Resist en CIA a de Staphylococcus Aureus Islados de Leche de Vacas Con Mastitis de Tjaro Michoacn

UNIVERSIDAD MICHOACANA DE SAN NICOLÁS DE HIDALGO FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

TESIS RESISTENCIA ANTIBIÓTICA DE Staphylococcus aureus AISLADOS DE LECHE DE VACAS CON MASTITIS DE TÉJARO MICHOACÁN

QUE PRESENTA

EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

PARA OBTENER EL TÍTULO DE

MÉDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA

MORELIA, MICHOACÁN., OCTUBRE DE 2011.

UNIVERSIDAD MICHOACANA DE SAN NICOLÁS DE HIDALGO FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

TESIS

RESISTENCIA ANTIBIÓTICA DE Staphylococcus aureus AISLADOS DE LECHE DE VACAS CON MASTITIS DE TÉJARO MICHOACÁN

QUE PRESENTA


PARA OBTENER EL TÍTULO DE

MÉDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA

ASESOR: MC. José Luis Carlos Bedolla Cedeño COASESORES: QFB. Rosalva Mejía Alfaro DR. José Herrera Camacho

MORELIA, MICHOACÁN., OCTUBRE DE 2011.

Resistencia antibiótica de Staphylococcus aureus aislados de leche de vacas con mastitis de Téjaro Michoacán

La presente investigación titulada “Resistencia antibiótica de Staphylococcus aureus aislados de leche de vacas con mastitis de Téjaro Michoacán”, forma parte del proyecto de investigación 14.10-2011. “Uso de extractos de semillas de cítricos para el control de la mastitis bovina”, financiado por la Coordinación de la Investigación Científica de la Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo.



DEDICATORIA

Quisiera iniciar brindándoles las gracias a mis padres José Luis Carlos Bedolla Cedeño y Edith García Cedeño por el apoyo que me han dado para la realización de mis estudios y por siempre estar ahí cuando los necesito.

A mis hermanos José Carlos, Brenda y Karla por haberme apoyado en toda mi carrera.



AGRADECIMIENTOS

A mis padres y a todas aquellas personas que al paso del tiempo de esta carrera me hicieron y brindaron su apoyo y dedicación para que pudiese hoy terminar mis estudios y presentar el siguiente trabajo.

Gracias a mis maestros, por compartir sus conocimientos y vivencias conmigo.



CURRICULUM VITAE

Eduardo Austreberto Bedolla García Fecha de Nacimiento: 29 de septiembre de 1986 Lugar de Nacimiento: Morelia Michoacán Pascasio Ortiz de Letona No. 189 Col. Agustín Arriaga Rivera. Morelia Michoacán. Tel. 3 26 70 19

Cel. 4432571919

E-mail: [email protected]

FORMACIÓN ACADÉMICA 1993-1998. Primaria. Escuela Primaria “18 de Marzo”. Morelia, Michoacán. 1999-2001. Secundaria. Escuela Secundaria Federal No. 6 “Dr. Alfonso García Robles”. Morelia, Michoacán.

2001-

Bachillerato. Centro de Bachillerato Tecnológico Agropecuario No. 7

La Huerta, Michoacán.

2002-

Preparatoria. Colegio de San Nicolás de Hidalgo. Universidad Michoacana

de San Nicolás de Hidalgo.

2003-2006. Bachillerato. Colegio de Bachilleres del Estado de Michoacán. Plantel Quiroga. Quiroga, Michoacán.

2006-2011. Licenciatura. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo. EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA


ASISTENCIA A CURSOS, TALLERES O SEMINARIOS DE ACTUALIZACIÓN PROFESIONAL

Curso de Capacitación de Informática. Realizado de Febrero a Julio de 2006, en el Colegio de Bachilleres “Plantel Quiroga”, con un total de 56 créditos. 6° Curso Internacional Avances en el Diagnóstico y Control de la Mastitis, realizado del 17 al 20 de 0ctubre de 2006 en el Centro Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias de la Universidad de Guadalajara, Jalisco. México (valor curricular de 40 horas). XII Congreso Veterinario de León. Realizado del 5 al 8 de Septiembre del 2007, en la ciudad de León Guanajuato. Con una duración de 32 horas. Primer Congreso Regional de Buiatría. Realizado los días 21 y 22 de Septiembre de 2007, por la Asociación Michoacana de Médicos Veterinarios Zootecnistas Especialistas en Bovinos A. C., en Morelia, Michoacán. VI Ciclo de Conferencias AMVEC de la Piedad. Realizado por la Asociación de Médicos Veterinarios Especialistas en Cerdos de la Piedad, A. C., el 28 de Septiembre del 2007, en la ciudad de La Piedad Michoacán. Con una duración de 8 horas. Seminario de “anestesia y manejo del dolor”,

Realizado por Especialidades Virbac

CANIGEN 2008, el 14 de Marzo de 2008, en la ciudad de Morelia, Michoacán. Con una duración de 5 horas. XIV Congreso Veterinario de León. Realizado del 2 al 5 de Septiembre del 2009, en la ciudad de León Guanajuato. Curso Internacional Diagnóstico y Control de la Mastitis Bovina, realizado del 12 al 15 de Abril de 2010 en el Centro Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias de la Universidad de Guadalajara, Jalisco. México (40 horas de duración).



