Guevara Guevara Juan Antonio
Ibarra Manríquez Manríquez Irving David. David. .
4QV1
Sección1
.
El
piruvato
representa
un
punto
de
bifurcación
importante en el catabolismo de los carbohidratos. En los tejidos animales en condiciones aerobias, el piruvato es el resultado de la glicolisis y el NADH, formado por la deshidrogenación del gliceraldehído 3 fosfato, es reoxidado después a NAD+ por el O2. Sin embargo, en condiciones anaerobias, en los músculos esqueléticos muy activos o en las bacterias acido lácticas, el NADH producido en la glicolisis no puede ser reoxidado por el
++++ ++++ ++++ +++ +++ ++ + +
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ ++
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ ++
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++
O2, pero puede reoxidarse por el propio piruvato al convertirse en lactato. (1) La
succinato
deshidrogenasa
cataliza
la
deshidrogenación estereoespecífica de succinato a fumarato. Esta enzima es inhibida fuertemente por el malonato, un análogo estructural del succinato y un ejemplo
de
un
inhibidor
competitivo.
La
deshidrogenación del succinato produce FADH2 que
Figura 1. Actividad de la deshidrogenasa láctica del tubo 1 a 5 ordenados de izquierda a derecha.
debe reoxidarse antes que la succinato deshidrogenasa puede emprender otro ciclo catalítico. La reoxidación del
Los resultados obtenidos en esta prueba fueron los
FADH2 se produce cuando sus electrones se pasan a la
esperados, el tubo 1 como se muestra en la imagen
cadena transportadora de electrones mitocondrial. (2)
perdió su color casi por completo esto porque contenía lo necesario para dar positivo en este proceso, contenía
La citocromo C oxidasa cataliza las oxidaciones de un
el sustrato, la enzima, el catalizador que favorece la
electrón de cuatro moléculas de citocromo C reducidas
reacción hacia el piruvato, la coenzima y el aceite vegetal
consecutivas y la reducción simultanea de cuatro
para mantener una baja concentración de O2 , en cuanto
electrones de una molécula de O2. El núcleo de
al tubo 2 se observó la reducción del azul de metileno en
complejo IV se compone de sus tres subunidades mayores y más hidrófobas, I, II, III, que están codificados por el DNA mitocondrial.
(3)
la parte del fondo del tubo, debido a que no se le agregó coenzima pero el extracto de la enzima pudo contener restos de coenzima por ser crudo y verse ligeramente esa
reducción
en
la
zona
donde
hay
menor
concentración de O2. El tubo 3 al no ser añadido el Determinar la actividad de algunas enzimas que
sustrato se esperaría que no se observara reducción
participan en reacciones de óxido-reducción y discutir la
pero al igual que con el tubo 2, el extracto es crudo por
importancia de los cofactores y el efecto de algunos
lo tanto puede poseer trazas de lactato. Al tubo 4 no se
inhibidores
le agregó enzima por lo cual la reacción no ocurrió y no se observó reducción. En el último tubo se pueden apreciar 2 fases, una zona parcialmente reducida (zona inferior) y una zona totalmente oxidada. El resultado de
estas fases es consecuencia de que no se le adicionó el
de tipo competitivo sobre la enzima y por lo tanto no
catalizador que favorece la reacción hacia el piruvato por
hubo reacción además de que se le suministró una
lo tanto la reacción al ser reversible se e ncuentra dirigida
cantidad suficiente para que esto pasara. En los tubos 5,
tanto hacia piruvato como lactato.
6 y 7, cada uno contenía los mismos volúmenes, como la única diferencia se hallaba el inhibidor, este encontraba en diferentes volúmenes siendo mayor en el tubo 5 y menor en el tubo 6 y 7, además el tubo 7 contenía un poco más de sustrato por lo cual se observó como la reducción en estos tubos iba aumentando de acuerdo a
++++ ++++ ++++ ++++ +++ + + +
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ ++
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ +
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ ++ +
las cantidades de inhibidor adicionadas como se muestra en la figura 2. Además en el último tubo puede observarse que el inhibidor es de tipo competitivo porque el resultado es casi igual que en el tubo 1 por lo que sabemos la velocidad máxima la misma.
