Ekstraksi Uji Aktivitas Enzim Amilase

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA DAN ANALISIS PANGAN EKSTRAKSI & UJI AKTIVITAS ENZIM AMILASE

NAMA NIM KELOMPOK KELAS ASISTEN

: WAHYU ERWIN FIRMANSYAH : 125100101111014 : J3 :J : NOVI

PROGRAM STUDI ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN JURUSAN TEKNOLOGI HASIL PERTANIAN FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN UNIVERSITAS BRAWIJAYA MALANG 2014

Wahyu Erwin Firmansyah THP-FTP-UB-2014

BAB I EKSTRAKSI DAN PENGUJIAN AKTIVITAS AMILASE A. Pre Lab

1. Mengapa enzim amilase bisa didapatkan pada kecambah biji-bijian?

Enzim amilase bisa didapatkan pada kecambah biji-bijian karena enzim amilase

diperlukan biji pada proses metabolisme senyawa pati yang berfungsi untuk mengkatalisis pemecahan atau hidolisis senyawa pati menjadi gula sederhana yang

larut dalam air yang diperlukan untuk perkecambahan biji. Munculnya tunas pada

kecambah biji-bijian dapat mengaktifkan enzim amilase, enzim tersebut menyediakan nutrisi yang paling baik untuk membantu pertumbuhan tunas (Sari, 2004).

Pada proses perkecambahan, aktivitas metabolisme akan menghasilkan hormon

giberelin yang akan ditranslokasikan ke lapisan aleuron sehingga menghasilkan enzim amilase terutama

-amilase. Enzim tersebut selanjutnya masuk ke dalam

cadangan makanan dan mengkatalis proses perubahan cadangan makanan berupa

pati menjadi gula sehingga dapat menghasilkan energi yang berguna untuk aktivasi sel dalam mendukung proses pertumbuhan. Cadangan makanan yang sudah diubah menjadi gula akan digunakan untuk membentuk struktur akar, batang, dan tunas (Bintang, 2010).

2. Jelaskan prinsip pengukuran aktivitas enzim amilase secara kuantitatif pada percobaan ini?

Prinsip pengukuran aktivitas enzim amilase secara kuantitatif pada percobaan ini

yaitu menguji aktivitas enzim amilase dari kecambah biji-bijian dimana aktivitas enzim

amilase ditunjukkan dengan perubahan warna akibat hidrolisis pati menjadi gula sederhana (maltosa) oleh enzim amilase. Prinsipnya didasarkan pada perhitungan gula pereduksi dari hasil hidrolisis pati (Mutia dkk, 2011).

Penentuan kadar gula pereduksi (maltosa) dapat dilakukan dengan menggunakan

analisa gula pereduksi yaitu mereaksikan gula pereduksi dengan reagen DNS (3,5 dinitro saliclic acid) dimana pada suasana basa, gula pereduksi akan mereduksi DNS

menjadi Asam 3-amino-5-dinitrosalisilat yang dapat menyerap dengan kuat radiasi gelombang elektromagnetik pada panjang gelombang tertentu. Semakin banyak gula

pereduksi maka semakin banyak Asam 3-amino-5-dinitrosalisilat yang terbentuk. Adanya senyawa yang terbentuk tersebut ditandai dengan adanya perubahan warna kuning menjadi merah jingga (Lim Chai Teo, 2013).

1

Wahyu Erwin Firmansyah THP-FTP-UB-2014 3. Bagaimana cara mengidentifikasi secara kualitatif bahwa telah terjadi reaksi enzimatis pada percobaan ini?

Cara mengidentifikasi secara kualitatif bahwa telah terjadi reaksi enzimatis yaitu

dengan melihat ada tidaknya perubahan warna pada sampel yang diuji. Apabila ada gula pereduksi pada sampel, maka akan terjadi perubahan warna kuning menjadi

merah jingga. Adanya perubahan warna tersebut menandakan bahwa telah terjadi

reaksi enzimatis yaitu dengan adanya enzim amilase yang mampu merombak pati

menjadi gula. Gula sederhana yang terbentuk akan bereaksi dengan reagen DNS pereduksi yang membentuk Asam 3-amino-5-dinitrosalisilat (Lim Chai Teo, 2013).

Selain itu, uji kualitatif juga dapat dilakukan dengan menambahkan larutan fehling

pada sampel. Jika terdapat glukosa dalam sampel maka akan terbentuk endapan

berwarna merah bata yang merupakan endapan tembaga (I) oksida (Cu2O) yang

dihasilkan dari reduksi tembaga (II) oksida (CuO) oleh glukosa yang merupakan gula

pereduksi. Bertambahnya endapan merah bata pada sampel menunjukkan bahwa semakin lama glukosa yang terbentuk semakin banyak (Sunarya, 2007).

