INTRODUCCION Los Los organi organismo smoss vivos vivos puede pueden n obtene obtenerr y gastar gastar la energ energía ía más rápida rápidamen mente te enzimas. Como debid debido o a la presen presencia cia de catal cataliza izado dores res biológ biológico icoss llamad llamados os enzimas. sucede con los los catalizadores inorgánicos, inorgánicos, las enzimas enzimas modifican la velocidad de una reacción química sin afectar el equilibrio final y sólo se requieren pequeñas cantidades para efectuar la transformación de un gran número de moléculas de sustrato !ara poder mostr ostra ar la activ ctivid idad ad enzi nzimáti mática ca se debe ebe ten tener prese resen nte fund fundam amen enta talm lmen ente te que que la acci acción ón cata catalílítitica ca de las las enzi enzima mass es de cará caráct cter er espe especí cífifico co"" o sea, sea, cada cada reac reacci ción ón quím químic ica a debe debe ser ser cata cataliliza zada da por por una una determinada enzima #l reactante o sustancia química que reacciona para dar un produc producto to en un sistem sistema a enzim enzimáti ático co se llama llama sustrato, sustrato, $abría entonces tantos sistemas enzimáticos como sustratos reaccionantes e%isten en un organismo vivo &ebido a que solo se necesitan muy ba'as concentraciones de enzima para cata cataliliza zarr una una reac reacci ción ón dada dada,, solo solo muy muy poca pocass enzi enzima mass pued pueden en medi medirs rse e directamente #n general, la actividad de cualquier sistema enzimático puede ser demostrada de dos maneras( ) *erific *erificando ando el sustrato sustrato no transfo transformad rmado o +SUSTRAT + SUSTRATO O RESIDUAL RESIDUAL después de un tiempo determinado de incubación en condiciones específicas de py temperatura . *erific *erificando ando los productos productos liberados liberados después después de un tiempo determina determinado do de incubación en condiciones específicas de p- y temperatura La finali finalida dad d del presente presente traba'o traba'o e%peri e%perimen mental tal es determ determina inarr la activ activida idad d enzimátic enzimática, a, utilizan utilizando do a la enzima amilasa salival que tiene la capacidad de producir degradación del almidón en maltosa +&isacárido reductor y algo de glucosa como e'emplo de un sistema enzimático
DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
I.
MATERIALES Y REACTIVOS A. DE LAORATORIO! • • • •
/ubos de ensayo !ipetas graduadas 0radilla !inzas para tubos de ensayo
. REACTIVOS A UTILI"AR! 1olución de almidón p- 23 al )4 Cloruro de sodio solución 3)5 #nzima al )4 +amilasa salival 6cido Clor$ídrico 3378 1olución yodada 9eactivo :olin ;u(
II.
1olución Cúprica alcalina 1olución fosfomolíbdica
#ROCEDIMIENTO •
COM#ONENTES 1olución de almidón )4 p- 23
I 7 ml
II 7 ml
1olución de cloruro de sodio 3)5
) ml
) ml
= ml
> ml
• • •
Colocar los tubos al baño de agua a >?@C por 7 minutos ?@C durante )3 minutos
E$#LICACI%N! < simple vista el contenido del tubo A y AA es igual, lo cual no es correcto, ya que en el tubo AA ocurrió la reacción de la enzima
CONTROL DE LA ACTIVIDAD EN"IM&TICA #OR EL SUSTRATO RESIDUAL.
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&e cada uno de los tubos de incubación transferir 37 ml de su correspondientes del cuadro siguiente, inmediatamente de cumplidos los )3 minutos TUOS COM#ONENTES 6cido clor$ídrico 337 8 &e los tubos A y AA( #tapa < 1olución yodada
I.' 7 ml 37 ml 37 ml
II.( 7 ml 37 ml 37 ml
ME"CLAR! bservar y anotar los resultados de cada tubo de acuerdo a la intensidad del color resultante
E$#LICACION! #l cambio de color del tubo A) de incoloro a azul oscuro se debe a que el indicador usado +solución yodada reacciono con la presencia del almidón +sustrato, en cambio en el tubo AA. el color amarillo claro se debió a que el indicador no encontró sustrato sobre el cual actuar, manteniendo el color característico de la solución yodada
CONTROL DE LA ACTIVIDAD EN"IM&TICA #OR LOS #RODUCTOS )ORMADOS *)olin +U TUOS COM#ONENTES I.'.' II.(.( &e los tubos A y AA( etapa < )ml )ml 1olución Cúprica alcalina )ml )ml -ervir D minutos #nfriar 1olución fosfomolíbdica )ml )ml
E$#LICACION! #n el tubo A)) se obtuvo un color celeste, distinto al tubo A.. en el cual se obtuvo un color naran'a, esto se debió a que la solución cúprica reacciono con los productos de la reacción enzimática que son azucares reductores como glucosa y maltosa, estos actúan sobre el cobre, reduciéndolo
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del color naran'a a un azul oscuro debido a la reacción reductora de los productos sobre el molibdeno +azul de molibdeno
III.
CONCLUSI%N
de la!"a#!"i! %e"&i#i' ()e de#e"&ina" n!$
La práctica de laboratorio nos permitió identificar que e%isten reactivos llamados indicadores capaces de demostrarnos la actividad enzimática a partir de las variaciones de color que se mostraban en los tubos después de cada reacción V.
CUESTIONARIO
' -U/ M/TODOS EN"IM&TICA0
CONOCE
#ARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD
*erificando el sustrato no transformado +sustrato residual después de un tiempo determinado de incubación en condiciones específicas de py temperatura *erificando sus productos liberados después de un tiempo determinado de incubación en condiciones específicas de p- y temperatura ( -C%MO SE #UEDE O1ETIVAR LA #RESENCIA DEL SUSTRATO RESIDUAL0 •
#n los ensayos de aspecto fotométrico puede seguirse el curso de una reacción observando cómo cambia la luz absorbida por la solución en la que se está dando la reacción, para poder utilizar un ensayo de este tipo debe $aber entre los sustratos a los productos algunos que absorba luz a una longitud de onda determinado y que sea de esta forma, se puede observar el aumento o la disminución de la observación a dic$a longitud de onda Cuando la luz absorbida se muestra en el espacio visible es posible observar un cambio en el color de la muestra y entonces $ablaríamos del método calorímetro
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2 -C%MO DEMOSTRAR SI SE 3A #RODUCIDO O NO REACCI%N EN"IM&TICA EN UN E$#ERIMENTO REALI"ADO0 •
/odos los ensayos enzimáticos miden el sustrato consumido o el producto generado en la reacción durante un tiempo #%iste un gran número de métodos diferentes para medir la concentración de sustratos y productos, y que muc$as enzimas pueden ser ensayadas de diferentes maneras $abitualmente en bioquímica se estudian las reacciones catalizadas por enzimas E$#ERIMENTOS EN LA )ASE DE EUILIRIO
E+PERIMENTO, LA -A,E DE EN EQUILIBRIO #n estos e%perimentos se perturba una mezcla de enzimas sustrato y productos que $an alcanzado el equilibrio químico por e'emplo combinando la temperatura, la presión o el p-, el análisis de estos e%perimentos requiere que la reacción sea reversible
4 -C%MO SE #UEDEN O1ETIVAR LOS #RODUCTOS DE UNA REACCI%N EN"IM&TICA0 •
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