Informe de Crecimiento Microbiano (Alimentos)

UNAMBA

CURVAS DE CRECIMIENTO MICROBIANO RESUMEN En el presente informe se estudio la curva de 1.73h y 1.37h respectivamente crecimiento del Saccahromyces cerevisiae, para este objetivo se utilizo un espectrofotómetro a 620nm con el cual se registro la absorbancia cada cierto tiempo, también se utilizo el método gravimetrico, pesando la materia celular húmeda cada cierto tiempo, se obtuvieron los siguientes resultados: para la velocidad especifica tato para gravimetría como para absorbancia fue de 0.4h-1 y 0.5h-1 , en lo que se refiere al tiempo de generación fue de

Volumen 1, nº 1

Fecha del boletín

“UNIVERSIDAD NACIONAL MICAELA BASTIDAS DE APURIMAC” CARRERA PROFESIO SI ONAL DE ING INGEENIERIA AGROINDUSTRIAL BIOTECNOLOGIA AGROINDUSTRIALLABORATORIO •

INTRODUCCION La célula microbiana son esencialmente una maquinaria de síntesis capaz de duplicarse a sí misma. El proceso de síntesis para el crecimiento bacteriano involucra unas 2000 reacciones químicas de una amplia variedad. Una vez sintetizados los polímeros, el crecimiento continúa con el ensamblaje y formación de nuevas estructuras celulares que finalizan con la división en dos células hijas. En un medio apropiado física y nutricionalmente, un cultivo se reproduce continuamente como células vegetativas, los nutrientes absorbidos y metabolizados permiten crecer al microorganismo .

OBJ ET ETIIVO Estudiar la curva de crecimiento de Saccahromyces cerevisiae

•

DOCENTE: Bio. Yanett Campos Ya ALUMNO: Christian Andrew Aguilar M.

ABANCAYAPURIMAC

Contenido: Resumen, introducción,objetivo

1

MarcoTeórico

2

Materiales y Procedimiento

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Resultados

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Discusiones, Conclusiones, y Bibliografía

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Anexo

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Curvas de creci crecimiento miento microbiano

MARCO TEORICO Crecimiento Microbiano

Es un incremento en el número de células o aumento de la masa microbiana. El crecimiento es un componente esencial de la función microbiana, ya que una célula individual tiene un período de vida determinado en la naturaleza y la especie se mantiene solamente como resultado del crecimiento continuo de la población celular. En muchas situaciones prácticas es necesario el control de la población celular, el conocimiento de cómo se expande es útil para el diseño de métodos de control para el crecimiento microbiano. Una bacteria es una máquina capaz de duplicarse así misma. Los procesos sintéticos de crecimiento celular bacteriano implican no menos de 2000 reacciones bioquímicas de una gran variedad de tipos. Las reacciones principales de la síntesis celular son de polimerización, luego se ensamblan las macromoléculas, se forman las estructuras celulares: pared celular, membrana citoplasmática, flagelos etc. El crecimiento crecimiento microbiana microbiana ocurre por fisión fisión binaria, bajo las mejores condiciones de E. coli puede completar su ciclo en 20 minutos. El control de la división celular está íntimamente ligado a los acontecimientos de replicación cromosómica. Crecimiento de poblaciones laciones

La velocidad de crecimiento es el cambio en el número de células por unidad de tiempo. El tiempo requerido para que a partir de una célula se formen dos células o el tiempo requerido para duplicar una población de células se llama tiempo de generación o tiempo de duplicación. En una sola generación se duplica el número de células o masa celular, en minutos en ocasiones en horas o días. Crecimiento exponencial

Modelo de incremento de la población en el que el número de células se dobla cada cierto período de tiempo. Una de las características del crecimiento exponencial es que la velocidad de incremento en el número de células es lenta inicialmente pero después incrementa constantemente. Como muestra la siguiente figura 1 , típica curva de crecimiento exponencial expresada aritméticamente, la pendiente va incre-

mentando progresivamente. Esta figura se obtuvo de un crecimiento de una única célula que tiene un tiempo de generación de 30 minutos, tabla 1. En la figura 2 se presenta el número de células en escala logarítmica versus tiempo en escala aritmética (Gráfico semilog) lo que da una línea recta, este es un inmediato indicador de que las células están creciendo exponencialmente. Este tipo de gráficos semilog es util para la estimación de tiempos de generación a partir de datos experimentales, el tiempo de generación puede leerse directamente a partir del gráfico figura 3.