2

Wahyu Erwin Firmansyah THP-FTP-UB-2014 B. Diagram Alir

1. Ekstraksi Enzim Amilase Sampel Dihancurkan Ditimbang sebanyak 5 g 50 ml buffer asetat (0.1-0.5 M) pH 5.5 Dibiarkan ± 30 menit sambil sesekali diaduk Disaring dengan kertas saring Diambil filtratnya (larutan enzim kasar) Disentrifugasi 1500 rpm selama 30 menit Diambil supernatanya Hasil

2. Uji Kuantitatif

a) Persiapan substrat pati 1 gr Soluble Starch Dilarutkan ke dalam 100 ml air Diaduk dan dipanaskan sampai jernih dan homogen Hasil

3

Wahyu Erwin Firmansyah THP-FTP-UB-2014 b) Pengukuran aktivitas hasil ekstraksi 1 ml enzim hasil ekstraksi Ditambah 1 ml larutan substrat pati Diinkubasi 3 menit, suhu 300C 2 ml DNS Dipanaskan sampai mendidih Didinginkan cepat pada air mengalir Ditambah 20 ml aquades Serapan diukur dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 550 nm Dihitung kadar maltose dari plotting regresi linear standar maltosa Hasil

c) Pembuatan larutan standar maltose 50 mg Maltosa Dilarutkan dalam 50 ml buffer HCl Diencerkan sampai diperoleh stok standar 1000 ppm Dilakukan seri pengenceran (0 ppm, 100 ppm, 200 ppm, 300 ppm, 400 ppm, 500 ppm, 600 ppm) Hasil 4


d) Pembuatan grafik standar 1 ml larutan stok standar maltosa 3 ml DNS Diinkubasi 15 menit, suhu 400C Didinginkan Diukur absobansinya pada panjang gelombang 550 nm Dibuat regresi linear (hasil absorbansi dan konsentrasi maltosa Hasil

5


C. Hasil dan Pembahasan 1.1 Ekstraksi enzim amilase dari kecambah a) Kurva Standar

Kurva Standar

0.300

y = 0.020x + 0.127 R² = 0.915

Absorbansi

0.250 0.200 0.150

Series1

0.100

Linear (Series1)

0.050 0.000

0

1

2

3

4

5

6

7

8

ppm

ppm

Absorbansi

0 ppm

0.130

100 ppm

0.166

200 ppm

0.205

300 ppm

0.216

400 ppm

0.243

500 ppm

0.243

600 ppm

0.256

6

Wahyu Erwin Firmansyah THP-FTP-UB-2014 b) Kurva Sampel

Kurva Sampel

0.8

y = -0.120x + 0.772 R² = 0.569

0.7 Absorbansi

0.6 0.5 0.4

Series1

0.3 0.2

Linear (Series1)

0.1

0

0

1

2

3

4

5

6

Konsentrasi

Sampel

Konsentrasi

Absorbansi

Biji Kering

18.4804 ppm

0.504

Biji Direndam 12 Jam

24.5588 ppm

0.628

Kecambah 12 Jam

25.2451 ppm

0.642

Kecambah 24 Jam

0.3431 ppm

0.134

Kecambah 48 Jam

1.0784 ppm

0.149

1. 2 Tuliskan hasil pengamatan dari percobaan! Sampel

Aktivitas Enzim

Biji kering

6,1601

Biji direndam 12 jam

8,1863

Kecambah umur 12 jam

8,4150


0,1144


0,3595

7

Wahyu Erwin Firmansyah THP-FTP-UB-2014 *Perhitungan Persamaan kurva standar (1) Biji kering

y = 0,0204x + 0,127

absorbansi = 0,504

*Konsentrasi (C)

y = 0,0204x + 0,127

0,504 = 0,0204x + 0,127

*Aktivitas Enzim α -amilase

x = 0,377/0,0204

= 18,4804 x 1/3

0,0204x = 0,504

= C x 1/T x 1 unit/1mikromol

0,127

= 6,1601

x = 18,4804

C = x = 18,4804 ppm (2) Biji direndam 12 jam *Konsentrasi (C)

absorbansi = 0,628

y = 0,0204x + 0,127

0,628 = 0,0204x + 0,127


x = 0,501/0,0204

= 24,5588 x 1/3

0,0204x = 0,628

0,127

= C x 1/T x 1 unit/1mikromol = 8,1863

x = 24,5588

C = x = 24,5588 ppm (3) Kecambah umur 12 jam *Konsentrasi (C)

y = 0,0204x + 0,127

absorbansi = 0,642

0,642 = 0,0204x + 0,127


x = 0,515/0,0204

= 25,2451 x 1/3

0,0204x = 0,642

0,127

x = 25,2451

C = x = 25,2451 ppm (4) Kecambah umur 24 jam *Konsentrasi (C)

y = 0,0204x + 0,127


absorbansi = 0,134 (data kelas D)

