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LA PRODUCCION DE ALIMENTO VIVO Y SU IMPORTANCIA EN ACUACULTURA INTRODUCCION

En la Acuacultura, uno de los factores limitantes es la obtención y producción de alimentos que cubran todos los requerimientos requerimientos para las especies especies de cultivo cultivo y que resulten resulten costeables. El alimento vivo (fitoplancton y zooplancton) es esencial durante el desarrollo larvario de peces peces,, crus crustá táceo ceoss y molu molusco scos. s. En la actu actual alid idad ad la inve invest stiga igaci ción ón orie orient ntada ada haci hacia a los los microorganismos como fuente de alimentación está en pleno desarrollo. En pases como !apón, donde se practica con "#ito la $aricultura, los cultivos masivos de microalgas, rotferos, cop"podos y cladóceros son la base de la producción comercial. %ado %ado el inte inter"s r"s que que e#is e#iste te por la Acuacu Acuacultltur ura a en &ati &atino noam am"r "ric ica a y el 'ari 'aribe, be, diri dirigi gido do principalmente a las especies de importancia comercial de peces, moluscos y crustáceos en condiciones condiciones controladas controladas para la producción y alta supervivencia supervivencia de semillas semillas en sistemas sistemas de cultivo semiintensivo e intensivo, se hace necesario el conocer las diferentes alternativas de producción de alimento vivo a gran escala, ya que es difcil sustituir el alimento natural, pues las dietas artificiales generalmente provocan altas mortalidades por deficiencias nutricionales cuando no están balanceadas. or otra parte, en la *ltima d"cada se ha tratado de sustituir los alimentos vivos por dietas micr microe oenca ncaps psul ulad adas as o por por t"cn t"cnic icas as que que perm permititan an el alma almacen cenam amie ient nto o por por conge congelad lado o o liofilización por tiempo indefinido de estos alimentos y en t"rminos generales no resuelven el problema real que es la demanda constante de alimento vivo y resultan incosteables. +na +na solu soluci ción ón a este este prob proble lema ma se fund fundam amen enta ta en el cono conoci cimi mien ento to,, opti optimi miza zaci ción ón y automatización de los sistemas de cultivo de fitoplancton y zooplancton, para llevarlos a nivele niveless masivo masivoss de producci producción ón semico semiconti ntinua nua o contin continua. ua. e logra logra optimi optimizar zar un cultiv cultivo o conociendo la concentración adecuada de nutrientes, buscando una coordinación entre el crecimi crecimient ento o y la utiliz utilizaci ación ón de estos estos nutrien nutrientes tes,, estanda estandariz rizand ando o una taza taza de diluci dilución ón o cosecha óptima a intervalos periódicos para lograr una producción alta y sostenida a largo plazo. El conoc conocim imie ient nto o y cont control rol de los los parám parámet etros ros ambi ambien enta tale less ópti óptimo moss en los los cult cultiv ivos os de fitoplancton y zooplancton es muy importante, ya que no sólo permiten la supervivencia y desarrollo de los organismos en cultivo, sino además factores como la temperatura y la salinidad regulan la concentración y calidad de nutrientes esenciales como son las vitaminas, los aminoácidos y los ácidos grasos. &as especies de microalgas y zooplancton zooplancton de mayor uso en Acuacultura, Acuacultura, se muestran muestran en la -abla  (/uillar, 01234 5irata, 01264 7atanabe et al., 0128). Estas especies han sido seleccionadas en base a su aporte nutricional y a las facilidades que permiten su producción masiva. En los siguientes captulos se presentan las alternativas de producción de las principales especies de alimentos vivos, as como sus caractersticas biológicas, que permiten el establecimiento de su cultivo. -A9&A 0 :eleto :eletonem nema a costat costatum, um, -halas -halassio siosir sira a pseudo pseudonan nana, a, 'haeto 'haetocero ceross calcitrans 5apt 5aptoph ophyc yceae eae soc sochry hrysi siss gal galban bana, a, soc sochry hrysi siss sp., sp., avlo avlova va luth lutheri eri 'hrysoph 'hrysophyce yceae ae -etrase etraselmi lmiss suecic suecica, a, -etrase etraselmi lmiss chuii chuii 'hlorop 'hlorophyc hyceaea eaea 'hlorel 'hlorella la autotro autotrophi phica, ca, 'hlorel 'hlorella la saccharo saccharophi phila la

9acillariophyceae

'hrypto 'hryptophy phycea ceaea ea 'yan 'y anop ophy hyce ceae ae ;otfera 'op"poda 9ranquiopoda 'ladocera 'ladocera

'hroomo 'hroomonas nas salina salina pir pirul ulin ina a sp., sp., pir pirul ulin ina a ma# ma#im ima a 9rachionus plicatilis -igriopus
-A9&A = E>E' E>E'-? -? %E &A A& A&@ @%A %A% %  -E$ -E$E; E;A A-+;A -+;A E@ &A '? '?$ $? ?' '? ?@ @ %E A'% A'%? ? /;A? E@ 'hlorella saccharophila (5irata,et al., 018B) E#p -emperatu alinida &pido 06F 0GF 0G 08 08 08 =F =F . ra del agua d s F F 0 0 = G3 6 GB 3 (C') (CD) totales H H =F H (D) 33 06.B 6 8.B 6.1 02.= == = =. 3.B =.B F.6 2.0 33. 1 0 06.B 8 2.1 6.= 03.B =B = B. 3.G =.3 F.3 G.F 3G. 6 8 06.B 0= 0=.2 B6 0B.6 =1. 3.0 =.6 F.B G.3 =1. 0 6 06.B 0B 00.0 B.6 0G.G =G. B.F 3.0 F.2 B.6 30. 0 0 0 06.B 08 00.0 B.F 03.B =6. 3.2 =.3 F.3 G.B 33. 0 8 06.B == 00.1 B.G 0B.2 =8. 3.3 0.8 F.3 B.F 3=. 8 B 06.B =G 0F.3 G.= 0G.0 =8. 3.8 0.1 F.3 B.F =1. 2 B 06.B 3F 0=.1 B.2 06.8 =G. 3.1 =.0 F.6 B.6 33. 2 3 = 06.FI =B 1.F 8.0 0G.G 3=. =.8 =.0 F.G 3.6 =8. = = =0.F =B 1.F 8.0 01.6 ==. 6.= 0.8 F.0 G.B =1. 3 B =6.2 =B 2.F 8.B 06.B =0. =.3 0.3 0.0 6.= 38. 6 6 =8.F =B 8.1 0=.0 3G.3 ==. 3.2 3.2 0.3 3.B 03. 2 1 =8.B =B 00.F 3=.1 08.2 08. =.8 0.B F.8 3.1 0G. 2 F

=8.B

=B

2.6

00.F 3=.1 08. =.8 0.B F.8 3.1 0G. 2 F •  Acidos grasos esenciales I 06.B F.2C' En el e#perimento =, temperatura variabley CD •

I. IMPORTANCIA NUTRICIONAL DE ALIMENTO VIVO

En los ecosistomas naturales acuáticos, la continuidad de las especies depende del equilibrio establecido entre los diferentes niveles de la trama trófica. As, el desarrollo y supervivencia de larvas y ogg, 012B4 7atanabe et al., 0128a, 01834 5irata et al., 018B). %e acuerdo a lo anterior, es importante conocer y maneogg, 012B) ;?-E@A 'A;9?5%;A-? /;AA -etraselmis 0.6= F.60 F.2F %unaliella 0.63 F.8F F.0B $onochrysis F.16 F.B1 F.== 'haetoceros 0.0= F.== F.=0 :eletonema 0.38 F.21 F.02 haeodactylum F.88 F.G6 F.02 &a compos composici ición ón celula celularr reporta reportada, da, correspo corresponde nde a result resultados ados de cultiv cultivo o en condici condiciones ones fsicoqumicas y nutricionales similares para las seis espcies (las cantidades de protena, carbohidratos y grasas están e#presadas en relación a cantidad total de 'arbono). -A9&A

6

'?$?'?@ ;?K$A&  $@E;A& %E '@'? EE'-E %E A&$E@-? LL? %E $A?; +? E@ A'+A'+&-+;AI -igriopus  Acatia %aphnia $oina EE'E 9rachionus plicatilis  e gMg 0B.1 B=.B 63.3 33.8 00.B 2=.= 6G.6 Jn gMg 2.6 1.8 8.= 0=.3 31.F 0=.8 0F.F $n gMm F.6 0.0 0.0 0.F F.= 03.= F.B 'u gMg 0.0 0.B 0.2 =.6 =.8 0.0 B.8 I 7atanabe et al., 0183. -A9&A B. '?$?'?@ %E A$@?A'%? EE@'A&E E@ '@'? EE'E %E J??&A@'-?@ %E $A?; +? E@ A'+A'+&-+;A  Artenia sp 9rachionus  Acartia -igriopus $oina spp nauplios plicatilis clausi  enilalanina 3.= 1.0 1G 3.1 0F.0 0FG 3.2 1.3 18 3.B 1.3 18 3.G 1.B 0FF 0G -irosina 3.2 0F.B 0G= 3.0 8.F 0=3 3.G 1.F 038 6.F 0F.2 3.3 8.8 03B B 0F. 0F. -reonina 0.2 6.8 6BI 3.= 8.3 28 6.= 11 3.8 0F.0 1B 3.8 1B B 0 -riptofano 0.F =.8 0GB 0.= 3.0 08= 0.0 =.8 0GB 0.0 =.1 02 0.= 3.= 088 0 00. Lalina 3.= 1.0 1G 6.= 0F.1 00B 6.B 001 3.3 8.8 13 3.= 8.B 81 3

03. 0B. 8F B.2 0B.= 1F B.8 1= B 6 0F. 0= 03.  Arginina B.F 06.= 0== 6.G 00.1 0F3 6.3 13 B.= 03.1 B.0 00G 8 F B 5istidina 0.3 3.2 22 0.B 3.1 80 0.1 6.8 0FF 0.G 6.3 1F 0.G 6.= 88 I II III I gM0FF g protena cruda (7atanabe et al., 0128a) II E#presado como total de aminoácidos esenciales (a.a.e.) III ;egistros basados en la composción con a.a.e. requeridos para peces el 0FF indica los mismos requerimientos &isina

G.0

02.3 0F3 G.0

0B.8 16

B.6

-A9&A G. ?;/A@$? $A;@? '+&-LA%? '?@ $';?A&/A E@ !A?@ (+. +$E9AA5, 012B) EE'E +E;LLE@'A $';?A&/A '?@'E@-;A'?@ ;?%+''?@ '-A '+&-LA%A D 9LA&L? ?strea edulis ato O 'haetoceros 3,FFF celMdaMlarva 06,FFF orgM=FF -a:eda. calcitrans (estadio temprano) l 012F $onochrysis 0F,FFF celMdaMlarva lutheri  Andara 'haetoceros to et 6F,FFF celMml 0F,FFF orgM3B l B1.3D broughtonii calcitrans al., 01G8 $onas sp 0F,FFF celMml  $eretri# 'haetoceros -ana:a, 3F,FFF celMml  =FD lamarc:ii calcitrans 01G8 @itzschia BF,FFF celMml  closterium pisula 0FF,FFF org G0D A:imoto 'haetoceros 3F,FFF a 0BF,FFF sachalinensi et al., calcitrans celMml s 01G6 atinopecten 'haetoceros -a:eda, =F,FFF celMml  88D yezoensis calcitrans 01GB :eletonema =F,FFF celMml costatum 'haetoceros mai, ?strea edulis =,FFF celMml 0=,FFF orgMton 6D calcitrans 01G2 $onochrysis 0B,FFF celMml lutheri ';+-A'E? enaeus :eletonema 5udinag 0F,FFF celMml  BGD  unada,

monoceros

costatum 'haetoceros calcitrans

01GG (nauplio postlarva) II. CULTIVO DE MICROALGAS

on llamadas microalgas a una gran cantidad de especies que constituyen el fitoplancton que abarca desde organismos autótrofos hasta microflagelados y microciliados au#ótrofos. u posición ta#onómica ha sido de gran pol"mica entre botánicos y zoólogos, como e
$uchos factores contribuyen para el desarrollo óptimo de los cultivos de microalgas, algunos de "stos afectan las caractersticas del crecimiento. &os recipientes de cultivo más com*nmente usados son de materiales no tó#icos como las caerenbac:, carboys o garrafas, etc., adecuados para cultivos de laboratorio. ara cultivos a gran escala los recipientes de plástico, madera y concreto son los más recomendables, incluyendo los estanques r*sticos en áreas rurales son los sistemas más económicos. En cultivos masivos la aereación es un factor muy importante para la homogenización de los nutrientes y para evitar la sedimentación de las microalgas. &as diatomeas suelen acumularse en lugares donde el agua no se mezcla, "sto tambi"n depende de la forma del recipiente de cultivo que cuando no es adecuado retarda el crecimiento. ?tro factor importante es la penetración de la luz en el cultivo4 en los cultivos masivos la profundidad es tan grande que la intensidad de la luz insidente no es suficiente para la fotosntesis, hasta el fondo del tanque. En los cultivos masivos a la intemperie la penetración de la luz es más efectiva, pero se debe reducir la intensidad de la luz fuerte, cubriendo estos estanques con una malla. En cultivos a gran escala es recomendable la inyección de '?= (F.BD) para contribuir al proceso fotosint"tico. ara muchas especies de %iatomeas la temperatura óptima oscila entre los 0B y =FC', pocas especies de esta familia crecen a más de =8C', las cloroficeas pueden soportar altas temperaturas4 un e
%A$E-;? $E%? haeodactylum (diatomea) 0F h =BC' 0F.6Q :eletonema (diatomea) 03.0 h 08C' R=FQ %unaliella (cloroficea) =6 h 0GC' 02.8Q 'hlorella (cloroficea) 2.2 h =BC' BQ -etraselmis (cloroficea) 08 h 08C' 08.6Q $onochrysis (crisoficea) 0B.3 h =FP=BC' 0FQ sochrysis (crisoficea) 3F.= h =FC' 0F.=Q Estas especies se han utilizado en acuicultura marina dados su valor nutritivo y digestibilidad, además de su capacidad para crecer en cultivos masivos. &a duración del ciclo celular como los requerimientos de temperatura son suceptibles de variación mediante selección de variedades. /E@E;?

