FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION EN ALIMENTOS ALIMENTOS
TECNICAS DEL LABORATORIO DE TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS UTILIZADAS EN EL ANÁLISIS DE MUESTRAS.
Por: MC. Jorge Alberto Buendía Guía MC. Luis Ervey Chacón Garza
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Saltillo, Coahuila
Junio de 2006
INDICE Pág. Determinación de Humedad
3
Determinación de Cenizas Determinación de Extracto Seco y Cenizas en bebidas Determinación de Minerales Calcio Fósforo (Vanadato-Molibdato) (Vanadato-Molibdato) Cloruro de Sodio (Método Mohr)
3 4 6 6 7 8
Determinación de Azucares Azucares Totales (Fenol-Sulfúrico) (Fenol-Sulfúrico) Azucares Reductores (Nelson-Somogui) (Nelson-Somogui) Determinación de Fibra Cruda
8 8 10 11
Determinación de Proteínas Nitrógeno Total (Método de Microkjeldahl)
13
Determinación de Lípidos Extracto Etéreo Lecitina Fosfolipidos
15 15 16 17
Determinación del % de Alcohol en Volumen
17
Determinación de Metanol (Ácido Cromotropico) Cromotropico)
21
Referencias Bibliográficas
23
13
2
DETERMINACIÓN DE HUMEDAD La humedad se considera como la pérdida de masa que sufre un material cuando se calienta a temperatura cercana a1 punto de ebullición de1 agua, durante un tiempo seleccionado o bien hasta que dos pesadas sucesivas no difieran en más de 3 mg. Metodología En una charola metálica de papel aluminio (a peso constante) se pesan de 2 - 5 g de muestra, se colocan en un horno a una temperatura de 98-100 °C durante 5 horas y posteriormente se enfrían en un desecador aproximadamente 10 min., hasta que toman una temperatura ambiente, después se pesan en una balanza hasta que se obtiene un peso constante (A.O.A.C, 1984). Cálculos:
PI-PF %H =————— x 100 PI - PC
Donde: %H = Porcentaje de humedad PI = Peso de charola a peso constante con muestra fresca (g) PF = Peso de charola con muestra seca (g) PC = Peso de charola a peso constante sin muestra (g)
DETERMINACIÓN DE CENIZAS El material mineral es cuantificado mediante la incineración de la muestra hasta 1a obtención de un residuo inorgánico correspondiente a la fracción de cenizas. Metodología Los crisoles de vidrio marca Pyrex se colocan en el interior de un horno durante 2 h para ponerlos a peso constante. Se pesa con exactitud 2 - 5 g de muestra en cada 3
crisol, usando una balanza analítica, luego la muestra se calcina colocando los crisoles sobre una tela de asbesto a fuego directo hasta que no se aprecie la formación de humo. Posteriormente se colocan los crisoles en el interior de un horno de mufla durante 5 h a 550 °C. Se sacan los crisoles de la mufla y se dejan enfriar en un desecador durante 15 min. Una vez fríos los crisoles se pesan en una balanza analítica y se calcula por diferencia de peso el contenido de cenizas.
Cálculos utilizados: Donde: W 1 = peso en g de la muestra W 2 = peso en g de las cenizas
% Cenizas = (w 2 / w 1 ) x 100
O bien con la formula:
%C = B – A * 100 M
Donde: %C = Porcentaje de cenizas. A = Peso del crisol vacío (g). B = Peso del crisol con cenizas (g). M = Peso de la muestra (g).
