LAPORAN PTAKTIKUM BIOKIMIA PANGAN “AKTIVITAS ENZIM
α −¿
AMILASE TOGE”
OLEH:
NAMA STAMBUK KELOMPOK KELAS
: WIWIED WIDYASTUTI UTAMI : D1C1 14 026 : IV EMPAT! : TPG"A
#URUSAN ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN $AKULT $AKULTAS AS TEKNOLOGI DAN INDUSTRI PERTANIAN PERTANIAN UNIVERSITAS HALU OLEO KENDARI 2016
A. Judul : Aktivitas Enzim α-Amilase Tauge B. Tujuan : Untuk mempelajari aktivitas amilolitik enzim α-Amilase yang dihasilkan dari Tauge. . !rinsip : Enzim amilase "isa didapatkan pada ke#am"ah "iji-"ijian karena enzim amilase diperlukan "iji pada proses meta"olisme senya$a pati yang "er%ungsi untuk mengkatalisis peme#ahan atau hidolisis senya$a pati menjadi gula sederhana yang larut dalam air yang diperlukan untuk perke#am"ahan "iji. &un#ulnya tunas pada ke#am"ah "iji-"ijian dapat mengakti%kan enzim amilase' enzim terse"ut menyediakan nutrisi yang paling "aik untuk mem"antu pertum"uhan tunas Be"erapa %aktor yang dapat mempengaruhi kerja enzim adalah konsentrasi enzim' konsentrasi su"strat' suhu' p(' ko%aktor dan inhi"itor. ). !rosedur : 1 mL #n$im + 1 mL b&-er (' * ) + 1 mL ion logam (.n/ aCl .gCl .g/ AgN/')
Diamkan * menit + 1 mL amil&m (023 023 023 0243 13)
%nk&basi selama '0 menit !ada s&h& ('0°C 0°C *0°C 0°C ,0°C)
+ 1 mL Reagen Nelson Panaskandengan air mendidih (100°C) selama 10 menit
Dinginkan + mL Reagen Arsenomolibdak Fortex
!ektro"otometer
*. !enentuan p( optimum +. !enentuan suhu optimum ,. !engaruh ion logam Aktivitas Enzim 2AE4 9 mg glukosa *5553&r glukosa lama inku"asi Aktivitas Enzim 2AE4 9 ;mg glukosa<3*=5 t
eterangan : mg glukosa diperoleh dari perhitungan kurva standar glukosa se"agai hasil hidrolisis amilase . !enentuan m dan /maks E. (asil dan !em"ahasan: 0ra%ik *. urva standar glukosa
Kurva Standar Glukosa 1 A/RAN% "(x) 5 0201x 6 020' R7 5 0288
02*
Linear (A/RAN%)
0 0
0
0
0
40
100
10
S%&% O'()*%*
1uhu
Aktivitas Enzim 2U3ml4
,5
5.5+
5
5.5+,
65
5.5*7
75
5.5+
85
5.5++
10
10
0ra%ik +. !engaruh 1uhu Terhadap Aktivitas Enzim Amilase 020' 020 Aktivitas Enzim
0201 0 *'0'*0**0**0*,0,* Suhu
1uhu dan p( adalah %aktor yang paling penting' yang nyata mempengaruhi aktivitas enzim 2>yeleke 1.B' +5*54. )alam reaksi enzimatis' suhu "erperan dalam meningkatkan interaksi antara su"strat dengan enzim. Aktivitas enzim meningkat pada suhu ,5? 2suhu optimum4 dengan aktivitas enzim se"esar 5.5+ U3ml dan menurun pada suhu 5? dan 65? kemudian meningkat pada suhu 75? dan kem"ali menurun pada suhu 85?. Tapan r dkk 2+5574 menyatakan suhu optimum enzim amilase pada Heliodiaptomus viduus yaitu ,5? dengan aktivitas se"esar 5'5**U3ml sedangkan haerunisa dkk 2+5*,4 menyatakan suhu optimum enzim amilase pada Aspergillus niger yaitu ,7? dengan aktivitas se"esar +5.*=U3ml. Aktivitas enzim tidak tinggi' dise"a"kan tidak semua su"strat "erikatan dengan sisi akti% enzim. 