''&? -E$E;A-+;A ?-$A

-A9&A 8. ;ES+E;$E@-? ;@'A&E %E &? '+&-L? %E $';?A&/A ;ES+E;$E@-? '?$+E-? S+$'? LA&?;E >sicos =,FFF P &uz 6,FFF lu# -emperatura 0B P ==C' alinidad F.32T p5 2P1 ;edo# @utritivos ' '?='?3 gM0FF ml ?=5=? ?, 5 gM0FF ml ≃

@

@=@56H @?3

gM0FF ml



?6

gM0FF ml

≃

?6  @a, N, 'a, $g ales >e, Jn, $n, 9, 9r, i ales 'u, 'o, 'l, , r, ;b, Al, et ales 90=, tiamina, biotina Litaminas

gM0FF ml gM0FF ml mgM0FF ml QgM0FF ml QgM0FF ml En esta tabla se e#ponen los requerimientos principales de los cultivos de microalgas y sus valores apro#imados. En cada caso habrá que estudiar los reqUerimientos particulares de la especie y de la variedad que se vaya a cultivar en las condiciones concretas de cultivo que se van a utilizar, por lo que estos datos son sólo orientación (Ninne, 0121). El fotoperodo es un factor que regula la división celular, en diatomeas la reproducción ase#ual (división) ocurre durante el perodo de luz y "ste es acelerado ba
perodo de iluminación puede a
e han desarrollado diferentes medios para el cultivo de microalgas que van desde las fórmulas para enriquecer el agua de mar natural, hasta el uso de medios artificiales que permitan resultados constantes en contraste con los resultados tan variables que brinda el uso del agua de mar natural que entre otros factores depende del lugar donde se colecta "sta, y el tiempo de almacenamiento de la misma. &os medios artificiales se usan principalmente para fines e#perimentales, ya que como se ha mencionado, brinda resultados constantes, aunque e#isten algunas especies que no crecen en medios artificiales por factores desconocidos que afectan su crecimiento, las principales fórmulas utilizadas van desde el agua de $iguel, que data de 010F, desarrollada por Allen @elson4 el medio de Endchereiber de 0136, hasta fórmulas especficas para familias como la fórmula del &aboratorio 5as:ins de @ueva or: para diatomeas, rovasoli et al., 012B4 $atthiesen O -horner, 01GG4 $cachlan, 01234 /uillard >., 01234 %roop, 012B, 01214 choene, 018=, etc. &as principales formulaciones de los medios de cultivo, tanto de mantenimiento de cepas como de producción masiva (minerales, enriquecidos y orgánicos), se describen desde la -abla 1 hasta la -abla 0G. El fitoplancton se desarrolla y multiplica en relación de las condiciones fisicoqumicas del medio. En t"rminos generales son los macronutrientes o factores limitantes del crecimiento el carbono, @itrógeno, >ósforo, ilicio, $agnesio, otasio y 'alcio, que se requieren en cantidades relativamente grandes, mientras que los llamados micronutrientes (>ierro, $anganeso, 'obre, Jinc, odio, $olibdeno, 'loro y 'obalto) se necesitan en menores cantidades. E#isten otros medios que incluyen en su composición sustancias orgánicas (vitaminas, aminoácidos) necesarios para aquellas especies de microalgas Au#ótrofas, es decir que no sintetizan por medio de la fotosntesis este tipo de compuestos y resultan factores que pueden limitar su crecimiento4 tal es el caso de latimonas, 'hrysophytas y algunas 9acillariophyceas. -A9&A 1. $E%? '5+ 0F ($?%>'A%? ?; /E;&?>>) (F. +$E9AA5, 012B) (;ecomendado para aislamiento de microalgas de hábitats oligotróficos y eutróficos) 'a(@?3)= F.F6D N=5?6

F.F0D

@a='?3

F.F=D

$g?6.25=?

F.F=BD

@a=i?3

F.F=BD

'itrato de >ierro Amoniacal @?-A uede usarse para medio solidificado  AgarAgar

F.FFBD 0.FD

-A9&A 0F. $E%? E@;S+E'%? $E%? $/+E& (A&&E@@E&?@, 010F) olución A N@?3

=F. = g

5=?

0FF ml

@a=5?60=5=?

6g

'a'l=G5=?

6g = ml = ml

olución 9

5'l conc. >e'l3 5=?

8F ml  Agregar = ml de la olución A y 0 ml de la olución 9 a un litro de agua de mar natural, y calentar a 2FC' por =F minutos. $E%? E;%A5;E9E; E@;S+E'%? (>?@, 0136a,b) @a@?3 0F mg @a=5?60=5=? = mg E#tracto de suelo  Agua de mar $E%? E;%'5;E9E; I Agua de mar E#tracto de suelo @a@?3

B ml 0FF ml 0 litro BF ml F.= g

@a=5?6.0=5=? F.F3 g I e recomienda usar el agua filtrada y pasteurizada,y adicionar los ingredientes. -A9&A 00. $E%? %E A5$A (ara cultivo masivo de cloroficeas marinas) ulfato de Amonio (para la agricultura =0D) uperfosfato de 'alcio (para la agricultura =0D) +rea (para la agricultura =0D) 'leWat 3=

(>>AA, 0FF gMt 0B gMt 0B gMt 3FPBF gMt

01G6a)

'omponentes de 'leWat 3= >e'l= (como fuente de >e)

F.38BD

Jn'l= (como fuente de Jn)

F.0GGD

$n'l= (como fuente de $n)

F.22BD

'o'l= (como fuente de 'o)

F.F02D

'u?6 (como fuente de 'u)

F.FF2D

(@56)G$o2?=6 (como fuente de $o)

F.G3=D

539?3 (como fuente de 9)

=.62FD E%-A F.FFBD $E%? %E A5$A $?%>'A%? (5;A-A, 012B) $edio de ashima (en la misma concentración) eptona BF gMt eptidasa F.FFBD %iaminasa F.FFBD (recomendado para cultivos a#"nicos) -A9&A 0=. A@AE O $A (01G8) A;A $onochrysis lutheri, latymonas sp., @itzschia closterium, 'haetoceros calcitrans @a'l 08 mg $etal $i#I 3F ml N'0 GFF mg >e (as 'l) 0FF Qg @a@?3 BFF mg -ris 0g $g?6 . 25=?

Bg

Lit.90=

3Qg

'a (as 'l)

0FF mg

@a= i?3

8F mg

N=5?6

3F mg

Litamin $i#X

0 ml

5=?

0l I $ezcla de metales 0FF ml, contanido @a = E%-A, 0FF mg4 >e, 0 mg4 Jn, F.B mg4 $n, 6 mg4'o, F.F0 mg4 'u, F.FF6 mg4 9, =F mg. X $ezcla de vitaminas BF ml, contenido 9 0=, 0F Qg4 biotina, BF Qg4 9 0, B mg -A9&A 03. $E%? %E /+&&A;% O ;5-E; (A;?@ O -;'N&A@%, 01G0)  A. ?&+'?@E @+-;E@-E 0.%isolver F.F8 gr de clorhidrato de 'obalto 'o'l =.G5=? y F.8 gr de ulfato de 'obre 'u?6.B5=?4 en 0FF ml de 5 =? destilada. =.AVadir 0 ml de solución A.0. a apro#imadamente 8FF ml de 5 =? destilada, que previamente se le ha adicionado F.= gr de -ricloruro >"rrico >e'l3.G5=? F.FG gr de ulfato de Jinc Jno 6.25=?

F.0= gr de ulfato de $anganeso $n?6.5=? F.F3 gr de $olibdato de odio @a =$o?6.=5=? 3.AVadir 0.= gr de Etilenodiaminotetracetato %isódico (E%-A) diludo a cerca de 1FF ml de 5=? destilada. 6.Aosfato %ihidratado de otasio N5=?6. 2.%iluir la solución a 0 litro y en autoclave a menos de 0B libras de presión por 0B minutos. 8./uardar la solución en botellas de vidrio en la obscuridad. 9. &'A-? %E ?%? 0.%isolver 0F.B gr de $etasilicato entahidratado de odio @a=i?3.B5=? ó 06 gr de @a=i?3.15=? en 0 litro de agua destilada. =.Esterilizar la solución por filtración a trav"s de un filtro de vidrio. 3./uardarla en un envase de polipropileno esterilizado. '. A'%? 5%;?'&?;5%;'? 0.reparar una solución F.0@5'&. =.%eterminar por titulación la cantidad de esta solución necesaria para neutralizar 0F ml de la solución 9.=i Y ml de F.@5'& han sido utilizadas para neutralizar 0F ml de solución 9.=, multiplicar por 0FF y esta cantidad llevarla a 0 litro de 5 =? destilada. 3.Esterilizar la solución ácida por filtración a trav"s de un filtro de vidrio. 6./uardarlo en una botella de polipropileno esterilizado. %. ?&+'?@ %E L-A$@A 0.%isolver 0F mg de -iamina hidroclórica y 0F mg de 9iotina en 0FF ml de 5 =? destilada. =.%iluir 0F ml de solución %.0 en 0FF ml de 5 =? destilada. 3.Esterilizar solución %.= pasándola a trav"s de un filtro de vidrio. 6./uardarla en porciones de 0F ml en tubos est"riles de tapa enroscada a menos de =FC'. -A9&A 06. $E%? %E /+&&A; Z>M=[ (!. -E@, 0121) @utrientes $ayores olución rimaria @a@o3 2.B D WMv @a5=?6.5= F.B D WMv ? @56'l =.GB D WMv @a=?3.1@= D WMv (calentar para 3 disolver) ? +sar un mililitro de estas soluciones por litro de agua de mar, para preparar el medio Z>M=[. ugerencia reparar el @a@?3 
Jn?6.25=? Jn'l= 'o'l=.G5=? $n'l=.65=? @a=$n?6.=5=?

8 =.= D WMv 0.F D WMv B 0.F D WMv 08 D WMv F.G D WMv 3

Es conveniente hacer las soluciones primarias en forma individual. y con una concentración menor de 0FG más concentrada que en el medio Z>M=[. olución rimaria de $etales -raza  A. 'on Zecuestrante >"rrico[ ('loruro >"rrico) %isolver B gr del ecuestrante >"rrico en 1FF ml de agua destilada y aVadir 0 ml de cada una de las soluciones primarias de metales traza preparados anteriormente4 aforar a un litro y asegurar que el p5 quede cerca de 6.B. +se 0 ml de esta solución por cada litro de agua de mar para hacer el medio de cultivo. Agua de mar filtrada (BQ, 0FQ, etc.) y de ser posible irradiada con +L. 9. 'on E%-A y 'loruro >"rrico (>e'l.G5 =?) %isuelva 3.0B g de >e'l.G5 =? ó 6.3G de E%-A (@a =) en 1FF ml de agua destilada, agregue 0 ml de cada una de las soluciones stoc: primarias de metales traza y afore a 0 litro, asegure un p5 de =.F. +se 0 ml de esta solución por litro de agua de mar para preparar el medio ZfM=[. olución rimaria de Litaminas •olución rimaria de 9iotina e prepara a partir de cristales de 9l, disolver 0F mg de biotina en 1G ml de agua destilada. 5aga esta solución ligeramente ácida para ser  autoclavada y mant"ngase en un congelador. •olución de 9itamina 9  A partir de 'yanocobalamina +.. de 0FFF mgM ml solución 0= inyectable. -omar 0 ml y aforarlo en 0FF ml de agua destilada. &a solución se acidifica para ser autoclavada y se congela. olución rimaria de Litaminas •-omar 0 m de la solución primaria de 9iotina y F.0 ml de la solución stoc: primaria de 90=, aforar a 0FF ml con agua destilada y aVadir =F mg de -iamina 5'l. e pueden preparar ampolletas de =, B ó 0F ml y almacenarlas est"riles (acidificas) en el congelador. +se \ ml de esta solución por cada litro de agua de mar para preparar el medio ZfM=[. reparación del 9uffer Z-ris[ -ome BF g de Z-ris[ y disu"lvase en =FF ml de agua destilada y a
'a'l=.=5=?