DETERMINACIÓN DE EXTRACTO SECO Y CENIZAS EN BEBIDAS Determinación de extracto seco Materiales
Probeta Cápsula de porcelana Crisol. Metodología En una cápsula a masa constante, adicionar el volumen de la muestra (como se indica en la Tabla 1), evaporar en baño de agua hasta completa sequedad; pasar la cápsula a la estufa a una temperatura de 373 K a 378 K (100 ° C a 105 ° C) durante 1 h
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como mínimo o hasta que la masa sea constante en tres lecturas consecutivas, previamente llevado a temperatura ambiente en el desecador (aproximadamente 2 h)
Tabla 1. Cantidad de muestra empleada para la determinación de extracto seco. Tipo de bebida
Volumen de muestra (ml)
Bebidas destiladas secas (sin azúcares
25 - 50
reductores) Bebidas destiladas semisecas (hasta 10 g/1
10 - 25 .
de reductores) Bebidas hasta con 10 g/1 de reductores
10
Bebidas con 10 g/1 - 25 g/1 de reductores
5
Licores con mas de 25 g/1 de reductores
2
Jarabes con mas de 100 g/1 de reductores
1
Cálculos
Donde:
[Me (g) – Mv (g) x 1 000 ml Es = --------------------------------------V (ml)
Es = cantidad de extracto seco, expresado en g/l; Me = masa de la cápsula más extracto seco en g; Mv = masa de la cápsula vacía en g; V = volumen de la muestra empleada en ml.
Determinación de cenizas en bebidas La cápsula que contiene el residuo del extracto seco, se coloca en la mufla a temperatura ambiente y se programa para que llegue a 798 K (525° C ), se mantiene a esta temperatura hasta obtener cenizas blancas (20 min. aproximadamente); dejar la cápsula en la mufla, una vez que haya disminuido su temperatura a 473 K (200 ° C , 1,5 h), sacar la cápsula de la mufla y dejar enfriar en el desecador hasta temperatura ambiente (aproximadamente 4h ) Determinar la masa y repetir esta operación hasta masa constante.
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Introducir la cápsula a la estufa durante 1 h a 373 K (100° C). Enfriar en desecador a temperatura ambiente (durante 2 h). la masa por tercera vez. La diferencia entre la segunda y tercera pesada no debe ser mayor a 1 Mg. Si la diferencia es mayor, repetir el proceso hasta lograrlo. Cálculos de cenizas C=
(Mc-Mv)x10 ----------------------------------- -------V
Donde: C = cantidad de cenizas, en Mg/l; Mc = masa de la cápsula más cenizas, en g; Mv = masa de la cápsula vacía, en g; V = volumen de la muestra empleada, en ml.
DETERMINACIÓN DE MINERALES Determinación del contenido total de calcio. Metodología Se colocan 5 g de muestra en un crisol de porcelana y estos son incinerados en una mufla a 550 °C, se lavan las cenizas en un vaso de 250 mL con 40 mL de ácido clorhídrico concentrado y 60 mL de agua. Se añaden 3 gotas de ácido nítrico concentrado y se calienta a ebullición por 30 minutos, se deja enfríar y se transfiere a un matraz volumétrico de 250 mL, es aforado hasta el enrace, se mezcla y se filtra, se pipetea un volumen de filtrado que contenga de 10 a 40 mg de calcio en un vaso de 250 mL se agrega 1 mL de solución de ácido nítrico (al 30% v/v) y 5 mL de solución de cloruro de amonio (al 5% v/v). Se afora hasta 100 mL con agua destilada y se calienta a ebullición. Se agregan 10 gotas de solución de verde de bromocresol bromocresol (al 0.04% v/v) y 30 mL de solución saturada y caliente de oxalato de amonio.
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Si se forma un precipitado se disuelve agregando unas gotas de ácido clorhídrico concentrado. Se neutraliza muy lentamente con solución de amoniaco (0.88), se agita en forma continua hasta que el indicador vire a pH de 4.4-4.6. Se coloca el vaso en un baño de vapor durante 30min. se retira el vaso y después de 1hra. Se filtra en un crisol gooch se lava muy bien el precipitado y el crisol, enseguida se disuelve el precipitado con 50 mL de solución de ácido sulfúrico (al 10% v/v) se enjuaga el crisol y se diluye el filtrado hasta 100 mL con agua destilada. Se calienta el filtrado a una temperatura de 75 °C y se titula con una solución de permanganato de potasio 0.02 M hasta que se obtenga un color rosa persistente. Ahora bien 1 mL de solución de permanganato 0.02 M equivale a 2.004 mg de calcio
(Pearson, 1999) . .