1aat "ertam"ah sampai suhu optimum ke#epatan reaksi enzim naik karena energy kinetik "ertam"ah. (al ini memper"esar peluang enzim dan su"strat "ereaksi untuk menghasilkan produk yang maksimal. Adanya peru"ahan suhu juga akan mempengaruhi ikatan hidrogen atau interaksi hidro%o"ik yang "erperan dalam menjaga kon%ormasi molekul enzim. !eru"ahan kon%ormasi akan mempengaruhi sisi akti% dari enzim' kondisi panas tertentu menye"a"kan ikatan hidrogen terse"ut akan putus. !utusnya satu ikatan hidrogen akan menye"a"kan mudahnya pemutusan ikatan hidrogen selanjutnya dalam rantai polipeptida terse"ut' sehingga protein enzim mengalami denaturasi 2hairunisa dkk' +5*,4. 'H O'()*%* p(
Aktivitas Enzim 2U3ml4
,
5.5+
5.5*@
6
5.5+5
7
5.5+,
8
5.5*7
0ra%ik +. !engaruh 1uhu Terhadap Aktivitas Enzim Amilase 020' 020 020 Aktivitas Enzim
0201 0201 0
'
*
,
4
pH
Enzim mempunyai aktivitas maksimal pada kisaran p( tertentu yang dise"ut p( >ptimum. Aktivitas enzim amilase tauge ter"esar pada p( 7 2p( optimum4 dan menurun pada p( 8. !enelitian 1i$ati 1etiasih dkk 2+5**4 menunjukkan p( optimum enzim amilase "akteri termo%ilik 1+ se"esar yaitu p( 7 sedangkan .Amutha 2+5**4 menyatakan p( optimum enzim amilase Bacillus Subtilis yaitu p( 7. Aktivitas enzim "erkaitan erat dengan strukturnya' peru"ahan struktur akan menye"a"kan peru"ahan aktivitas enzim. !ada p( optimum kon%ormasi enzim "erada pada kondisi yang ideal. (al ini menye"a"kan interaksi antara enzim dan su"strat menjadi maksimal. !ada suasana yang terlalu asam atau "asa' kan%ormasinya "eru"ah sehingga aktivitas enzim akan terganggu. !eru"ahan tingkat keasaman akan meye"a"kan terjadinya penurunan aktivitas 2Agustin dalam 1yai%ul' +5*+4. P+,-./%& I, L-.*
on Cogam
Aktivitas Enzim 2U3ml4
AgD>,
5.5*
&n1>,
5.5*8
B>l ,
5.5*8
&gl,
5.56*
0ra%ik ,. !engaruh on Cogam Terhadap Aktivitas Enzim Amilase 020 020* 020 Aktivitas Enzim 020' 020 0201 0 AgN/'
.n/'
/Cl'
.gCl'
Ion Logam
1e"agian "esar enzim memerlukan senya$a lain yang "ukan protein dalam "ioaktivitasnya. 1alah satu zat yang dapat "er%ungsi se"agai aktivator atau inhi"itor dalam proses katalisis enzim adalah ion logam. !ada konsentrasi tertentu ion logam dapat meningkatkan aktivitas enzim 2aktivator4 dan dapat pula menurunkan aktivitas enzim 2inhi"itor4. on logam terse"ut dapat "er%ungsi se"agai ko%aktor "agi enzim karena dapat "erperan dalam pengikatan enzim dengan su"strat untuk mensta"ilkan kon%ormasi akti% enzim. Berdasarkan hasil yang didapatkan penam"ahan ion logam AgD>, mengasilkan aktivitas enzim yang rendah yaitu se"esar 5.5* U3ml' "egitu pula pada penam"ahan &n1>, dan B>l, dengan aktivitas enzim 5.5*8 U3ml. 1edangkan aktivitas enzim yang dihasilkan dengan penam"ahan ion logam &gl, se"esar 5.56* U3ml. )apat disimpulkan ion logam AgD>, ' &n1>, dan B>l, merupakan inhi"itor sedangkan ion logam &gl, merupakan aktivator. (asil penelitian ati 2+5*64 menyatakan ion logam a+F se"agai aktivator' dapat menaikkan aktivitas enzim. 1edangkan ion logam DaF' F' Gn+F' o+F se"agai inhi"itor pada enzim amilase Bacillus licheniformis. S%(/.( O'()*%*
;1<
Aktivitas Enzim 2U3ml4
5'+H
5.5*
5'H
5.5*,
5'7H
5.5*7
5'=H
5.5*6
*H
5.5*=
