degradacion enzimatica de la sacarosa

Degradación enzimática UNIVERSIDAD DEL SANTA de la sacarosa FACULTAD DE CIENCIAS EAP MEDICINA HUMANA

Bioquímica Prof. Camone Me!icina Humana " V Cic#o Ve#$que% Tu&i##a Ca'a#ina Ana

PRACTICA 4 DEGRADACIÓN ENZIMATICA DE LA SACAROSA I. INTRODUCCIÓN

A#(una !e #a en%ima on )ro'eína enci##a* #a ma+oría on )ro'eína com)#e,a* e'o -#'imo )ue!en !ecom)onere en una )orcin )ro'eica + o'ro e#emen'o or($nico no )ro'eico /(ru)o )ro'0'ico12 en ca!a cao #a reaccin ca'a#i%a!a en%im$'icamen'e !e)en!e !e una com&inacin 'rani'oria en're #a en%ima + e# u'ra'o* o e# com)ue'o cu+a reac'i3i!a! e ace#era!a )or #a en%ima. E'a com&inacin 'rani'oria e !enomina C4MPLE54"EN6IMA"SUSTRAT4 /E"S1. Ho+ a&emo que 7a+ a# meno 88 'i)o !e en%ima on re)ona&#e !e #a 'ranformacin !e #o a#imen'o que in(erimo en u'ancia m$ im)#e ca)ace !e )aar a# 'orren'e an(uíneo a 9n !e er u'i#i%a!a. En%ima ca)ace !e ace#erar #a reaccione química !e #a !i(e'in a7orran!o aí una im)or'an'e can'i!a! !e ener(ía + 'iem)o. La c0#u#a 3i3a )ue!e er coni!era!a 'ermo!in$micamen'e como un i'ema a&ier'o2 #a cua# e )er)e'-a + e re)#ica a i mima )or me!io !e reaccione or($nica enca!ena!a )or ca'a#i%a!ore que #a mima c0#u#a )ro!uce. La 'o'a#i!a! !e #a reaccione enca!ena!a e !enomina me'a&o#imo* cua#quier )ar'ici)an'e en una reaccin me'a&#ica* u'ra'o* in'erme!iario o )ro!uc'o* e !enomina me'a&o#i'o. E# me'a&o#imo )ue!e er !i3i!i!o en !o ca'e(oría: ANAB4LISM4 )roceo concernien'e con #a &ioín'ei !e mo#0cu#a or($nica com)#e,a + CATAB4LISM4* )roceo concernien'e a #a !e(ra!acin !e mo#0cu#a or($nica com)#e,a* con #a (eneracin imu#'$nea !e ener(ía. En%ima !iferen'e ca'a#i%an #a 7i!r#ii + #a ín'ei !e# a#mi!n + (#uc(eno2 A#fa ami#aa ca'a#i%a #a 7i!r#ii !e #o en#ace a#fa (#ucoí!ico* )ro!ucien!o (#ucoa* ma#'oa* ma#'o'rioa + !e;'rina. B"ami#aa ca'a#i%a #a 7i!r#ii !e #o en#ace a#fa < " = (#ucoí!ico )ro!ucien!o ma#'oa a )ar'ir !e# e;'remo no re!uc'or. E# a#fa ami#aa + Be'a" ami#aa no )ue!en 7i!ro#i%ar #o en#ace a#fa < " > (#ucoí!ico2 e neceario !e# en%ima ami#o <*> (#ucoi!aa )reen'e en #o anima#e* )#an'a + microor(animo. La 7i!r#ii !e e'o en#ace e )ue!e e(uir me!ian'e e# a#mi!n o e# (#uc(eno )or #a reaccin !e io!o* o mi!ien!o e# )ro!uc'o forma!o me!ian'e #o a%ucare re!uc'ore* con #o reac'i3o !e Fe7#in( + Bene!ic'. Lo !iac$ri!o #o encon'ramo en muc7a forma en #o or(animo 3i3o2 en're e##o 'enemo: acaroa* #ac'oa* ma#'oa* e'c. Lo cua#e e c#ai9can en: A%ucare re!uc'ore como #a ma#'oa /?#ucoa @ (#ucoa* )roce!en'e !e #a 7i!r#ii )arcia# !e# a#mi!n + !e# (#uc(eno1 + #a #ac'oa /?a#ac'oa @ ?#ucoa1 e e# a%-car !e #a #ec7e2 + no re!uc'ore como #a acaroa /?#ucoa @ Fruc'uoa1 e e# a%-car !e mea )roce!en'e !e #a caa !e a%-car + remo#ac7a. Lo monoac$ri!o on a#!e7í!o o ce'ona )o#i7i!ro;i#a!o* #o monoac$ri!o que 'ienen un (ru)o a#!e7í!o e !enomina a#!oa + #o que con'ienen un (ru)o ce'nico " ce'oa.. La a#!oa + ce'oa en me!io a#ca#ino* on ca)ace !e o;i!are a ci!o a#!nico* con #o que )ue!en re!ucir !e'ermina!o reac'i3o. Son mu+ comune #a reaccione !e re!uccin !e# Ion c-)rico /a%u# in'eno en me!io a#ca#ino1 a Ion cu)roo /ro,o #a!ri##o1* ino#u&#e. La conoci!a reaccione !e FEHLIN? + !e BENEDICT. En o#ucin a#ca#ina + en ca#ien'e #a (#ucoa re!uce f$ci#men'e a# ion c-)rico a cu)roo /;i!o cu)roo1* en un e(un!o )ao e# a(re(a!o !e o#ucin