Determinación del contenido total de fósforo (Método de Vanadato-Molibdato) Reactivos Vanadato-Molibdato . Se disuelven 20 g de Molibdato de amonio en 400 mL de agua
caliente (50 ºC) y se enfrían. Se disuelve 1 g de Vanadato de amonio en 300 mL de agua destilada hirviendo, se enfría y se añaden 140 mL de ácido nítrico concentrado, lentamente y mezclando. Luego se agrega despacio la solución de Molibdato a la solución de Vanadato y ácido con agitación y se diluye a 1 L con agua. Solución estándar de fosfatos. Se prepara una solución concentrada que contenga 3.843
g de fosfato dibásico de potasio (KH2 PO 4 ) por litro. Luego se diluyen 25 mL de esta solución a 250 mL con agua (1 mL equivale a 0.2 mg de P 2 O 5 ) Preparación de la curva estándar
A una serie de matraces volumétricos de 100 mL se añade 0, 2.5, 5, 10, 20, 30, 40 y 50 mL de la solución estándar de fosfato (esto da soluciones que contienen 0-10 mg de P 2 O 5 ) y se diluye cada uno a 50-60 mL con agua. Se adicionan unas gotas de
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solución de amoniaco (0.88) y se acidifican con Ácido Nítrico (1:2) se agregan 25 mL del reactivo de Vanadatp-Molibdato, se diluye hasta la marca y se mezcla. Se dejan en reposo 10 min. Y se mide la densidad óptica a 470 nm. Metodología Se colocan 5 g de muestra en un crisol de porcelana y son incinerados en una mufla a 450-500 °C por 4 hrs., las cenizas son recuperadas con 10 mL de HCl 5 M a ebullición y se transfirieren a un matraz de aforación de 100 mL, se filtran si es necesario, posteriormente son neutralizadas por goteo con amoniaco (0.88) (usando agua destilada el volumen de la solución en esta etapa debe ser 50-60 mL). Después se le añade una solución de ácido nítrico (1:2 v/v) y 25 mL del reactivo vanadato-molibdato, se afora al enrase, y se deja reposar 10 min. Se determina colorimétricamente en un espectrofotómetro como P 2 O 5 a 470 nm. (Pearson, 1999)
Determinación de Cloruro de Sodio (Método de Mohr) Metodología Se lavan las cenizas en un matraz cónico o en un crisol de porcelana blanca con 1 ml de agua destilada. Se agregan 1 mL de solución de cromato de potasio al 5 % y se titula con solución 0.1 M de nitrato de plata hasta que aparezca un color rojo ladrillo. 1 mL de AgNO 3 equivale a 0.005844 g de NaCl (Pearson, 1999)
DETERMINACIÓN DE AZUCARES Carbohidratos totales (Método Fenol-Sulfúrico) Todos los azúcares incluyendo po1isacáridos se deshidratan con ácido sulfúrico concentrado formando furfurales o alguno de sus derivados, los que a su vez se condensan con fenoles presentes en la mezcla de reacción para dar compuestos de coloración naranja amarillento cuya intensidad se mide espectrofotométricamente. 8
Metodología Se pesó 1 g (0.1 g) de muestra y se afora a un litro (100 ml) en un matraz de aforación de 1L utilizando agua destilada, agitándose vigorosamente por 30 minutos en una parrilla de agitación y se deja reposar. Posteriormente Posteriormente se toma 1 mL (0.5 mL) de la solución en un tubo de precipitado de 16X150 a la cual se le adicionó 1 mL (0.5 mL) de fenol al 5% e inmediatamente después se hace deslizar con precaución por las paredes del tubo 5 mL (2.5 mL) de ácido sulfúrico concentrado. Se deja reposar durante 30 minutos, se agita y se lee en el espectrofotómetro a 490 nm. El color desarrollado es estable por varias horas (Dubois; 1956). (Se puede usar un factor de dilución de 2 agregando 7 mL (3.5 mL) de agua destilada.) Para elaborar la curva estándar se utilizó una solución estándar de glucosa (100 g/ mL) y se prosiguió como se indica a continuación:
μ
Curva estándar: A partir de la solución estándar (100 μg/mL) de glucosa, proseguir como se indica: Volumen de1 estándar Volumen de agua μg del estándar 0.00 1.0 0 0.20 0.08 20 0.40 0.60 40 0.60 0.40 60 0.80 0.20 80 1.00 0.00 100 Cada tubo se analizó de la misma forma que a la muestra, obteniéndose la ecuación de la curva correspondiente para determinar los carbohidratos totales del sistema. Cálculos:
