[Laporan Kfib] Selasa 10714013 Elya_khoirunnisa Kinetika Enzim

 LAPORAN PRAKTIKUM KIMIA FARMASI INSTRUMEN DAN BIOKIMIA (FA-3113) KINETIKA ENZIM

Oleh : Elya Khoirunnisa M. (10714013) Tanggal Tanggal Percobaan

: 11 Okober !01"

Tanggal Pengu#$ulan : 1% Okober !01"  &a#a 'sisen 'sisen

: 'enina *. (107130"0)

LABORATORIUM KIMIA FARMASI PROGRAM STUDI SAINS DAN TEKNOLOGI FARMASI SEKOLAH FARMASI INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG 2016

PERCOBAAN IV KINETIKA ENZIM I.

II.

TUUAN 1. Menenukan nilai K M (konsana Michaelis) an +#a, (la-u #aksi#u#)

 berasarkan graik ari en/i# glukosa oksiase an subsra glukosa sanar. TEORI DASAR   En/i# #eru$akan $roein yang berguna unuk #engkaalisis reaksi biologi yang ihasilkan ari -aringan hiu$. En/i# #e#engaruhi kineika reaksi ea$i iak  #e#engaruhi kesei#bangan $aa reaksi. En/i# ber$engaruh ala# reaksi engan cara #e#$erce$a reaksi engan #enurunkan energi akiasi. En/i# #e#iliki bebera$a ciri  ciri yaiu : 1. *isi aki (acie sie) Meru$akan sisi aki en/i# yang ersusun oleh asa# a#ino yang igunakan unuk  #engika subsra unuk #e#benuk ko#$leks en/i# subsra (E*) ala# reaksi. !. Eisiensi kaalisis En/i# a$a #engkaalisis reaksi hingga 10 310%  ibaningkan iak #enggunakan en/i#. 3. *$esiias En/i# beker-a ala# #e#engaruhi reaksi sanga s$esiik berikaan engan sau aau  bebera$a subsra an #engkaalisis engan sau i$e reaksi. Paa reaksi yang #enggunakan en/i# sebagai kaalis2 la-u aal (+ o) akan #eningka engan #eningkanya konsenrasi subsra2 na#un akan #enca$ai #aksi#al $aa saa erenu sehingga keika ia#bahkan subsra akan #e#iliki la-u yang sa#a $aa saa subsra -enuh.

engan2 E 5 en/i# * 5 subsra P 5 $rouk 6eaksi i aas #enun-ukkan $e#benukan ko#$leks en/i# subsra (E*) ke#uian igunakan unuk $e#benukan $rouk. Paa saa se#ua en/i# beraa $aa ko#$leks en/i#   subsra yang i-enuhkan oleh subsra2 #akal la-u reaksi akan #enca$ai #aksi#u# (+ #a,) sehingga keika ia#bahkan subsra erus  #enerus la-u reaksi akan ea$.

Michaelis  Menen sera riggs an 8alane #enurunkan ske#a reaksi ersebu #e-ai $ersa#aan #ae#aika yang #en-elaskan hubungan anara la-u aal an konsenrasi subsra. v=

Vmax [ S ]  Km +[ S ]

engan2 K# 5 konsana Michaelis. ari $ersa#aan i aas2 a$a iga#barkan #elalui graik sebagai beriku.

9a#bar !.1 graik $ersa#aan Michaelis  Menen (6ichar 8arey2 !011)

erasarkan graik i aas2 +o ilakukan plotting engan konsenrasi subsra yang akan igunakan unuk #enenukan la-u #aksi#u# ari reaksi (+#a,) an Konsana Michaelis (K M) engan ineeaer  urk $lo engan $ersa#aan sebagai beriku : 1 v

=

Km

1

 + Vmax [ S ] Vmax

9a#bar !.! 9raik ineeaer  urk $lo (6ichar 8arey2 !011)

erasarkan $ersa#aan an graik i aas a$a igunakan unuk #enenukan nilai la-u #aksi#u# an konsana #ichaelis ari graien yang ia$akan ke#uian ihubungkan engan $ersa#aan regresi. III.

ALAT DAN BAHAN 1. ALAT

a.  b. c. . e.

Pi$e ees Tabung reaksi &eraca 9elas ki#ia s$aula

. cue g. $i$e #ikro h. s$ekrooo#eer ;+  isible

2. BAHAN

a. 9lukosa sanar  b. 9lukosa oksiase c. Ki OP'P IV.

CARA KERA Paa $ercobaan kineika en/i# ini2 langkah yang ilakukan $era#a kali aalah

i#asukkan ki yang berisi glukosa oksiase ke ala# abung reaksi2 ke#uian laruan glukosa sanar ke ala# abung reaksi yang lain engan " konsenrasi yang berbea. *elan-unya2 $aa #asing  #asing abung reaksi yang berisi laruan glukosa sanar an glukosa oksiase ia#bahkan a10 n#. *eelah ilakukan $e#bacaan absorbansi yang $era#ab2 ke#uian #asing  

#asing laruan iinkubasi ke#bali sela#a bebera$a #eni an ilakukan $e#bacaan ke#bali engan s$ekrooo#eer. V.