0,134 = 0,0204x + 0,127


x = 0,007/0,0204

= 0,3431x 1/3

0,0204x = 0,134 x = 0,3431

0,127

C = x = 0,3431 ppm


8

Wahyu Erwin Firmansyah THP-FTP-UB-2014 (5) Kecambah umur 48 jam

*Konsentrasi (C)

absorbansi = 0,149 (data kelas D)

y = 0,0204x + 0,127


0,0204x = 0,149

= 1,0784 x 1/3

0,149 = 0,0204x + 0,127 x = 0,022/0,0204

0,127

x = 1,0784


C = x = 1,0784 ppm 2. Bahas dan bandingkan data-data dalam percobaan ini! 2.1 Analisis Prosedur (Anpros) Pada praktikum kali ini alat yang digunakan yaitu pipet ukur, pipet tetes, bola hisap,

beaker glass, gelas ukur, erlenmeyer, tabung reaksi, mortar, corong kaca, kertas saring,

pengaduk kaca, sentrifuge, tube sentrifuge, inkubator, kompor listrik, kuvet, dan

spektofotometer. Sedangkan bahan yang digunakan yaitu biji kacang hijau kering, biji kacang hijau yang direndam 12 jam, kacang hijau yang dikecambahkan 12 jam, buffer asetat pH 5.5, aquades, reagen DNS, dan pati 1%.

Pada praktikum kali ini, hal yang dilakukan pertama kali yaitu mempersiapkan

sampel. Sampel yang digunakan yaitu biji kacang hijau dengan tiga perlakuan yaitu biji kacang hijau kering, biji kacang hijau yang direndam 12 jam, dan biji kacang hijau yang

dikecambahkan selama 12 jam. Masing-masing sampel perlakuan tersebut ditimbang dengan timbangan analitik sebanyak 10 gram.

Selanjutnya masing-masing sampel dihancurkan dengan mortar. Sampel harus

dihancurkan untuk mendapatkan enzim amilase yang termasuk enzim endoselluler

sehingga untuk mengekstraksi harus menghancurkan masing-masing sampel terlebih dahulu. Masing-masing sampel diambil dan ditimbang sebanyak 5 gram. Sampel yang sudah ditimbang 5 gram selanjutnya dimasukkan ke erlenmeyer. Kemudian ditambahkan

50 ml buffer asetat (0.1-0.5 M) pH 5.5 yang berfungsi untuk mempertahankan pH. Karena enzim yang digunakan dapat bekerja secara optimum sesuai dengan pH yang optimum. Setelah itu didiamkan ±30 menit sambil sesekali diaduk supaya homogen. Setelah 30

menit, disaring dengan kertas saring Whatman untuk diambil filtratnya. Filtrat yang diambil merupakan larutan enzim kasar yang ditampung dalam beaker glass.

Setelah itu masing-masing filtrat diambil 20 ml dan dimasukkan ke tube sentrifuge.

Selain itu dibuat blanko yang berisi campuran antara 10 ml aquades dengan 50 ml buffer

asetat dan dimasukkan juga ke dalam tube sentrifuge. Selanjutnya disentrifugasi 1500 9

Wahyu Erwin Firmansyah THP-FTP-UB-2014 rpm selama 30 menit dengan sentrifuge untuk memisahkan supernatan dengan pelet. Setelah 30 menit diambil supernatannya untuk uji aktivitas enzim amilase.