x = (y-0.083667)/5.54* 10-3
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Donde:
y = Absorbancia x = Concentración de carbohidratos Azúcares Reductores (Método Nelson -Somogy) Reactivos:
Reactivo 1 Solución A: En 800 mL de agua destilada se disuelven 25 g de Carbonato de sodio Anhidro (Na2 CO3 ) 25 g de Tartrato de Sodio y Potasio (KNaC4 H 4 O 6 4H 2 O) 20 g de Bicarbonato de Sodio (NaHCO3 ) 200 g de Sulfato de Sodio (NaSO4 ) Aforar a 1 L
Solución B: En 200 mL de Agua destilada se agregan 4 gotas de Ácido Sulfúrico concentrado (H2 SO 4 ) y se disuelven 30 g de Sulfato de Cobre (CuSO 4 5H 2 O) Para preparar el reactivo 1 se mezcla 1 mL de solución B y 25 mL de la solución A.
Reactivo 2 Solución A: En 400 mL de agua destilada se disuelven 21 mL de Ácido Sulfurico Concentrado (H2 SO 4 ) 25 g de Molibdato de Amonio ((NH4 ) 6 Mo 7 O 24 4H 2 O) Solución que se debe guardar en un frasco color ambar
Solución B: En 25 mL de agua destilada se disuelven 3 g de Arseniato de Sodio Heptahidratado (NaHAsO4 7H 2 O) Las soluciones se mezclan lentamente con agitación se aforan a 500 mL. Posteriormente se calienta a 55 ºC durante 30 min.
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Nota. Todas las soluciones deben estar a temperatura ambiente.
Metodología Colocar 250 μL de muestra problema y adicionar 250 μL de reactivo 1 Incubar la mezcla durante 10 min. En un baño de agua hirviendo Retirar del baño de agua agu a y dejar enfriar Agregar 250 μL de reactivo 2 y agitar ag itar vigorosamente Agregar 4 mL de agua destilada y agitar Tomar las lecturas en el espectrofotometro a 660 nm. Curva de calibración: A partir de la solución estándar (500 ppm) de glucosa, proseguir como se indica: ppm Sln. μL patrón H2O μL 0 0 250 30 15 235 50 25 225 100 50 200 200 100 150 300 150 100 400 200 50
DETERMINACIÓN DE FIBRA CRUDA El tratamiento de muestras desengrasadas con ácidos nítrico, tricloroacético y acético, solubilizando completamente almidón, proteína y lignina y la mayor parte de la hemicelulosa, pero no afecta la celulosa, la cual se puede cuantificar después de este tratamiento, separando por filtración. Metodología
Se colocan 2 - 5 g de muestra en un matraz erlenmeyer de 250 mL y se añadieron 2 g de ácido tricloroacético, tricloroacético, 5 mL de ácido nítrico y 50 mL de ácido acético al 70 % v/v. Se hidroliza de 1- 12 h. Las muestras se se mantienen a reflujo durante 30 min. Se 11
filtra a través de crisoles gooch puestos previamente a peso constante, utilizando una bomba de vacío, lavando el residuo con agua destilada caliente hasta eliminar el olor a ácido acético del matraz. Se secan los crisoles en una estufa durante 12 h y se pesan. La fibra real se calcula restándole a la fracción retenida en el filtro el contenido de cenizas insolubles, obtenida por calcinación. La corrección para cenizas solo se realiza cuando el contenido de fibra cruda es mayor del 8%. (Van, 1952) Cálculos: % FC = (w 2 / w 1 ) x 100 Donde: % FC = % de Fibra cruda w 1 = peso de la muestra w 2 = peso de la fibra desecada O bien mediante la ecuación:
(Pr -Pv) - (Pf - Pe) %FC = —————————— x 100 M Donde: %FC = Porcentaje de fibra cruda Pr = Peso del filtro con residuo (g) Pv = Peso del filtro de vacío (g) Pf = Peso del crisol (a peso constante) con fibra (g) Pe = Peso del crisol a peso constante (g) M = Peso de la muestra desengrasada (g) Otra forma de expresar los cálculos es:
%FC = Pa – Pb * 100 M Donde:
%FC = Porcentaje de fibra cruda. Pa = Peso del filtro gooch solo a peso constante (g). 12
Pb M
= Peso del filtro gooch + Muestra filtrada seca (g). = Peso de la muestra desengrasada (g).
