DETERMINACION ENZIMATICA DEL ALMIDON

DIGESTIÓN ENZIMÁTICA DEL ALMIDÓN 1.

OBJETIVO

Determinar la actividad enzimática de la alfa amilasa salival e identificar los productos de la digestión del almidón.

2.

PROCE ROCED DIMIE IMIENT NTO O

Preparar una batería de tubos como sigue: Tubo 1 Almidón al 1% (mL.) Buffer Fosfato (mL.) pH= 6.8 HCL 0.5N (mL.) Agua destilada (mL.) NaCL 0.9% (mL.)

Tubo 2

Tubo 3

1.0 0.5

1.0 0.5

1.0 - --

----1.2

--1.2 ---

1.2 0.5 ---

NaCL: activador de la enzima alfa amilasa salival.  Tubo 1,2: pH óptimo  Tubo 3: pH ácido Llevar a baño maría de 37ºC por 5’ y luego agregar Alfa amilasa (mL.)

0.5

0.5

0.5

 Tubo 1 + Alfa amilasa salival: digerido I  Tubo 2 + Alfa amilasa salival: digerido II  Tubo 3 + Alfa amilasa salival: digerido III

3.

FUNDAMENTO Reacción del Lugol

El lugol o solución de Lugol es una solución de I2 (1%) en equilibrio con KI (2%) en agua destilada. destilada. Fue nombrada en honor al físico francés  J. G. A. Lugol . El Lugol colorea las micelas de almidón de color azul intenso casi negro. El almidón es una mezcla (en diferentes proporciones según las especies) de los polisacáridos amilosa (10-20%) y amilopectina (80-90%). El almidón es coloreado de azul en presencia de Lugol, debido a una adsorción o fijación del I -3 sobre las unidades de glucosa de la amilosa, y ayuda a mantene mantenerr su estructur estructura. a. Al calentar calentar hasta hasta ebullici ebullición, ón, desapare desaparece ce la estructu estructura ra ternaria ternaria (incolor (incoloro) o) y reaparece al enfriar (azul-violeta). Tubo 1’ Digerido I Digerido II Digerido III HCL 0.5N Lugol

•

1.0 -- - -0.5 2.0

Tubo 2’ --1.0 --0.5 2.0

Tubo 3’ - -- -1.0 0.5 2.0

Reacción de Benedict

La reacción o prueba de Benedict identifica azúcares reductores (aquellos que tienen su OH anomérico libre), como el lactosa, lactosa , la glucosa, la maltosa, y celobiosa. celobiosa . En soluciones alcalinas, pueden reducir el Cu 2+ + que tiene color azul a Cu , que precipita de la solución alcalina como Cu2O de color rojo-naranja. El fundamento de esta reacción radica en que en un medio alcalino, el ion cúprico (otorgado por el sulfato cúprico) es capaz de reducirse por efecto del grupo aldónico del azúcar (CHO) a su forma de Cu +. Este nuevo ion se observa como un precipitado rojo ladrillo correspondiente al óxido cuproso (Cu 2O). El medio alcalino facilita que el azúcar esté de forma lineal, puesto que el azúcar en solución forma un anillo de piranósico o furanósico. furanósico. Una vez que el azúcar está lineal, su grupo aldehído puede reaccionar con el ion cúprico en solución. En resumen, se habla de azúcares reductores cuando tienen su OH anomérico libre, y éstos son los que dan positivo en la prueba de Benedict. Tubo 1’’ Digerido I Digerido II Digerido III Rvo. de Benedict

0.5 -- - -0.5

Tubo 2’’ --0.5 --0.5

Tubo 3’’ - -- -0.5 0.5

4.

RESUL ESULTADOS DOS Reacción del Lugol

Tubo 1’

Tubo 2’

Tubo 3’

Pres Presen enci cia a de gluc glucos osa. a. Hubo actividad enzim enzimáti ática. ca. Lu Lu ol (-) (-)

Pres Presen enci cia a de gluc glucos osa. a. Hubo actividad enzimá enzimátic tica. a. Lu Lu ol (-) (-)

Prese Presenc ncia ia de almidó almidón. n. No hubo activida actividad d enzimáti enzimática. ca. Lu ol (+ (+)

Tubo 1’’

Tubo 2’’

Tubo 3’’ 3’ ’

Prese resenc ncia ia de gluc glucos osa. a. Coloraci Coloración ón rojo - ladrillo ladrillo.. Benedict (+)

Pres Presen enci cia a de gluc glucos osa. a. Coloraci Coloración ón rojo - ladrillo ladrillo.. Benedict (+)

Presen esenc cia de almid lmidó ón. Coloración azul. Benedict (-)

Reacción de Benedict