3er. Congreso Regional de Buiatría. Realizado los días 10 y 11 de Junio del 2010, en la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo. Participación en la segunda semana nacional de vacunación antirrábica canina de reforzamiento, llevada a cabo del20 al 24 de Septiembre de 2010, en la ciudad de Morelia, Michoacán. Curso de Capacitación “Reconocimiento de la principales enfermedades exóticas y emergentes de los animales, su vigilancia, prevención y control”, efectuado los días 20 al 23 de Junio de 2011. 3er Congreso Internacional y 12º Congreso Nacional de Investigación Socioeconómica y Ambiental de la Producción Pecuaria, Realizado los días 18,19 y 20 de Mayo del 2011 en la ciudad de Morelia Michoacán. Curso de Inseminación Artificial en Bovinos, realizado los días 8 y 9 de Julio de 2010 en el municipio de Tarímbaro con una duración de 25 horas. Gobierno del Estado de Michoacán y Secretaría de Desarrollo Rural. 10º Precongreso Internacional de Actualización Veterinaria. Realizado el día 10 de agosto del 2011 en la ciudad de León Guanajuato México. 2° Congreso Internacional de Inocuidad Pecuaria. Realizado los días 1 y 2 de Septiembre de 2011 en la ciudad de Morelia Michoacán.

ASISTENCIA A CURSOS, TALLERES O SEMINARIOS DE ACTUALIZACIÓN PEDAGÓGICA VIII Curso-Taller Estatal del Educador Popular. Sección XVIII SNTE-CNTE. Realizado del 18 al 22 de Julio de 2011 en la Ciudad de Morelia, Michoacán.



PARTICIPACIÓN EN ARTÍCULOS EN EXTENSO Artículo ”Prevalencia de mastitis bovina en Téjaro, Michoacán. Publicado en las memorias del XVII Encuentro de Investigación Veterinaria y producción Animal. Realizado los días 6 y 7 de Diciembre de 2006 en la FMVZ-UMSNH. Artículo “Técnicas de inseminación artificial en ovinos”. Publicado el 24 de Abril de 2007 en Monografías.com Área: Biología. Artículo “Frecuencia y etiología de la mastitis subclínica en el municipio de Cherán Michoacán, presentado en el V Encuentro Participación de la Mujer en la Ciencia. Realizado del 21 al 23 de mayo de 2008, por el Centro de Investigaciones en Óptica, A. C. León, Guanajuato. Artículo “Frecuencia y etiología de la mastitis bovina en Cotzio municipio deTarímbaro Michoacán, presentado en el V Encuentro Participación de la Mujer en la Ciencia. Realizado del 21 al 23 de mayo de 2008, por el Centro de Investigaciones en Óptica, A. C. León, Guanajuato. Artículo “Incidencia y etiología de la mastitis bovina en Maravatío Michoacán, Presentado en el XXI Congreso panamericano de Ciencias Veterinarias. Realizado del 12 al 16 de octubre de 2008 en la ciudad de Guadalajara, Jalisco. Artículo “Etiología de la mastitis bovina en Maravatío Michoacán, presentado en el VI Encuentro Participación de la Mujer en la Ciencia. Realizado del 13 al 15 de mayo de 2009, por el Centro de Investigaciones en Óptica, A. C. León, Guanajuato. Artículo “Prevalencia de mastitis subclínica en Pátzcuaro Michoacán, presentado en el VI Encuentro Participación de la Mujer en la Ciencia. Realizado del

13 al 15 de mayo

de 2009, por el Centro de Investigaciones en Óptica, A. C. León, Guanajuato. Artículo “Determinación de consumo de alimento y ganancia de peso en conejos (oryctolagus cuniculus) durante la etapa de engorda con dos diferentes dietas comerciales” Presentado en el VII Encuentro Participación de la Mujer en la Ciencia.



Realizado en el Centro de Investigaciones en Óptica, A. C. del 26 al 28 de Mayo de 2010 en la Ciudad de León Guanajuato. Artículo “Manejo del becerro recién nacido hasta el destete en un hato lechero en el GGAVATT Ganaderos Unidos de Téjaro, Michoacán” Presentado en el VII Encuentro Participación de la Mujer en la Ciencia. Realizado en el Centro de Investigaciones en Óptica, A. C. del 26 al 28 de Agosto de 2010 en la Ciudad de León Guanajuato. Artículo “Origen y aislamiento microbiológico de mastitis clínica en el ganado lechero en el municipio de Tarímbaro Michoacán” Presentado en el V Congreso Universitario de Ciencias Veterinarias. Realizado en Puerto Vallarta, Jalisco, del 24 al 26 de Septiembre de 2008.