DETERMINACIÓN DE PROTEINAS Determinación de nitrógeno total. (Método de Microkjeldahl) El nitrógeno de las muestras se digirió con ácido sulfúrico caliente mas un agente catalítico que favorece la reacción convirtiendo todo el nitrógeno orgánico e inorgánico a nitrógeno amoniacal. El amonio se libera al agregar un álcali y destilar 1a muestra por arrastre de vapor en ácido bórico; con el cual forma los iones amonio y borato. La titulación se efectúa con un ácido estandarizado que en forma indirecta proporciona el contenido de nitrógeno. Reactivos Ácido Sulfúrico concentrado Catalizador (HgO-K 2 SO 4 ). Se pesaron 50 g de sulfato de potasio, se le adicionó 2 g
de óxido de mercurio y se mezcló hasta obtener un polvo completamente homogéneo. Solución de NaOH 60%-Na 2 SO 2 O 3 5%. Se disolvieron completamente 600 g de
hidróxido de sodio en aproximadamente 600 mL de agua desti1ada, enseguida se disolvieron 50 g de tiosulfato de sodio y se aforó a 1000 mL. H 3 BO 3 5%(p/v). Se pesaron 50 g de ácido bórico, se disolvieron en agua destilada y
se aforó a 1000 mL. HCl 0.01N. 1 mL de ácido clorhídrico de 37.5% de pureza se diluyó en agua
destilada y se aforó a l000 mL.
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Se normalizó con borato de sodio utilizando rojo de metilo como indicador. Rojo de metilo 0.2% (p/v). Se disolvieron 200 mg de rojo de metilo en etanol
absoluto y se aforó a 100 mL
Azul de metileno 0.2%(p/v). Se pesaron 100 mg de azul de metileno y se diluyó en 50 mL de etanol absoluto. Solución Indicadora (rojo de metilo-azul de metileno). Se mezclaron 100 mL de
solución alcohólica de rojo de metilo 0.2% con 50 mL de azul de metileno 0.2%. Metodología Para realizar esta técnica se requiere pesar de 15 – 40 miligramos (mg) de muestra (la cual debió desgrasar previamente) y se coloca en un matraz microkjeldahl, al cual se le adiciona también 2 g de mezcla catalizadora ( HgO-K HgO-K 2 SO 4 ) junto con 2.5 mL de ácido sulfúrico concentrado ( H H 2 SO 4 ), después se coloca el matraz con la muestra y la mezcla digestora en el equipo de digestión con un extractor de vapores. Ya que se coloco el matraz en el equipo, se procede a encender y se mantiene en calentamiento suave hasta que el líquido resultante se clarifique, manteniendo el calentamiento por un tiempo de 1.5 – 2 horas, posteriormente se deja enfriar. Una vez que se enfríe el líquido se observa un residuo blanquecino, el cual se disuelve con poca cantidad de agua destilada y se transfiere al tubo del destilador, lavando el matraz de 2 – 3 veces con agua destilada. En un matraz erlenmeyer se colocan 5 mL de una solución de ácido bórico al 5% y se le adicionan dos gotas del indicador de kjeldahl, el matraz se coloca en la terminal del condensador, cuidando que este quede dentro de la solución. La muestra que se se coloca en el destilador,, se hace pasar al contenedor, una vez que se coloco la muestra en su sitio se le adicionan 10 mL de una solución de hidróxido de sodio- tiosulfato de sodio, después que se reunieron las soluciones se cerro la llave de paso y se procedió a la destilación. Una vez iniciada la destilación por arrastre de vapor, se colecta 14
