Hari, Tanggal Tanggal : Selasa, Selasa, 17 Oktobe Oktoberr 2015 2015 Tempat: Tempat: Laboratorium Bakteri JA
UJI MPN PADA BAHAN PANGAN (Coliform dan Fecal Coli)
!" T#J#A$ %raktikum pemeriksaan bakteri &oli'orm pa(a makanan (an minuman (engan meto(e )%$ bertu*uan untuk mengeta+ui a(ana bakteri &oli'orm (alam sampel makanan atau minuman" !!" !!" -ASA -ASA. . T/O T/O.! .! )enurut %eraturan %emerinta+ .! nomor 2 ta+un 200 pangan a(ala+ segala sesuatu ang berasal (ari sumber +aati (an air, baik ang (iola+ maupun ang ti(ak (iola+, ang (iperuntukkan (iperuntukkan sebagai makanan makanan atau minuman bagi konsumsi konsumsi manusia, termasuk ba+an tamba+an pangan, ba+an baku pangan, (an ba+an lain ang (igunakan (alam proses peniapan, pengola+an (an atau pembuatan makanan atau minuman" )enurut Su+ar*o ta+un 13 pangan a(ala+ ba+an4ba+an makanan ang (imakan se+ari4 +ari +ari untu untuk k meme memenu nu+i +i kebu kebutu tu+a +an n bagi bagi peme pemeli+ li+ar araa aan, n, pert pertum umbu bu+a +an, n, ker*a ker*a,, (an (an penggantian *aringan tubu+ ang rusak" Ba+an pangan (apat bertin(ak sebagai perantara atau substrat untuk pertumbu+an mikroorganisme patogen (an organisme lain penebab penakit" -engan (emikian kita perlu mengeta+ui bakteri ang ter(apat pa(a ba+an pangan tersebut (engan u*i kuantitati' pa(a ba+an pangan tersebut" 6ii %oltek %oltekkes kes emenkes %alu" %alu" 2018 )%$ a(ala+ suatu meto(e enumerasi mikroorganisme ang menggunakan (ata (ari +asil pertumbu+an mikroorganisme pa(a me(ium &air spesi'ik (alam seri tabung ang (itanam (itanam (ari (ari sampel sampel pa(at pa(at atau &air ang ang (itanam (itanam ber(asark ber(asarkan an *umla+ *umla+ sampel atau (ien (ien&er &erka kan n menu menuru rutt ting tingka katt seri seri tabu tabung ngn naa se+in se+ingg ggaa (i+a (i+asil silka kan n kisar kisaran an *umla *umla+ + mikroorganisme ang (iu*i (alam nilai )%$9satuan olume atau massa sampel" )eto(e )%$ biasana biasana (ilakukan untuk meng+itung *umla+ mikroba (i (alam &onto+ ang bebentuk &air, meskipun (apat pula (igunakan untuk &onto+ berbentuk pa(at" %rose(ur pengu*ian )%$ ;oli'orm sesuai )eto(e Analisis )ikrobiologi )A %%O) 39)!9038 aitu (engan &ara meniapkan (ua tabung reaksi masing4masing berisi ml" -ari +asil +omogenisasi pa(a peniapan sampel (ipipet 1 ml pengen&eran 1041 ke (alam tabung pertama +ingga (iperole+ suspense (engan pengen&eran 10 42 lalu (iko&ok sampai
+omogen" Selan*utna (ibuat pengen&eran 104<" A(a (ua ta+ap pengu*ian )%$ ;oli'orm aitu : 1" #*i %ra(uga %resumti' Test8 #ntuk men(apatkan pengen&eran (isiapkan < tabung reaksi berisi ml );B ang (ilengkapi tabung (ur+am" e(alam tiap tabung (ari masing masing seri (imasukkan 1 ml suspensi pengen&eran" -iiinkubasi pa(a su+u <7= ; selama 24 *am" Setela+ 2 *am (i&atat (an (iamati a(ana gas ang terbentuk (alam tiap tabung, kemu(ian inkubasi (ilan*utkan +ingga *am (an (i&atat tabung4tabung ang menun*ukkan u*i positi'" 2" #*i %enegasan Biakan (ari tabung ang