3G.2G gMl

$g?6.25=?

3G.12 gMl

@a5'?3

0=.GF gMl

N=5?6

8.20 gMl

@a@?3

8B.F0 gMl

@a=i?3.15=?

=8.6= gMl %e esta solución rotulada como a se obtiene 0 ml y se le adiciona a 0 litro de agua esterilizada. b. $icronutrientes @a=E%-A

6.3G gMl

>e'l3.G5=?

3.0B gMl

'u?6.B5=?

F.F0 gMl

Jn?6.25=?

F.F== gMl

'o'l=.G5=?

F.F0 gMl

$n'l=65=?

F.08 gMl

@a=$o?6.=5=?

F.FFG gMl %e esta solución rotulada como b, se obtiene 0 ml y se le adiciona a 0 litro de agua esterilizada. c. Litaminas -hiamine. 5'l F.0 mgMl 9iotin F.B gMl 'yanocobalamina F.B gMl %e esta solución rotulada como c, se obtiene 0 ml y se le adiciona a 0 litro de agua esterilizada. d. -ris -ris BF.gM=FF ml (5ydro#ymethyl) 5=? dest.  Aminomethano ('uando el cultivo se encuentra a#"nico el tris puede reemplazarse por /lycylaglycine). %e esta solución rotulada como d, obtener = ml y adicionar al litro de agua esterilizada que se está preparando

el cultivo. +na vez preparado el medio de cultivo, se debe hacer  aamilia 9acilarioficea) @a@?3 3.6 mg @a=5?6.0=5=? F.1=B mg @a=i?3.15=?

0F.06 mg

@a=E%-A.=5=?

F.8F3 mg

>e?6.25=?

GF.F Qg

$n'l=.65=?

06.6 Qg

Litamina 90=

'5?@E,

018=)

F.B Qg 9iotina F.B Qg -iamina5'l F.B Qg ara enriquecer un litro de agua de mar  @?-A &a solución stoc: de >ierro y ilicato debe de acidificarse un poco con una gota de  Acido ulf*rico concentrado, y la solución de E%-A debe acidificarse con Acido 'lorhdrico. El E%-A puede ser adicionado antes que el >ierro. ara la producción de microalgas a nivel comercial se usa el agua de mar enriquecida con fertilizantes agrcolas (+rea, >osfato triple, @itrato de Amonio, etc.) ('hu, 016=, y -amiya, 01B24 >>AA, 01G6a) y tradicionalmente la fertilización de estanques con abonos orgánicos, en cultivos de especies herbvoras como las carpas. 3. -E'@'A %E A&A$E@-?  +;>'A'?@ $uchos m"todos se han desarrollado para obtener cultivos monoespecficos (de una sola especie) y a#"nicos (libres de contaminantes). A continuación se brinda una breve descripción de algunos de los principales m"todos que se utilizan para aislar y purificar  microalgas (?. +mebayashi, 012B) (>ig. 0). 0) Aislamiento •ipeteo capilar e utiliza para separar microalgas mayores de 0FQ, mediante una pipeta construda con un tubo capilar, a trav"s del microscopio óptico se Zpesca[ las c"lulas y se separan en pequeVas gotas de nutrientes colocados alrededor de una 'a
aparecen sobre la superficie del agar, que se pueden transferir mediante el $"todo de 5oc:ing o de la micropipeta a medios lquidos. =) urificación 'omo ya se mencionó al describir las t"nicas de aislamiento, estas mismas nos permiten purificar el ]ultivo a trav"s de las resiembras clonales sucesivas, pero además es recomendable entre otros m"todos el uso de antibióticos para eliminar otros microorganismos, generalmente de tipo bacteriano que est"n contaminando el cultivo de microalgas de nuestro inter"s. En el inciso B de este mismo captulo correspondiente a $"todos de Esterilización se amplian las alternativas. 3) 'ontrol 9acteriológico ara determinar el desarrollo bacteriológico realizamos lo siguiente 0. reparación del $edio de Jobell -rypticase 0.F gr   E#tracto de levadura 0.F gr   >osfato >"rrico B mg  Agar 0B.F gr   Agua enve
>ig. 0b) Aislamiento y purificación de microalgas >ig. 0a) $"todo de filtración a trav"s de por el m"todo de diluciones sucesivas y una columna empacada con algodón. subcultivos repetidos.

>ig. 0c) $"todo de aislamiento y >ig. 0d) Aislamiento mediante micropipeta y el uso purificación de microalgas en placa de de microscopio. agar. +na vez preparado colocar en 'a
esterilización a 0B lbrs. de presión y 0=BC'. 'on una asa de latino picar el agar con la muestra que se desea analizar y colocar a la luz y observando si hay crecimiento bacteriano. =. i el cultivo presentara bacterias es aconseiltrar en equipo est"ril, adicionar vol*menes de 3.F, =.F, 0.F, F.B y F.=B que dan concentraciones de E
'uando el plancton es utilizado para alimentar larvas u organismos filtroalimentadores como los moluscos, el suministro constante y la concentración de estos alimentos son factores que determinan la supervivencia y desarrollo de los organismos en cultivo. A continuación se hace una descripción breve de los m"todos que se utilizan para determinar el n*mero de c"lulas presentes en una muestra de plancton. 0) 5ematocitómetro o 'ámara de @eubaver (>ig. =) $ediante una pipeta asteur se toma una muestra de plancton y se desliza en la cámara que previamente tiene adherido el cubreob
>ig. =a) 'onteo celular en homatocmetro.

>ig. =b) 'uadrantes de la cámara de conteo. a.rimero calcule el factor de dilución m ^ $uestra problema (ml) f ^ Agua de mar con formaldehido b.e requiere tambi"n la profundidad del hematocmetro, la cual está incluida en el mismo en la parte inferior derecha. .5. ^ rofundidad del 5ematocmetro c.-odo c.-odo el cálculo se multiplica por 0,FFF para convertir c onvertir a mililitros. d.e requiere el n*mero promedio de c"lulas de la muestra problema. @.. @.. ^ @*mero promedio de c"lulas por ml 'on todos los incisos anteriores se realiza el cálculo de n*mero de c"lulas de la muestra problema por ml y la fórmula queda as @o. de '"lulas ^ (>.%.) (.5.) (0,FFF) (@..) =) %ensidad ?ptica $ediante un espectrofotómetro se determina la concentración celular de la muestra por  densidad óptica (calibrando con anterioridad el aparato, siguiendo las instrucciones del manual correspondient correspondiente), e), se determina determina la transmitancia transmitancia (@m), que se e#trapola con la recta patrón antes determinada determinada que corresponda corresponda a la especie problema (se construye construye graficando graficando transmitancia vs. num. de c"lulasMml). As en la intersección de la recta conociendo la concentración (@m) se puede calcular la cantidad de microalgas de la muestra problema. or  otro lado, conociendo la ecuación de la recta de cada gráfica, seg*n la especie, se determina dire direct ctam amen ente te la conc concent entrac ració ión n de c"lu c"lula lass de la muest muestra ra sust sustitituy uyen endo do el valo valorr d" la transmitancia en esta ecuación. 3) Lolumen 'elular  or or cent centri rifu fuga gaci ción ón,, se obti obtien ene e Zun Zun paqu paquet ete e o past pastililla la celu celula lar[ r[ que que dese desech chan ando do el sobrenadante, puede ser pesado y determinado en unidades de peso 7Mv, la cantidad de c"lulas o biomasa de la muestra problema en peso h*medo o peso seco. 6) 'omposición Sumica En algunos estudios se puede determinar la concentración de clorofila A,9 y otros pigmentos presentes en la muestra. %ebe considerarse que la composición qumica del fitoplancton vara de acuerdo al tipo de cultivo usado, medio nutritivo y otros factores por lo que es necesario realizar el estudio de la composición qumica (análisis pro#imal) de la especie de

estudio en relación al tipo de cultivo desarrollado. 5. METODOS DE ESTERILIZACION

E#is E#iste ten n dife difere rent ntes es m"to m"todos dos para para logra lograrr las las meormol e recomienda su uso en los casos en que e#ista e#ista una contaminació contaminación n en las instalaciones instalaciones o laboratorio por hongos y otros microorganismos. e utiliza una concentración de F.0D al 0FD (no se utilice para material de cristalera o recipiente de cultivo). olución de Alcohol Etlico al 2FD e recomienda para material de cristal (pipeta, caenol, pero "ste *ltimo es muy tó#ico). =) Esterilización >sica Esterilización por 'alor 5*medo +til +tiliz izand ando o difu difuso sores res de vapor vapor a una una temp temper erat atura ura de 0FF_0 0FF_00F 0FC', C', se recom recomie ienda nda para para estanques y tuberas de agua y de aire, destruye microorganismos vivos e incluso destruye esporas. esporas. e recomienda recomienda utilizarlo utilizarlo por tres das consecutivos consecutivos.. Este m"todo m"todo recibe el nombre de -indarización.  Autoclave e recomienda para la esterilización de medios de cultivo, vitaminas, material de cristal. -iene la desventailtración e utiliza para separar partculas orgánicas o microorganismos en los medios de cultivo o inst instal alaci acion ones es del del sist sistem ema a de aere aereac ació ión. n. E#is E#iste ten n dife difere rent ntes es tipos tipos de los los que que podem podemos os mencionar filtros milipore (membranas, vidrio, celulosa, etc), filtros de fibra (algodón, vidrio, mate materi rial ales es sint sint"t "tic icos) os),, filt filtros ros de tierr tierra a de diat diatom omea eas, s, gele geless de acril acrilam amid ida a (esf (esfera erass de diferentes tamaVos en micras), empaques de algodón y carbón activado, y finalmente e#isten unidades comerciales de esterilización con cartuchos sint"ticos (F.6BQ, 3Q, BQ, =FQ) etc. Esterilización por +.L. +.L. &os efectos de la irradiación ultravioleta son bacteriostáticos y fungiostáticos en logitudes de onda menores de BFF @$ (!erlov, 012F). e recomienda para estos fines las longitudes de onda de =6F a =8F @$ las má#imas eficiencias se obtienen cerca de los =B6 @$ (Ninne, 012G). &os rayos ultravioleta desinfectan el agua. El dato más importante y preciso sobre un tratamiento con rayos +.L. es la dosis de +.L. (normalmente e#presada en Q7 segMcm=)

requ requer erid ida a para para mata matarr a un dete determ rmin inad ado o porc porcen enta taig. 3 y -abla 6) (Ninne, 012G4 7heaton, 01224  Aguirre, 01804 -orrentera -orrentera O >ranco, 0188). 3) 'riter 'riterios ios de Eficie Eficienci ncia a para la elecc elección ión y +tiliz +tilizaci ación ón de los $"todos $"todos de Esteri Esteriliz lizaci ación ón $encionados a.$"todo a.$"todo ndirecto ndirecto e analiza analiza el estado de salud y las tasas de superv`vencia superv`vencia de los organismos en cultivo. b.$" b.$"to todo do %ire %irect cto o e calc calcul ula a el porce porcent nta< aigs. 3 y 6 se muestran resultados de diferentes m"todos de esterilización. 6. EQUIPO E INSTALACIONES

a.ala o &aboratorio de 'ultivo e recomienda para fines de mantenimiento de cepas, transferencias sucesivas de cultivos, crecimiento de cultivos en pequeVos y medianos vol*menes. /eneralmente para fines de investigación las siguientes caractersticas &aboratorio con temperatura controlada 08P=FC'. aredes y pisos de azuleigura B se muestra un e
FIGURA 3a Promedlo de las Bocterlas viables formadoras de Colonla (C.F.U.) por mllímetro despes de diversos tratamientos. (9arroso, 0182).

FIGURA.