PARTICIPACIÓN COMO PONENTE EN CONGRESOS Y OTROS EVENTOS INTERNACIONALES, NACIONALES Y ESTATALES

Ponencias estatales Ponencia “Prevalencia de mastitis en el ganado lechero del municipio de Tarímbaro, Michoacán”, presentada en el marco de las actividades académicas del 2do. Congreso Estatal de Ciencia y Tecnología, celebrado en el Colegio de Michoacán, A. C., el 10 de noviembre de 2006. Zamora, Michoacán. Ponencia “Prevalencia y etiología de la mastitis en el ganado lechero de Téjaro, Michoacán”, presentada en el marco del II Congreso de Investigación Científica, realizado del 21 al 24 de noviembre de 2006, en la ciudad de Morelia, Michoacán. Ponencia “Prevalencia de mastitis bovina en el municipio de Tarímbaro, Michoacán”, presentada en el marco del II Congreso de Investigación Científica, realizado del 21 al 24 de noviembre de 2006, en la ciudad de Morelia, Michoacán.



Ponencias nacionales Ponencia “Prevalencia de mastitis bovina en el municipio de Tarímbaro, Michoacán”, presentada en el III Congreso Universitario de Ciencias Veterinarias. Realizada los días 29 y 30 de septiembre de 2006 en Puerto Vallarta Jalisco. Centro Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias. Universidad de Guadalajara y Universidad Autónoma de Aguascalientes. Ponencia “Prevalencia y etiología de la mastitis en el ganado lechero de Téjaro, Michoacán”, presentada en el III Congreso Universitario de Ciencias Veterinarias. Realizada los días 29 y 30 de septiembre de 2006 en Puerto Vallarta Jalisco. Centro Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias. Universidad de Guadalajara y Universidad Autónoma de Aguascalientes. Ponencia “Frecuencia de mastitis bovina causada por estafilococos coagulasa negativos en Téjaro Michoacán”, presentada en la XX Semana de la Investigación Científica. Realizada del 23 al 27 de noviembre de 2009 en el Centro Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias. Universidad de Guadalajara, Jalisco. Ponencia “Determinación de la calidad de la leche del bote de recepción de los hatos lecheros del municipio de Tarímbaro, Michoacán”.

Presentado en el VII Encuentro

Participación de la Mujer en la Ciencia. Realizado en el Centro de Investigaciones en Óptica, A. C. del 26 al 28 de Agosto de 2010 en la Ciudad de León Guanajuato. Ponencia “Resistencia antibiótica de Staphylococcus aureus y estafilococos coagulasa negativos aislados de leche de vacas con mastitis subclínica de Téjaro Michoacán”, presentada en el XXXV Congreso Nacional de Buiatría en León, Guanajuato, realizado los días 11 al 13 de Agosto del 2011.

Ponencias internacionales Ponencia “Etiology of subclinic mastitis in Patzcuaro Michoacan, presentado in The International Conference MASTITIS CONTROL 2008 „From Science to Practice‟.



Realizada del 30 de septiembre al 2 de Octubre de 2008. In The Hague, the Netherlands. Ponencia “Determinación del conteo de células somáticas con fossomatic en cabras lecheras de Ecuandureo Michoacán”. Presentada en el XIV Congreso Latinoamericano de Buiatría. Realizado del 15 al 17 de Septiembre de 2009 en Lima, Perú. Ponencia

“Determination of the quality of the milk cattle ranches of Tarimbaro

Michoacan”. Presentada en el XXVI World Buiatrics Congress 2010. Realizado del 14 al 18 de noviembre de 2010 en Santiago, Chile. Ponencia “Etiological agents of the Mastitis in dairy cows of the municipality of Alvaro Obregon Michoacán”. Presentada en el XXVI

World Buiatrics Congress 2010.

Realizado del 14 al 18 de noviembre de 2010 en Santiago, Chile. Ponencia

“Somatic cell count and somatic cell score in goats from Ecuandero,

Michoacan”. Presentada en el XXVI World Buiatrics Congress 2010. Realizado del 14 al 18 de noviembre de 2010 en Santiago, Chile.