menun*ukkan u*i pra(uga positi' (ipin(a+kan 1 sengkelit ke (alam tabung reaksi berisi 10 ml B6LB ang tela+ (ibungkus tabung (ur+am" Seluru+ tabung (iiinkubasi pa(a su+u <7 =; selama 24 *am" -ilakukan pengamatan a(ana pembentukkan gas" %ernataan +asil (ari u*i )%$ &oli'orm ini aitu *umla+ tabung ang positi' gas (i&atat (an (iru*uk ke tabel )%$" Angka ang (iperole+ pa(a table )%$ menatakan *umla+ bakteri &oli'orm (alam tiap gram9tiap ml sampel ang (iu*i Sugianto, Tantri"20128" -alam meto(e )%$ (igunakan me(ium &air" %er+itungan (ilakukan ber(asarkan *umla+ tabung ang positi' aitu ang (itumbu+i ole+ mikroba setela+ inokulasi pa(a su+u (an >aktu tertentu" %engamatan tabung positi' (apat (ili+at (engan timbulna kekeru+an atau terbentuk gas (alam tabung (ur+am Anonim" 201<8" !!!" ALAT -A$ BAHA$ A" Alat 1" Tabung.eaksi 2" .aktabung <" !n&ubator " )ortar (anpastle 5" Lampu Bunsen 3" %ipetukur 7" Bola +isap " orekapi B" Ba+an 1" Sampel*a*anbali 2" Sampelikanpin(ang <" Sampelta+u " Sampellontong 5" A?ua(est
;" )e(ia 1" )e(ia LB-S 2" )e(ia LBSS <" )e(ia B6LB !@" ;A.A /.JA A" %reparasiSampel 1" 2" <" "
-igunakan A%- se&arabaik, benar, (anlenkap -isiapkanalat(anba+an ang akan(igunakan -isiapkan mortar (anpastle, lalu (i lap (enganmenggunakankapas al&o+ol 70 -i'iksasipinsetpa(alampu Bunsen (an(iambilsampelmenggunakanpinset ang
su(a+(i'iksasita(i 5" -itimbangmenggunakannera&aanalitik+inggasampelsebanak 10 gram 3" Sampel ang su(a+(itimbangta(i(igerusmenggunakan
mortar
(anpastlesampai+alus 7" -ituangsampelke(alam /rlenmeer ang berisi$a;l'isiologis B" #*i%en(uga %resumti' Test8 1" -isiapkan 5 tabung ang berisi me(ia LB-S (an 2 tabung ang berisi me(ia LBSS 2" -iinokulasikan(engan pipet sterilpa(atabung 145 )e(ia LB-S8 masing4 masing 10 ml sampel, tabung 3 me(ia LBSS8 (iisi(engan 1 ml sampel, (antabung 7 me(ia LBSS8 (engan 0,1 ml sampel <" -i+omogenkansemua me(ia ang su(a+berisisampel, (an(iinkubasipa(asu+u <7 (era*at ;elsius selama 2 *am -" 1" 2" <" "
#*i%enegasanon'irmati' test8 Hasilpositi'pa(au*ipen(uga(itan(ai(engana(ana gas pa(atabung(ur+am -iinokulasisampelpositi'sebanak 2 oseke(alam 2 seri me(ia B6LB 10 mL -i+omogenkansampel(engan me(ia B6LB tersebut -iinkubasi(alam 2 seri, aituseri 1 pa(asu+u <7 (e*at ;elsius, se(angkan B6LB seri 2 pa(asu+u 2 (era*at&elsius, (iinkubasiselama 2 *am
@" HAS!L %/$6A)ATA$ 1" SA)%/L TAH# %resumtie test Sebelum
Sesu(a+ inkubasi <7&8
Ti(ak a(a gelembung 48 ;on'irmatie test 4 ;omplete( test 4
2" SA)%/L JAJA$A$ BAL! CL/)%O6D Sebelum
%resumptie test Sesu(a+ inkubasi <7&8
!nterpretasi +asil E8 a(a gelembung gas
;on'irmatie test Su+u <7;
!nterpretasi +asil Su+u ; Su+u <7; : E8 Su+u ; : 48 Tabung ang E8 pa(a su+u <7; a(ala+ tabung 5:1:1
a(a gelembung gas E8
ti(ak a(a gelembung gas 48 ;omplete( test 4
<" SA)%/L )AA$A$ CLO$TO$6D %resumtie test
!nterpretasi +asil
Sebelum
Sesu(a+ inkubasi <7&8 Ti(ak a(a gelembung 48
;on'irmatie test 4 ;omplete( test 4
