PEWARNAAN ZIEHL NEELSEN 1. Pendah dahulu uluan
Mikobakteria yang diwarnai dengan pewarna fenilmetana (contoh : fuksin bes) dalam larutan aniline atau fenol akan mengekalkan warna tersebut meskipun telah diberi asam yang kuat. Oleh yang demikian, bakteria golongan pertama ini disebut sebagai bakteria tahan asam. Sifat tahan asam ini merupakan cirri yang bermanfaat dan penting dalam membedakan Mycobacteri Mycobacterium um dengan bakteri lain. (Beberapa spesies aktinomise aktinomisett juga tahan asam). Pada bakteria tahan asam, pewarna fenol mempunyai kelarutan yang tinggi di dalam sel dibandingkan dengan decolorator, pewarna tersebut kekal di dalam sel, manakala pada bakteria tak tahan asam pewarna tersebut hanya masuk ke dalam sel dan kemudian disingkirkan dari sel oleh decolorator. Disamping ciri-ciri ini kadar resap pewarna pada sel yang tahan asam adalah rendah dibandingkan dengan sel tak tahan asam. Ciri-ciri ini disebabkan oleh perbedaan komposisi kimia (secara kuantitatif dan kualitatif) bakteria tahan asam dan bakteria tak tahan asam. Mikobakteria yang tahan asam mempunyai karbohidrat, alcohol dan asam lemak (seperti asam mikolik) yang tersendiri. Oleh yang demikian, dalam tata cara ini object glass perlu dipanaskan sehingga uap keluar karena dalam hal ini, pemanasan digunakan untuk terlaksananya pewarnaan dalam jangka waktu yang optimal.
2. Tujuan
Untuk mengidentifikasi “acid-fast” mycobacteria : leprae, tuberculosis dan atypical.
3. Info Inforrm Co Consen nsentt 1.
Meminta persetujuan
2. Menj Menjel elas aska kan n pros prosedu edur r 3. Menj Menjel elas aska kan n tuju tujuan an
4. Alat dan Bahan 1.
Material kuman yang akan diselidiki:
a. Mycobakterium tuberculosa: spuntum b. Mycobacterium leperae: kerokan 2. Gelas Objek 3. Ose 4. Lampu spiritus 5. Mikroskop dan minyak imersi 6. Alkohol 70% dan kapas 7. Cat yang akan digunakan : •
Carbon fuchsin 10 ml (Ziehl Neelsen A)
( Alkohol fuchsin / basic fuchsin dan carbol 5% 90 ml)
•
HCI 3% dalam alkohol absolute 96% (Ziehl Neelsen B)
(HCI 3 ml, alkohol absolute 97 ml)
•
Methylen biru (Ziehl Neelsen C)
5. Cara Kerja
1. Objek glass yang kering dan bersih, dibersihkan dengan kapas alhokol 95% 2. Ambil Ose steril yang telah dipanaskan di atas api spiritus sampai merah membara, lalu setelah ose steril dingin, masukan ke dalam tabung yang berisi material kuman cair untuk mengambil kuman. Ratakan pada oyek glass secara tipistipis, tunggu sampai kering 3. Bila material kuman dalam bentuk padat, diencerkan dengan setetes air steril dengan koloni di atas objek glass, biarkan kering 4. Ose dipanaskan lagi, agar kuman mati. 5.
Fiksasi preparat dengan cara memanaskan preparat tadi diatas api spiritus
sebanyak 2-3 kali, agar kuman menempel di objek glass, Preparat siap diwarnai.
Setelah direkatkan , preparat digenapi dengan carbol fuchsia selama 5 menit di
•
panaskan diatas nyala api sampai terjadi penguapan akan tetapi jangan sampai mendidik •
Sisa cat dibuang, cuci dengan larutan HCL 3% dalam alkohol absolute, sehingga cat tampak larut semua
•
Cuci dengan air
•
Genangi dengan methylen blue atau malachite green 1-2 menit
•
Cuci dengan air dan biarkan menjadi kering
•
Sediaan ditetesi minyak imersi dan dilihat di bawah mikroskop dengan lensa obyektif pembesaran 97-100 x.
Hasil pemeriksaan :
-
Kuman tahan asam alkohol tampak warna merah
-
Kuman tak tahan asam alkohol tampak warna biru/hijau.
Interpretasi Jumlah Basil (-) BTA / 100 LP 1-9 BTA / 100 LP 10-99 BTA / LP 1-10 BTA / LP > 10 BTA / LP
Hasil yang dilaporkan
0 (-) 1-9 BTA / 100 LP (tulis jumlah) 1+ (+ / positif 1) 2+(++/positif 2) 3+ (+++/positif 3)
Daftar pustaka
•
Standar Pelayanan Medik Diagnosis dan Terapi Pemeriksaan dan Tindakan Penyakit Kulit dan Kelamin, 1995, Fakultas Kedokteran UNIBRAW, Malang.
•
Jawetz, Melnick & Adelbergts, Mikro Biologi Kedokteran, 2005, Salemba Medika, Jakarta.
•
Michael J Pelczar, jr. Dasar-dasar Mikrobiologi.
•
Tony Hart, Paul Shears, Atlas Berwarna Mikrobiologi Kedokteran, 1996, Hipokrates, Jakarta.
•
Buku Petunjuk Praktikum dan Skill Laboratory Pengecatan, Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sultan Agung Semarang.