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Dupli Duplicación cación de la población población

Donde K es la constante de crecimiento para un cultivo cerrado, μ y K están relacionaEn algunos casos es necesario emplear una das y reflejan el proceso de crecimiento de ecuación diferencial para expresar relacio- una población que incrementa exponencialnes cuantitativas de crecimiento: mente. Las densidades poblacionales bacterianas se expresan en notación científica mediante potencias de 10, por tanto en la ecuación:

se pueden convertir los logaritmos neperianos a los logaritmos base 10 y sustituir la constante instantánea μ por K::

Cálculo Cálculo del tiempo de generación

Para muchos propósitos en microbiología es útil conocer el tiempo de generación de una población microbiana durante el crecimiento exponencial, de la figura 2 se deduce que el crecimiento bacteriano exponencial es una progresión geométrica, existe una relación directa entre el número de células presente en el momento inicial y el habido en un momento determinado del crecimiento exponencial nencial así:

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Fase de latencia: latencia: Cuando una población

N= número final de células, No= número inicial de células y n= número de generaciones que ha ocurrido durante el período de fase exponencial, el tiempo de generación de la fase expone exponencial ncial se calcula calcula t/ n, donde t=horas o minutos de crecimiento exponencial y conociendo N y No, es posible calcular el número de generaciones y a su vez el tiempo de generación.

microbiana se inocula en un medio fresco, el crecimiento ocurre después de cierto tiempo. Si un cultivo en crecimiento exponencial se inocula exactamente el mismo medio, no se observa esta fase sino que sigue creciendo exponencial, se requiere cuando las células se toman de un cultivo viejo, también cuando las células han sido dañadas por tratamientos: radiaciones, tóxicos, calor, también cuando se pasan de un medio rico a un medio pobre.

Fase exponencial: encial: Es la consecuencia de

Para expresar la ecuación N =N02n en térmi- que una célula se divida en dos, estas en nos de n, es necesario la siguiente transfor- otras dos y así sucesivamente, la mayoría mación: crecen exponencialmente pero las velocidades de crecimiento exponencial pueden variar esencialmente. Es influenciada por las condiciones ambientales (temperatura, composición del medio de cultivo) y por las características genéticas del microorganismo las procariotas crecen más rapidamente que las eucariotas. Fase estacionaria: En un cultivo donde no

Ciclo Ciclo de crecimiento de poblaciones laciones

Se ha visto el ciclo de crecimiento parcialmente en la parte de crecimiento exponencial. Un cultivo bacteriano simple y homogéneo tiene un ciclo de crecimiento como el que se representa a continuación. puede dividirse en varias fases: Fase de latencia, exponencial, estacionaria y de muerte, ver figura 4.

se renueva el medio un cultivo el crecimiento exponencial no puede ocurrir indefinidamente. Una bacteria pesa alrededor de una billonesima de gramo (10-12g), cada 20 minutos en 18 horas producirá una población bacteriana cerca de 4000 veces el peso de la tierra, obviamente es imposible mantener ese ritmo de crecimiento. Habitualmente un nutriente esencial del medio de cultivo se acaba, o algún producto de desecho se acumula en el medio hasta que alcanza una concentración inhibitoria de crecimiento exponencial. La población alcanza la fase estacionaria. No hay incremento neto o decremento del número de células. Sin embargo, aunque no hay crecimiento, ocurren funciones celulares, incluyendo el metabolismo bioenergético y algunos procesos biosintéticos. Algunos microorganismos pueden tener un crecimiento lento, algunas células crecen y otras mueren, siend siendo o el balance total total de ausencia de incremento en el número de células, esto se conoce como crecimiento críptico. En E. coli se han identificado genes que son necesarios para la supervivencia durante esta fase genes sur, si existen mutaciones conducen rápidamente a la muerte celular a medida que entran en la fase estacionaria.