PARTICIPACIÓN EN CONFERENCIAS-TALLER Colaborador de la Conferencia-Taller “Crianza de la codorniz” en el XII Tianguis de la Ciencia, realizado los días 19 y 20 de abril de 2002, en la Unidad de Ciencias, Ingenierías y Humanidades de Morelia, Michoacán, organizado por la Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo y la Secretaria de Educación en el estado. Colaborador de la Conferencia-Taller “Crianza del conejo doméstico” en el XII Tianguis de la Ciencia, realizado los días 19 y 20 de abril de 2002, en la Unidad de Ciencias, Ingenierías y Humanidades de Morelia, Michoacán, organizado por la Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo y la Secretaria de Educación en el estado. Colaborador de la Conferencia-Taller “Cría y explotación del conejo doméstico” en el XII Tianguis de la Ciencia, realizado los días 4 y 5 de abril de 2003, en la Unidad de Ciencias, Ingenierías y Humanidades de Morelia, Michoacán, organizado por la EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA


Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo y la Secretaria de Educación en el estado. Colaborador de la Conferencia-Taller “Cría de Conejos” en el XIV Tianguis de la Ciencia, realizado los días 23 y 24 de abril del 2004, en la Unidad de Ciencias, Ingenierías

y Humanidades de Morelia, Michoacán, organizado por la Universidad

Michoacana de San Nicolás de Hidalgo y la Secretaria de Educación en el estado. Colaborador en la Conferencia-Taller “Cría del conejo doméstico” en el Tianguis de la Ciencia 2005, realizado los días 22 y 23 de abril de 2005, en la Dirección General de Bibliotecas de la Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo. Organizado por la Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo, la Coordinación de la Investigación Científica y el Departamento de Comunicación de la Ciencia. Colaborador en la Conferencia-Taller “Embriogénesis animal” en el XVII Tianguis de la Ciencia 2007, realizado el 27 de abril de 2007, en Ciudad Universitaria. Organizado por la Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo, la Coordinación de la Investigación Científica y el Departamento de Comunicación de la Ciencia. Colaborador en la Conferencia-Taller “Sanidad de la ubre” en el XVII Tianguis de la Ciencia 2007, realizado el 27 de abril de 2007, en Ciudad Universitaria. Organizado por la Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo, la Coordinación de la Investigación Científica y el Departamento de Comunicación de la Ciencia.

DISTINCIONES Aprobación del examen EGEL de Medicina Veterinaria y Zootecnia, con testimonio de desempeño SATISFACTORIO. Realizado el 26 de Agosto de 2011.



ÍNDICE Páginas RESUMEN INTRODUCCIÓN…………………………………………………………........... 1 TIPOS DE MASTITIS……………………………………………………………. 1 Mastitis clínica……………………………………………………………………. 1 Mastitis subclínica……………………………………………………………….. 3 IMPACTO DE LA MASTITIS EN LA SALUD PÚBLICA……………………… 4 CLASIFICACIÓN DE LOS AGENTES PATÓGENOS CAUSANTES DE LA MASTITIS BOVINA……………………………………………………… 5 Patógenos causantes de la mastitis contagiosa……………………………... 6 Patógenos causantes de la mastitis ambiental………………………………. 7 Género Staphylococcus………………………………………………………… 9 Habitat de los estafilococos…………………………………………………….. 9 División de los estafilococos……………………………………………………. 10 Aislamiento e identificación …………………………………………………… 11 Staphylococcus aureus…………………………………………………………. 12 Resistencia del Staphylococcus aureus a los antibióticos………………….. 15 FARMACOS EMPLEADOS PARA EL TRATAMIENTODE LA MASTITIS BOVINA…………………………………………………………………………… 17 Aminoglucósidos………………………………………………………………… 18 Cefalosporinas…………………………………………………………………… 18 Fenicoles………………………………………………………………………….. 18



Macrólidos………………………………………………………………………… 19 Penicilinas………………………………………………………………………... 19 Quinolonas………………………………………………………………………. 20 Sulfamidinas-Trimetoprim……………………………………………………… 20 Tetraciclinas……………………………………………………………………… 21 DESVENTAJAS DE LOS ANTIBIÓTICOS EN SALUD PÚBLICA……..….. 21 PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA……………………………….. 23 Pruebas de difusión en gel de agar o método de Kirby – Bauer…………… 23 Pruebas de dilución o concentraciones inhibitorias mínimas (C.I.M.)……. 23 OBJETIVO ……………………………………………………………………….. 26 MATERIAL Y MÉTODOS………………………………………………………. 27 Prueba de California y toma de muestras de leche…………………………. 27 Aislamiento e identificación de cepas de S. aureus…………………………. 28 Prueba de sensibilidad a antibióticos…………………………………………. 28 RESULTADOS Y DISCUSIÓN ………………………………………………… 30 CONCLUSIÓN ………………………………………………………………….. 34 LITERATURA CITADA …………………………………………………………. 35



RESISTENCIA ANTIBIÓTICA DE Staphylococcus aureus AISLADOS DE LECHE DE VACAS CON MASTITIS DE TÉJARO MICHOACÁN

