“Año de la Promoción de la Industria Responsable y del Compromiso Climático”
Universidad Nacional Mayor de San Marcos Facultad de Medicina Escuela Académico Profesional de Tecnología Médica
Curso: Bioquímica Informe de Laboratorio N° 10 PRACTICA DE LABORATORIO Nº 12 - 13
HIDROLISIS QUIMICA Y ENZIMATICA DE LOS DISACARIDOS Mesa N° 04
Aguilar Ocaña, Gissel Teresa Bonifacio Mundaca, Jenny Katherine De la Cruz Isuiza, Luis Fernando Mallma Ynga, Piero Luis Pacheco Santillán, José Luis Sánchez Salinas, Álvaro Hernando Docente: Nuñez Fonseca, Marco Antonio
5 de Mayo del 2014
INTRODUCCION Los disacáridos son un tipo de glúcidos formados por la unión o condensación de dos azúcares monosacáridos iguales o distintos mediante un enlace O-glucosídico (con pérdida de una molécula de agua) pues se establece en forma de éter siendo un átomo de oxígeno el que une cada pareja de monosacáridos, mono o dicarbonílico, que además puede ser α o β en función del -OH hemiacetal o hemicetal. Los disacáridos más comunes son • Sacarosa (azúcar común):
- No tiene poder reductor - Es el resultado de la unión del carbono 1 de la alfa-glucosa y el carbono 2 de la ß-fructosa con un enlace glucosídico alfa (1-2) -La hidrólisis de la sacarosa por ácidos o por enzimas como la invertasa o sacarasa, rompe el enlace glucosídico y se obtiene el azúcar invertido que es una mezcla de glucosa y fructosa. • Lactosa (azúcar de la leche):
-Tiene poder reductor -Está constituída por ß-galactosa y alfa-glucosa, con el enlace glucosídico ß (1-4) entre el carbono 1 de la ß-galactosa y el carbono 4 de la a-glucosa. -Su hidrólisis se lleva a cabo por la acción de la enzima Lactasa • Maltosa, isomaltosa, trehalosa y celobiosa: Formadas todas por la unión de dos glucosas, son diferentes dependiendo de la unión entre las glucosas. Todas ellas tienen poder reductor, salvo la trehalosa. • Maltosa:
-Está formada por dos moléculas de alfa-glucosa con el enlace glucosídico alfa (1-4) entre el carbono 1 de la primera molécula y el carbono 4 de la segunda. -Es un azúcar reductor debido a que reduce el ión cúprico a ión cuproso cuando se emplea el reactivo de Felhing. -Se obtiene durante la degradación o síntesis del polisacárido celulosa
El carácter reductor se da en un disacárido si uno de los monosacáridos que lo forman tiene su carbono anomérico (o carbonílico) libre, es decir, si este carbono no forma parte del enlace O-glucosídico. Dicho de otra forma, si el enlace Oglucosídico es monocarbonílico el disacárido resultante será reductor (maltosa, celobiosa, etc.), mientras que si el enlace O-glicosídico es dicarbónílico el disacárido resultante será no reductor (sacarosa, trehalosa). El enlace covalente entre dos monosacáridos provoca la eliminación de un átomo de hidrógeno de uno de los monosacáridos y de un grupo hidroxilo del otro monosacárido, de forma que en conjunto podemos decir que se elimina una molécula de agua (H2O) que se libera al medio de reacción. En la mucosa del tubo digestivo del ser humano existen unas enzimas llamadas disacaridasas, que hidrolizan el enlace glucosídico que une a los dos monosacáridos, para suabsorción intestinal. La maltosa y lactosa son disacáridos que poseen un carbonos anoméricos libre por lo que poseen poder reductor y la reacción con el Reactivo de Benedict es positiva, en tanto que la sacarosa es un disacárido que no posee carbonos anoméricos libres por lo que carece de poder reductor y la reacción con el Reactivo de Benedict es negativa. Sin embargo, en presencia de HCl y en caliente, la maltosa, lactosa y sacarosa se hidrolizan, es decir, incorpora una molécula de agua y se descomponen en los monosacáridos que los conforman, glucosa + glucosa, glucosa + galactosa y glucosa + fructosa, respectivamente, que si son reductores.
OBJETIVOS
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Inducir la hidrolisis de la maltosa, lactosa y sacarosa químicamente y enzimáticamente.
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Evaluar a los disacáridos previos a la hidrólisis con reactivo Benedict y Selliwanof.
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Evaluar a los disacáridos después de su hidrolisis con reactivo Benedict y Selliwanof.
PROCEDIMIENTO
HIDRÓLISIS QUÍMICA 1. Colocamos agua destilada en el tubo control y en los tubos 1A, 2A, 3A
2. Luego en el tubo 1A 2ml de Maltosa, en el tubo 2A lactosa y el tubo 3A Sacarosa.
3. Luego echamos 1 ml del reactivo de Benedict a los 3 tubos.
4. Llevamos a calentar a baño maría los tubos y observamos los cambios.
5. Luego para observar la hidrólisis procedemos a hacer de nuevo el procedimiento 1 y 2 y echamos 1ml de HCl 4M lo llevamos a baño María para hidrolizar los disacáridos.