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Fase de muerte: Si la incubación continua

Determinaci Determinación ón de peso húmedo ♦ Determinación de peso seco ♦ Determinación de nitrógeno total ♦ Determinación química de un ácido nucleico ♦

después después que la población alcanzó la fase estacionaria las células entran en fase de muerte, en algunos casos acompañada de lisis celular, es también de acuerdo a la figura 4 una función exponencial. Sin embargo, en muchos casos la velocidad de Un último grupo entiende al crecimiento sobre muerte es mucho más lenta que la veloci- la base de la influencia que ejercen los microdad de crecimiento exponencial. organismos en los cambios químicos de su entorno como consecuencia del incremento Medición del crecimient crecimiento: de la biomasa. El crecimiento de una población bacteriana puede ser entendido desde diferentes perspectivas y de acuerdo a éstas se puede llegar a determinar la medida del crecimiento mediante diversas metodologías. Para algunos, el crecimiento es la capacidad para multiplicarse que tienen las células individuales, ésto es iniciar y completar una división celular. De esta forma, se considera a los microorganismos como partículas discretas y el crecimiento es entendido como un aumento en el número total de partículas bacterianas. Existen dos formas para determinar el número total de microorganismos en una muestra:

Recuentos Directos Recuento microscopico: icroscopico: Es una técnica co-

mún, rápida y barata que utiliza un equipamiento fácilmente disponible en un laboratorio de microbiología. Para estos recuentos se utilizan generalmente cámaras de recuentos, aunque también pueden realizarse a partir de muestras filtradas en membranas y transparentizadas o teñidas con colorantes fluorescentes (Naranja de acridina).

La mayor dificultad del recuento en cámara es obtener reproductibilidad en el llenado de la cámara con líquido. Otra dificultad es la adsorción de las células en las superficies del vidrio, incluyendo pipetas. Esta adsorción es ♦ Recuento microscópico de partículas crítica en el proceso de dilución de la muestra ♦ Recuento electrónico de partículas y se minimiza al realizar las diluciones en medios de alta fuerza iónica (solución fisiológica Para otros, el crecimiento implica el au- o medios mínimos sin fuente de carbono). mento de los microorganismos capaces de formar colonias debido a que sólo se tiene Las cámaras más utilizadas son las de en cuenta el número de microorganismos Hawksley y la de Petroff-Hausser. La primera viables, esto es capaces de crecer indefini- tiene la ventaja que puede ser utilizada con damente. Las determinaciones que se uti- objetivos de inmersión, aunque la mayoría de lizan son: los recuentos se realizan con objetivos secos. Una de las mayores ventajas del recuento mi♦ Recuento de colonias croscópico es brindar información adicional ♦ Método del número más probable sobre el tamaño y la morfología de los objetos contados. Para los fisiólogos bacterianos, bioquímicos y biólogos moleculares una medida del crecimiento es el incremento de biomasa. Para ellos, la síntesis macromolecular y un incremento en la capacidad para la síntesis de los componentes celulares es una medida del crecimiento. Para este grupo la división celular es un proceso esencial pero menor que rara vez limita el crecimiento, ya que lo que limita el crecimiento es la capacidad del sistema enzimático para utilizar los recursos del medio y formar biomasa.

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♦

Tipo de cuadro

Area

Volumen

Factor

Cuadradototal

1.00 x 10-2

2.00 x 10-5

5.00 x 104

Cuadrado grande 4.00 x 10-4

8.00 x 10-7

1.25 x 106

Cuadrado peque2.50 x 10-5 ño

5.00 x 10-8

2.00 x 107

1/Dilu 1/ Dilución: Inversa de la dilución utilizada en la resistencia que son comparables al

para llenar la cámara de recuento. contados: Cantidad ♦ Número de cuadrados contados: de cuadrados de la cámara que se utilizaron para contar un el número de bacterias. ♦ Volumen del cuadrado: cuadrado: Volumen de cada cuadrado de la cámara. Depende del tipo de cuadrado en donde se realizó el recuento. Por ejemplo, cada cuadrado pequeño tiene un volumen de 5 x 10-8 ml (50 µm x 50 µm x 20 µm = 5 x 104 µm3 = 5 x 10-8 ml). Recuento electronico: Los contadores elec-