3b

Rorconta!es

do

Redcci"n (C.F.U.) obtenldos con dlversos tratamlentos. (9arroso, 0182).MpR

-A9&A 02. ;E+&-A%? ;E?;-A%? ?9;E E& +? %E E-E;&JA'?@ +.L. E@  A'+A'+&-+;A (-?;;E@-E;A O >;A@'?, 0188)  A+-?; (A?) >&7? %E@%A% D%E -? %E ?9!E-? %E %E +.L. ;E%+?'?@ '?@-A$@A@- @LE-/A'?@ E ?:inami et al.,  1F Q 1F 9acterias -ratamiento de agua de 01B= 7Mcm= mar. helton and   óptimos 9acterias 'ultivos de alme
9urroWs y 'ombs, 01G8 Eagleton y 5erald, 01G8 &as:er y Llymen, 01G1 -he >ishery ?ceanography 'enter al &a 0FFF !olla, (+A) 0tMmin anders y >ryer, 012= $urchelano, 3 0tMmin 012B Nimura, et al., 8.B 012G 0tMmin 9ulloc: y = 0tMmin tuc:ey, 0122 9onnefoy, et  al., 0128



significativa

9acterias

'ultivo de almón.



óptimos

9acterias

%esinfección acuarios marinos.

 significativa =0B,BFF Q 1F D 7MsegMcm=  óptimos

9acterias 9acterias

==,0FF Q 7 11.F segMcm= 03,0FF Q 7 11.11 segMcm= =F,FFF Q 7 BF.F segMcm=

9acterias

9acterias

9acterias oblación microbiana mezclada. 9acterias

9roWn y 3= ;usso, 0121 0tMmin  Aguirre, 0180 3.2B0 0tMmin

3F,FFF Q 7 significativo segMcm= GF.1B Q 7 11.G3 segMcm=

$aisse, et al.,  0180

0F,FFF Q 7 1F D segMcm=

Lirus

 Agratze:, al., 0183

10,1FF Q 7  segMcm=

9acterias

et 

a:o, et al., 3 0 0G0,GFF Q 11.1 018B lMmin 7 segMcm= a:o, et al.., 0B lMmin 3=,3FF Q 7  018B segMcm= a:o, et al.., =B lMmin 01,6FF Q 7 0FF 018B segMcm= -orrentera y 3.2B 06F,FB1 Q 0FF D >ranco, 0188 lMmin 7 segMcm=

9acterias

5ongos Lirus 9acterias 9acterias

de

Esterilización de agua de mar. 'ultivo de peces. 'ultivo de '. 'rasostrea gigas. -ratamiento de agua de mar. 'ultivo bivalvos. -ratamiento de aguas negras. 'ultivos de 'rasostrea virginica. Esterilización de medios de cultivos continuos de microalgas. istema de recirculación para peces. istema de recirculación para peces. -ratamiento de aguas negras. 'ultivo de peces marinos. 'ultivo de peces marinos. -ratamiento de agua de mar almacenada.

7. TIPOS DE CULTIVO

0.'ultivo Estático %esarrollo del cultivo hasta fase de crecimiento e#ponencial y la utilización del

volumen total del mismo. /eneralmente el uso de estos cultivos es para fines de bioensayo o bien para transferencia a vol*menes mayores (ver la >igura G, que ilustra la secuencia del cultivo). =.'ultivo 'ontinuo %e acuerdo a Nubitsche: (012F), un cultivo continuo es un sistema de fluiguras 2 y 8 se muestran dos e
>ig. 6a) Esquema del ivnernadero de 7achapreague (+A). 'ultivo masivo con temperatura controlada en

invernadero con ventilador.

>ig. 6b) 'ultivo masivo a la intemperie de algas unicelulares en tanques de fibra de vidrio (la temperatura es controlada por enfriadores sumergibles. &a !oya, an %iego, +..A).

(Agitar los recipientes = ó 3 veces al da)

toc: primario ?btenido de laboratorio ('epario) noculación asc"ptica de plancton on agua esterilizada filtrada y enriquecida. El plancton permanece en contendores de stoc:. 'recimiento de 6 das sin aire.

'ontenedor  'ultivo intermedio

/arrafón de =F its. 'ontenedor =FF its.

de

noculación asc"ptica de un stoc: de cultivo de agua marina esterilizada en outoclave, filtrada y enriquecida. 'recimiento de 6 das. >lu
noculación del garrafón de cultivo en agua marina filtrada, enriquecida e irradiada. 'recimiento de = das. >lu
o

>ig. B) ecuencia de cultivo en sistema estático. 'uando se ha alcanzado una densidad óptima de c"lulas, se utiliza todo el cultivo como inóculo de la siguiente fase.

>ig. G) 'ultivo semicontinuo (;. +:eles, en tein, 0121). Esquematización diagram"tica de un cultivo semicontinuo (0), cilindro de '? =, (=) botella colectora de cultivo, (3) cámara de llenado asc"ptico, (6) flu<ómetro de gas, (B) filtro de aire, (G) regulador de presión, (2) compresor de aire, (8) salida de gas, (1) campana de llenado asc"ptico sobre el inoculador, (0F) sifón de cosecha, (00) válvula de aguernbach con inóculo.

>/. 2) 'ultivo semicontinuo ('áceres, 01214  Aguirre, 0180). istama de cultivo semicontinuo de -etraselmis suecica usando medio de cultivo esterilizado con autoclave. A) ;eserva de medio de cultivo (=F 0)4 9) ifón para el medio de cultivo4 ') Escape de aire4 %) ;ecipiente de cultivo (bolsa de plástico)4 E) %osificador de aire4 >) >iltro de aire4 /) ifón de cosecha4 5) ;ecipiente de cosecha. 8. MODELOS DE PRODUCCION

 Alrededor de 01GF se inició la modelación de los cultivos continuos con bacterias (>encl, 01GG), basados en la teora básica desarrollada por $onod (01BF). En relación a estas teoras matemáticas se han desarrollado numerosos trabaiguras 1, 0F y ll se muestran tres e
$';?A&/A A;A A&$E@-A'?@ E@ A'+'+&-+;A  A&-E;@A-LA LE@-A!A @'?@LE@E@-E (granlorecimiento natural en /eneralmente barato, poca mano 'ontrol limitado invernadero (7achapreague) de obra, producción masiva, 0F03 c"lulasMda aprovechamiento de la luz solar  >lorecimiento natural en piscina /eneralmente barato, 'ontrol limitado sobre con aguas de desecho (7oods aprovechamiento de nutrientes, las especies de algas 5ole) 0F06c"lulasMda aprovechamiento de la luz solar  'onWy (nglaterra) BY0FG ?strea de F.3 cmMaVo 7achapreague (Lirginia, +A) =FFY0FG alme
>/. 8a) ;elación entre la densidad y la dilución para un cultivo semicontinuo de -etraselmis suecica, donde se muestran las medias de los valores obtenidos con los lmites de confianza al 1BD de una distribución normal. &a relación se obtiene de acuerdo al $odelo de $onod (01BF). Aguirre, 0180.

>/. 8b) ;elación entre la producción y la dilución en el cultivo semicontinuo de -etraselmis suecica. &a dilución óptima se encuentra en el punto de infle#ión de la curva.

>/. 1a) ;elación entre la densidad y la dilución para un cultivo semicontinuo de sochrysis galbana, donde se muestran las medias de los valores obtenidos con los lmites de confianza al 1BD de una distribución normal. &a relación se obtiene de acuerdo al $odelo de $onod (01BF) (ares O &eyva, 0182).

>/. 1b) ;elación entre la producción y la dilución en el cultivo semicontinuo de sochrysis galbena. &a dilución óptima se encuentra en el punto de infle#ión de la curva (ares O &eyva, 018=).

>/. 0Fa) $odelo de %roop (01GG) que asume la distribución de los datos en forma lineal de la densidad (K) de 'hlorella saccharophila en función de la tasa de dilución (%) (-orrentera, 0183).

>/. 0Fb) $odelo de producción de %roop, para 'hlorella saccharophila basado en los datos de la regresión lineal (-orrentera, 0183). III. CULTIVO DE ROTIFFROS

En el phylum rotfera se encuentran especies muy importantes ob
9rachionus plicatlis es miembro de la >amilia 9rachionidae. El ciclo de vida de este organismo involucra una alternancia en la reproducción se#ual y ase#ual4 la ta#onoma de este organismo es descrita por ;uttner O Nolis:o (0126). Este organismo ha sido tema de pol"mica sobre su sistemática, ya que los datos aportados en cuanto a talla y forma concluyen que esta especie en relación al hábitat es variable, ya que soporta amplios rangos param"tricos y está ampliamente distribuida, y esta distribución se debe a la alta longevidad y resistencia de huevos latentes. &os rangos de salinidad que soporta van desde 0 a 12 ppm (;uthner O Nolis:o, 0126) con el lmite e#tremo de =FF ppm. Este mismo autor concluye que el agua de mar es el medio óptimo de este organismo. Es tambi"n importante mencionar que

en dilución rápida del agua de mar se obtiene un incremento en el n*mero de hembras y producción de huevos. El n*mero de huevos producidos por hembra, es un indicador de las condiciones óptimas del medio. u amplia distribución indica que es una especie Euriterma (B_=FC'). &a >igura 0= describe la anatoma de 9. licatilis (;. 5uches, en 9. eamilias 'ryptomonas y 'hrysophytas. ?tros traba
&a producción masiva del rotfero 9rachionus plicatilis se inició en !apón alrededor de los aVos GFs. Estos se cultivaron inicialmente transfiri"ndolos de un estanque a otro de'hlorella con una densidad de 0F a =F Y 0FG cMml (>>A, 01G6a, b). or lo impráctico de la t"cnica se iniciaron una serie de investigaciones tratando de encontrar el m"todo adecuado para la producción continua de rotferos, sin depender de los cultivos masivos de 'hlorella y otras microalgas4 una de "stas propuso el uso de la levadura de pan (accharomyces cerevisiae) como alimento (5irata O $ori, 01G3). e pensó que "sta resolvera la producción de rotferos, pues esta t"cnica permite obtener densidades muy altas de más de 0FF rotferosMml, despu"s de la publicación de estos resultados, otros investigadores se interesaron en estudiar la composición qumica de los rotferos alimentados con diferentes microalgas y levaduras (>u:usho et al., 012G4 5irata et al., 018F4 mada, 018F4 7atanabe, 01284 Nita
>/. 00) Anatoma de 9rachionus plicatilis (;otfera) en 9. eigura 03 se muestran los resultados obtenidos por 5irata et al., en relación a la utilización de a) 'hlorella, b) &evadura y c) &evaduraM'hlorella. 'omo se puede observar los resultados obtenidos con las dietas a y c, son densidades altas hasta de 0FF ;Mml. or otro lado, se realizaron investigaciones en cuanto al aporte nutricional de los rotferos para el cultivo de larvas de peces y se observó que en las larvas de peces alimentados con rotferos producidos a partir de ladieta de levadura o la mezcla 1BD levadura y BD 'hlorellaocurran

altas mortalidades. e identificó la causa como un desvalance nutricional en cuanto a los ácidos grasos esenciales (>u:usho et al., 012G4 Nita
>/. 0=) %ensidad de rotferos con diferentes

alimentos A) 'hlorella4 9) &evadura4 ') 'hlorellaM&evadura4 %) 'ontrol (5irata, 018F). -A9&A 01. '?$?'?@ %E A$@?A'%? E@ 9rachionus plicatilis, '+&-LA%? '?@ %>E;E@-E $';?A&/A  &ELA%+;A (gM0FF g ;?-E@A ';+%A) @agasa:i /ifu 012B 012G 012B =&eva 0&evadur  0'hlorel &evadura 3&evadura 3'hlorella &evadura 6'hlorella dura a H la H 'hlorella 'hlorella soleucina =.1 =.8 3.0 6.6 6.F 6.F 3.= 3.6 &eucina B.B B.3 B.G G.1 G.0 G.= G.= G.0 $ethionina F.8 F.8 F.8 0.F F.1 F.1 F.1 F.8 'ystina F.2 0.0 F.8 F.2 F.2 F.2 F.1 F.G henylala 3.B 3.6 3.B 6.B 6.0 6.0 3.1 3.1 nina -yrosina 3.F 3.F 3.= 3.F =.8 =.1 3.= 3.0 -hreonina 3.B 3.0 3.6 6.F 3.B 3.6 3.6 3.= -ryptopha 0.0 0.= 0.= 0.0 0.0 0.= 0.= 0.= no Lalina 3.G 3.B 3.8 6.6 6.F 6.= 6.F 6.= &ysina B.2 B.8 B.8 G.G G.F G.F B.B G.0  Arginina 6.= 6.B 6.G B.= 6.G 6.8 6.6 6.G 5istidina 0.6 0.6 0.6 0.2 0.B 0.2 0.B 0.B  Alanina 3.= 3.= 3.2 3.1 3.B 3.B 3.1 3.8  Acido 2.2 2.B 8.F 1.8 8.1 8.8 8.B 8.F  Aspártico  Acido 8.1 8.8 1.3 0F.0 1.2 1.B 0F.0 1.8 /lutámico /lycina =.1 =.1 3.0 3.G 3.0 3.= 3.0 3.0 rolina B.= B.1 B.8 B.F 6.8 6.1 G.0 G.2 erina 3.2 3.2 3.1 3.2 3.G 3.2 6.= 6.F -?-A& G2.B G2.1 20.F 21.B 2=.1 23.2 26.= 26.0 $uestra obtenida con Etanol al 8FD, por hidrólisis con "ter dietlico. 0. ;otferos cultivados con 'hlorella minutissima. =. ;otferos cultivados con levadura. 3. ;otferos cultivados con 'hlorella marina y levadura (0 g de levaduraM0F celMml agua de marMda). 6. ;otferos cultivados con levadura y enriquecidos con 'hlorella marinapor 3G horas

