UNIVERSIDAD TECNOLOGICA DE SAN JUAN DEL RIO, QRO.
INGENIERÍA QUÍMICA
9° CUATRIMESTRE
2° PARCIAL
INTEGRANTES:
ALONSO OLGUIN
MARTINA
CRUZ PÉREZ YENNI
GISSELL
SULPICIA GODOY SALINAS S ALINAS TREJO HERNÁNDEZ PALOMA PALOMA TREJO PAULINO DENISSE PROCESOS IOTECNOL!GICOS
M. EN C. LUZ CARMEN C ARMEN CASTILLO HERNÁNDEZ
QUI"2SV#
%$Fecha de entrega: 14 de Julio del 2013
PRACTICA & ' CURVA DE CRECIMIENTO ACTERIANO
OJETIVO: El alumno realizará y observará el crecimiento bacteriano mediante una curva de crecimiento, as como la a!licaci"n de los m#todos$ cuenta viable y turbidimetra%
INTRODUCCI!N: &e suele de'inir el crecimiento de cual(uier sistema biol"gico como el incremento ordenado de todos los elementos com!onentes de ese sistema, lo cual im!lica un aumento de la masa celular (ue eventualmente conduce a la multi!licaci"n celular% En organismos !luricelulares dicha multi!licaci"n se traduce en un aumento del tama)o del individuo, mientras (ue en unicelulares (ue se dividen !or 'isi"n o !or gemaci"n, lo (ue ocurre es un aumento de la !oblaci"n% *or lo tanto, en una curva de crecimiento e+isten 4 'ases: 1 Fase -ag .latencia / !erodo de ada!taci"n, aumento de tama)o individual$ !oco crecimiento 2 Fase E+!onencial/ má+imo crecimiento% ctividad 'isiol"gica alta% 3 Fase estacionaria/ tasa de crecimiento igual a tasa de muerte .'alta de nutrientes y desechos metab"licos% etabolitos secundarios .antibi"ticos, vit%, aa, to+inas% ao contenido 5% 6#lulas !e(ue)as% 4 Fase de uerte/ acumulaci"n de metabolitos inhibidores yausencia de nutrientes% 6#lulas viables !oco abundantes% 7 e+isten di'erentes m#todos !ara el conteo de este crecimiento bacteriol"gico los cuales son:
Para el conteo para microorganismos viables son: 6uenta en !laca$ 8aciado en !laca E+tendido en !laca sa calibrada iles y irsa Filtraci"n 59mero más !robable .5* • • • • •
Para el conteo de microorganismos totales: ecuento microosco!ico: 6uenta de reed 6ámara de 5eubauer 6ámara de *retto' ausser ;urbidimetra • • •
PROCEDIMIENTO: 6ultivo de 24 horas de 5 " &;, resembrar en 6&; la bacteria durante 12 horas a 3<=6
;omar 1 m- del cultivo y adicionarlo a 100 m- de =
;omar lecturas
;omar > m- cada hora y leer en el es!ectr"metro
ealizar 10 lecturas
Ira'icar en !a!el milim#trico: @%C% contra tiem!o%
LECTURA EN VACIADO EN PLACA ()*+-+ /0 134 ??6@ ABE &E ;CE5 -& -E6;B&: acer diluciones 1:10,000,000
ncubar a 3>=624 hrs
6ontar el n9mero de colonias
ealizar el !lan de diluciones ??5C;: *ara el !lan de diluciones hay (ue contem!lar los cálculos !revios de concentraci"n, !or lo cual$
*or eem!lo$ si en el !rimer muestra se va a tomar 1ml del reactor y se vaciará en Dml de soluci"n salina su concentraci"n será$ 1ml en 10ml$ 110 0%1
*ara sacar las siguientes concentraciones$ 6 1816282 @es!ear: 6181 8262
*or lo tanto$ 6 2 .0%1 ml?.0%1 ml .10ml 1 G 10 H3
@onde$ 6 2 6oncentraci"n (ue (ueremos saber de la siguiente diluci"n 61 6oncentraci"n de la diluci"n (ue vas a tomar 81 8olumen de la alcuota 82 8olumen total
RESULTADOS ediante la metodologa !laneada anteriormente, se realiz" tal cual$
S0 5)675 78 +8 P0)- 08)*-708 5;10 <=+)-+, 0>6-<5, ?<5., )0;<0)6, )-0;<5
P0<;58 /0 608)5 REACTOR C67)-@5 8+5;-+0 ;=8 +7/5 S53 T<)-+8 +5)57/5 6 )0;<0)6 /0 2°C
S0 )5;5 ' ;7 /07 0+)5 B;7 < 7 <601 /0 TURIDIMETRÍA 3 $ ;7 < 07- 78 /-76+-508 (MÉTODO EN VERTIDO EN PLACA4 <58)0-508.
MÉTODO DE VERTIDO EN PLAA
*or 9ltimo, incubamos a H5;5?0-;58 07-+- /0 3>=624 hrs y 5+58.
K%!ara el !osteriormente realizamos conteo de Bnidades Formadoras de 6olonias .BF6 el conteo
R07-+- /0 /-76+-508 @+-/5 0 +8 <0)- 08)*-708.