trónicos permiten realizar recuentos de bacterias, levaduras no filamentosas y protozoarios, pero no de hongos y microorganismos filamentosos o miceliares. Estos instrumentos constan básicamente de dos compartimientos comunicados a través de un pequeño conducto. En ambos compartimientos hay electrodos que miden la resistencia eléctrica del sistema, y como el orificio del conducto es muy pequeño y su resistencia es muy alta, la resistencia eléctrica de cada compartimiento es independiente. El principio de funcionamiento de estos instrumentos es el que se explica a continuación. Un volumen fijo de una suspensión bacteriana es forzada a pasar desde un compartimiento al otro a través del pequeño conducto, en un muy breve intervalo de tiempo. Cuando un microorganismo pasa al nuevo compartimiento, la resistencia de éste se incrementa debido a que la conductividad de la célula es menor que la del medio. Estos cambios en la resistencia son convertidos en pulsos o voltaje y contados. Este tipo de recuento presenta algunos inconvenientes. Ciertas bacterias muy pequeñas producen cambios

"ruido" generado por la turbulencia que se desarrolla al pasar el fluido por el orificio. No pueden medirse células que formen filamentos o agregados o soluciones muy concentradas de microorganismos, debido a que el pasaje de más de una célula en un breve período de tiempo va a ser tomado como una célula más grande. Es común la obstrucción del orificio por microorganismos muy grandes. Medida de la Biomasa

La medida de la masa de los constituyentes de la célula bacteriana es utilizada frecuentemente como base para la medida de una actividad metabólica, o de un constituyente metabólico o químico. Algunos de los métodos para cuantificar la biomasa son obvios y confiables, pero pueden volverse complicados si se busca la exactitud. Peso húmedo: Se obtiene a partir de una

muestra en suspensión que es pesada luego de la separación de las células por filtración o centrifugación. Es una técnica útil para grandes volúmenes de muestra. La principal desventaja es que el diluyente queda atrapado en el espacio intercelular y contribuye al peso total de la masa. La cantidad de líquido retenida puede ser importante, por ejemplo, un pellet de células bacterianas muy empaquetadas puede contener un espacio intercelular que aporta entre el 5-30% del peso, de acuerdo a la forma y deformación celular. Para corregir el peso húmedo se determina la cantidad de líquido que queda retenida en el espacio intercelular luego de una centrifugación, para ello se utilizan soluciones de

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polímeros no iónicos (como el Dextran) que partículas. La turbidimetría mide la luz pueden ingresar en el espacio intercelular pero dispersada como un decrecimiento de la no pueden atravesar las paredes bacterianas. luz transmitida a través de la solución. En relación a la longitud de onda y al taPeso seco: El peso seco (contenido de sólidos) maño de la partícula pueden existir tres de las células bacterianas que se encuentran tipos de dispersión. en una suspensión se obtiene por el secado de un volumen volumen en un horno a 105° 105° C hasta peso Los métodos de dispersión de la luz son constante. Esta técnica es útil para grandes las técnicas más utilizadas para monitovolúmenes de muestra, debido a que diferen- rear el crecimiento de los cultivos bactecias del orden de los miligramos representan rianos. Son muy útiles y poderosos pero pueden llevar a resultados erróneos. el peso de un gran número de bacterias. Principalmente, dan información sobre el La desventaja de este método es que compo- peso seco (contenido macromolecular). nentes volátiles de la célula pueden perderse por el secado y puede existir alguna degrada- Turbidimetría: La turbidimetría mide la ción. También la muestra seca puede recobrar reducción de la transmisión de luz debihumedad durante el pesado, principalmente si do a partículas de una suspensión y el ambiente tiene una humedad relativa alta. cuantifica la luz residual transmitida. Determinación inación de acidos nucleicos: nucleicos: Es una Estudios teóricos y experimentales han

técnica que permite determinar indirectamente la masa de una población bacteriana. Se determina la cantidad existente de un determinado ácido nucleico (generalmente DNA) y a partir de este dato se estima la masa de la población.