(7atanabe, et al., 0128b4 5irata, 0183). -A9&A =F. '?$?'?@ %E A$@?A'%? E@ $';?';+-A'E? (gM0FF g ;?-E@A (7A-A@A9E et al., 0128b)  Artemia  Acartia -rigriopus $oina  Aminoácidos salina0 clausi  
%>E;E@-E ';+%A)

3. TECNICAS ALTERNATIVAS DE PRODUCCION MASIVA

ara el cultivo de 9. licatilis en condiciones óptimas se recomienda la utilización de agua de mar (3=_3BD), la temperatura óptima de =BC' (5irata O $ori, 01G34 7atanabe, 0128, e 5irata 018F), y en cuanto a la selección del me>A, 01G6a,b) (>igura 06). osteriormente la producción de 9. licatilis con levadura de pan (5irata O $ori, 01G2) (>igura 0B) sustituye la transferencia sucesiva por tanques de recirculación, me
&a >igura 0G muestra un cultivo sistemático, alternando la dieta de 'hlorella y levadura llamado Zthinning out method[ (>u:usho et al., 012G). Este m"todo es el de mayor uso en cultivos masivos pues reporta una alta producción de rotferos (3FF ;Mml).  finalmente el m"todo desarrollado por 5irata et al. (0122), llamado Zsistema de retroalimentación[, semeigura 02) (Z>eedbac: ystem[4 5irata, 018F). &as tasas de conversión de alimento de este tipo de sistemas diariamente se incrementan. e puede concluir que los sistemas de retroalimentación tienen dos ventaiguras 08 y 01. 4. IMPORTANCIA DEL CULTIVO DE B!"#$%&'( )*$"!+$*$(

&as principales ventauni:oWa O da:a, 01234 5irayama O Nusano, 012=4 5irata, 012B4 5irata et al., 018B4 7atanabe et al., 01214 Nita
>/. 03) $"todo del tanque de transferencia.

>/. 06) Esquema del sistema de cultivo en tanque de recirculación A) 9omba de aire4 9) ;otferos en el medio4 ') -ubo de vinil (=B cm de diámetro)4 %) >iltro de recirculación4 E) -ina de policarbonato (anlight), cubierta de fibra de vidrio..

>/. 0B) -"cnica de cultivo desarrollada por la asociación -he eto nland >arming >isheries Association (>>A) y la Estación de $aricultura de @agasa:i. Este m"todo es el más com*nmente utilizado y es llamado Z-hinning out method[ (>u:usho et al., 012G).

>/. 0G) istema de retroalimentación de nutrientes (Z>eedbac: ystem[) para el cultivo masivo de rotferos (5irata, 018F).

>/. 02) Lariaciones en la densidad de rotferos en el sistema de cultivo de retroalimentación (Z>eedbac: ystem[) en tanque de =,2FF l (5irata et al., 018F).

>/. 08) ección del sistema de retroalimentación del cultivo de rotferos A) -anque de =,2FF l4 9) 9iodepósito en zigzag4 ') Aereador móvil4 %) $otor de reducción4 E) ;egulador de automóvil4 >) 'ompresor. -A9&A =0. -? %E A'%? /;A? ;EE@-E E@ ;?->E;? E@ LA;? +-;A-?  A'%? ;?->E;? ;?->E;? ;?->E;? /;A? &ELA%+; &ELA%+;A H 'hlorellamarina '+&-L?  A (. 'hbrella marina cereviceae) 0GF 8.2 00.2 0G.8 0G02 =6.= 0G.G =6.3 08F 6.8 G.F 0.2 0801 33.1 ==.8 0F.0 08=G H B.8 H 0F.6 H 3.= H 0833 H F.G H =.= H F.6 H =F0 G.F H 3.3 =.6 H =F33 F.6 =.3 6.6 =F6G F.6 =.3 6.6 =F63 F.B F.G F.= =FB3C 0.FC 8.0C =6.0C ==0 0.2 0.B 0.3 ==B3 F.= 0.2 3.8 ==G3C F.BC F.1C F.B 35+>AC =.=C 00.3C =8.GC I 7atanabe et al., C Acido graso esencial para especies H Acido graso esencial para especies de agua dulce

;?%+'%? ;?->E; ? A/+A %+&'E 8.1 08.1 0.G 1.F 0B.2 H 0F.= H F.3 F.8 F.8 0.0 0.1C  F.3 C C 0183 marinas

-A9&A ==. -? %E A'%? /;A? ;EE@-E E@ ;?->E;? A&$E@-A%? '?@ &ELA%+;A (accharomyces cerviceae)  &ELA%+;A ?$E/A (7C) '+&-LA%? E@  A'%? &ELA%+;A (. &ELA%+;A ;?->E;? &ELA%+;A /;A? cereviceae) ?$E/A &ELA%+;A ?$E/A 0GF 8.3 P =F.F 03.6 P 0G.1 GP2 0F P 0= 0G02 06.= P 38.= B.F P G.G =GP=2 0F P 00 08F 3.6 P 8.6 =.3 P =.G 3P6 =P3

0801 =G.0 P 63.1 0B.B P 0G.6 =GP3F == P =6 08=G =.8 P 0B.0 0.F P 0.0 2P1 =P6 0833 F.B P G.6 F.8 P F.1 F.2 P F.8 =F0 tr  0.G 8.6 P 1.= 3P6 8 P 0F =F33 3.F P 3.6 0P= 3P6 =F6G 3.F P 3.6 0P= 3P6 =FB3I I 03.6 P 02.6I 0P=I 1 P 0=I ==B3 F.1 P 0.6 FPF.6 =P3 ==G 3 I 0=.8 P 0B.GI I 2 P 1I 3 5+>AI I 33.B P 3B.8I =P66I =B P =GI 7C &a levadura 7 está enriquecida con una fuente de ácidos grasos esenciales I on ácidos grasos esenciales -A9&A =3. -AA %E A&$E@-A'?@, ;E;?%+''?@  >E'+@%%A% E@ '+&-L? %E ;?->E;? 9rachionus plicatilis donde ; ^ tasa de alimentación  ^ suplemento alimenticio (g) -b ^ peso total de la muestra de rotferos (g) ;eproducción donde .5. ^ producción de huevos @;h^ n*mero de rotferos con huevos -.;. ^ n*mero total de rotferos de la muestra donde %.5. ^ densidad de huevos %.;. ^ densidad de rotferos ndice de fecundidad -asa de recuperación donde A ^ población en momento t0 9 ^ población en momento t =

IV. CULTIVO DE ARTEMIA SALINA 1. CONSIDERACIONES GENERALES

&a Artemia salina es un crustácco que en estado adulto mide entre 02P08 mm, posee un par  de ap"ndices prenciles, oigura =F). resenta un ciclo de vida se#ual y ase#ual. E#isten especies bise#uales y especies patenogen"ticas en ambas. ueden presentarse dos alternativas de desarrollo del huevo uno es el desarrollo de larvas (prenauplio, nauplio) o bien que en condiciones adversas se presente el fenómeno de Z'riptobiosis[, en el cual se producen los quistes. Este fenómeno se debe a que la gástrula permanece en este estado en perodos de desecación ambiental4 esta gástrula enquistada en condiciones favorables se hidrata y continua su desarrollo hasta eclosionar el nauplio (>igura =0). Esta capacidad de l Artemia de la formación de huevos resistentes es lo que la ha hecho ser  uno de los recursos de alimentación en Acuacultura más importantes, pues los quistes pueden conservar su variabilidad durante varios aVos hasta que se dan las condiciones necesarias para la eclosión. 0.0) Areas de %istribución  A finales de los GFs la demanda de quistes de Artemia era insuficiente, por lo que se encareció. %ebido a esta gran demanda se incrementaron las investigaciones sobre este organismo, principalmente por el ;eference 'enter de la +niversidad de /hent, 9"lgica, en colaboración con laboratorios de Estados +nidos e nglaterra, e#plorándose varias zonas naturales de producción de Artemia en Europa, Asia, Am"rica y Australia (orgeloos, 0126) (-abla =3).  Aunque su distribución es cosmopólita, la mayor abundancia ocurre en zonas tropicales y subtropicales. E#isten dos categoras generales en cuanto a salinidad se refiere de las zonas de producción natural de Artemia -halassohalino donde la mayor concentración de sales son de @a'l (menor n*mero de localidades). Athalassohalino con sales de ulfatos, 'arbonatos y ales de otasio (mayor n*mero de localidades). Estas categoras son importantes, pues determinan las diferentes especies de Artemia. 2. OBTENCION Y CONSERVACION DE QUISTES

E#isten cinco etapas fundamentales para la preparación de quistes que son colecta en zonas naturales o en cultivos intensivos, filtrado, lavado, secado, envasado y almacenado. En zonas naturales (salinas, lagos, zonas estuarinas), los quistes se acumulan en las orillas mezclándose con arena, lo que permite variaciones del nivel del agua y "stos están sometidos a deshidratación e hidratación, lo que disminuye su viabilidad, por lo que al colectarlos deben de ser pasados por tamices, lavarse alternativamente con agua de mar y agua dulce, incluso se recomienda su centrifugación para eliminar la mayor parte de quistes no viables, y su secado por varios m"todos, entre ellos corrientes de aire. E#isten muchos m"todos para la obtención de quistes y t"cnicas de decapsulación reportadas por la bibliografa, ya que A. alina es ob/. 01. ''&? %E L%A %E A;-E$A A&@A

>/. =Fa) Artemia salina (vleva et al., 0123) A) 5embra, 9) 'abeza de macho, ') 'abeza de hembra, 0. ?
>/. =Fb) Estados nauplio de Artemia salina. -A9&A =6. J?@A @A-+;A&E %E ;?%+''?@ %E A;-E$A E@ E& $+@%? (. ?;/E&??, 0126)

'?@-@E@-E

@+$E;? -?-A& %E ;@'A& @+$E;? %E &?'A&%A%E E AE &?'A&%A% E  AA 01 E+;?A 22 EAA 32  A$E;'A %E& @?;-E 32 +..A. 36 $EK'? 1  A$E;'A 'E@-;A& 00 I;E/?@ G 'A;9E  A$E;'A %E& +;II 01 A;/E@-@ 2  A  AA 01 +; 0B  A>;'A 08 $"#co (9a
Es importante mencionar que a salinidades ba
3.0) arámetros Ambientales •-emperatura En relación a la temperatura, el lmite inferior es de GC' y el lmite superior de 32C'. %espu"s de este rango hay alta mortalidad. •'omposición Sumica &a composición qumica del medio debe de tener iones de @a, N, $g en proporciones adecuadas. &a relación @a y 'l' 6 es muy importante. 'abe mencionar que se han transferido especies de medios con sales de 'arbonatos a medios con sales de ulfatos, y se ha reportado que pueden adaptarse a ellos, observándose cambios de inter"s en la cepa adaptada diferente a la cepa original. •p5 En relación al p5, se considera adecuado el rango de 8.F a 0F.F. •?#geno El rango de ? es amplio desde 0.F mgMl hasta saturación de ? . = = 3.=) Alimentación e han encontrado en análisis del contenido del tubo digestivo desde algas y detritus hasta granos de arena, lo que demuestra que es un organismo filtrador no selectivo, por lo que puede ingerir materiales contaminados. ngiere partculas de 0.= a BF Q. ólo se alimenta de partculas, no de alimentos solubles. &a Artemia no regula su nutrición (se alimenta las =6 h). Estos factores deben de considerarse para la adecuada selección de las especies silvestres, y para calcular la concentración y la dieta adecuada para fines acuaculturales. En las poblaciones silvestres es difcil determinar el rendimiento má#imo sostenible (;$), ya que "ste depende de los factores ambientales. 3.3) roceso de Eclosión