aproximadamente de 75 – 100 mL del destilado (en el matraz que contiene el ácido bórico con el indicador se encuentra de un color violeta, el cual cambia a verde cuando se recolecta el destilado). Esta solución que se recupera se titula con ácido clorhídrico 0.01 N hasta que vire el color del indicador de verde a violeta, y se anotan los mililitros consumidos del titulante. Para cada determinación se utiliza un blanco de reactivos siguiendo el mismo procedimiento. (A.O.A.C, 1984) Cálculos:
Donde:
(V 2 – V 1 ) (eqN ) N % N =—————————— x 100 M
%N = Porcentaje de nitrógeno total V 1 = Volumen de ácido clorhídrico gastado al titular el blanco (mL) V 2 = Volumen de ácido clorhídrico gastado al titular la muestra (mL) EqN = 14.007 N = Normalidad del ácido clorhídrico (0.01N) M = Peso de la muestra (mg)
DETERMINACIÓN DE LIPIDOS Lípidos (Extracto Etéreo) Metodología: Se coloca de 2 – 3 g de muestra en un cartucho de celulosa de poro mediano, el cual se coloca en la chaqueta de un aparato de extracción Soxleth, y se conecta a un matraz bola de fondo plano (conteniendo perlas de ebullición) que a sido colocado previamente a peso constante, y cerrando la parte de arriba con el destilador. La extracción se efectúa a reflujo con éter de petróleo durante un lapso de 6 a 8 horas (en algunos casos se requiere mayor tiempo) en una parrilla eléctrica, a una velocidad de condensación de 2 a 3 gotas por segundo; al termino de la extracción se 15
puede recuperar el solvente dentro del mismo equipo, al cual se le ha retirado el cartucho. El matraz se lleva a peso constante a una temperatura de 50 – 60 °C. Se enfría en un desecador y se toma su peso. Cálculos: %EE = B – A * 100 M Donde:
%EE = Porcentaje de extracto etéreo. A = Matraz a peso constante (g). B = Matraz con extracto etéreo (g). M = Peso de la muestra (g).
Determinación rápida de Lípidos En un tubo de ensaye de 25X200 colocar de 1a 3g de muestra mas mas 15 mL de una mezcla Cloroformo-etanol (3:1) o bien de Etanol-éter (1:2) Taparlos bien y agitarlos continuamente durante 1 hr. Cuidando de destapar el tubo para liberar el gas con precaución. Posteriormente vaciar únicamente el líquido a tubos de ensaye 16X150 previamente puestos a peso constante. Posteriormente dejar evaporar el contenido de los tubos y pesar. Calcular el resultado por diferencia de peso. Cálculos: %EE = B – A * 100 M Donde:
%EE = Porcentaje de extracto etéreo. A = Tubo de ensaye a peso constante (g). B = Tubo de ensaye con extracto etéreo (g). M = Peso de la muestra (g).
Otras determinaciones de lípidos Lecitina 16
Se toman 5 g de muestra y se colocan en un matraz con 200 mL de una mezcla de cloroformo/etanol (1:1 v/v), se agita ligeramente y se deja reposar una noche. El solvente es extraído y secado con aire (bomba) hasta que se obtiene un liquido graso. Se transfiere a un crisol y es determinado por el método de contenido total de fósforo y multiplicado por el factor (P 2 O 5 X 11.19 = mg de Lecitina/g muestra).
Fosfolípidos A siete gramos de muestra se les agrega hidróxido de amonio con 20 mL de una mezcla de etanol/éter (1:1 v/v) se deja reposar una noche y se coloca en un equipo Soxleth por 6 hrs. la grasa es transferida a un crisol y determinada por el método de contenido total de fósforo.