Determinacion Determinacion de nitrógeno: Es una técnica

que permite determinar indirectamente la masa de una población bacteriana. Existen distintas técnicas para determinar la cantidad de nitrógeno que contiene una muestra en relación al compuesto que se quiera determinar. Puede analizarse el nitrógeno no proteico mediante el NO2-, NO3-, NH4+, el nitrógeno proteico mediante absorción en UV, Reacción de Biuret, Reacción de Lowry, o el nitrógeno total mediante la Digestión de Kjeldahl.

Incorporación de precursores radiactivos: Es

una técnica que permite determinar indirectamente la masa de una población bacteriana. En esta técnica se adiciona al medio un compuesto marcado radiactivamente que puede ser incorporado a la célula, y luego se determina la cantidad de marca incorporada por toda la población. Dispersión de la Luz

Cuando un haz de luz paralelo (colimado) golpea una partícula en suspensión, parte de la luz es reflejada, parte es diseminada, parte es absorbida y parte es transmitida. La nefelometría mide la luz dispersada por una solución de

mostrado que soluciones diluidas de diferentes tipos de bacterias, independientemente del tamaño celular, tienen casi la misma absorbancia por unidad de concentración de peso seco. Esto quiere decir que, en soluciones diluidas, la absorbancia es directamente proporcional al peso seco, independientemente del tamaño celular del microorganismo. Sin embargo, se encuentran absorbancias muy diferentes por partícula o por UFC (Unidad Formadora de Colonia) cuando los tamaños de las células bacterianas son diferentes. Por esta razón, para estimar el número de microorganismos totales o el número de microorganismos viables de una suspensión bacteriana debe realizarse una "curva de calibración" con cada tipo de microorganismo, sólo de esta forma es posible relacionar Absorbancia (Densidad Optica) con el número de microorganismos totales o con UFC.

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Absorbancia bsorbancia =K x Peso Seco Seco

por la escasez de otro factor.

K: constante que varía con la longitud de on-

Ley de la Tolerancia de Shelford

Peso seco: Concentración celular bacteriana

La presencia y/ y/ o ausencia, abundancia abundancia de organis organism mos en un ambiente ambiente están determinados determinados no sol solo o por los nutrientes sino tam también por factores físico físico químicos

da utilizada y representa la inversa del peso seco del microorganismo que produce un aumento de 10 veces en el valor de la absorbanc bancia ia (1/W (1/ W0). expresada expresada en unidades de peso seco (µg/ (µg/ mlmg/ ml).

La relación directa entre la absorbancia y el peso seco sólo se aplica para suspensiones diluidas de bacterias. Estas suspensiones no deben tener una absorbancia mayor a 0.3, ya que valores mayores producen desviaciones de la ley de Beer. Sin embargo, el inconveniente de utilizar suspensiones diluidas puede involucrar un mayor error de pipeteo y menor sensibilidad por el bajo nivel de absorción. En estos gráficos se puede apreciar que suspensiones diluidas de dos microorganismos diferentes con igual peso seco tienen la misma absorbancia, mientras que para el mismo número de microorganismos totales la absorbancia de cada suspensi suspensión ón es distinta. distinta. Factores que afectan al creci crecim miento bacteriano: ♦

♦

♦

La distribución y funcionamiento de la poblaciones poblaciones microbianas están fuertemenfuertemente influidas influidas por factores abióticos La limitación de nutrientes y la tolerancia am ambiental biental regulan regulan o excl excluy uyen en la exis exis-tencia de microorganismos en diferentes ambientes Los microorganismos poseen limites inferiores inferiores y superiores superiores de tolerancia, así como como óptimos óptimos para los diferentes diferentes factores abióticos

Leydel Mínimo Mínimode Liebig: Liebig:

La producción de biomasa total de cualquier cualquier organismo esta determinado determinado por el nutriente cuya cuya concentración sea mínima, en relación con lo que requiere el organismo. Un incremento en la concentración de determinado nutriente limitante permite el crecimiento o reproducción de la población afectada, hasta que queda limitada

♦

♦

♦

♦

Esta ley describe la forma en que las variables abióticas controlan la abundancia de los organismos en un sistema Shelford, 1913, establece que cada organis organism mo necesita una seri serie e de condiciones para sobrevivir y desarrollarse Los márgenes de tolerancia y la fluctuación fluctuación de los factores físico físico químicos en un sistema determinan que m.o. pueden encontrarse encontrarse o desarrollarse sobre una base sustentable Los márgenes de tolerancia para una variables dada interacci interaccionan onan con otras variables.