Pada uji aktivitas enzim amilase, pertama kali dilakukan yaitu mempersiapkan

substrat pati 1% yang berarti 1 gram pati dilarutkan dalam 100 ml air. Kemudian, 1 ml

enzim hasil ekstraksi diambil dan ditambahkan 1 ml larutan substrat pati yang berfungsi

sebagai substrat yang dihidrolisis oleh enzim. Lalu diinkubasi selama 3 menit dengan

shaker waterbath dengan suhu 30oC supaya mencapai suhu optimum yang sesuai dengan

suhu optimum enzim amilase. Selanjutnya ditambah dengan 2 ml DNS (3,5 dinito salicilic

acid). Reagen DNS tersebut berfungsi untuk mendeteksi adanya gula pereduksi dalam sampel disakarida maltosa hasil dari hidrolisis substrat pati oleh enzim amilase. Sampel dan blanko yang telah ditambah DNS dalam tabung reaksi diletakkan ke dalam beaker

glass yang berisi aquades kemudian dipanaskan sampai mendidih diatas kompor listrik dengan tujuan untuk menghentikan aktivitas enzim atau menginaktivasi enzim. Selama

pemanasan tersebut terjadi perubahan warna dari warna kuning menjadi orange

kecoklatan. Setelah mendidih didinginkan secara cepat pada air mengalir. Kemudian masing-masing sampel dan blanko diencerkan dengan menambahkan 20 ml aquades.

Selanjutnya blanko dan masing-masing sampel diukur nilai absorbansinya dengan

spektrofotometer pada panjang gelombang maksimal yaitu 550 nm. Pertama larutan blanko

dimasukkan

terlebih

dahulu

ke

dalam

kuvet

lalu

dimasukkan

ke

spektrofotometer. Larutan blanko tersebut digunakan untuk kalibrasi. Kemudian masingmasing sampel juga dimasukkan ke kuvet secara bergantian dan diukur nilai

absobansinya dengan spektrofotometer. Setelah didapatkan nilai absorbansi masingmasing sampel, dihitung nilai aktivitas enzim amilase dengan terlebih dahulu membuat plot regresi linear standar.

2.2 Perbandingan Kurva Standar dengan Kurva Sampel Pada kurva standar dihasilkan persamaan regresi linear yaitu y=0,0204x+0.127

dimana sumbu y merupakan Absorbansi dan sumbu x merupakan Konsentrasi (ppm). Dari kurva standar tersebut menunjukkan bahwa semakin banyak konsentrasi (ppm)

maka semakin tinggi nilai absorbansi. Sedangkan pada kurva sampel dihasilkan persamaan regresi linear yaitu y=-0,1204x+0,7726 dimana sumbu y merupakan Absorbansi dan sumbu x merupakan Konsentrasi (ppm). Jika kurva sampel dibandingkan

dengan kurva standar maka terdapat perbedaan pada perbandingan konsentrasi dengan absorbansi. Pada kurva sampel data yang didapatkan kurang akurat sehingga hasilnya kurang signifikan.

Hasil tersebut disebabkan karena adanya perbedaan perlakuan

dimana data 2 perlakuan didapatkan dari kelas lain. Pada 3 perlakuan yang pertama,

kedua dan ketiga perbandingan antara absorbansi dan konsentrasi berbanding lurus 10

Wahyu Erwin Firmansyah THP-FTP-UB-2014 dimana semakin besar absorbansi maka semakin besar pula konsentrasi. Pada perlakuan

keempat dan kelima nilai absorbansi yang didapatkan menurun sehingga konsentrasinya juga menurun.

2.3 Hubungan Reagen DNS dengan Aktivitas Enzim Amilase Reagen DNS (3,5 dinitro salicilic acid) merupakan suatu reagen yang digunakan untuk

mendeteksi adanya gula pereduksi dalam sampel disakarida maltosa hasil dari hidrolisis substrat pati oleh enzim amilase. Penentuan aktivitas enzim amilase ditentukan dari

banyaknya gula pereduksi yang terbentuk hasil hidrolisis pati oleh enzim amilase.

Penentuan kada gula pereduksi (maltosa) dapat dilakukan dengan dengan menggunakan analisa gula pereduksi yaitu mereaksikan gula pereduksi dengan reagen DNS (3,5 dinitro

saliclic acid) dimana pada suasana basa, gula pereduksi akan mereduksi DNS menjadi Asam 3-amino-5-dinitrosalisilat yang dapat menyerap dengan kuat radiasi gelombang elektromagnetik pada panjang gelombang tertentu. Semakin

banyak

gula

pereduksi

maka

semakin

banyak

Asam

3-amino-5-

dinitrosalisilat yang terbentuk. Adanya senyawa yang terbentuk tersebut ditandai

dengan adanya perubahan warna kuning menjadi merah jingga. Adanya perubahan warna tersebut menandakan bahwa telah terjadi reaksi enzimatis yaitu dengan adanya