DETERMINACIÓN DEL POR CIENTO DE ALCOHOL EN VOLUMEN A 293 K (20° C) (% ALC. VOL) Reactivos
Solución de hidróxido de sodio (NaOH), a 6N Agua destilada Materiales
Gránulos o trozos de carburo de silicio o perlas de vidrio (destilación de alcoholes) Probeta con diámetro suficiente para efectuar, simultáneamente la mediciones alcoholimétricas y de temperatura (prefiérase sin graduación, y con un diámetro 4 cm. ó 5 cm. y de capacidad mínima de 300 ml). Matraz volumétrico de 250 ml o 300 ml ml Matraz de destilación de 1 L. Refrigerante tipo Graham de 60 cm. de longitud adaptado en el extremo inferior con un tubo y con la punta biselada. Trampa de vapor
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Pipetas (5 ml) Tablas de corrección por temperatura para esfuerza real al 293 K (20° C) (% Alc. Vol.).
Procedimiento Verter y medir en el matraz volumétrico la cantidad de muestra indicada en la tabla A.4 a una temperatura de 293 K (20° C) 0,5 K, transferidos cuantitativamente con agua destilada (la cantidad de agua depende el contenido de azúcares reductores del vino, ver tabla A.4, produce enjuagar con el agua al menos tres veces el matraz volumétrico), al matraz de destilación que contiene gránulos o trozas de carburo de silicio o perlas de vidrio y se adicionan 2,5 ml de NaOH 6N, posteriormente conectarlo al refrigerante mediante el adaptador. Calentar el matraz de destilación y recibir el destilado en el mismo matraz donde se midió la muestra. El refrigerante termina en una adaptación con manguera y tubo con la punta biselada, que entren en el matraz de recepción debe encontrarse sumergido en un baño de agua-hielo durante el curso de la destilación. Cuando la cantidad de destilado contenida en el matraz de recepción se acerque a la marca (unos 0,5 cm. Debajo de la marca de aforo), suspender la destilación y retirar el matraz de recepción, y llevar el destilado a la temperatura que se midió la muestra, procurar no perder líquido. Llevar a la marca de aforo con agua destilada, homogeneizar y transferir el destilado a la probeta. En una probeta adecuada el tamaño de alcoholímetro y a la cantidad de la muestra destilada, verter el destilado enjuagando la probeta primero con un poco de la misma muestra. Después Después vaciar el destilado hasta unos 10 cm. Abajo del nivel total. Introducir el alcoholímetro cuidadosamente junto con el termómetro. El alcoholímetro debe flotar libremente, se aconseja que esté separado de las paredes de la probeta 0,5 cm. Esperar a que se estabilice la temperatura y dando ligeros movimientos con el termómetro, eliminar las burbujas de aire. Efectuar la lectura de ambos. Si la lectura se
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realiza a una temperatura diferente de 293 K (20° C), se tiene que pasar a grado volumétrico (% Alc. Vol. A 293 K (20° C), se tiene que pasar a grado volumétrico (% Alc. Vol. A 293 K (20° C), (esfuerza real), y hacer la corrección necesaria empleando las tablas de corrección por temperatura. Tabla 2. Volúmenes de muestra y agua para la destilación de muestras. Producto
%Alc %Alc..
Conte onten nido ido de
Vol.
azúcares
273 K reductores totales (20° C) (g/l) Bebidas alcohól icas
Vinos espum osos
agua destil ada m atraz de recepción de l
(m l )
agregada (m l)
a destilación (m l)
0 a 15
250
75 300
10
10
0
250
100
30
a 13 10
a 30 0
300 250
150 100
30
a 20
a 400
300
180
10 a 14
0 a 100
250 300
100 180
30
3
0
250
100
20
a8
a 120
300
150
10
200
250
150
a 14
a 500
300
200
12,5
100
250
125
a 24
a 200
300
150
15
50
250
100
a 45
a 500
300
200
45
0 a ..