RESUMEN

El objetivo del presente trabajo fue determinar la resistencia antibiótica de Staphylococcus aureus aislados de leche de vacas con mastitis de Téjaro, Michoacán. El estudio se realizó de septiembre de 2010 a enero de 2011 en 16 hatos lecheros de la población de Téjaro municipio de Tarímbaro, Michoacán, los cuales cuentan con 8 vacas en promedio. La mastitis subclínica se determinó mediante la prueba de California de acuerdo con Wolter et al (2004), se obtuvieron 484 muestras de leche de 122 vacas en producción. La identificación de los estafilococos se llevó a cabo a través de su morfología colonial, prueba de catalasa, tinción Gram, prueba de coagulasa, prueba de manitol gelatina y hemólisis. La prueba de susceptibilidad antibiótica se llevó a cabo a través del método de difusión en disco en agar Mueller-Hinton con 102 cepas de estafilococos (41 S. aureus y 61 Estafilococos Coagulasa Negativos) aisladas de las muestras de leche que se obtuvieron de los casos de mastitis subclínica de los hatos lecheros. Se encontró que de las 41 cepas de S. aureus estudiadas, 26 (63.41%) fueron resistentes a cuatro antibióticos, de las cuales 12 (29.2%) fueron resistentes a la penicilina, 9 (21.9%) a la ampicilina, 4 (9.7%) a la eritromicina y solamente 1 (2.4%) resultó resistente a las tetraciclinas. Se concluye que las cepas de Staphylococcus aureus aisladas en este trabajo mostraron mayor resistencia in vitro a los antibióticos de uso frecuente en la terapia de la mastitis bovina como son la Penicilina y Ampicilina. Resistencia que trae como consecuencia una disminución en la respuesta al tratamiento en caso de mastitis clínica y la transmisión de bacterias resistentes a antibióticos a los consumidores a través de la cadena alimentaria, cuando se consumen productos elaborados a partir de leche cruda, por lo que en el tratamiento de los animales infectados por S. aureus, es importante determinar a través de un antibiograma la resistencia que estos presentan a los antibióticos y así aplicar el tratamiento adecuado.

Palabras clave: Mastitis bovina | Staphylococcus aureus | Resistencia antibiótica





INTRODUCCIÓN

La mastitis es un proceso inflamatorio de la glándula mamaria y es comúnmente una consecuencia de una infección microbiana causada por patógenos que penetran a la glándula a través del canal del pezón (Seegers et al, 2003; Zhao y Lacasse, 2008). Es considerada una enfermedad altamente prevaleciente en el ganado lechero, y es una de las más importantes que afecta mundialmente la industria lechera; pues ocasiona pérdidas económicas muy fuertes a todos los productores de leche en el mundo debido a la disminución de la calidad y cantidad de leche producida y un aumento en los costos de tratamiento y servicios veterinarios, y pérdida de animales (Correa et al., 2002; Ceron-Muñoz et al., 2002; Wellenberg et al., 2002; Tomasinsig et al., 2010).

La mastitis bovina como ya se menciono arriba, normalmente se da como resultado de la infección intramamaria por bacterias que pueden producir la enfermedad de manera clínica o subclínica (Leigh, 1999; Dos Santos et al., 2002). Es decir, puede ser acompañada de signos clínicos o no. Una inflamación intramamaria está asociada con un aumento en el conteo de células somáticas (CCS) en la leche. Sin embargo, la magnitud del aumento en el conteo de células somáticas varía de acuerdo a la bacteria involucrada en la infección intramamaria (Djabri et al., 2002).

TIPOS DE MASTITIS

Mastitis clínica

En algunos casos la inflamación de los cuartos mamarios es acompañada de signos clínicos (signos pronunciados de inflamación mamaria y de enfermedad sistémica), por lo que es diagnosticada entonces como mastitis clínica (Djabri et al., 2002).


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La mastitis clínica es una anormalidad fácilmente observada por los granjeros en cualquiera de los dos casos: la leche y/o la ubre (de Mol, 2000). Es un problema que subsiste en muchos hatos lecheros (Barkema et al., 1999).

Se caracteriza por la tumefacción o dolor en la ubre, enrojecimiento, la leche presenta una apariencia anormal y, en algunos casos, hay aumento de la temperatura rectal, letargo, anorexia e incluso la muerte. Además, las bacterias están presentes en la leche,

el

rendimiento

es

muy

reducido,

y

su

contenido

está

alterado

considerablemente (Heringstad et al., 2000; Schrick et al., 2001).

La mastitis clínica debida a Escherichia coli (E. coli), estreptococos ambientales, y Staphylococcus aureus (S. aureus) continua siendo un problema importante (Schukken et al., 1999). Y puede ser una condición aguda y dolorosa que afecta el comportamiento animal (Zadoks, 2002). Durante la primera lactación, este tipo de mastitis, resulta en obvias pérdidas como son disminución en la producción de leche y alteraciones en la composición de la misma (Barker et al., 1998).

En un estudio realizado por Barker et al. (1998), demostraron que las vacas con mastitis clínica durante la primera lactación presentaron un prolongado intervalo hasta el primer servicio (94 días) comparado con animales que no presentaron mastitis clínica (71 días).