El fenómeno de eclosión es un fenómeno qumico puro (intercambio iónico), relacionado con la concentración de glicerol que posee el embrión, a mayor producción de glicerol hay mayor  absorción de agua4 en etapas crticas de presión osmótica la membrana se rompe, y despu"s la concentración de glicerol s*bitamente ba'A (S+-E  @A+&?) &ocalidad Eclosión mg -iempo de @auplio en &ongitud total nauplioMg de cosecha (h) peso seco del nauplio quiste incubación (Qg) (Qm) 9aha de an >rancisco (+A) 63B.B  9 =6 0.G3 9aha an ablo 612.2  9 =6 0.1= 663.3 (+A) $acau, 9rasil B=1.F  9 =6 0.26 /ran &ago alado 6G2.F  9 =6 =.63 (+A) 9aha nai: (Australia) B32.B   =1 =.62 &ago 'haplin ('anadá) 6FF.6  9 =2 =.F6 626.G &avaldulc (>rancia) BG0.8   30 3.F8 BF1.F -ientsin ('hina) 6FF.B   =1 3.F1 B0B.F $argherita di avoia 6B8.=   =1 3.33 (talia)

eso h*medo (8F.=D5=?) orgeloos (018=) -iempo de incubación a =BC' 9  bise#ual o  P partenogen"tica -A9&A =2. '?@%'?@E ?-$A E@ '+A@-? A '?$?'?@  '?@'E@-;A'?@ %E A&E ;ES+E;%A A;A &A ;?%+''?@ %E A;-E$A E@ '+&-L?  A;A &A E'&??@ %E S+-E (. ?;/E&??, 018=) '?@%'?@E S+$'A A;A '?@%'?@E S+$'A E'&??@ A;A '+&-L? >+E@-E '?@'. gMl '?@'.gMl ?= BB ppm @a'l BF 30.F8 $g'? $g'l=

03

2.26

0F

G.F1

'a'l=

F.3

0.B3

N'l @a5'?3

F.=

F.12

=.F

=.FF

p5  8.F

3.B) 'ultivo ntensivo e han desarrollado diferentes sistemas para el cultivo de Artemia en condiciones de laboratorio para fines de investigación sobre la >isiologa, 9ioqumica, los mecanismos de formación de quistes, eclosión y el aporte nutricional de la Artemia, entre otros muchos estudios importantes, que han permitido el establecimiento de cultivos para la nutrición de larvas de peces y crustáceos de importancia en Acuacultura. Estos cultivos se pueden clasificar en dos grupos los llamados cultivos intensivos, en recipientes de volumen controlado (tanques de concreto, tinas de plástico, estanques r*sticos, etc.). En estos sistemas las condiciones ambientales y los nutrientes están controlados, por lo que se logran altas densidades de cosecha. En la -abla =2 se muestran algunos e
3.2) ;ecomendaciones para la optimización de la cosecha de quistes •%iseVo de estanques bien orientados (contra el viento) para favorecer la acumulación de quistes (lugares tropicales). •'onstrucción de barreras (bamb*, plástico, etc.). •%eterminar la frecuencia óptima de cosecha (una vez al da, preferentemente por la maVana). •%iseVo de redes colectoras de malla doble de l mm (e#terior) y BFQ de luz interior). •'olección de los quistes en solución saturada y aereación continua (para deshidratación de quistes). • Aplicación de t"cnicas para provocar diapausa. •rocesar los quistes (salado, desecado, empaque). -A9&A =8. %E-A +-&JA%A A;A '+&-L? %E A;-E$A ('oll$orales !., 0183) -? %E A&$E@-? ;E'+;? -? %E '+&-L? $icroalgas 'hlorella, 'hlamidomonas, %unaliella, diferentes &aboratorio e especies de dinoflagelados (E<. Anacystis sp., intensivo especies de diatomeas (:eletonema, -hallassiosira, etc.) %ietas inherentes pirulina (seca). %esechos de soya, salvado de ntensivo arroz >ertilización /allinaza, abonos agrcolas minerales E#tensivo -A9&A =1. ;@'A&E 'A;A'-E;-'A %E &? %>E;E@-E -? %E '+&-L? %E A;-E$A (. ?;/E&??, 018=) -? %E ;E'E@-E A&$E@-? ?9!E-L? %E@%A% '+&-L? @-E@L? 'ultivos de Acuarios, %iferentes 9ioensayos y BgM0F l &aboratorio botellones especies de alimentación bolsas de microalgas, a pequeVa plástico salvado de escala arroz 'ultivos Estanques, alvado de ?btención de 0F,FFF orgMl ntensivos (por r*sticos, arrozH T 3B biomasa y lote) estanques de ppm H alta quistes para concreto concentración  Acuacultura de ?= H >e E%-A EK-E@L? $ane
sistema) ntroducción de Estuarios, 'onocimiento ?btención de En salinas especies lagos salinos, y control de biomasa y estacionales (depende de salinas condiciones quistes para inoculación de las condiciones naturales (p5, Acuacultura 0FF a BFF g naturales del T,?=, quistesM5a. sistema) alinas nutrientes) permanentes 0FP0B g quistes M 5a. I0. ara favorecer la producción en los cultivos e#tensivos es recomendable el uso de sales para la agricultura=FF :gM5a de $onofosfato de Amonio0FF :gM5a de @itrato de AmonioBFF :gMales de 'alcio (regula el p5) =. Es importante el control del nivel del estanque para favorecer el desarrollo del fitoplancton y no el de planctonbentónico. 3. uede usarse la t"cnica de fertilización combinada usando 0.8 tonM5a de gallinaza (cada tres das) despu"s dehaber fertilizado con fertilizantes minerales). -A9&A 3F. '?$?'?@ %E %E-A $EJ'&A%A +A%A A;A &A A&$E@-A'?@ %E ;?->E;?  A;-E$A E@ '+&-L?  %E-A E@;S+E'%A %ieta para %ieta para $ezcla ngredientes gM0FF g mezcla rotferos  Artemia enriquecida olvo de espirulina seca 6F 0 H 6F 3 C 6F 0 H 6F = I H 0 = C C 3 &evadura > 6F 6F 6F 6F escado autolizado 23 23 %&$etionina 0 0 = = %/lucosa 5'& F.B F.B F.B  Almidón de maz 1.1 1.1 2.1 1.6  Aceite de hgado de bacalao 6 6 6 6 0F 0F 'olesterol 0 $ezcla de vitaminasa) 3.= 3 3.= 3.= 1.G 0F 'loruro de 'olina = = = = 6 6 'a5?6 F.3 F.B F.3 F.3 0 F.8 >e?6.25=?

F.0

F.0

F.0

F.0

F.6

F.=

0 /atesoupe et al., 0122 I = /atesoupe et al., 0180 C 3 /atesoupe et al., 0180 a) /atesoupe O &uquet (0180)  (mezcla de vitaminasde 5alver (012=). •

4. IMPORTANCIA NUTRICIONAL DE ARTEMIA

&a Artemia es un e#celente alimento vivo en la Acuacultura por sus caractersticas de desarrollo, su pequeVo tamaVo de nauplio y metanauplio (adecuado para las larvas y  
eclosionados es muy alto4 este valor decrece en ausencia de alimento. i la  Artemia(metanauplio y nauplio) es alimentada adecuadamente, podomos obtener un enriquecimiento de nutrientes esenciales en un sustrato de microalgas (vivas o secas), o en una mezcla artificial de nutrientes (lpidos, aminoácidos, ácidos grasos, etc.) (-acon, 0182). e ha calculado que se requiere entre un =.B a B g de la fuente, enriquecida para un millón de nauplios, y este enriquecimiento se logra en un perodo no menor de G h. En la -abla =1 se presentan diferentes mezclas de nutrientes y mezclas enriquecidas que se utilizan para  Artemia y rotferos. &os recursos nutricionales que posee Artemia (protenas, ácidos grasos, etc.). u composición qumica y su concentración varan de una cepa a otra, como se muestra en la -abla 3F. %e estos nutrientes, las principales fuentes a considerar son los ácidos grasos y aminoácidos esenciales en los nauplios y metanauplios. e ha mencionado ya en captulos anteriores, que la importancia de los llamados alimentos vivos (fitoplancton y zooplancton), radica en el aporte de ácidos grasos y aminoácidos esenciales que puedan brindar para el desarrollo larvario de peces y crustáceos (7atanabe et al., 0183). En la -abla 30 se muestra la composición en ácidos grasos de cuatro cepas de Artemia (nauplios reci"n eclosionados) de diferentes localidades. ara lavas de peces marinos, los nauplios de Artemia contienen una alta proporción de ácidos grasos esenciales de tipo 7,(=FB7 3 y ==G73) que son los más nutritivos y que permiten el buen desarrollo y alta supervivencia de las larvas. ara especies de agua dulce, los nauplios de Artemia contienen una alta proporción de los ácidos grasos esenciales 73 (08=7G y 08373) (7atanabe et al., 0183). &a calidad nutricional de Artemia vara de un aislamiento a otro, de tal forma que en el mercado internacional alcanzan un alto valor aquellas cepas de Artemia cuyos quistes poseen concentraciones altas de aminoácidos esenciales y ácidos grasos. En &atinoam"rica y el 'aribe se reporta un gran n*mero de localidades en donde se produce  Artemia en forma natural en salinas y zonas estuarinas, de las que se conoce muy poco en relación a su producción, caracterización de la cepa (biologa básica, análisis pro#imal, ecologa), y potencialidad de industrialización para ser utilizadas en Acuacultura. Es importante el desarrollo de trabarancisco . America 'anada 'anada >ranciso  America 5umedad D    81.2 1F.1 88.= rotena D B6.6 B0.B 62.B G.0 G.B G.8 /rasa D G.6 0F.B 6.8 =.F 0.G =.0 'eniza D G.3 03.F 0B.3 0.= 0.F 0.B 'a mgMg 3.23 =.=0 0.60 F.=3 F.=6 F.60 $g  =.8F =.B3 B.B1 F.66 F.=F F.G8

 2.GF G.1B 2.G3 0.33 0.=0 0.66 @a  G.03 30.10 =8.B8 6.F= 0.63 6.13 N B.23 B.36 2.0= 0.F8 F.1G 0.0G >e QMg 0=18 0=22 0F== B=.= =16.G =82.3 Jn  10.= 1G.F G0.6 0G.0 =0.0 =6.0 $n  18.3 BF.1 06.8 =.0 =.G 3.2 'u  0F.G 1.0 0B.1 F.G 0.0 0.1 I 7atanabe et. al. (0183) -A9&A 3=. '?$?'?@ %E A'%? /;A? (D) %E @A+&? (;E'E@ E'&??@A%?) %E A;-E$A E@ '+A-;? &?'A&%A%E  A'%? /;A? ;A' 9aha de an ablo 'anadá 'hina >rancia 06F 0.21 F.63 F.83 0.8F 0.23 060 =.1= =.=G 0.G2 =.=6 3.F3 0GF 0=.2F 2.21 1.11 00.6F 00.1F 0G02 0G.28 B.=6 1.F3 01.FG 00.36 0G36M0208 633 =.66 0.62 =.B6 =.=F 08F 6.F2 3.F8 B.0= 3.11 6.=0 0801 3F.32 =1.0B =8.=6 =G.80 =6.23 08=GI 1.G= 6.GF 2.1B 6.G8 G.06 0833I =.BB 33.B1 01.82 2.38 =F.1F 0863 nd 6.88 0.GF 0.=G =.F6 =F=GM=F3G F.=F F.=6 F.66 F.0B 0.03 =F33M=F6G B.8= 0.68 6.=0 3.36 =.6B =FB3II 8.6B 0.G8 1.B= 0B.3B 8.F0 C %atos de Nlein$acphee et al., 018= I Acidos grasos esenciales para pecesde agua dulce II Acidos grsos esenciales para pecesmarinos -odos los valores están e#peresadoscomo D total de ácidos grasos. V. CULTIVO DE COPEPODOS 1. CONSIDERACIONES GENERALES

&os cop"podos son crustáceos de pocos mil*netros que son considerados entre las alternativas de alimentación en Acuacultura. e han logrado cultivos de 'alanoideos ('alanussp. Acartia sp., etc.) y de 5arpacticoideos (un eigura == se muestra el desarrollo de este organismo. 0.0) -"cnicas de 'ultivo El cultivo de cop"podos a*n no disponde de t"cnicas sencillas para considerarlos posibles substitutos de la Artemia. &a principal especie que se ha cultivado masivamente es-igriopus

 igura =3, se muestran algunos de estos materiales probados. &os me
>/. =0) Estadios de crecimiento de -igriopus
2 P 1 'opepodito 0C P 3C 0F P 00 'opepodito 6C P BC (hembra) 0= Adulto hembra 03 P 06 'opepodito macho 6C P BC 0B Adulto macho

