RECUENTO DE PROBIÓTICOS EN PRODUCTOS LÁCTEOS
RESUMEN: El yogurt es un alimento funcional al contener cierta clase de probióticos, que son microorganismos vivos que, que, cuando se consumen pueden mejorar mejorar el equilibrio microbiano de la flora bacteriana intestinal. Entre los probióticos importantes se encuentran los Bifidobacterium Bb-12 y Lactobacillus acidophilus (lactobacillus bulgaricus y streptococcus thermophilus ). Para la identificción de estos probióticos se realizó 6 diluciones las cuales fueron sembradas en agar MRS, medio selectivo para microorganismos lácticos, luego se añadió clorhidrato de clindamicina para el recuento de lactobacillus, Posteriormente las siembras se incubaron en anaerobiosis a 35°c/ 24h. Pasado las 24h se procedió a la identificación de colonias mediante el aislamiento de cepas, las cuales se tiñó con coloración de gram
Palabras claves:
Probióticos, Bifidobacterium, lactobacillus acidophilus, bulgaricus,
thermophilus, clindamicina
INTRODUCCIÓN: OBJETIVOS: El yogur es un producto lácteo obtenido mediante la fermentación bacteriana de la leche. Si bien se puede emplear cualquier tipo de leche, la producción actual usa predominantemente leche de vaca.. A menudo, se le añade fruta,vainilla, chocolate y otros saborizantes, pero también puede elaborarse sin añadirlos; en algunos países se conoce al de sabor natural. El yogurt es
un alimento suave, viscoso de sabor propio, con una única estructura proteica
o gel débil características que son desarrolladas durante la fermentación de la leche por bacterias ácido lácticas. Este producto lácteo se conoce de muchas maneras . No se sabe con exactitud el origen de de este producto, pero existe la creencia mundial acerca de sus efectos beneficiosos en la salud y nutrición humana. (Tamime y Robinson, 1991) Las cualidades nutrimentales del yogurt no solo vienen de la leche, sino también de la transformación de estos como resultado de la actividad metabólica causada por la fermentación de los
microorganismos. Cultivos como Strptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus, que son microorganismos no mucogénicos se emplean en proporciones iguales, y tien temperaturas óptimas entre 38-44°c y entre 41-42°c, repectivamente (Valderrama J. 2001) Próbiotico es un término de reciente utilizado que se aplica a productos obtenidos por fermentación con microorganismos benéficos para la salud.(Hernández A. 2005). Las bacterias que contienen los yogurts con Probióticos recargan la barrera de protección que tiene el intestino para evitar el paso sustancias extrañas hacia la sangre). Esta barrera conformada por bacterias que son inucuas para los seres humanos), también favorecen la digestión y los movimientos gástricos naturales. Agar MRS se utiliza para el crecimiento y recuento de los cultivos de Lactobacillus
en los productos lácteos y otros productos alimenticios. La peptona y glucosa constituyen la fuente de nitrógeno, carbono y de otros elementos necesarios para el crecimiento bacteriano. El monoleato de sorbitán, magnesio, manganeso y acetato, aportan cofactores y pueden inhibir el desarrollo de algunos microorganismos. El citrato de amonio actúa como agente inhibitorio del crecimiento de bacterias Gram negativas. El medio puede ser usado para cultivar lentamente cultivo de lactobacilos tales como los microorganismos ya mencionados. Este agar debe utilizarse a un pH de 5,7 (Pascual M) El objetivo de esta práctica es Enumerar bifidobacterias y lactobacilos en productos lácteos fermentado e Identificar la morfología de las bacterias probióticos por medio de la tinción de gram, para finalmente interpretar los resultados
MATERIALES Y MÉTODOS: Siembra MRS: Tomando todas las medidas de asepsia necesarias se tomaron 10 ml de muestra y se -1 -6 prepararon seis diluciones (10 a 10 ) utilizando agua buferada estéril como diluyente. Para -1 -3 la siembra se utilizaron las tres últimas diluciones (10 , 10 2y10 ) y se sembró por duplicado, para esto se colocó 1ml de cada dilución en las cajas utilizando diferentes pipetas para evitar contaminación. Posteriormente se añadió el agar templado a 45°C en las 7 cajas incluido el blanco que no contiene muestra. Una vez solidificado se adicionó 0.75 ml de clorhidrato de clindamicina para el recuento de Lactobacillus. Finalmente se coloca las cajas de forma invertida en la jarra de anaerobiosis e incubar a 31°C por 3 días