Además, las vacas con mastitis clínica entre el primer servicio y el establecimiento de la gestación tuvieron un aumento en el número de días abiertos y un doble aumento de servicios por concepción (Hockett et al., 2000).

La mastitis clínica es una enfermedad costosa en las granjas lecheras de los Estados Unidos, con una tasa promedio de incidencia lactacional de 14.2% de acuerdo a un análisis retrospectivo de 62 reportes realizados (Smith et al., 2001).


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En el Reino Unido, la incidencia de mastitis clínica es aproximadamente de 40 casos por cada 100 vacas por año o un millón de casos anualmente (Hillerton y Kliem, 2002).

Según Heringstad et al. (2000) en 1993, el número de casos de mastitis clínica por 100 vacas al año fue de 56, 32, 30 y 21 en Dinamarca, Finlandia, Noruega y Suiza respectivamente. En varios estudios realizados en California, Michigan y Ohio las incidencias de mastitis que se encontraron fueron de 30, 33 y 37 casos por 100 vacas por año respectivamente. Estas estimaciones incluyen las mastitis reportadas por los dueños y tratadas por los veterinarios.

Los costos estimados por mastitis clínica varían dependiendo del país y presupuesto e incluyen los costos del tratamiento y veterinario, la reducida producción de leche durante la parte restante de la lactación, las pérdidas de leche que ha sido desechada debido a contaminación con antibióticos, eliminación temprana, labor extra, disminución de la calidad de la leche e incremento de los riesgos de la enfermedad en el futuro. Los costos estimados por caso de mastitis clínica en Noruega son de 460 dólares americanos, en base a todos los costos arriba mencionados.

Las pérdidas económicas estimadas en Finlandia debido a un caso de mastitis clínica fueron de 215 dólares americanos en base al valor de leche desechada, costos en veterinario, medicina y de labor extra. Los costos de la mastitis clínica reportados por granjeros de Estados Unidos varían de 108 a 122 dólares por caso, en base a medicamentos y veterinario, preventivos, de trabajo extra, desecho y pérdidas de leche (Heringstad et al., 2000).

Mastitis subclínica.

La mastitis subclínica es definida como la presencia de un microorganismo en combinación con un conteo elevado de células somáticas de la leche (de Mol, 2000). EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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El conteo elevado de células somáticas en la leche indica mastitis subclínica (Hultgren, 2002).

Este tipo de mastitis no presenta cambios visibles en la leche o ubre. Se caracteriza por el reducido rendimiento de leche (Schrick et al., 2001), composición alterada de la leche y la presencia de componentes inflamatorios y bacterias en la leche (Heringstad et al., 2000).

Cuando los signos no son visibles, la presencia de patógenos y las modificaciones citológicas de la leche traen como resultado una mastitis subclínica (Djabri et al., 2002), por lo que las técnicas de laboratorio como la medición del conteo de células somáticas y el cultivo bacteriológico son necesarios para detectar inflamación e infección (Barker et al., 1998).

La mastitis, particularmente subclínica y crónica, es la más persistente y más común del grupo de enfermedades de importancia por la higiene de la leche en el ganado lechero. La mastitis subclínica ocurre frecuentemente, y puede conducir a grandes pérdidas económicas debido al reducido rendimiento de leche, y multas a causa de los elevados conteos de células somáticas presentes en los tanques de leche. En la práctica, los casos de mastitis subclínica con frecuencia no son detectados rápidamente, o pueden incluso no ser reconocidas por el ordeñador (Wellenberg et al., 2002).

Según Wellenberg et al. 2002, actualmente las pérdidas ocasionadas por ambos tipos de mastitis clínica y subclínica pueden ascender a 20% de la producción potencial.

IMPACTO DE LA MASTITIS EN LA SALUD PÚBLICA

El amplio consumo de productos lácteos y las recientes epidemias de enfermedades animales que reciben mucha publicidad ha aumentado la preocupación del EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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consumidor acerca de la calidad de alimentos de origen animal, coincidente con estas tendencias, la globalización que ha influenciado la definición de leche de alta calidad además que las expectativas del consumidor cada vez afectan más las prácticas de manejo animal (Patiño, 2008).

La resistencia cuesta dinero, medios de subsistencia y vidas humanas, y amenaza con socavar la eficacia de los programas de atención de la salud. Se ha descrito recientemente como un problema para la estabilidad mundial y la seguridad de los países. Pocos estudios han indicado que los clones resistentes se pueden reemplazar por otros susceptibles; sin embargo, en general, tarda en revertirse o es irreversible (Organización Mundial de la Salud, 2001).

La leche contaminada pone en peligro la salud de quienes la consumen, en el caso del hombre cobra gran importancia la diseminación de bacterias causantes de enfermedades

tales como: tuberculosis, brucelosis, faringitis estreptocócica, entre

otras (Ávila et al., 2004; Ruiz y Romero, 2003; Patiño, 2008).