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MATERIALES Inoculo (para 100ml):

Pipetas

Glucosa Extracto de levadura KH2PO4 MgSO47H2O

Estufa

2 gr. 0.1 gr. 0.5 gr. 0.04 gr.

Vasos de precipitados Autoclave Incubadora

Medio de fermentación (para 250ml): Glucosa Extracto de levadura KH2PO4 MgSO47H2O Sulfato Sulfato de amonio amonio

5 gr. 0.25 gr. 0.5 gr. 1 gr. 0.1 gr.

Levadura Sacharomyces cereviceae Centrifuga Tu Tubos de ensay sayo Espectrofotómetro

METODOLOGÍA Esterilizar Esterilizar el el inocu i noculo lo a 121 ºC *20 * 20 minutos minutos a 15 psi Enfriar a 28 ºC Inocular Inocular asépticame asépticamente nte 5 gr. De levadura levadura Incubar a 28 ºC por 12 horas

Esterili Esterilizar zar el medio medio de de fermentaci fermentación ón a 121 ºC ºC *20 *20 minutos a 15 psi Enfriar a 28 ºC Inocular asépticamente asépticamente 5%de 5%dell inoculo Incubar a 28 ºC por 24 horas

Para inocular i nocular se debe debe hacer los siguientes pasos: -Extraer 5% del inoculo, centrifugarlo a 3000 rpm por 10 minutos. -Eliminar el sobre nadante. -Llenar agua y llevarlo de nuevo a la centrifuga a 300rpm por 10 minutos. -Eliminar el sobre nadante -Inocular el decantado al medio de fermentación.

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Para la la medición con el espectrofotómetro (densidad óptica): óptica):

Extraer 4 ml del caldo de fermentación Calibrar el espectrofotómetro a 620nm Llevar la muestra espectrofotómetro a 620nm Para la la medición por gravimetría:

Extraer 4 ml del caldo de fermentación

Extracción del 5%del 5% del inoculo después después de las 12 horas

Centrifugar a 3000rpm por 10 minutos Pesar el decantado

Realizar los siguientes gráficos Centrifugación a 3000rpm por 10 minutoss to

a c i t p ó d a d i s n e D

o s e P

Tie Tiem mpo

Tie Tiem mpo

Después del centrifugado separación en dos fases

Vaciado del inoculo al medio de fermentación

Observación en espectrofotómetro

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RESULTADOS PARA LOS GRAFI GRAFICO COS S

Tie Tiem mpo 0 1 3 5 24

Absor sorbancia 0,217 0,749 0,842 1,32 1,259

Gravime imetría 0,008 0,01 0,03 0,01 0,185

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CÁLCULOS MATEMÁTICOS Se analizar la parte de la curva hasta donde haya habido crecimiento y tomaremos como el dato final N (absorbancia) al dato de mayor magnitud tal como se muestra en al siguiente tabla Tie Tiem mpo 0 1 3 5

Absor sorbancia 0,217 0,749 0,842 1,32

CALCULO DEL LA TASA DE CRECIMIENTO PARA ABSORBANCIA

N f = N0 ∗ eµ

∗t

LnN LnN f = LnN0 + µt Ln Ln (1.32) = Ln ( 0.217) + µ ∗ (5) µ = 0.4h

-1

CALCULO DEL TIEMPO DE GENERACION PARA ABSORBANCIA

N f = N0 ∗ eµt

2 g

N f = N 0 ∗2

=

e µt

gLn 2 = µtLne g =

τ =

µ t

Ln 2

τ =

g 5

τ =

2.89 1.73

tiempo po de de generación generación que nos nos arroja n los resultados resultados nos muestran muestran que Conclusión: El tiem

cada 1.73

g =

0.4h

−1

∗ 5h

Ln2 g = 2.89 horas se duplica la levadura

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CÁLCULOS MATEMÁTICOS Se analizar la parte de la curva hasta donde haya habido crecimiento y tomaremos como el dato final N (peso) al dato de mayor magnitud tal como se muestra en al siguiente tabla Tie Tiem mpo 0 1 3 5