>/. ==) Esquema de tres diferentes tipos de sustrato para el cultivo masivo de -igriopus . -ela de mosquitero de plástico (luz de 0.G mm) /.Aereador  (Estación E#perimental de esca de la refectura 5yogo, !apón 0128). -A9&A 33. ';E'$E@-? %E -igriopus E;E@-E %E-A (N?/A, 0121) -ipo de alimento -asa de alimentación 'recimiento (ndM0) &evadura de repostera 0=BPG=B gMt 6,FFF  Alimento sint"tico para anguila y peces 3Fg Y 2 vecesMt G,FFF carnvoros  Alimento sint"tico para camarón F.0 P 0.F gM= 0MB das 6,FFF P 8,FFF  Alimento sint"tico para yelloWtail 0F P 0BgMtM3das 3,FFF @itzchia sp B Y 0FB celMmlMda 1,FFF &eche en polvo F.0 P F.BgM= 0MBMdas G,FFF P 3G,FFF &evadura seca 0 mgM0Mda 6,FFF >ragmentos de +ndaria sp B P =FgM0M=F das 0=,FFF P 08,FFF >ragmentos de +lva sp B P =FgM0M=F das 02,FFF P 3G,FFF >ragmentos de Enteromrpha sp 0 :gMt =8,FFF

VI. CULTIVO DE MICRCORUSTACUOS DE AGUA DULCE 1. CONSIDERACIONES GENERALES

%entro de esta clase de organismos e#isten dos g"neros de agua dulce de gran importancia en Acuacultura, que son %aphnia y $oina, las cuales se localizan en diversos medios. El g"nero %aphnia comprende más de =F especies, de las cuales las más conocidas son %aphnia magna, %. pule#, %. longispina, %. trauss. En relación al g"nero $oina podemos mencionar a las especies $oina rectirostris, $. macrocopa, $. brachiata y $. affinis. 0.0) $orfologa Estos organismos se caracterizan por poseer un cuerpo comprimido lateralmente y ovalado (>igura =6)4 no se distinguen segmentos como en otros crustáceos. resentan dimorfismo se#ual marcado, la hembra es más grande que el macho (>igura =B). resentan un carapacho de quitina transparente, las antenas o ap"ndices con numerosas setas4 oigura =6). 2. PARAMETROS AMBIENTALES

=.0) 5ábitat on organismos ampliamente distribuidos en lagos, reservorios artificiales, charcos temporales y aguas de desecho. oseen huevos de resistencia llamados efipios con una envoltura quitinosa que el aire y los animales pueden distribuir. on abundantes en ambientes con alta concentración de materia orgánica en donde proliferan hacterias, levaduras y microalgas. Especies de %aphnia pueden cohabitar con $oina, 'op"podos y 9rachiópodos. =.=) -emperatura %. magna es especialmente resistente a cambios e#tremos de temperatura desde ?C' a ==C' y se consideran 08C'=FC' como su temperatura óptima. %. longispina, %. ule# y $oina rectirostris no sobreviven a cambios e#tremos de temperatura, se desarrollan en temperaturas de =8C' P =1C'. $oina macrocopa se desarrolla tambi"n en un rango amplio de temperatura desde BC' a 3FC' y se considera de =6C' P =GC' como su temperatura óptima. $oina brachiata crece en temperaturas de 8C' P 03C'. =.3) ;equerimientos de ?#geno Estos organismos habitan en medios donde la concentración de ? = es variable, ya que pueden crecer tanto en completa saturación de ? = hasta concentraciones muy ba
0. =. 3. 6. B. G. 2. 8. 1. 0F. 00.

>/. =3) %aphnia pule# (hembra) Lollmer, 01B0 Antenula 0=. 'ámara embrionaria Antena 03. Embrios $*sculos de las 06. roceos abdominales antenas ?
>/. =6) Estructura de antenulas en macho y hembra de %. $agna (rleva, 0123).

>/. =B) 5uevo de resistencia efipios en %. ule# (a) y %. $agna (b). (rleva, 0123). =.6) ;equerimientos en p5 El p5 óptimo en estas especies es difcil de determinar. En t"rminos generales, el p5 oscila entre 2.0 P 8 y por eigura =G) (huevos de resistencia partenogen"ticos) dependen de la temperatura principalmente. or e
&a producción de %aphnia y $oina en condiciones de cultivo es relativamente sencilla por su resistencia a variaciones ambientales y diversas dietas altenativas que se pueden usar como se ha mencionado en párrafos anteriores. 'omo en otras especies de alimento vivo, las alternativas de producción de estas especies pueden ser cultivo en laboratorio para fines de investigeción, cultivo intensivo y cultivo e#tensivo. &a -abla 33 muestra la producción de microcrustáceos de agua dulce con diferentes especies de microalgas y bacterias. 3.0) 'ondiciones ?ptimas de 'ultivo -C'  0BC' a =BC' ?=  3 a G mgMl p5  (G.8 P 2.8)

/rado de ?#idación  06.8P=G.= mg ? =Ml 3.=) $edios de 'ultivo ;ecomendables •$edios minerales (sales de fosfatos y nitratos) •$edios orgánicos (esti"rcol de caballo, res, cerdo, gallina) •$edios enriquecidos (combinación de medios orgánicos e inorgánicos o estractos de suelo e recomienda cosechar estos organismos a intervalos regulares para mantener un equilibrio en el cultivo. En condiciones óptimas de cultivo para iniciar la cosecha (de =F a =B das despu"s del inicio del cultivo), se puede obtener una biomasa de 0F gMm3. &as -ablas 36 y 3B muestran los diferentes medios de cultivo recomendables para sistemas intensivos y e#tensivos. 4. IMPORTANCIA NUTRICIONAL

&as especies más estudiadas en relación de su aporte nutricional para la acuacultura son %aphnia y $oina. &a -abla 3G nos muestra el contenido nutricional reportado para%aphnia. Estas dos especies de cladóceros de agua dulce han sido seleccionadas dentro del grupo de zooplancton que ofrece alto contenido nutricional y facilidades de producción en cultivo. &a -abla 32 muestra la composición mineral y pro#imal de cinco especies seleccionadas como alimento vivo4 entre "stas se encuentran %aphnia y $oina. Es importante considerar que el contenido nutricional de estas especies está en función directa del sustrato en el que se desarrollan. &a -abla B muestra la composición de aminoácidos esenciales de estas cinco especies seleccionadas4 dentro de "stas, %aphnia y $oina tienen un buen aporte. &os cladóceros en Acuacultura han sido obE;E@-E A&$E@-? (;&ELA .L., 0123) EE'E A&$E@-? '?@'E@-;A'?@ -C' '?@+$? ;E>E;E@'A %E A&$E@-? %E cclMml.  A&$E@? celMhr  %aphnia magna bacterias 0,FFF 0B =FF $anuflcva, coliformes 01G6 =,FFF 2FF 3,FFF 0,FBF 6,FFF 0,2FF %. magna 'hlorella 60F 08 0=6 ushchenya, pyrenoidosa 2BF 01B8 =BB 0,06F a =11 0,B8F =6 313 =,0GF 6FB =,3FF 3=2

%. magna %. magna %. pule#

$oina affinis

$oina sp

oenedesmus 8 sp 60B Azotobacter y == bacteria 'oli 62F 'hlamydomo =B nas reinhardti BF 2B 0FF oenedesmus G,FFF dimorphus

oenedesmus =FF sp BFF

B8 =2B

Lasilleva, 01B3 ;odina, 0186a

=F 6.B B.8 03.8 01.0 =6. F =G. B =0 0G.G = 68.F

;ichman, 01B8

hirota, 01GG

-orrentera, 018G (observación personal) A/+A[ A;A

-A9&A 3B. $E%? %E '+&-L? A;A Z+&/A %E -E$A @-E@L? (EE'AA'+A'+&-+;A, 0183, '?$. E;.)  0.óngase G.G. gr de salvado de trigo en 0 litro de agua. =.%e
disuelto. 6.i"mbrese el medio con Zulga de Agua[. B.e agregará la suspensión cada cinco o seis das. -A9&A 3G. ;E+&-A%? %E '+&-L? %E $';?';+-A'E? %E A/+A %+&'E ('&A%?'E;?) '?@ @+-;E@-E ?;/A@'? E @?;/A@'?  -E$A @-E@L?  EK-E@L? (;&ELA, .L., 0123) >+E@-E %E %? %E j @'A& %E -E$? %E %+;A'?@ @+-;E@-E >E;-&JA'?@ E;E gMm3 $A%+;A'?@ %E& ?; m3 %E %E& '+&-L? '+&-L?  A/+A (%A) (%A) E#creta caballo E#creta caballo

de 0.B :g (inicial) 0F F.2B :g (cada 8P 0F das) de 0.B :g (inicial) 0F F.2B :g (cada 8P 0F das) de 0F litros BPBF de

nfusión e#creta caballo nfusión de 0F litros cada 6 0BP=F pasto (= das :gM0FF 0) nfusión de 0F litros cada =P 0FP=2B e#creta de 6 das (0F3) caballo y pasto &evadura 0GP=F g inicial 3FP6F proteolizada 8P0F gMB das &evadura 0GP=F gr inicial 0FP6F proteolizada 8P0F gMB das >ertilizantes minerales

32.B g nitratos =FP6F (03 mg @Ml) = mgMl superfosfatos >ertilizantes 32.B g nitrato de BF minerales amonio y =F gr  de levadura (al 0FF inicio) 01 g de nitrato de 0BF amonio y 0F g de levadura cMB das E#creta de F.B P 0 :g caballo trozos de vegetales superfostatos y sulfato de amonio &evadura F.B :g

9?$AA '?E'5A $AK. %A;A gMm3 ?9-E@%A gMm3

=FP=B

L?&&$E@ '-A -?-A& %E& '+&-L? $305=?

6F

hipet, 01BF

G0=.B

As:etou, 01B6

0FP0G

1P6B

=BF

0BP01

=GP62

=BFP0,BFF 36.6 38.B)

0FP=6

06P6=

=BFP0,FFF =2.3

=2.B

$esh:ov a, 01B2

08P=F

0=FP03F

8FFP0,=FF 3FPBF

=BP3F

9ris:ina, 01GF

=FP=B

08FP=2F

0G

=8F

9ris:ina, 01GF

0=

0B

=G =3 03.6

B=B BB2 33=

2

=FP=B (verano) =BP6F

=FP3B

B 3P6

3P6

=B.8

3F.G (3FP B.B

$esh:oW a, 01B2 $esh:ov a, 01B2

9ogatova O  As:erov, 01B8  As:etov, 01B8 01GF

3BP6B (invierno)

0FP0B

=8

Nonovalo v O 9inting, 01BG

0FG

As:enov,

proteolizada y fertilizantes minerales 0F=

01GF a 00F

-A9&A 32. '?@-E@%? %E A$@?A'%? E@ %A5@A (;&ELA .L., 0123) -yrosina 6.=2D -ryptophano 3.G=D  Arginina 0F.1=D 5istidina =.G1D 'istina 0.02D $ethionina 3.6BD -A9&A 38. '?$?'?@ $@E;A&  ;?K$A& %E '@'? EE'E %E A&$E@? LL? E&E''?@A%? EE'E 9rachionus licatilis -igriopus e mgMg 0B.1 B=.B 63.6 33.8 00.B 2=.= 6G.6 Jn mgMg 2.6 1.8 8.= 0=.3 31.F 0=.8 0F.F $n mgMg F.6 0.0 0.0 0.F F.= 03.= F.B 'u mgMg 0.0 0.B 0.2 =.6 =.8 0.0 B.8 • 7atanabe et al., 0183 REFERENCIAS

