Sistema de Estudios de Posgrado Maestría Académica en Ciencia de los Alimentos Alimentos funcionales y nutracéuticos SP!"#$%&
31 / 08 / 15
'om(re) Hermes R. Alvarado Montero
Carné) A50276
Com*araci+n Com*araci+n de metodologías metodologías *ara cuantificar la acti,idad antio-idante Método
Molécula de tra(a.o
Princi*io
Cuantificaci+n
DPPH
1,1-difenil-2 picrilidracil !DPPH"
Deslocali#aci$n de e - en DPPH %enera color violeta osc&ro, con 'anda de a'sorci$n a 517 nm en disol&ci$n de (t)H. Reacci$n con mol*c&la AH red&ce al DPPH + lleva a la p*rdida de s& color
(tracto de m&estra !0,2 m" se dil&+e en Me)H + se me#cla con 2 m de DPPH 0,5mM. e mide a'sor'ancia /0 min desp&*s, a 517 nm
Ecuaci+n o clculo
(A84A9
2,2-a#ino-'is!/etil'en#otia#olin-6:cido s&lf$nico" !A9;<"
A9;< tiene color a#&l verdoso, pero mol*c&la AH p&ede red&cirlo a A9, el c&al no tiene color
e prepara disol&ci$n de A9; <, al a=adir >0 m% de Mn) 2 a 20 m de A9 5 mM !en '&ffer pH 7,0". e constr&+e c&rva de cali'raci$n con rolo !est:ndar de antioidante", en '&ffer pH 7,0. e me#cla dil&ci$n de la m&estra con 200 ? de disol&ci$n, en placas. e lee la a'sor'ancia a 750 nm, tras 5 min de reacci$n
e &sa c&rva de cali'raci$n de rolo, para interpolar el (A8 de la m&estra
(@&ivalente de rolo, en mM
RAP
R-ficoeritrina !R-P("
R-P( presenta fl&orescencia, la c&al decae por acci$n del A9AP, A9AP, &n %enerador de radicales. a presencia de &na mol*c&la AH merma el efecto del A9AP so're el decaimiento de la fl&orescencia de R-PH
e a=ade 120 ? de m&estra dil&ida a me#cla de 2, m de '&ffer pH 7,B /75 ? de a%&a 'idestiladaB /0 ? de R-P( dil&ida + 75 ? de A9ADP. e re%istra cin*tica de reacci$n a /> C8, por 5 min, con espectrofot$metro l&miniscente
Ra#$n entre lar%o de fase la% de la m&estra, con respecto a fase la% de &n patr$n
alor sin &nidades
ERAP
8ompleo Ee/< 2,/,5trifenil-1,/,-tria#a-2a#oniaciclopenta-1,dieno clor&ro !PF"
AH red&cen el compleo Ee /< PF a Ee 2< PF, a pH :cido. (sto ca&sa variaci$n en la a'sor'ancia a 5G/ nm
e me#cla /,00 m de reactivo ERAP con 100 ? de m&estra dil&ida. e mide l a a'sor'ancia a 5G/ nm en espectrofot$metro de arre%lo de diodos, tras /0 min de inc&'aci$n a /7 C8
Ra#$n entre a'sor'ancia de m&estra con respecto a patr$n enri@&ecido con Ee /<
mM de e@&ivalentes de Ee2< por % o de m&estra
)RA8
I-ficoeritrina !I !I-P(" o fl&oresceJna preferida3
El&orescencia de mol*c&la de tra'ao decae por reacci$n con AAPH, &n %enerador %enerador de radicales a presencia de &na mol*c&la AH merma el efecto del AAPH so're el decaimiento de la fl&orescencia de mol*c&la de tra'ao
e &sa vol&men final de 200 ? + '&ffer de pH 7,0. e constr&+e constr&+e c&rva de cali'raci$n con rolo, c&+as concentraciones de patrones depender:n de de @&e m&estra sea lipofJlica o idrofJlica. e a=ade AAPH, a patrones + 'lanco !&sar '&ffer". e a%ita 10 s + se inc&'a a /7 C8. e lee fl&orescencia !K ec. >5 nm B K em. em. 520 nm" cada min&to d&rante /5 min
e &sa c&rva de cali'raci$n, de :reas 'ao la c&rva de fl&orescencia vs tiempo !corre%idas por el 'lanco"B para interpolar valor de )RA8 de la m&estra
Lnidades de )RA8 o ?M de rolo por %ramo de m&estra
%
ini'ici$n de radical DPPH !A 'r Aar 34A 34A 'r " 100
nidades Porcentae de ini'ici$n de radical DPPH