6. Luego que hidrolizamos echamos 1ml de NaOH 4M y 1ml del reactivo de Benedict y lo llevamos a baño María, observamos los resultados.
7. Los mismos procedimientos se hacen pero para observar si hay fructuosa pero usamos el reactivo de Seliwanoff.
HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA 1. En un beacker de 50 ml diluir y homogenizar 2.5g de levadura en 20ml de agua destilada.
2. Dejar reposar durante 15 min y filtrar.
3.
Posteriormente colocar el extracto de levadura según el cuadro de temperatura mostrado anteriormente. Y lo separamos en levadura “crudo” a 37°C y “hervido” a 100°C
4. Hacemos los mismos procedimientos que en la hidrólisis química pero solo con la sacarosa vertiendo levadura “crudo” en el tubo control y tubo 1B y levadura “hervido” en el tubo 2B.
5.
Dejamos que pase 10 min a 37°C en baño maría.
6. Luego echamos 1ml de reactivo de Benedict.
7. Llevamos a baño María y observamos los resultados.
8.
Hacemos el mismo procedimiento con el reactivo de Seliwanoff para observar fructuosa.
RESULTADOS HIDROLISIS QUÍMICA -Antes de la hidrolisis: Tubo control
Tubo 1A
Tubo 2A
Tubo3A
Benedict
Seliwanoff
Tubo 1B
Tubo 2B
Tubo3B
Después de la hidrolisis Tubo control Benedict
Seliwanoff
HIDROLISIS ENZIMÁTICA
Tubo control
Crudo
Hervido
Benedict
Seliwanoff
INTERPRETACION DE RESULTADOS
-En la hidrolisis química s necesitan altas temperaturas y ácidos concentrados para romper los enlaces glucosidicos. -El que diera positivo la prueba de seliwanoff en el tubo de sacarosa antes de la hidrolisis debe ser que la botella con agua destilada estaba contaminada con monosacáridos. -Con la prueba de Benedict se comprueba que la hidrolisis se produjo y formo monosacáridos reductores y con la prueba de seliwanoff se comprueba que en la hidrolisis de la sacarosa existe cetosas, en este caso la fructuosa. -En la hidrolisis enzimática de la sacarosa se produjo sin necesidad de altas temperaturas como en el caso de el extracto de levadura crudo y sin utilizar ácidos, esto se debe a que las enzimas necesitan menor energía de activación y necesita menos tiempo que en la hidrolisis química.
DISCUSION En la presente práctica se realizaron dos hidrolisis una química y la otra enzimática, en el caso de la hidrolisis química existió un problema al momento de realizar la hidrolisis a la sacarosa debido a que esta fue un poco contaminada y por tanto luego de llevar haber agregado el HCl y puesto a T° 100°C, se tiño de un color medio amarillo, lo cual indico el error al momento de pipetear la sacarosa con una pipeta usada para otro disacárido. En lo que respecta a la hidrolisis enzimática los resultados para la prueba de Selivanof debieron de ser negativo en el tubo donde se mezcló la sacarosa con el extracto de le vadura “hervido”, pero este tubo no estuvo el suficiente tiempo a T° de 100°C por tanto no se desnaturalizo la enzima completamente y esta siguió realizando su acción catalizadora lo que indica que el resultado con Selivanof es positivo ya que se hidrolizo la sacarosa en fructuosa y glucosa, y este reactivo reconoce a la fructuosa. Por tanto para poder realizar esta práctica experimental se requiere un aislamiento de contaminación, ya sea del medio así como de los instrumentos a utilizar como es en este caso las pipetas, los tubos de ensayo, los frascos contenidos con disacáridos y reactivos. Además de mantener la T° necesaria para cada experimento practico.
CONCLUSIONES
Por medio de esta práctica se lograron reconocer algunas de las propiedades de los carbohidratos, como lo es su propiedad reductora. Se realizó la hidrólisis 3 disacárido, de los cuáles se comprobó esta reacción por medio de pruebas químicas con reactivos que ayudan a la identificación de los compuestos que se forman después de estas reacciones para determinar y comprobar que se realizó bien el procedimiento. La hidrólisis de los disacaridos se puedo evidenciar con dos pruebas: Prueba de Benedict, evidencio la aparición de azucares reductores. Prueba de selliwanof, sirve para distinguir entre la aldosa y la cetosa, Las cetosas generalmente producen un color rojo. En cambio después de la hidrólisis de la sacarosa con la prueba de benedict observamos que su color era diferente por la presencia de fructosa y glucosa, su color era más oscuro y un poco verdoso. En la prueba de selliwanof antes y después de la hidrólisis dio positivo sólo en la sacarosa.
BIBLIOGRAFIA
https://docs.google.com/document/d/1nJKakJFJdmKwfHoteIeUkXNs7JQcaTeDXQmRSU6lS0/edit http://quimica-csfisicas.blogspot.com/2012/05/hidrolisis-de-disacaridos-o.html