enzim amilase yang mampu merombak pati menjadi gula pereduksi. Semakin banyak gula pereduksi yang terbentuk menunjukkan bahwa semakin tinggi aktivitas enzim amilase untu memecah substrat pati menjadi gula pereduksi. Tingginya aktivitas enzim amilase ditandai dengan perubahan warna sampel yang semakin pekat dari sebelumnya. 2.4 Perbandingan Tiap Sampel Sampel yang digunakan dalam praktikum kali ini yaitu sampel kacang hijau dengan 5

perlakuan yang berbeda-beda. Perlakuan sampel yang dilakukan dalam praktikum ada 3 yaitu biji kacang hijau kering, biji kacang hijau yang direndam selama 12 jam, dan kacang hjau yang dikecambahkan 12 jam. Perlakuan yang lain yaitu kacang hijau yang dikecambahkan selama 24 jam dan 48 jam didapatkan dari kelas lain.

Pada perlakuan yang pertama yaitu biji kacang hijau kering. Sampel tersebut

diekstrak dengan buffer asetat. Dari hasil ekstraksi biji kacang hijau kering diambil

supernatannya untuk uji aktivitas enzim. Enzim hasil ekstraksi tersebut diambil 1 ml dan

ditambah pati 1% yang akan menjadi substrat. Warna dari ekstrak enzim dengan pati1%

yaitu bening. Selanjutnya diinkubasi selama 3 menit pada suhu optimum 30 oC. Kemudian ditambahkan reagen DNS yang akan mendeteksi adanya gula pereduksi dalam sampel

disakarida maltosa hasil dari hirolisis substrat pati oleh enzim amilase yang di ekstrak 11

Wahyu Erwin Firmansyah THP-FTP-UB-2014 dari biji kacang hijau kering. Reagen DNS akan merubah warna menjadi kuning, dan

setelah dilakukan pemanasan warna yang terbentuk akan lebih pekat. Kemudian

dilakukan pengenceran dengan menambahkan 20 ml aquades. Setelah itu diukur nilai absorbansinya dan didapatkan nilai absorbansi sebesar 0,504. Kemudian nilai

absorbansi tersebut dimasukkan ke persamaan linear sehingga didapatkan nilai x atau

konsentrasi (C) sebesar 18,4804. Dari nilai konsentrasi tersebut didapatkan nilai aktivitas enzim -amilase pada biji kacang hijau kering yaitu 6,1601.

Pada perlakuan yang kedua yaitu biji kacang hijau yang direndam selama 12 jam.

Sampel tersebut diekstrak dengan buffer asetat. Dari hasil ekstraksi biji kacang hijau yang direndam 12 jam diambil supernatannya untuk uji aktivitas enzim. Enzim hasil

ekstraksi tersebut diambil 1 ml dan ditambah pati 1% yang akan menjadi substrat. Warna

dari ekstrak enzim dengan pati1% yaitu bening. Selanjutnya diinkubasi selama 3 menit pada suhu optimum 30oC. Kemudian ditambahkan reagen DNS yang akan mendeteksi

adanya gula pereduksi dalam sampel disakarida maltosa hasil dari hirolisis substrat pati

oleh enzim amilase yang di ekstrak dari biji kacang hijau yang direndam selama 12 jam. Reagen DNS akan merubah warna menjadi kuning, dan setelah dilakukan pemanasan warna yang terbentuk akan lebih pekat dari warna sebelumnya. Kemudian dilakukan

pengenceran dengan menambahkan 20 ml aquades. Setelah itu diukur nilai

absorbansinya dan didapatkan nilai absorbansi sebesar 0,628. Kemudian nilai absorbansi tersebut dimasukkan ke persamaan linear sehingga didapatkan nilai x atau konsentrasi (C) sebesar 24,5588. Dari nilai konsentrasi tersebut didapatkan nilai aktivitas enzim -amilase pada biji kacang hijau yang direndam 12 jam yaitu 8,1863.

Pada perlakuan yang ketiga yaitu kacang hijau yang dikecambahkan selama 12 jam.

Sampel tersebut diekstrak dengan buffer asetat. Dari hasil ekstraksi biji kacang hijau

yang direndam 12 jam diambil supernatannya untuk uji aktivitas enzim. Enzim hasil ekstraksi tersebut diambil 1 ml dan ditambah pati 1% yang akan menjadi substrat. Warna dari ekstrak enzim dengan pati1% yaitu bening. Selanjutnya diinkubasi selama 3 menit

pada suhu optimum 30oC. Kemudian ditambahkan reagen DNS yang akan mendeteksi

adanya gula pereduksi dalam sampel disakarida maltosa hasil dari hirolisis substrat pati

oleh enzim amilase yang di ekstrak dari kacang hijau yang dikecambahkan 12 jam.