Según Reinemann, (1998) las dos fuentes más importantes de bacterias en la leche cruda son: 1) Los patógenos de la mastitis de la ubre. 2) Los patógenos ambientales que contaminan la máquina de ordeño (Patiño, 2008).

CLASIFICACIÓN DE LOS AGENTES PATÓGENOS CAUSANTES DE LA MASTITIS BOVINA

En la glándula mamaria bovina se han identificado hasta 140 especies, subespecies y serovariedades

microbianas.

Las

técnicas

microbiológicas

han

permitido

la

determinación precisa de la identidad de muchos microorganismos patógenos de la mastitis. Tomando como base la epidemiología y la fisiopatología, se han clasificado estos microorganismos como causantes de la mastitis contagiosa o ambiental, en base a su asociación epidemiológica con la enfermedad y a su proclividad de causar EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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la infección oportunista, persistente o transeúnte, respectivamente (Bedolla y Castañeda, 2003; Radostits et al., 2002; Riffon et al., 2001; Rossitto et al., 2002; Gallegos y Moncada, 2011).

Según Riffon et al. 2001, las bacterias responsables de la mastitis bovina pueden ser clasificadas como contagiosas y ambientales, dependiendo de su reservorio primario y el ambiente contra el cuarto de la glándula mamaria infectada.

Patógenos causantes de la mastitis contagiosa

Los patógenos contagiosos de primera importancia incluyen al Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium spp., y al Mycoplasma spp. (Riffon et al., 2001; Rossitto et al., 2002; Djabri et al., 2002). Son organismos transmitidos de vaca a vaca a través de los paños utilizados para limpiar las ubres, la leche residual en las pezoneras y un equipo de ordeño inadecuado donde el reservorio primario que alberga los patógenos es el animal infectado o el cuarto de la ubre (Bedolla y Castañeda, 2003; Rossitto et al., 2002; Zadoks et al., 2001; Radostits et al., 2002), y la exposición de los cuartos mamarios no infectados se restringe al proceso de la ordeña (Zadoks et al., 2001; Zadoks, 2002; Gallegos y Moncada, 2011; Bedolla, 2011).

Los patógenos contagiosos de la mastitis como el Staphylococcus aureus y Streptococcus agalactiae que son infecciosos a nivel individual y a nivel de población (Zadoks, 2002), han sido reportados bajo control en los hatos lecheros a través del uso de prácticas de manejo que utilizan la desinfección de las tetas después de la ordeña, terapia de la vaca seca, desecho, mantenimiento del equipo de ordeño, y terapia antibiótica de las infecciones intramamarias (Rossitto et al., 2002; Bedolla, 2011).


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A pesar de que la mastitis por organismos contagiosos (especialmente Streptococcus agalactiae) ha disminuido por mejoramiento en el manejo, las pérdidas económicas debido a la enfermedad pueden continuar porque los organismos causales no pueden ser erradicados del medio ambiente de las vacas lecheras (Nash et al., 2002).

En general, un programa de control de la mastitis concienzudo puede erradicar a Streptococcus agalactiae de la mayoría de los rebaños lecheros. Es mucho más difícil tratar los rebaños en los que Staphylococcus aureus tiene una prevalencia alta (Radostits et al., 2002).

Patógenos causantes de la mastitis ambiental

Los patógenos principales en este grupo son los bacilos entéricos Gramnegativos (Escherichia coli, Klebsiella spp.), Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, y Enterococcus spp. (Rossitto et al., 2002). Otros microorganismos patógenos se incluyen en la clase ambiental de este tipo de infecciones.

Se trata generalmente de oportunistas que invaden la glándula mamaria cuando los mecanismos de defensa están disminuidos o cuando se introducen inadvertidamente en la glándula mamaria al realizar un tratamiento intramamario. Este grupo de microorganismos oportunistas incluyen a Pseudomona spp., levaduras, Prototheca spp., Serratia marcescens y Nocardia spp. Cada uno de estos agentes poseen características de cultivo, mecanismos patógenos y consecuencias clínicas singulares (Radostits et al., 2002).

La fuente de estos agentes patógenos es el entorno de la vaca. La forma de transmisión principal es del ambiente a la vaca a través de un manejo inadecuado del primero. Algunos ejemplos incluyen la cama húmeda, terrenos sucios, ubres mojadas por la leche, preparación inadecuada de la ubre y los pezones antes del ordeño y sistemas de estabulación que favorecen las lesiones en los pezones (Radostits et al., EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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2002). Y la exposición de los cuartos no infectados a los patógenos ambientales que puede ocurrir en cualquier momento durante la vida de una vaca (Zadoks et al., 2001). Estas infecciones generalmente ocurren de forma esporádica. Sin embargo, se pueden producir brotes en los rebaños o en una región entera, normalmente como consecuencia de problemas con la higiene o el tratamiento. Por ejemplo, se ha producido mastitis causada por Pseudoma aeruginosa en brotes relacionados con la contaminación de las conducciones de goma en las salas de ordeño (Radostits et al., 2002).