Gravime imetría 0,008 0,01 0,03 0,1

CALCULO DEL LA TASA DE CRECIMIENTO PARA EL PESO

N f = N 0 ∗ e µ

∗t

LnN f = LnN0 + µt Ln ( 0.1) = Ln ( 0.008) + µ ∗ (5) µ = 0.5h

-1

CALCULO DEL TIEMPO DE GENERACION PARA EL PESO

N f = N0 ∗ eµt

2 g

N f = N 0 ∗2

=

e µt

gLn 2 = µtLne g = g =

µ t

Ln 2 0.5h

−1

τ = ∗ 5h

Ln 2 g = 3.64 Conclusión: El

τ =

τ =

t g 24 4.53 1.37

tiem tiempo po de de generación generación que nos arroja n los resultados resultados nos muestran muestran que cada 1.37 horas se duplica la la lev levadur adura a

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DISCUSIONES Con respecto a la velocidad especifica: especifica:

Fabio Rafael Tarántola 2003, menciona que la velocidad especifica del Sacharomyces es de 0.124h-1 , en los resultados obtenidos se tuvo para la absorbancia un resultado de 0.4h-1 y para la medición del peso de 0.5h-1 , es probable que se haya haya cometido cometido erroes en la toma de datos al momento de medir la absorbancia y quiza no estuvo calibrado el espectrofotómetro.

Fabio Rafael Tarántola 2003, menciona que el tiempo de duplicación del Saccharomyces cereviceae es 2 horas a 25 ºC, e los resultados obtenidos par absorbancia se tiene que el tiempo de duplicación es de 1.73h, y para la gravimetría se tiene que el tiempo de duplicación es de 1.37h, los resultados están cercanos al teorico.

CONCLUSIONES Saccahromy yces cerev cerevisi isiae ae es de 0.124h-1 La velocidad especifica de crecimiento de Saccahrom Saccahromy yces cerev cerevisi isiae ae es de 2horas El tiempo de duplicación de Saccahrom Saccahromy yces cerev cerevisi isiae ae se desarrolla normalmente a 25ºC Las levaduras como Saccahrom

BIBLIOGRAFIA Fabio Rafael Tarántola 2003, “DISEÑO Y PUESTA EN MARCHA DE UN SISTEMA SEMICONTINUO DE FERMENTACION PARA LA PRODUCCION DE ETANOL A PARTIR DE MATERIAS PRIMAS RENOVABLES MEDIANTE Saccharomyces cerevisiae”. Universidad Nacional del Cuyo Mendoza-Argentina. Erika Fajardo Trujillo2007, “EVALUACIÓN DE MELAZA DE CAÑA COMO SUSTRATO PARA LA PRODUCCIÓN DE PONTIFICIA A UNIVERSIDA UNIVERSIDAD D JAV JAVERI ERIANA ANA-FACULTA -FACULTAD D DE DE CIENCIAS CIENCIAS BÁSI BÁSICA CASS- MICROBIOMICROBIOSaccharomyces cerevisiae” PONTIFICI LOGÍA INDUISTRIAL BOGOTÁ D.C. www.microbiologia.com.ar Buscador www.google.com: www.google.com: “Mi “Microbiol crobiolog ogía ía clínica clínica crecimiento ymuerte de bacterias” bacterias”

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ANEXOS Ta Tablas las de Fabio Rafae fael Tarántola

EXPERIMEN EXPE RIMENTO TO SUSTRATO INICIA INICIALL VELOCIDAD Azúcar Reductor ESPECÍFICA -1 Inicial µ (h ) 1 1.84 0.090 2 3.25 0.124 3 5.24 0.115

Tiempo de Organismo

Temp. (° C) duplicación (hs)

BACTERIAS Escherichia coli

37

0,28

Bacillus subtilis

40

0,43

Pseudomonas putida

30

0,75

Mycobacterium tubercu37 losis Tr Treponema pallid llidu um

6

37

34

25

2

LEVADURAS Saccahromyces Saccahromyces cerevisiae

CONSTANTE DE CONVERSIÓN (Y) Nº lev x108/g azúcar 3.68 295.4 142.8

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