Reagen DNS akan merubah warna menjadi kuning, dan setelah dilakukan pemanasan warna yang terbentuk akan lebih pekat dari warna sebelumnya. Kemudian dilakukan

pengenceran dengan menambahkan 20 ml aquades. Setelah itu diukur nilai

absorbansinya dan didapatkan nilai absorbansi sebesar 0,642. Kemudian nilai absorbansi tersebut dimasukkan ke persamaan linear sehingga didapatkan nilai x atau konsentrasi (C) sebesar 25,2451. Dari nilai konsentrasi tersebut didapatkan nilai aktivitas enzim -amilase pada hijau yang dikecambahkan 12 jam yaitu 8,4150.

12

Wahyu Erwin Firmansyah THP-FTP-UB-2014 Pada perlakuan yang keempat yaitu kacang hijau yang dikecambahkan selama 24

jam. Sampel tersebut diambil dari data kelas lain (kelas D). Nilai absorbansi yang didapatkan

sebesar 0,134. Kemudian nilai absorbansi tersebut dimasukkan ke

persamaan linear sehingga didapatkan nilai x atau konsentrasi (C) sebesar 0,3431. Dari nilai konsentrasi tersebut didapatkan nilai aktivitas enzim

yang dikecambahkan selama 24 jam yaitu 0,1144.

-amilase pada kacang hijau

Pada perlakuan yang kelima yaitu kacang hijau yang dikecambahkan selama 48 jam.

Sampel tersebut diambil dari data kelas lain (kelas D). Nilai absorbansi yang didapatkan

sebesar 0,149. Kemudian nilai absorbansi tersebut dimasukkan ke persamaan linear sehingga didapatkan nilai x atau konsentrasi (C) sebesar 1,0784. Dari nilai konsentrasi tersebut didapatkan nilai aktivitas enzim

dikecambahkan selama 48 jam yaitu 0,3595.

-amilase pada kacang hijau yang

Dari kelima sampel tersebut terjadi perbedaan yang cukup signifikan antara data dari

praktikum kelas J dengan data dari kelas lain. Seharusnya semakin lama atau semakin dikecambahkan aktivitas enzim akan meningkat, namun dari data tersebut justru semakin

turun pada kacang hijau yang dikecambahkan selama 24 jam jam 48 jam. Sementara data dari kelas J sudah sesuai dimana dari biji kering, biji direndam, sampai kecambah 12 jam

mengalami peningkatan absorbansi yang menandakan adanya peningkatan aktivitas

enzim amilase. Perbedaan hasil tersebut dapat disebabkan karena pebedaan perlakuan dimana saat praktikum terjadi perbedaan konsentrasi saat mengambil larutan, sampel, maupun reagen. Selain itu dari reagen DNS yang semakin lama semakin tidak stabil.

Kemudian dari pengambilan substrat juga berbeda dimana pada praktikum kelas J konsentrasi yang digunakan yaitu 1% substrat pati sedangkan pada praktikum kelas D konsentrasi yang digunakan yaitu 1 ppm. Dari perbedaan tersebut dapat dijelaskan

bahwa dengan adanya perbedaan konsentrasi akan menyebabkan perbedaan serapan

oleh spektrofotometer yang berakibat pada perbedaan nilai absorbansi dan aktivitas enzim amilase yang cukup signifikan sehingga data yang dihasilkan kurang akurat untuk dijadikan sebuah perbandingan.

Keberhasilan untuk mengisolasi atau mengekstraksi dan pengujian aktivitas enzim

sangat tergantung pada jenis dan sumber enzim, letak enzim, kecermatan kerja , serta bahan dan cara ekstrasi yang digunakan. Kacang hijau dipilih karena memiliki kadar pati

yang tinggi. Percobaan yang dilakukan berdasarkan literatur sedikt berbeda dimana dengan menggunakan 5 perlakuan yang berbeda berdasarkan umur kecambah yaitu dari umur 1-5 hari, selain itu sampel yang digunakan yaitu kacang hijau dengan tiga

varietas yang berbeda. Dari penelitian tersebut uji statistik menunjukkan bahwa umur dan varietas kecambah kacang hijau berpengaruh nyata terhadap aktivitas amilase. Pada

13

Wahyu Erwin Firmansyah THP-FTP-UB-2014 waktu permulaan perkecambahan yaitu setelah Giberelin membentuk enzim -amilase. Kemudian enzim tersebut dalam 12-18 jam perkecambahan mencerna amilosa dan amilopektin pada pati kecambah. Hal tersebut menyebakan aktivitas enzim

-amilase

lebih besar dari pada hari kedua. Aktivitas enzim mulai naik secara stabil pada hari

ketiga dan turun pada hari keempat dan kelima. Penyerapan air pada proses perkecambahan biji mempunyai aktivitas utama untuk mengaktifkan makromolekul dan organel sel di dalam biji. Selama proses perkecambahan sebagian besar enzim dalam biji menjadi aktif diantaranya enzim

-amilase. Dengan adanya air akan memudahkan

dalam reaksi enzimatis (Suarni & Patong, 2007).