@!" %/)BAHASA$ )%$ )ost %robable $umber8 a(ala+ meto(e +itungan &a>an (engan menggunakan me(ium pa(at,tetapi pa(a meto(e )%$ (engan menggunakan me(ium &air (i (alam tabung reaksi" %er+itungan )%$ ber(asarkan pa(a *umla+ tabung reaksi ang positi', akni ang (itumbu+i ole+ mikroba setela+ inkubasi pa(a su+u (an >aktu tertentu" %engamatan tabung ang positi' (apat (ili+at (engan mengamati timbulna kekeru+an atau terbentukna gas (i(alam tabung ke&il tabung (ur+am8 ang (iletakkan pa(a posisi terbalik, aitu untuk *asa( renik ang membentuk" #ntuk setiap pengen&eran pa(a umumna (engan menggunakan < atau 5 seri tabung "Lebi+ banak tabung ang (igunakan menun*ukkan ketelitian ang lebi+ tinggi, tetapi alat gelas tabung reaksi8 ang (igunakan *uga lebi+ banak ->i(*oseputro,20058" %er+itungan bakteri +i(up (ilakukan (engan &ara seri pengen&eran" ;ara ini se&ara luas (igunakan untuk meng+itung bakteri +i(up (alam berbagai &airan seperti air, susu, biakan &air (an ba+an makanan" Serentetan pengen&eran (ibuat untuk kemu(ian (itanam (alam me(ium pembiakan (an setela+ inkubasi *umla+ koloni (i+itung" Setela+ (ikonersi sesuai (engan pengen&eranna, akan (iketa+ui *umla+ bakteri permilliliter" arena pengen&eran (iker*akan se&ara lipat gan(a atau se&ara (e&imal, maka angka ang (iperole+ +ana angka perkiraan, ang biasa (isebut )%$" )eto(e )%$ ter(iri (ari tiga ta+ap, aitu u*i pen(ugaan %resumptie Test8, #*i on'irmasi ;om'irme( Test8, (an #*i elengkapan ;omplete( Test8" -alam #*i ta+ap pertama, kebera(aan &oli'orm masi+ (alam tingkat probabilitas ren(a+ masi+ (alam (ugaan" #*i ini men(eteksi si'at 'ermentatie &oli'orm (alam sampel" arena beberapa *enis bakteri selain &oli'orm *uga memiliki si'at 'ermentatie ,(iperlukan u*i kon'irmasi untuk mengetes kembali kebenarana(ana &oli'orm (engan bantuan me(ium selekti' (i'erensial" #*i kelengkapan kembali meakinkan +asil tes u*i kon'irmasi (engan men(eteksi si'at 'ermentatie (an pengamatan mikroskop ter+a(ap &iri4&iri &oli'orm :berbentuk batang, gramnegatie, ti(ak berspora mem'ermentasi laktosa men*a(i asam (an gas ang (i(eteksi(alam>aktu 2 *am inkubasipa(a <7o(apatmeng+asilkansena>ain(ole ang terkan(ung (i air pepton ang mengan(ung asam amino tripto'an ti(ak (apat menggunakan natriumsi trat sebagai satu4satuna sumber karbo Far(ia,18" )e(ia La&tose Brot+ LB8 (igunakan sebagai me(ia untuk men(eteksi ke+a(iran &oli'orm (alam air, makanan (an pro(uk susu, sebagai kal(u pemerkaa %re4enri&+ment brot+8 untuk Salmonella (an (alam mempela*ari 'ermentasi laktosa ole+ bakteri pa(a umumna" %epton (an ekstrak bee' mene(iakan nutrient esensial
untuk metabolism bakteri" La&tose mene(iakan sumber karbo+i(rat ang (apat (i'ermentasi untuk organisme &oli'orm" %ertumbu+an (engan pembentukan gas a(ala+ presumptie test untuk &oli'orm" La&tose Brot+ (ibuat (engan komposisi 0,< ekstrak bee', 0,5 pepton(an 0,5 laktosa" )e(ia B6LB Brilliant 6reen Bile Brot+8 (igunakan untuk mengkon'irmasi +asil tes positi' (ugaan" %a(a me(ia ini, enimatik intisari (ari gelatin a(ala+ sumber karbon (an nitrogen (igunakan untuk kebutu+an pertumbu+an (i me(ia B6LB" Laktosa merupakan sumber karbo+i(rat" Bakteri ang mem'ermentasi laktosa (an meng+asilkan gas ang ter(eteksi" %enggunaan utama (ari me(ia ini iala+ untuk mengi(enti'ikasi kebera(aan /"&oli pa(a makanan" ;oli'orm