•

•

•

•

•

PERHITUNGAN DAN PENGOLAHAN DATA Konsenrasi glukos sanar 5 1 #g?#l +olu#e subsra 5 1> @2 !> @2 40 @2 "0 @2 an 70 @. M1. +1 5 M! . +! 1#g?#. 0201> # 5 M !. !201> # M! 5 7.44 , 10 3 #g?# M1. +1 5 M! . +! 1#g?#. 020!> # 5 M !. !20!> # M! 5 0.01! #g?# M1. +1 5 M! . +! 1#g? #. 02040 # 5 M !. !2040 # M! 5 0.01A" #g?# M1. +1 5 M! . +! 1#g?#. 020"0 # 5 M !. !20"0 # M! 50.0!A #g?# M1. +1 5 M! . +! 1#g?#. 02070# 5 M !. !2070 # M! 5 0.033 #g?#

aa absorbansi  &o. 1. !. 3. 4. >.

'bsorbansi sebelu#

inkubasi inkubasi 021!> 021A 0207 021%1 020A! 02307 021!! 02!71 021>" 023A3 aa kece$aan aal reaksi en/i# an subsra v=

•

•

•

'bsorbansi seelah

v=

v=

v=

 A 2− A 1 waktu

  0,065 5 menit    0,111

=0,013

 = 0,0222

5 menit    0,215 5 menit 

=0,043

*elisih absorbansi 020"> 02111 02!1> 0214A 02!37

•

•

v=

v=

  0,149 5 menit    0,237

=0,0298

 = 0,0474

5 menit 

Konsenrasi

+o (abs?#eni)

7.44 , 10 3 #g?# 0.01! #g?# 0.01A" #g?# 0.0!A #g?# 0.033 #g?#

02013 020!!! 02043 020!A% 020474

1

1

Vo

[S ]

7".A!307"A! 4>.04>04>0> !3.!>>%13A> 33.>>704"A% !1.0A704"41

134.41 %3.33 >1.0! 34.4% 30.30

Kurva Lineweaver-Burk 50.00 40.00 30.00 1/Vo 20.00

f(x) = - 0.13x + 34.57 R² = 0.15

Linear ()

10.00 0.00 0.00

50.00

100.00

150.00

1/[S]

erasarkan aa ari graik i aas ia$akan hasil $ersa#aan regresi sebagai  beriku : y 5 a Bb, y 5 0.1!">, B 34.>"7 1 •

a5

Vmax

1

34.>"7 5

Vmax

+#a, 5 0.0!A absorbansi?#eni  Km •

VI.

 b 5

Vmax

PEMBAHASAN

En/i# #eru$akan $roein yang berguna unuk #engkaalisis reaksi biologi yang ihasilkan ari -aringan hiu$. En/i# #e#engaruhi kineika reaksi ea$i iak  #e#engaruhi kesei#bangan $aa reaksi. Paa $ercobaan kineika en/i# ini2 langkah yang ilakukan $era#a kali aalah i#asukkan ki yang berisi glukosa oksiase ke ala# abung reaksi2 ke#uian laruan glukosa sanar ke ala# abung reaksi yang lain engan " konsenrasi yang berbea yang beru-uan agar a$a #e#benuk   $ersa#aan garis engan cara regresi ari keena# iik ersebu. Ke#uian ilakukan inkubasi $aa suhu 37 o = yaiu $aa suhu o$i#u# beker-anya en/i# sehingga er-ai akiasi en/i# glukosa oksiase. Masing  #asing laruan ilakukan $e#bacaan absorbansi engan #enggunakan ;+  isible engan $an-ang gelo#bang >10 n#. *elan-unya2 sa#$el iinkubasi ke#bali $aa suhu 37 o = sela#a > #eni yang beru-uan agar en/i# bereaksi engan subsra glukosa sanar $aa suhu o$i#u# en/i#. *ealah ilakukan inkubasi yang keua ilakukan $e#bacaan absorbansi ke#bali unuk  #ena$akan aa absrobansi keua. ari keena# aa absorbansi yang ia$akan ke#uian ibua kura kalibrasi unuk  #enenukan nilai la-u #aksi#u#. Paa $erhiungan ini igunakan kura ineeaer urk engan su#bu y #enyaakan 1?+o an su#bu , #enyaakan 1?konsenrasi subsra engan graik beru$a graik linier iak se$eri graik Michaelis yang berbenuk $arabola karena a$abila igunakan ala# benuk $arabola graien yang ia$akan $aa seia$ iik berubah  ubah sehingga akan #e#$engaruhi nilai K# an +#a,. ala# ker-a en/i# unuk #e#engaruhi suau reaksi a$a i$engaruhi oleh bebera$a 1.

acor ianaranya yaiu : *uhu Paa suau reaksi a$abila suhu inaikkan #aka kece$aan reaksi akan #eningka hingga $aa konisi erenu sehingga a$a #e#$erce$a $e#benukan en/i# an subsra an #e#engaruhi ker-a en/i#. *elain iu2 suhu o$i#u ker-a en/i# $aa #akhluk hiu$ sekiar 3> o  40o =. '$abila #elebihi suhu ersebu #aka ke#ungkinan  besar akan er-ai enaurasi $aa ikaannya2 an a$abila suhu iurunkan secara signiikan #aka en/i# akan iak aki na#un $aa bakeri er#oil suhu o$i#u# en/i# ala# ubuhnya $aa suhu 70 o=.