Berdasakan literature yang lain uji aktivitas enzim amilase dilakukan dengan dua

perlakuan saja yaitu pada biji kacang hijau kering dan biji kacang hijau yang direndam.

Dari percobaan tersebut didapatkan bahwa aktivitas enzim amilase pada biji kacang hijau kering lebih rendah daripada kacang hijau yang direndam. Hal tersebut disebabkan karena pada biji kacang hijau yang kering masih belum ada aktivitas

metabolisme sehingga belum ada kondisi yang menyebabkan adanya hidrolisis pati. Sedangkan pada biji yang direndam aktivitas enzim amilase lebih besar karena pada biji

yang direndam mengalami imbibisi dimana air diserap masuk ke dalam bahan. Masuknya air ke dalam bahan mengakibatkan zat-zat cadangan menjadi aktif. Proses masuknya air melalui kulit biji adalah proses fisik yang berhubungan dengan sifat kimiawi dari kulit biji dan sifat tanggap biji terhadap kesediaan air sekitarnya. Dengan

masuknya air juga akan meningkatkan rangsangan sel pada biji untuk meningkatkan

proses metabolisme yang berupa aktivitas respirasi. Dengan adanya proses metabolisme maka kebutuhan energy juga akan meningkat. Dengan demikian enzim amilase akan

menghidrolisis pati dalam biji, sehingga aktivitas enzim amilase pun meningkat pada saat perendaman (Anggrahani, 2009). 2.5 Urutan Data Berdasarkan hasil percobaan yang telah dilakukan maka dapat didapatkan urutan

data aktivitas enzim amilase dari yang terendah sampai terbesar. 1) Biji kacang hijau

kering dengan aktivitas enzim amilase sebesar 6,1601; 2) Biji kacang hijau yang direndam selama 12 jam sebesar 8,1863; 3) Biji kacang hijau yang dikecambahkan selama 12 jam sebesar 8,4150.

Namun jika data kelas lain ikut, urutan aktivitas enzim amilase dari yang terendah

sampai terbesar yaitu:

1) Biji kacang hijau dikecambahkan 24 jam


0,1144

1,3595

14

Wahyu Erwin Firmansyah THP-FTP-UB-2014 3) Biji kacang hijau kering

6,1601

4) Biji kacang hijau direndam 12 jam

8,1863


8,4150

2.6 Faktor yang Mempengaruhi a) Suhu: Suhu yang terlalu tinggi akan mendenaturasi enzim, karena enzim merupakan protein sehingga bagian aktif enzim terganggu dan munurunkan konsentrasi dan aktivitas enzim. Umumnya aktivitas enzim

-amilase terjadi pada suhu 30-40 ºC dan

aktivitasnya akan mengalami penurunan pada kisaran suhu 45-50 ºC, hal ini disebabkan

karena enzim mangalami denaturasi akibatnya molekul-molekul enzim rusak sehingga kehilangan spesifitasnya Peningkatan suhu eksternal secara umum akan meningkatkan kecepatan reaksi kimia enzim,

tetapi kenaikan suhu yang terlalu tinggi akan

menyebabkan terjadinya denaturasi enzim yaitu kerusakan struktur protein enzim, terutama kerusakan pada ikatan ion dan ikatan hidrogennya. (Suarni & Patong, 2007).

b) pH: Tingkat keasaman (pH) yang efektif untukenzim umumnya berkisar antara 4,5-8, pH yang terlalu tinggi atau terlalu rendah akan membuat enzim inakif secara irreversibel

karena kan terjadi denaturasi protein. Perubahan pH juga dapat menyebabkan

berhentinya aktivitas enzim akibat proses denaturasi protein pada struktur tiga dimensi enzim (Tosari, 2008).

c) Konsentrasi Enzim: Pada substrat tertentu kecepatan ditambah dengan bertambahnya konsentrasi substrat. Semakin besar konsentrasi enzim maka semakin tinggi kecepatan

reaksi, dengan kata lain konsentrasi enzim berbanding lurus dengan kecepatan reaksi (Poedjiadi, 2006).