Identificación y Tinción de Gram Primeramente se realiza un aislamiento de cepas, observando y seleccionando la caja donde tenga las colonias más separadas. Con el asa previamente esterilizada se toma una colonia y
se la fija en un porta objetos obteniendo una capa fina para una mejor observación. Una vez seca y fijada la preparación, se procede a su tinción y posterior observación
RESULTADOS Y DISCUSIÓN: Después de los días requeridos de incubación se observó el crecimiento de microorganismo, para el contaje de bacterias lácticas en cajas Petri se identificaron escasas colonias pequeñas redondas y cremosas, Al presentar esta morfología se puede decir que se trata de colonias lactobacillus. En la observación al microscopio se observó que eran bacilos gram positivos por lo cual, pertenece al grupo de los Lactobacillus, L. vulgaricus. El género Lactobacillus está formado por bacterias Gram positivas de forma bacilar que suelen forman largas cadenasy producen ácido láctico como metabolito principal (son homofermentativas) (Hernández A. 2005)
Muestra
Resultado
Norma referencial
8
Yogurt Toni (normal) Yogurt Toni (normal)
3.2x10- UFC/g NPM/g
7
1.1x10 UFC/g 8
3.0x10
Yogurt Toni (vivaly)
UFC/g
Yogurt Toni (vivaly)
7.0x10 UFC/g
Yogurt Alpina (regeneris bebible)
3.3x10 UFC/g
Yogurt Alpina (regeneris bebible)
3.7x10 UFC/g
Yogurt Chivería
1.3x10 UFC/g
5
8
8
8
-6
-7
10 -10
Las muestras que presentan un recuento de colonias mayor a la 10 7 ; yogurt toni normal, yogurt toni normal con antibiótico, yogurt toni vivavly, ypgurt alpina, yogurt alpina con antibiótico y la muestara siete. Estas muestras al contener un número elevado de bacterias se dice que su funcionamiento probiótica es mejor. Como lo cita la revista scielo “ No hay acuerdos generales en cuanto a la concentración mínima necesaria del probiótico para alcanzar ventajas terapéuticas. Algunos investigadores sugieren niveles de concentración -6 -7 -8 mayores a 10 ufc/ml, otros estipulan concentraciones mayores a 10 ufc/ml y 10 ufc/ml como niveles satisfactorios (Kailasapathy y Rybka, 1997; Lourens-Hattingh y Viljeon, 2001, Kurmann y Rasic, 1991)
CONCLUSIONES:
Se pudo realizar el recuento de microorganismos lácticos, habiendo crecimiento de de lactobacilos Se identificó
El objetivo de esta práctica es Enumerar bifidobacterias y lactobacilos en productos lácteos fermentado e Identificar la morfología de las bacterias probióticos por medio de la tinción de gram, para finalmente interpretar los resultados
RECOMENDACIONES:
Se debe esterilizar correctamente la superficie de trabajo al igual que los materiales y el empaque de la muestra, además se recomienda que se trabaje con un mechero encendido para conservar la esterilidad. Para una mejor obtención e interpretación de resultados se debe realizar la siembra de cada una de las diluciones por duplicado Cuando se realice la adición de la sobre capa en el cultivo en cajas Petri, tener cuidado de no mojar la tapa de la caja con el medio de cultivo.
Bibliografía
Tamime, Robinson. Yogurt. 1991
Valderrama j. Propiedades y características de yogurt. Centro de información Tecnologica. 2001. Edición 71
Hernánadez A. Prebióticos. Microbiología Industrial. 2005.
Pacual M. Microbiología Alimentaria. Metodología Analítica para Alimentos y Bebidas. 2° Edición. J.A. Ruiz Rivera J.A. Ramírez M. Scielo revista facultad de agronomía. Elaboración de yogurt con probióticos ( Bifidobacterium spp. yLactobacillus acidophilus) e inulina. 2009 Fuente: http://www.scielo.org.ve/scielo.php?pid=S037878182009000200006&script=sci_arttext
ANEXOS
Muestra
Placa
10-4
10-5
Estimado 10-6
Contaje reportado NMP/g
Yogurt Toni (normal)
A B
TNTC TNTC
TNTC TNTC
318 325
3.2x10 UFC/g Estimado
Muestra
Placa
10-4
10-5
10-6
Contaje reportado
Yogurt Toni (normal)
A B
111 112
19 18
2 4
1.1x10 UFC/g
Muestra
Placa
10-4
10-5
Estimado 10-6
Contaje reportado NMP/g
8
7
8
Yogurt Toni (vivaly
A B
TNTC TNTC
TNTC TNTC
347 262
3.0x10 UFC/g
Muestra
Placa
10-4
10-5
10-6
Contaje reportado NMP/g
Yogurt Toni (vivaly)
A B
93 0
5 8
0 0
7.0x10 UFC/g
5
Muestra
Placa
10-4
10-5
10-6
Contaje reportado NMP/g
Yogurt Alpina (regeneris bebible
A B
TNTC TNTC
TNTC TNTC
295 310
3.3x10 UFC/g
Muestra
Placa
10-4
10-5
10-6
Contaje reportado NMP/g
Yogurt Alpina (regeneris bebible)
A B
TNTC TNTC
TNTC TNTC
394 358
3.7x10 UFC/g
8
8
Muestra
Placa
10-3
10-4
10-5
Contaje reportado NMP/g
Yogurt Chivería
A B
TNTC TNTC
TNTC TNTC
1500 1260
1.3x10 UFC/g
8
TÉCNICA PARTICULAR DE LOJA UNIVERSIDAD