selain /"&oli *uga (apat tumbu+ pa(a
me(ia ini" #ntuk praktikum kali ini sampel ang (igunakan iala+ kue tra(isional bali CLempogD ,ikan pin(ang, ta+u (an lontong" Sebelum itu (ilakukan preparasi sampel terlebi+ (a+ulu" Sampel (itimbang 10 gram, (i+an&urkan (engan mortar (an pestel ang tela+ (iolesi al&o+ol 70 untuk (esin'eksi agar ti(ak a(a kontaminan bakteri ang beras la(ari alat tersebut" Selan*utna sampel (ilarutkan (engan 0 ml larutan garam 'isiologis" Setela+ selesai, (ilan*utkan (engan ta+ap pengu*ian" Ta+ap4ta+ap pengu*ian iala+ sebagai berikut : a" Tes %erkiraan %resumtie Test8 )e(ia ang (iperlukan pa(a u*i perkiraan iala+ La&to&e Brot+ LB8" Gang mana LB (ibagi men*a(i 2 *enis, aitu LB-S (an LBSS" LB-S (igunakan untuk pengen&eran ang lebi+ besar 10ml8 (an LBSS (igunakan untuk pengen&eran ang lebi+ ke&il 1 ml (an 0,1 ml8" proses pemipetan +arusla+ steril, agar ti(ak ter*a(i kontaminasi, serta pipet ang (igunakan maupun me(ia ang (igunakan +arusla+ (isterilisasi baik kering maupun basa+" Setela+ sampel (ipipet sebanak 10 ml pa(a me(ia, (iinkubasi pa(a su+u <54<7o ; selama 12 *am" Tiap tabung ang menun*ukkan peragian keru+8 (an a(ana gas sebanak 10 atau lebi+ (ari olume tabung (ur+am, maka tabung itu (iperkirakan mengan(ung kuman golongan &oli atau positi' bakteri &oli'orm" %a(a praktikum kali ini smapel ta+u (an lontong menun*ukkan +asil ang negatie karena ti(ak (itemukan a(ana gas pa(a tabung (ur+am se+ingga ti(ak (iperlukan tes penegasan" Sementara pa(a sampel kue lempog (an ikan pin(ang (itemukan gas (an pa(a tabung (ur+am ter(apat gelembung pa(a sema tabung, maka pa(a ke(ua sampel ini perlu (ilakukan u*i penegasan untuk menentukan *enis bakteri &oli'orm ang men*a(i pen&emar pa(a ke(ua ba+an makanan ini" b" Tes %enegasan ;on'irmatie Test8
)e(ia ang (igunakan a(ala+ B6LB" A(apun pemeriksaan (ilakukan pa(a seluru+ tabung positi' (alam me(ia LB La&tose Brot+8" ;ara penanaman ang (ilakukan iala+ pin(a+kan (ari me(ia LB ang (i+omogenkan kembali (engan menggunakan ose ke (alam me(ia B6LB (an (iinkubasi pa(a su+ <7 o ; (an pa(a o; selama 22 *am" %a(a praktikum,sampel kue ClempogD (an ikan pin(ang menn*ukkan +asil ang positi' (engan a(ana gelembung gas pa(a tabung (ur+am (an >arna me(ia men*a(i keru+ pa(a su+u <7 o; se+ingga positi' pa(a semua tabung (inatakan 5 1 1 , maka (ari itu ba+an makanan (apat (ikatakan terkontaminasi bakteri &oli'orm non 'e&al &oli" Hal ini karena semua sampel negatie pa(a inkubasi selama 22 *am pa(a su+u o;" &" Tes %elengkap ;omplete Test8 Tes ini (igunakan untuk memasikan *enis bakteri penebab kontaminan" #*i ini ti(ak +arus (ilakukan, namun (ilakukan *ika ter*a(i ke&urigaan pa(a +asil ang (i(apat" %erbeni+an ang biasa (igunakan (alam u*i ini iala+ : 4" /)B agar plate