 Allen E.!. O @elson E.7., 010F. ?n the artificial culture of marine plan:ton organisms, n A. Ninne (Eds.) $arine Ecology, Lol. , 'ultivation art , &ondon.  Aguirre $.A., 0180. >studios con un cultivo scmicontinuo de -eraselmis suecia (Nylin, 013B), nutrientes, vitaminas, desinfección del medio con +.L. y producción del sistema a largo plazo. -esis Esc. up. de 'iencias $arinas, +.A.9.'., G= pp.  9arroso ;.9., 0182. Análisis comparativo de diferentes sistemas de esterilización de agua de mar y su importancia en acuacultura. -esis de licenciatura, +A%, $"rida, ucatán, $"#ico. 60 pp.  'áceres $.'.!., 0121. istema de cultivo de $onochrysis lutheriba
rudimentarias y el desarrollo de un nuevo m"todo de apro#imación a la ecuación de $onod (01BF). -esis Esc. up. de 'iencias $arinas. +.A.9.'., Ensenada, 9a.>., 022P8=.  %roop $.;., 01GG. Litamin 9 0= and $arine Ecology . An e#perimental With a chemostat. !. $ar. 9iol. Ass. +.N., 6G GB1PG20.  %roop $.;., 01G8. Litamin 9 0= and $arine Ecology L. -he :inetics of upta:e, groWth and inhibition in $onochrysis lutheri. !. $ar. 9iol. Ass. +.N., 68G81P233.  %roop $.;., 012B. -he chemostat in $ariculture, n /. ersoone O E. !aspers (Eds.), roc. 0Fth Europ. ymp. $ar. 9iol. ?stend. 9el., ep. 02P=3, 012B. +niversa ress, 7etteren, p. 20P13.  %roop $.;., 0121. ?n the definition of # and q in cell quota model. !. E#p. $ar. 9iol. Ecol. 31(=)=F3.  Emerson 7.%., 0186. redation and energetics of enaeus indicus (%ecapoda enaeidae) larvae feeding on 9rachionus plicatilis and Artcmia nauplii. Aquaculture 38 =F0P=F1.  Eusebio !.A., 9.. ;abino, E.'. Eusebio, 012G. ;ecycling system in integrated plant and animal farming. Lol.  @o. , pp. 0P=2. -echnical 9ulletin.  >ábregas !., '. 5errera, 9. 'abezas O !. Abalde, 018B. $ass culture and biochemical variability of the marine microalga -etraselmis suecica Nylin (9utch) With high nutrient concentration. Aquaculture 61(018B), =30P=66.  >ábregas !., '. 5errero, 9. 'abezas O !. Abalde, 018G. 9iomass production and biochemical composition in mass culture of the marine microalga sochrysis galbana ar:e at varying nutrient concentrations. Aquaculture B30F0P003.  >ábregas !., '. 5errero, !. Abalde, ;. &iaVo O 9. 'abezas, 018G. 9iomass production and biochemical variability of the marine microalga %unaliella tertiolecta (9utcher) With high nutrient concentrations. Aquaculture B3, (018G), pp. 0182P0111.  >encl J., 01GG. -heoretical analysis of continuous culture systems, n $ale: O >encl (Eds.). -heoretical and methodological basis of continuous culture of microorganisms. Academic ress, @eW or: and &ondon, pp. G1P0F=.  >ogg A.E., 012B. Algal cultures and phytoplan:ton ecology. econd Ed. -he +niversity of  7isconsin ress, 02B pp.  >oyn 9., 0136a. &ebenszy:lus, cytologie und se#ualitat dec chlorophycee 'ladophora subriana, n ?. Ninne (Ed.). $arine Ecology Lol. i, art , &ondon.  >oyn 9., 0136b. &ebenszy:lus und se#ualitat der chlorophycee +lva lactuca, n ?. Ninne (Ed.). $arine Ecology Lol. , art , &ondon.  >ran: >.!., .&. 7elch, .. /alstoff, !./. @eedham, 01B1. 'ulture methods for invertebrate animals. KL Arthropoda, 'lass 'rustacea, =FBP==2.

 >u:usho N., ?. 5ara O !. oshino, 012G. $ass production of rotifer fed 'hlorella and yeast in the 6F ton tan:. Aquaculture =6 (3), 1GP0F0.  >u:usho N., 0182. $ass culture of food organisms, n -opics in -echnology. !apan nternational 'ooperation Agency, pp. 60P62.  /atesoupe >.!. et al., 0122. Alimentation lipidique de turbot (coparthalmus ma#imus &.) . nfluence de la longever dechaine des de la serie e. Annl. 5ydrobiol. 881P12.  /atesoupe >.!. et al., 0180. Alimentation lipidique requirement du turbot (cophthalmus ma#imus) . nfluence de la supplimentation en esters mighyliques de lacide linoleinque et de la complimentation in acids gras de la serie 1 sur la croissance. Ann. 5ydrobiol., 8=32P=B6.  /atesoupe >.!. O . &uquet, 0180. ractical diet for mass culture of the rotifer 9rachionus plicatilis applications to larval rearing of sea bass %icentrarchus labra#. Aquaculture ==061P 0G3.  /oldman !.'. O !.5. ;yther, 012B. @utrient transformation in mass culture of marine algae. @ature Lol. =B6, pp. B16PB1B.  /uillard ;.;.&., 01B1a. >urther evidence of the destruction of bivalve larvae by bacteria. 9iol. 9ull 002=B8P=GG.  /uillard ;.;.&., 01B1b. %ivision rates. 5andboo: of phycological methods. &ondon, 'ambridge. +niversa ress, 080P016.  /uillard ;.;.&., 012=. 'ulture of phytoplan:ton for feeding marine invertebrates. 'ulture of  $arine nvertebrates Animals. @eW or:4 lenum 6F1 p.  /uillard ;.;.&., 0123. %ivisions rates, n !.;. tein (Ed.). 5andboo: of phycological methods. 'ulture methods and groWth measuremens. 'ambridge, +niversa ress, pp. =81P 300.  5alvert !.E., 012=. -he vitamins, n >ish @utrition, Edited by !.E. 5alver. Academic ress, @eW or: and &ondon, pp. =1P0F3.  5irata 5., 0126a. An attempt to apply an e#perimental microcosms for the mass culture of  marine rotifer, 9rachionus plicatilis. ?.>. $iller. $em. >ac. >ish. Nagoshima, +niv. =6 0PG.  5irata 5., 0126b. An attempt to apply an e#perimental microcosms for the mass culture of  marine rotifer, 9rachionus plicatilis. ?.>. $iller. $em. >ac. >ish. Nagoshima, +niv. =3, 0G3P 02=.  5irata 5., 012B. reliminary report on the photoperiodic acclimation for groWth of 'hlorella cells in sinchronized culture. $em. >ac. >ish. Nagoshima, +niv. =6 0PG.  5irata 5. O $. $ura:oshi, 0122. Effects of aeration volume on the groWth of marine 'hlorella in culture. $em. >ac. >ish., Nagoshima +niv. =G, pp. 0BP=0.  5irata 5., 018F. 'ulture methods of the marine rotifer, 9rachionus plicatilis. $em. ;ev. %ata >ile >ish. ;es., 0, =2P6G.  5irata 5. O . $ori, 01G3. $ass culture of marine rotifer 9rachionus plicatilis fed the bread yeast aibai/yogyo, B3GP6F.  5irata 5., A. $avri:os O . higehisa, 018B. Evaluation of the use of 9rachionus plicatilis and Artemia nauplii for rearing praWn enaeus ac. >ish., Nagoshima +niv. 36, @o. 0, pp. =2P3G.  5irata 5., O . $ori, 01G3. $ass culture of marine rotifer 9rachionus plicatilis fed the bread yeast aibaigyogyo, B3GP6F.  5irata 5. O . higehisa, 018B. teady state of zooplan:ton community in a feedbac: culture systems. roc. L er. Ecol. ymp. $icrocosms in ecol. ;est. /eorgia (in print).  5irata 5., $. +shiro O . 5irata, 018=. Ecological succession of 'hlorella saccharophila, 9rachionus plicatilis and autogenous bacteria in culture Water. $em. >ac. >ish., Nagoshima +niv., 300B3P0GF.  5irata 5., . amasa:i, . 5irata O $as:, 018F. $arine zooplan:ton culture in a feedbac:

system. roc. zymber: 'onf. Aquaculture.  5irayama N. O -. 7atanabe, 0123. >undamental studies on physiology of rotifer for its mass culture L. @utritional effects of yeast on population groWth of rotifer. 9ull. of the !apanese ociety of ci. >ish., Lol. 31(0), pp. 00=1P0033.  5irayama N. O . ?gaWa, 012=. >undamental studies on physiology of rotifer for its mass culture . >ilter feeding of rotifer. 9ull. !apan. oc. ci. >ish., 38 0=F2P0=06.  5irayama N., -. 7atanabe O -. Nusano, 0123. >undamental studies on physiology of rotifer  for mass culture . nfluence of phytoplan:ton density on population groWth. 9ull. !apan. oc. ci. >ish., 31(00)00=3P00=2.  mada ?., 018F. -he yeast supplemented With fish liver oil as feed for rotifer. oshu:u, 02(B)3GP6=.  mada ?., . Nageyama, -. 7atenabe, &. Nitauish., 6B(8)1BBP1B1.  mai -., 01G2. $ass production of molluscs by means of rearing the larvae in tan:s. Lenus, =B0B1P0G2.  to -., 01BB. tudies on the Z$isu:aWari[ in eelculture pond   the changes in p5 and o#ygen in the Z$isu:aWari[ by 9rachionus plicatilis (;otifer). ;ept. >ac. >ish. ref. +niv. $ie, =0G8P022.  to -., 01G8. >undamental problems on the rearing of ayu fish. 3Gth !apan &a:es ;ivers.  Aquacultural ;es. 'onf. Esp. Ed., 0P=6.  rleva .L., 0123. $ass cultivation of invertebrates biology and methods. Academy of  ciences of the +;. All +nion 5ydrobiological ociety and srael rogram for cientific -ranslations. 'ap. 9ranchiopoda B=P28, %aphnia 21P0=F.  !erlov @./., 012F. &ight general introduction, n ?. Ninne (Ed.). $arine Ecology, Lol. , art . 7iley, &ondon, pp. 1BP0F=.  Ninne ?., 012G. 9iological Water treatment4 culture Water treatment, n ?. Ninne (Ed.) $arine Ecology, Lol. , 'ultivation, art , &ondon. pp. 0==P036.  Ninne ?., 0122. 9ivalvia $ollusca. 'ultivation of animals  research cultivation, n ?. Ninne (Ed.), $arine Ecology Lol. , 'ultivation, art . 7iley &ondon, pp. 1FFP136 .  Nylin 5., 013B. +ber rhodomona, platymonas und prasinocladus. Nfysiogr. als: &und. >orth 9d. B, @r. ==0P0=.  Nita. ?oWa, . >uish., 6G(0), 63P6G.  Nita. ?oWa, . >uish., 6G(0), 62PBF.  Nubitschec: 5.E., 012F. ntroduction to research With continuous cultures. rentice5all, nc. EngleWood 'liffs, @.!., 01B pp.  &aing . O $.@. 5elm, 0180. >actors affecting the semicontinuous production of -etraselmis suecica (Nylin) 9utch in =FF 0. Lessels Aquaculture, ==032P068.  $atthiesen /.'. O -horner, 01GG. Artificial culture of shellfish. lan:ton culture, art   ec. 0, pp. 3P=6.  $onod !., 01BF. &a technique de culture continue theorie et applications. Ann. nst. asteur, aris, 2131FP60F.  @atural Environment ;esearch 'ouncil. 0126 'ulture 'entre of Algae and rotozoa. 'ambridge.  @ovic: A. O zilard &., 01BFa. E#periments With the chemostat on spontaneous mutations of 

bacteria. roc. @at. Acad. ci. 7ash., 3G2F8.  ares .A. O A. &eyva, 018=. 'ultivo semicontinuo de las microalgas sochrysis galvana y -etraselmis suecica para su uso como alimento de larvas y adultos de $ytilus californianus. -esis +A9'. Esc. up. 'ienc. $ar, Ensenada, 9.'.  arsons -.;., N. tephens O %.5. tric:land, 01G0. ?n the chemical composition of eleven species of marine phytoplan:ters. !. >ish. ;es. 9oard. 'an. 08(G)0FF0P0F0G.  eood and Agriculture ?rganization of the +nited @ations by >ishing @eWs (boo:s) &td.  rovasoli &., !.!.A. $claughlin O $.;. %roop, 012B. -he development of artificial media for  merine algae. Anch. $icrobiol, =B31=P6=8.  rovasoli &. O .!. intcher, 012B. -he ymatuning ymposia in Ecology. Edited by '.A. -ryon, !r. O ;.-. 5artman.  ;uttnerNolis:o A., 0126. lan:ton rotifers. 9iology and ta#onomy. 9iological tation &unz of  the Austrian Academy of cience. E. chWeizebart sche verlagsbuch handlung, p. G=PG1.  >>A, 01G6a. 'ultivation of live food organisms in the ashima tation . >ertilizers for  $arine hytoplan:ton 'ulture. aibaigyogyo @eWs, 3,60P8.  >>A, 01G6b. 'ultivation of live food organisms in the ashima tation . 'ollections of  singlecellci green algae and its culture. aibaigyogyo @eWs, 3,61P08.  tein !.;., 0121. 5andboo: of phycological methods. 'ulture methods and groWth measurements. 'ambridge, +niv. res, pp. 66G.  orgeloos ., 0126. -he influence of algal food preparation on its nutritional efficiency for   Artemia salina &. &arvae. -halassia ilippous:i<, 018G. 5igh density culture of marine microalgaepromising items for mariculture . %etermination of  optimal light regime fr 'hlorella sp. >. marine under highdensity culture condition.  Aquaculture BB(018G), ==0P==1.  chkne 5.N. O A. chkne, 018=. $E- 66 A Wee:ly enrichedsea Water medium for  ecological studies on marine plan:ton algae, and some e#amples of its application. 9otánica $arina, Lol. KKL, pp. 002P0==.  -acon A./.!., 0182. -he nutrition and feeding of farmed fish and shrimp  a training manual . -he essential nutrients. >A? >ield %ocument @o. =., ro.