0ra%ik ,. !engaruh 1u"strat Terhadap Aktivitas Enzim Amilase 020 020 Aktivitas Enzim 0201 0201 0 03 03 03 043 13 Substrat
onsentrasi su"strat adalah salah satu %aktor yang dapat mempengaruhi aktivitas enzim amilase. 1u"strat optimum enzim amilase tauge yaitu pada konsentrasi *H dengan aktivitas enzim se"esar 5.5*= U3ml. (asil yang didapatkan oleh ati 2+5*54 konsentrasi su"strat optimum Aktinomisetes yaitu +H dengan aktivvitas enzim se"esar ='+,6, U3ml. !ada umumnya terdapat hu"ungan optimum antara konsentrasi enzim dan su"strat "agi aktivitas maksimum. onsentrasi su"strat yang amat rendah' ke#epatan reaksipun amat rendah' tetapi ke#epatan ini akan meningkat dengan meningkatnya konsentrasi su"strat. Caju aktivitas enzim akan meningkat dengan meningkatnya kadar su"strat sampai suatu titik. 1ekali enzim jenuh dengan su"strat' penam"ahan kadar su"strat tidak akan "erpengaruh pada ke#epatan reaksi 2 ati' +5*54. P+,+,(%., K* 3., V*.
&i#haelis-&enten mende%inisikan suatu tetapan yang sekarang dinyatakan se"agai m' yang "erman%aat dalam menyatakan hu"ungan yang tepat antara konsentrasi su"strat dan ke#epatan reaksi enzimatik. &erupakan dasar "agi semua aspek kinetika kerja enzim. Jika diketahui m dan /maks maka dapat dihitung ke#epatan reaksi suatu enzim pada setiap konsentrasi su"strat. Unsur kun#i di dalam persamaan &i#haelis- &enten adalah m yang "ersi%at khas "agi enzim tertentu' dengan su"strat spesi%ik pada kondisi suhu dan p( tertentu 2ati' +5*64. !ersamaan kurva plot y 9 5.556 5.5+6 dengan menggunakan persamaan Cine$eaver-Burk maka didapat m dan /maks se"agai "erikut: * /ma 9 9 5 "3v 5.5+6 ma 9
5.556 5
9 5.+ U3ml3menit
(asil yang didapatkan ati 2+5*64 nilai m dan /maks a"Amilase dari isolat Aktinomisetes masing-masing 8*.*5I+H2"3 v4 dan 8'7+ U3ml3menit
DA$TAR PUSTAKA
.Amutha.+5*+. Effect Of Ph, Temperature And etal !ons On Am"lase Activit" #rom Bacillus Subtilis $c% &&' . nternational Journal >% !harma And Bhio 1#ien#e (ol.). hairun Disa.+5*,. solasi' arakterisasi *an Amobilisasi +Amilase *ari Aspergillus -iger #ncc '&/. (ol , -o ' (al ** *@. 1. B. >yeleke )kk. +5*5. Production And 0haracteri1ation Of Am"lase Produced B" Bacillus egaterium !solated #rom A 2ocal 3am Peel *umpsite !n inna, -iger State. Journal >% &i#ro"iology And Antimi#ro"ials (ol. )456.
1is$ati 1etiasih )kk. +5**. $arakterisasi En1im Amilase Ekstrasel *ari !solat Bakteri Termofil S7). Jurnal imia ndonesia (ol. 46. 1yai%ul Bahri.+5*+. $arakterisasi En1im Amilase *ari $ecambah Bi8i 9agung $etan 4:ea a"s 0eratina 2.6. Jurnal Datural 1#ien#e )esem"er +5*+ (ol. .46 ;)<;. Tapan r')kk.+557. The Effect Of Temperature, Ph, And Salt On Am"lase !n Heliodiaptomus (iduus 4=urne"6 . Turk J Gool (ol 4/5>?6. ati 1udaryati 1oeka.+5*5. Optimasi *an $arakterisasi AAmilase *ariisolat Aktinomisetes 3ang Berasal *ari $alimantan Timur. !usat !enelitian Biologi /ol *52,4. ati
1udaryati 1oeka.+5*6. $emampuan Bacillus 2icheniformis *alam enghasilkan En1im@ Amilase. !ros 1em Das &asy Biodiv !ndon 4?6 ')'< ''.