250
50
a 80
50
300
90
Bebidas carbonatadas y
m uestra
Cantida tidad d de agua en el
35 a 55
Vinos Vinos generosos
Cant Cantid ida ad de Cantid tidad de
sidras Rom pope Cóctel es Licores Ex tractos hidroalcohól icos
30 30 30 10
Procedimiento para licores Procédase de acuerdo a lo descrito en 3 y ver la tabla para el empleo de volumen de muestra y agua.
Procedimiento para aguardientes En aquellos productos que no contienen color o azúcar, como el caso del aguardiente, no es necesario realizar el proceso de destilación y la medición del por ciento de alcohol se realiza con la muestra directa.
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Expresión de resultados Si en el momento de la determinación la muestra está a una temperatura diferente a 293 K (20° C), la lectura debe corregirse usando las tablas alcoholimétricas (ver tabla VIII - b de la Guide Practique D’Alcoométie), en la sección de grado volumétrico (esfuerza real). El por ciento de alcohol en volumen a 293 K (20° C), de la bebida alcohólica, objeto de esta prueba, es la lectura ya corregida obtenida en el párrafo anterior, puede abreviarse (% Alc. Vol.)
DETERMINACIÓN DE METANOL POR EL METODO DE ACIDO CROMOTROPICO. (Universidad Autónoma de Chihuahua Marzo de 2001) Material
Ac. Cromotrópico H 2 SO 4 Meta bisulfito de Sodio Alcohol Metílico. Alcohol Etílico Permanganato de potasio. Ácido Fosforito Equipo
Espectro UV-Visible. Incubadora.
Metodología. Preparación Del KMNO 4 Se colocan 3 gr de KMNO4 en 15 ml. De H3 PO 4 . y se aforado a 100 ml en Agua destilada. Sln. 5% De Ac. Cromotrópico Cromotrópico 20
Ac. Cromotrópico 5gr en 12.5 ml. de H2 O 1 ml de H 2 SO 4 25 ml de Metanol calentar a ebullición y filtrar añadiendo 50 ml de Isopropanol después adicionar 12.5 ml de H2 O Sln Alcohólica. 0.55ml de Alcohol etílico en 9.45 ml de H2 O destilada. Diluir la muestra al 5% o por lo siguiente 0.5 ml del producto destilado en 9.5 ml. De agua destilada. Procedimiento: Medir 2 ml de solución de permanganato de potasio en ácido fosforito en matraces volumétricos de 50 ml, colocados en baños de hielo hasta que se enfríen, posteriormente añadir por separado 1 ml de la muestra diluida y 1 ml de la solución alcohólica al 5.5 % ( este será 4l blanco) y dejar reposar durante 30 min. En baño de hielo. Decolorar cada uno de los matraces con pequeñas cantidades de bisulfito de sodio seco agitando individualmente. Añadir 1 ml de solución de ácido Cromotrópico posteriormente, con el matraz en el hielo, añadir directamente 15 ml de ácido sulfúrico concentrado agitando constantemente. Colocar en baño María (de 60 a 70 °C.) durante 15 min., enfriar y adicionar con agitación agua hasta el volumen próximo a aforo. Enfriar a temperatura ambiente y llenar de agua destilada hasta el aforo, homogenizar y dejar reposar por 5 min. Después leer las absorbancia de la solución estándar y de la muestra a 575 nm utilizando el blanco para el ajuste del espectrofotómetro. Preparación de la curva patrón:
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Se tomaron 0.5ml. de metanol y se adicionaron a 9.5 ml de solución alcohólica al 5.5 % Preparándose diluciones de 1/10, 1/100, 1/1000, 1/10000, 1/100000, posteriormente se realiza el procedimiento dentro del párrafo p árrafo anterior y se lee a 575 nm. Con los resultados obtenidos se realiza una regresión lineal correspondiente para así obtener la curva patrón de referencia la cual, relacionará la absorbancia con la concentración de metanol.
Cálculos. Los resultados se realizaran con la ecuación de obtenida de la regresión lineal de la curva de calibración. Ecuación:
A = m(X) + b Despejando: A - b/m = X
Obteniéndose x que es la concentración de metanol expresada en ml de metanol / ml de la solución alcohólica.
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