fofomo#í&!ica e re!uci!o )or e# ion cu)roo con formacin !e ;i!o inferior !e mo#i&!eno #o cua#e )ro!ucen un co#or a%u# a!ecua!o )ara #a me!icione e)ec'rofo'om0'rica. CAPACIDAD: Com)rue&a #a accin en%ima !e #a acaraa o&re #a acaroa* e;)#ican!o me!ian'e reaccione química !ic7a accin e i!en'i9can!o #o )ro!uc'o que e forman. II. MATERIALES Material biológio •

Suspensión de levadura al 10%

Reati!o" •

200 ml de solución de sacarosa 0.25 M

•

200 ml de Reactivo de Benedict

•

200 ml. de solución Buffer Acetato 0,2M pH .!

Materiale" •

12 "u#os de $nsao 1&'15

•

 Mec(eros

•

 )in*as

•

 +radillas

•

)ipetas de 5 ml.

•

 )ipeteadores

E#$i%o" •

$uipo de Ba-o Mara a /

III. PROCEDIMIENTO Armar e# i(uien'e e' !e 'u&o.

I&. RESULTADOS:

 TUB4

C4L4RACIN

I

Naran,a #a!ri##o

II

Ver!e A%u#a!o

III

A%u# c#aro

PR4DUCT4 ;i!o cu)roo* (#ucoa + fruc'uoa So#ucin !e Bene!ic'* #e3a!ura a# <* a(ua !e'i#a!a + o#ucin &uer !e ace'a'o So#ucin &uer !e ace'a'o* acaroa a# .8G M* a(ua !e'i#a!a + o#ucin Bene!ic'

V. CUESTIONARIO 1. Reresente la reacción enzimática de la degradación de la sacarosa or acción de la sacarasa.

acara

(

(

!. "ediante #na reacción $#%mica e&li$#e la aarición de la coloración ro'o ladrillo

E# reac'i3o !e Bene!ic' e ua )ara reconocer a%-care re!uc'ore que 'ienen e# 4H anmero #i&re. Pue!e re!ucir e# Cu@8 /co#or a%u#1 a Cu84 /naran,a #a!ri##o1 Cu@8 /Ion c-)rico1



Cu@< /Ion

La reaccin !e Bene!ic' e e)ecí9ca )ara a%-care con (ru)o re!uc'ore #i&re /C41. To!o #o monoac$ri!o )oeen un (ru)o re!uc'or #i&re. Lo !iac$ri!o ma#'oa + #ac'oa 'ienen (ru)o re!uc'ore #i&re* )ero #a acaroa no #o )oee* +a que e )ier!en #o (ru)o re!uc'ore !e u com)onen'e cuan!o 0'a e forma!a.

E'a )rue&a e &aa en #a ca)aci!a! !e# car&o7i!ra'o !e re!ucir e# Cu8@ en un me!ioa#ca#ino a Cu@. E'e Cu@ e o;i!a + )reci)i'a en forma !e Cu84* #o que )ro)orciona #a co#oracin )oi'i3a !e #a reaccin. La co#oracin )ro!uci!a 3a !e!e 3er!e* amari##o* anaran,a!o o ro,i%o* !e)en!ien!o !e #a concen'racin !e ;i!o !e co&re + 0'a a u 3e% !e #a can'i!a! !e co&re re!uci!o *. +ra,$#e la estr#ct#ra $#%mica de los az#cares red#ctores - no red#ctores 

AUCARES REDUCTORES/ Lo A%-care re!uc'ore on aque##o

a%-care que )oeen u (ru)o car&oni#o /(ru)ofunciona#1 in'ac'o* + que a 'ra30 !e# mimo )ue!en reaccionar con o'ra mo#0cu#a. Por e,em)#o #a (#ucoa. Lo a%-care re!uc'ore )ro3ocan #a a#'eracin !e #a )ro'eína me!ian'e #a reaccin !e (#ucoi#acin no en%im$'ica 'am&i0n !enomina!a reaccin !e Mai##ar! o (#icacin.

+0UCOSA



AUCARES NO REDUCTORES/ Lo a%-care No Re!uc'ore on

aque##o que e unen )or en#ace (#ucoí!ico !e 'i)o A#fa o Be'a* cuan!o 8 monoac$ri!o i(ua#e o !iferen'e e unen forman un !iac$ri!o* #o Diac$ri!o )or con!enacin #i&eran una mo#0cu#a !e a(ua + on a%-care no re!uc'ore +a que e# (ru)o 4;i!ri#o / 4H 1 !e una 7e;oa e com&ina con e# (ru)o A#!e7í!o / CH4 1 !e o'ra 7e;oa #i&eran!o < mo#0cu#a !e H8* )or e,em)#o: #a Sacaroa / (#ucoa @ fruc'oa 1 Ma#'oa / 8 uni!a!e !e a#fa (#ucoa1* Tre7a#oa* e'c.