d) Konsentrasi Substrat: Pada umumnya konsentrasi substrat akan menaikkan reaksi tetapi pada batas tertentu tidak terjadi peningkatan reaksi jika konsentrasi subtrat lebih

besar. Bila konsentrasi substrat diperbesar, semakin banyak substrat yang dapat berhubungan dengan enzim pada bagian aktif tersebut. Konsentrasi kompleks enzim substrat makin besar dan hal ini menyebabkan makin besarnya kecepatan reaksi (Yunianta, 2006).

e) Adanya Zat Inhibitor: adanya inhibitor akan menghalangi sisi aktif enzim bergabung dengan substrat spesifik, sehinggga reaksi antar substrat enzim terganngu atau tidak bereaksi sama sekali.

15

Wahyu Erwin Firmansyah THP-FTP-UB-2014 KESIMPULAN Dari praktikum yang telah dilakukan maka dapat disimpulkan bahwa prinsip dari

uji aktivitas enzim amilase yaitu menguji aktivitas enzim amilase dari kecambah bijibijian dimana aktivitas nzim amilase ditunjukkan dan diukur dari adanya maltosa yang terbentuk setelah substrat pati diinkubasi dengan enzim amilase. Tujuannya taitu untuk

mengisolasi enzim amilase dari kecambah kacang hijau dan menguji aktivitas enzim yang telah diekstrak. Faktor yang mempengaruhi aktivitas enzim yaitu suhu, pH, konsentrasi substrat, dan adanya zat inhibitor. Aktivitas enzim yang diperoleh dari

praktikum yaitu pada biji kacang hijau kering aktivitas enzim amilase sebesar 6,1601,

aktivitas enzim amilase pada biji kacang hijau yang direndam selama 12 jam yaitu 8,1863, aktivitas enzim amilase pada biji kacang hijau yang dikecambahkan selama 12 jam yaitu

8,4150, aktivitas enzim amilase pada biji kacang hijau yang dikecambahkan selama 24 jam yaitu 0,1144, aktivitas enzim amilase pada biji kacang hijau yang dikecambahkan selama 48 jam yaitu 1,3595. Dari hasil tersebut didapatkan aktivitas enzim amilase yang terbesar yaitu pada biji kacang hijau yang dikecambahkan selama 12 jam.

16

Wahyu Erwin Firmansyah THP-FTP-UB-2014 DAFTAR PUSTAKA Anggrahani, Sri. 2009. Pengaruh Lama Pengecambahan Terhadap Kandungan A-Tokoferol dan Senyawa Proksimat Kecambah Kacang Hijau. Jurnal Publikasi. Fakultas Teknologi Pertanian Universitas Gadjah Mada Yogyakarta Bintang, Maria. 2010. Biokimia Teknik Penelitian. Jakarta: Penerbit Erlangga Lim Chai Teo M-L. 2013. Analysis of in vitro Digestibility of Starches and Microcapsules: Evaluation of Retention and Release of Folic Acid in the Fortification of Food. Thesis. RMIT University Mutia, M., dkk. Isolasi dan Karakterisasi Enzim Amilase dari Akar Rimpang Alang-alang. Jurnal Publikasi. Jurusan Kimia FMIPA Universitas Hasanuddin Makassar Poedjiadi, Anna. 2006. Dasar-dasar Biokimia. Jakarta: UI Press Sari, L.D.A. 2004. http://eprints.undip.ac.id. Hubungan Aktivitas Enzim Amilase dengan Perkecambahan pada Tiga Varietas Kedelai (Glycine max (L) Marill) yang Berbeda. FMIPA UNDIP. Diakses Tanggal 15 Maret 2014 Jam 22.00 Suarni & Patong, R. 2007. Potensi Kecambah Kacang Hijau sebagai Sumber Enzim サamilase. Jurnal Publikasi. Vol.7(3). Hal.332-336 Sunarya, Y. & Setiabudi, A. 2007. Mudah dan Aktif Belajar Kimia. Jakarta: PT Setia Purna Inves Tosari, A. A. 2008. Aktivitas Enzim Amilase. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Hasanuddin Makassar Yunianta, dkk. 2006. Hidrolisis Secara Sinergis Pati Garut oleh Enzim サ-Amilase, Glukoamilase, dan Pullulanase untuk Produksi Sirup Glukosa. Jurnal Publikasi. Fakultas Teknologi Pertanian Universitas Brawijaya Malang

17

Ekstraksi Uji Aktivitas Enzim Amilase

Recommend Documents