7a des!u#s de la el !roceso de cuenta colonias%
@onde los resultados se muestran en la TA!LA "
MÉTODO DE T#R!IDIMETR$A
incubaci"n, llevamos acabamos conteo mediante el a!arato de
&e !uso !rinci!almente un blanco !ara la eliminaci"n de absorbancia% @es!u#s se coloc" cada !rueba .la muestra del reactor de cada hrs en la !arte dentro del es!ectro'ot"metro como se ve en la imagen%
ESPECTROFOT!METRO
&e cierra la ta!a y se da la lectura al e(ui!o e inmediatamente da la lectura digitalmente .absorbancia en nm%TA!LA %
GRÁFICAS $4 P5 07 ;*)5/5 /0 )61-/0
(1-5;84
Tiempo (hrs) 09:25 a.m. 10:25 a.m.
Absorbancia (nm) 0
0.218
1
0.236
11:25 a.m. 12:25 p.m. 01:25 p.m. 02:25 p.m. 03:25 p.m. 04:25 p.m. 05:25 p.m. 06:25 p.m. 07:25 p.m.
2 3
0.241 0.254
4
0.277
5
0.324
6
0.369
7
0.4075
8
0.43
9
0.437
10
0.427
TA!LA %
ASORANCIA TIEMPO ".' ".B' ".B ".%' ".% NM ".2' ".2 ".$' ".$ "."' " "
2
B
HRS
PRUEA DE TURIDIMETRÍA (AS T4
24 P5 07 ;*)5/5 /0 +60) @-170
$"
$2
TA!LA "
L5? $" 6+;7 )-0;<5 9 8 7 6 5
75? $" UFC;7
4 3 2 1 0
1
2
3
4
5
6
7
8
hrs
PRUEA DE CUENTE VARIALE (LOG UFC T4
9
10
11
DISCUSI!N DE RESULTADOS: 6ada microorganismo tiene una tem!eratura de crecimiento adecuada, lo (ue en nuestro caso con'orme a la literatura (CLASIFICACION Y DESCRIPCION DE LOS HONGOS
Y
LEVADURAS,
UNIVERSIDAD
NACIONAL
FEDERICO
VILLARREAL,
MICROBIOLOGIA I) el
intervalo de tem!eratura de crecimiento de las levaduras .S++55;3+084 es, en general semeante al de los mohos, es$ con un "!timo alrededor de2> a 30=6y un má+imode a!ro+imado 3> a 4<=6%5osotros mantuvimos de cierta 'orma una tem!eratura de 2L=6, as como su tiem!o de du!licaci"n de estas es entre 4> a 1D0 min
*or el m#todo de )61-/-;0)K: *odemos observar (ue en un intervalo mnimo de tiem!o .las dos 2 !rimeras horas a!ro+imadamente !or debao de la cual no hay crecimiento .'ase lag$ entre el tiem!o 2 y D, se !roduce un incremento lineal de la velocidad de crecimiento con la tem!eratura de cultivo (ue controlamos .'ase e+!onencial o logartmica% *or encima del tiem!o D la velocidad de crecimiento decae bruscamente .'ase de muerte y se !roduce la muerte celular, !or lo (ue a(u se !udo observar la im!ortancia del control de tem!eratura, ya (ue no se !udo observar la 'ase estacionaria% 7 !or el m#todo de +60) @-170: *odemos observar más claramente las 'ases, entre el tiem!o 1 y 2 .Entre las 10:2> a las 11:2> la 'ase lag donde no hay crecimiento bacteriano% Entre el tiem!o 2 y D .11:2> am a las M:2> !m la 'ase e+!onencial donde hay una multi!licaci"n en los microorganismos% 6omo ya se haba mencionado anteriormente no se !uede observar la 'ase estacionaria ya (ue se tuvo un descontrol de tem!eratura muy notorio causando la muerte celular inmediatamente .a las <:2> ya estaban muertas, des!u#s de 10 hrs%
hora bien, mediante los cálculos$ se obtuvo 4%0L03 de n9mero de generaciones .59mero de divisiones celulares en un cultivo y una velocidad de crecimiento .n9mero de generaciones !or unidad de tiem!o de 0%>L2D lo cual resulta un tiem!o de generaci"n es decir, el tiem!o re(uerido !ara (ue se du!licara el n9mero de c#lulas de nuestra !oblaci"n de levaduras de 1%<1>> hrs%
CONCLUSIONES: lonso Clgun artina 6ruz *#rez 7enni Iissell &ul!icia Iodoy salinas ;reo ernández !aloma ;reo *aulino @enisse
ILIOGRAFÍA htt!:NNN%ugr%esOeianezicrobiologia12crecimiento%htmPQ;oc>LD3431<
))<:08.87-/080.0))7--6-0)715)5-5#5#B#0+60)5# 1+)0-5#2%BB rocR, adigan, artinRo, *arRer% 2004% iologa de losmicroorganismos, 10 edici"n, *rentice all% *rescott, arley, Slein 2004% icrobiologa, cIraNHill, nteramericana% htt!:NNN%ehoNenes!anol%comcalcularHgeneracionH'aseHe+!onencialH comoQ4LD<>4