9a#bar ".1 graik hubungan ker-a en/i# engan suhu (6ichar 8arey2 !011)

!.

$8 Paa $8 eksri# se$eri $aa asa# kua aau basa le#ah akan #enyebabkan en/i# erenaurasi karena sisi aki en/i# yang beru$a $roein akan erionisasi $aa ikaan  $e$ianya a$abila era$a asa# aau basa kua. *eangkan $aa asa# le#ah2 akan er-ai $enurunan energy kineic $aa en/i#. *elain iu2 en/i# -uga #e#iliki $8 o$i#u# ala# syse# ker-anya se$eri $aa $e$sin akan beker-a #aksi#u# $aa $8

3.

!. Konsenrasi subsra Konsenrasi subsra yang se#akin besar akan #eningkakan la-u reaksi $aa en/i# na#un akan berheni -ika #enca$ai -enuh $aa subsraa au elah se#ua berikaan engan en/i# sehingga a$abila ia#bahkan subsra erus  #enerus akan #enca$ai

4.

la-u #aksi#u# se$eri yang iga#barkan $aa graik Michaelis  Menen. Cnhibior Meru$akan senyaa yang a$a #engha#ba ker-a en/i# sehingga #enurunkan aau #enghenikan kece$aan #engkaalisis reaksi oleh en/i#. Cnhibior bersia reersible engan #engika en/i# engan ikaan koalen sehingga a$abila inihibior  #ele$askan ikaannya2 en/i# akan a$a aki ke#bali. Denis inhibior aa ua yaiu : a.Cnhibior ko#$eii Cnhibior -enis ini akan berikaan engan en/i# $aa bagian en/i# yang akan  berikaan engan subsra sehingga akan #enurunkan banyaknya subsra yang  berikaan engan en/i# aau iak a$anya subsra berikaan engan en/i#.

9a#bar ".! conoh inhibior ko#$eii (6ichar 8arey2 !011)

 b. Cnhibior non ko#$eii Cnhibior ini akan berikaan $aa sisi yang berbea engan sisi yang berikaan engan subsra sehingga subsra an en/i# #asih a$a berikaan na#un #enurunkan kece$aan reaksi.

9a#bar ".3 #ekanis#e inhibior non ko#$eii  (6ichar 8arey2 !011)

'$oen/i# #eru$akan en/i# yang beru$a senyaa $roein yang #e#iliki sisi aki unuk berikaan aau isebu binding site. Binding site ini era$a ua -enis yaiu sisi aki yang akan berikaan engan subsra an sisi aloserik yang akan berikaan engan koakor aau inhibior en/i#. Koakor?akiaor en/i# #eru$akan bagian en/i# beru$a senyaa non$roein. Koakor a$a #engubahubah benuk sisi aki sehingga a$a ie#$eli subsra erenu. Maca##aca# koakor en/i#: a. Koen/i# #eru$akan koakor beru$a senyaa organik (ia#in) yang berikaan secara nonkoalen engan en/i#.  b. 9ugus $roseik #eru$akan koakor beru$a senyaa anorganik (#ineral) yang  berikaan secara koalen engan en/i#. En/i# yang elah berikaan engan koakor isebu haloen/i#. *isi aki a$a iganggu oleh inhibior ko#$eii yang bersrukur sa#a engan subsra. Cnhibior  VII.

akan #encegah subsra unuk berikaan. KESIMPULAN 1. &ilai la-u #aksi#u# ari reaksi glukosa oksiase an subsra glukosa sanar 02147! absorbansi?#eni !. &ilai konsana Michaelis ari rekasi glukosa oksiase an subsra glukosa sanar

VIII.

732A>3. DAFTAR PUSTAKA

8arey2 6ichar. !011.  Biochemistry 5th  edition.  &e Dersey : ibrary o =ongress =aaloging  in  Publicaion aa. 8ala#an >3"! Mary K. =a#$bell an *han O.arrell. !00A.  Biochemistry2 " h E.=anaa : Tho#son rooks. 8ala#an 14314A. h$s:??#aeri7%.iles.or$ress.co#?!013?0"?en/i#Fbio3.$  iakses $aa anggal 1" Okober !01" $ukul 07.!> GC h$:??igilib.uni#e.ac.i?1"41?%0?abH!0+C.$  iakses $aa anggal 17 Okober  !01" $ukul 1>.00 GC