Siembra y resiembra de cultivo de bacterias

Siembra y resiembra de cultivo de bacterias. Objetivo: Que el alumno aprenda a cultivar bacterias en un medio de cultivo (EMB) Introducción: Uno de los sistemas más importantes para la identificación de micr microo oorg rgan anis ismo moss es obse observ rvar ar su crec crecim imie ient ntoo en sust sustan anci cias as alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento nec necesari sarios os y debe esta estarr exe xennto de tod todo micr microo oorg rgan anis ismo mo contaminante. La mayo mayorí ríaa de las las bact bacter eria iass patóg patógen enas as requ requie iere renn nutr nutrie ient ntes es complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes. ingredientes. El agar agar es un elem elemen ento to soli solidi difi fica cant ntee muy muy emple mplead adoo para para la preparación de medios de cultivo. Se licua completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grad grados os.. Con Con míni mínima mass exce xcepcio pcione ness no tien tienee ef efec ecto to sobr sobree el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él.

La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuación. En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo el medio y para detectar reacciones de fermentación de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoría de las bacterias Gram-positivo.

Material: • • • • • • • •

Asa bacteriológica. 2 cajas de petri. Aplicador o isótopo. Varilla para tinción. Microscopio. Portaobjetos. Cubreobjetos. Mechero.

Sustancias: • • • • •

Bacterias (Muestra). Solución salina. Cristal violeta. Lugol. Zafranina.

Siembra. Técnica a seguir: Frotar la muestra sobre el EMB (solo en una caja de petri) en campo determinado. 2. Esterilizar el asa bacteriológica a través de la flama del mechero. 3. Por medio del asa (previamente esterilizada) se frota en el campo de las bacterias para expandirlas en el EMB. 4. Se coloca la caja de petri en la estufa bacteriológica a 37° C aproximadamente de 24 a 48 horas. 1.

Resiembra. Técnica a seguir: 1. Esterilizar el asa bacteriológica a través de la flama del mechero. 2. Después de un día, la caja de petri se saca de la estufa bacteriológica y con el asa bacteriológica frotar las bacterias crecidas. 3. En la otra caja de petri frotar el asa bacteriológica para volver a sembrar. 4. Frotar sobre un portaobjetos las bacterias crecidas de la primera caja de petri, secar y fijar con la flama. 5. Cubrir con solución salina la muestra con la finalidad de expandir las bacterias. 6. Cubrir con cristal violeta por 1 minuto. 7. Lavar a chorro de agua. 8. Cubrir con lugol por 1 minuto. 9. Lavar a chorro de agua. 10. Decolorar con alcohol cetona por 1 minuto. 11.Cubrir con zafranina por 30 segundos. 12. Secar a la intemperie completamente. 13. Observar con objetivo de inmersión.

Observaciones: • •

Se pudo observar bacilos de color rosa. En la siembra de bacterias, estas crecieron en el medio de cultivo y mostraron un color verde

Conclusión: Se logra con éxito la siembra y resiembra de bacterias.