+++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
Figura 2. Actividad de la deshidrogenasa succínica de los tubos 1 al 7 ordenados de izquierda a derecha.
+++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
+ + + + + + +
+++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
+ + + + + + +
+ + + + + + +
Al determinar la actividad de la deshidrogenasa succínica a comparación de la determinación anterior en esta se utilizó un inhibidor además de que no se le adicionó a los tubos la coenzima debido a que esta se encuentra unida a la enzima succinato deshidrogenasa.
Figura 3. Actividad de la citocromo oxidasa de los tubos 1 al 8 ordenados de izquierda a derecha.
En el tubo 1 se observa reducción total del azul de metileno porque contiene el sustrato, la enzima y está sellado con aceite vegetal y al no contener inhibidor la reacción se favoreció a la formación de fumarato. En cambio al tubo 2 no se le agregó enzima por lo que la reacción no se llevó a cabo. Al tubo 3 no se le agregó el sustrato, en nuestra prueba no hubo reducción pero en el caso de algunos equipos sí se observó una ligera reducción esto por el extracto de la enzima que pudo contener trazas de succinato. El tubo 4 presentó reducción porque contenía malonato el cual un inhibidor
Al realizar esta prueba al no seguirse las instrucciones como se debía se obtuvieron resultados diferentes pero correspondientes a lo adicionado a cada tubo. A todos los
tubos
se
les
añadió
enzima
entonces
no
proporcionaron las lecturas deseadas, los tubos 2, 6 y 8 no debían contener enzima, el tubo 4 no llevaba parafenilendiamina pero se le agregó que sirve como donador artificial de electrones.
El tubo 1 contenía todos los reactivos correspondientes por lo cual sí se observó una intensificación del color, en el tubo 2 el resultado tuvo que ser negativo ya que no
metabólicos” Reverté, México 2006. Pág 160.
había que agregar enzima, pero al hacerlo, lógicamente fue positivo. Al tubo 3 le fue adicionado inhibidor
Melo Ruiz, Virginia. “Bioquímica de los procesos
(1)
Voet, Donald “Fundamentos de bioquímica: la vida
irreversible que es el cianuro de potasio el cual actúa
a
sobre el complejo IV de la cadena respiratoria donde se
panamericana. Buenos Aires, Argentina. Pág 530,
encuentra la enzima citocromo oxidasa, el resultado fue
564. (2)(3)
negativo. El tubo 4 no contenía parafenildiamina y no se esperaba la intensificación del color o al menos que el extracto de la enzima contuviera alguna traza de otra molécula que pudiera ser un donador de electrones. El tubo 5 contenía cada reactivo para llevar acabo la reacción, pero se le añadió además a-naftol, reacciona con la parafenildiamina y forma un compuesto colorido llamado azul de indofenol y la coloración del tubo se muestra café, pero es ligeramente claro. Al tubo 6 también se le agregó enzima, pero este representa uno de esos errores, no la requería por eso se observa intensificación del color lo cual no concuerda con el resultado buscado. En el tubo 7 no se efectuó la reacción gracias al inhibidor presente. Respecto al tubo 8 de igual manera tenía enzima y hay que reiterar que esto no era lo indicado en la práctica, aunque el resultado fue el esperado debido a que la reacción no sucedió por la presencia del inhibidor, pero la coloración difiere porque el
extracto
de
la
enzima
tiene
una
tonalidad
característica.
Los órganos extraídos aún eran depósito de enzimas con actividad eficiente. Obviando los tubos descritos, en el resto se pudo comprobar el efecto esperado sobre la actividad de las enzimas estudiadas.
nivel
molecular”
2ª
edición,
Medica