4" @ogas %roskauer
4" %epton untuk in(ol
4";itrat me(ia
4" )etil .e(
Bakteri &oli'orm merupakan parameter mikrobiologis terpenting kualitas makanan (an minuman ang (ikonsumsi" Bakteri ini (ibagi men*a(i (ua *enis,aitu Fae&al &oli'orm (an $on4'ae&al &oli'orm" elompok bakteri &oli'orm ter(iri atas /s&+eria &oli, /nteroba&ter aerogenes, ;itroba&ter 'ruen(ii (an lain4lain" /"&oli merupakan bakteri ang tergolong 'ae&al &oli'orm" )eskipun *enis bakteri ini ti(ak menimbulkan penakit se&ara langsung,kebera(anna (apat menun*ukkan salinitas ang ren(a+" Stan(ar batas maksimum &emaran mikrobiologi (alam pangan (isusun (an (irumuskan ole+ panitia %$! 37407 ba+an tamba+an pangan (an kontaminasi pa(a tanggal 13 Januari 200 (i Bogor -ila,201<8" Lempog (alam pengu*ian )%$ &oli'orm (i(apatkan +asil 511 ang (apat (ikatakan ter(apat bakteri &oli'orm non4 'e&al &oli I 209100 ml atau 209100 gram )astra (kk,20158, ber(asarkan stan(ar pen&emaran masi+ (apat (ikonsumsi karena batas maksimum pen&emaran &oli'orm pa(a lempog iala+ <9gram atau <009100 gram" Hal serupa (apat (i*umpai pa(a pin(ang,karena +asil pin(ang ang (i(apat iala+ 511 pa(a su+u <7 o; sama (engan lempog8, se+ingga *umla+ bakteri ang ter(apat (i(alamna I 209100 gram" %in(ang
(alam stan(ar batas maksimum pen&emaran iala+ sebesar <9gram atau <009100 gram" Hal ini memastikan pin(ang masi+ (apat (ikonsumsi" Selain itu,ke(ua sampel ti(ak tumbu+ baik pa(a su+u o;,se+ingga terbebas (ari bakteri Fae&al &oli'orm" A(apun penakit ang (apat (itimbulkan (ari konsumsi makanan ang su(a+ terkontaminasi akan menimbulkan penakit in'eksi enteri& ang (iakibatkan ole+ bakteri pat+ogen" Ba+aa lain (ari bakteri &oli'orm a(ala+ : Sakit %erut, -iare ang (isebabkan /"&oli, kolera, -isentri amu(a"
@!!" S!)%#LA$ Ber(asarkan praktikum ang tela+ (ilakukan maka (apat (isimpulkan ba+>a: 1" %a(a presumptie tes sample ta+u (an lontong negatie, sementara itu pa(a sample ikan pin(ang (an kue lempong positi' pa(a seluru+ tabung 5118 2" %a(a &on'irmatie tes sample kue lempong (an pin(ang positi' semua pa(a su+u <70& 5118, namun negatie pa(a su+u 0& <" Ber(asarkan stan(ar batas maksimum &emara mikrobiologi (alam pangan" -apat (inatakan ba+>a sample pin(ang (an kue lempog
masi+ (apat (ikonsumsi,
karena batas maksimum lempog 20009100 gram atau 209gram (an ikan pin(ang <9gram atau <009100 gram @!!!" -AFTA. %#STAA 6!! %oltekkes emenkes
%AL#"
201" Ilmu
Pangan
Dasar "
Konline"
terse(ia:+ttps:99>>>"'a&ebook"&om9permalink"p+pM i(N5<<31<120storP'bi(N1<5<22115 " K(iakses: 21 -esember 2015, 10"<0 >ita Anonim" 201<" Pemeriksaan Makanan / Minuman Dengan Metode Most Probably Number "
Konline"
terse(ia:
+ttp:99ukm+"blogspot"&o"i(9201<90<9pemeriksaan
makanan4minuman4(engan"+tml" K(iakses: 21 -esember 2015, 10"05 >ita Sugianto, Tantri"2012" Uji MPN" Konline" terse(ia: +ttp:99tantri4 sugianto"blogspot"&o"i(920129079u*i4mpn"+tml" K(iakses: 21 -esember 2015, 10"00 >ita