La mastitis ocasionada por patógenos ambientales es el principal problema que afecta a muchos hatos lecheros bien manejados, que aplican un programa de control de los patógenos contagiosos de la mastitis (Calvinho et al., 1998; Phuektes et al., 2001).

Debido a que en la actualidad estos patógenos no han sido bien controlados por los métodos arriba mencionados, ahora están surgiendo como la causa más frecuente de mastitis en muchos hatos, particularmente bien manejados, hatos con bajo conteo de células somáticas (<200,000 cs/ml) (Rossitto et al., 2002).

Tradicionalmente, los agentes más comunes causantes de la mastitis también han sido clasificados como patógenos principales (mayores) y menores según el grado de inflamación que estos producen en la glándula mamaria (Ariznabarreta et al., 2002).

Los patógenos principales son definidos como los patógenos responsables, la mayoría de las veces, de las mastitis clínicas o de fuertes respuestas inflamatorias (conteos elevados de células somáticas en la leche) y comprenden al Staphylococcus aureus, estreptococos (S. uberis, S. agalactiae, S. dysgalactiae) y coliformes (Ariznabarreta et al., 2002; White et al., 2001; Djabri et al., 2002).

Los patógenos menores son definidos como los patógenos que infectan la glándula mamaria, causando conteos moderados de células somáticas, pero en lo general no causan signos clínicos. Estas infecciones, son especialmente frecuentes, debidas EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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sobre todo a estafilococos coagulasa negativos (principalmente S. chromogenes, S. hyicus, S. epidermidis, y S. xylosus) o por Corynebacterium bovis y Micrococcaceae coagulasa-negativos (Ariznabarreta et al., 2002; White et al., 2001; Djabri et al., 2002).

Género Staphylococcus

El

género

Staphylococcus

se

ha

clasificado

tradicionalmente

en

la

familia

Micrococcaceae junto con, entre otros, el género Micrococcus.

Los estafilococos son cocos grampositivos (de 0.5 a 1.5 um de diámetro) que se presentan sueltos, en parejas, en pequeñas cadenas (de 3 ó 4 células) y mas característicamente en grupos irregulares en forma de racimos (su denominación procede del griego staphyle, racimo de uvas) (Vadillo et al., 2002).

Son anaerobios facultativos, catalasas positivos, generalmente oxidasa negativos, no esporulados, inmóviles y generalmente no forman cápsula o tienen una limitada formación capsular.

En la actualidad en el género Staphylococcus

se reconocen 32 especies y varias

subespecies, si bien solo algunas de ellas tienen importancia desde el punto de vista clínico (Vadillo et al., 2002).

Hábitat de los Estafilococos

Los estafilococos están ampliamente difundidos en la naturaleza. Su hábitat natural es la piel y las membranas mucosas de los mamíferos y las aves. También pueden encontrarse de forma transitoria en el tracto intestinal.


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La presentación de varias de las especies de estafilococos coagulasa negativos descritas en los últimos años como está prácticamente restringida a la especie animal a la que se hace referencia su denominación latina.

Otras especies, como

Staphylococcus hyicus, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus sciuri y Staphylococcus lentus tienen una difusión algo más amplia y se presenta en los ungulados (Vadillo et al., 2002).

División de los estafilococos

Los estafilococos, según produzcan o no la enzima coagulasa,

se dividen en dos

grandes grupos:

1. Estafilococos

coagulasa

positivos

(ECP)

(Staphylococcus

aureus,

Staphylococcus intermedius, Staphylococcus hyicus).

2. Estafilococos

coagulasa

Staphylococcus

negativo

heamolyticus,

(ECN)

(Staphylococcus

Staphylococcus

hominis,

chromogenes, Staphylococcus

simulans, Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus hyicus).

Existe una buena correlación entre

la

producción de coagulasa y la capacidad

patógena de los estafilococos, de tal manera que, en general, se considera que los ECP son patógenos y que los ECN no lo son (Cuadro 1) (Vadillo et al., 2002).


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Cuadro 1. Familia micrococacceae Familia Micrococacceae

Género Staphylococcus

Especie Staphylococcus aureus S. intermedius S. hyicus

Coagulasa +

Staphylococcus chromogenes S. heamolyticus S. hominis Coagulasa S. hyicus S. simulans Otros Micrococcus

M. roseus M. varians

Planococcus Stomatococcus (Fuente: Saran y Chaffer, 2000).

En el grupo de ECP se incluyen S. aureus, S. intermedius, S. hyicus (aunque solo entre un 24 y 56 % de las cepas son coagulasa positivas) (Vadillo et al., 2002).

Aislamiento e identificación

Los estafilococos crecen en los medios de cultivo ordinarios, como el agar nutritivo, si bien para la siembra de muestras clínicas (exudados, pus de abscesos, leche mamítica, raspados de piel, orina, etc.) se utiliza habitualmente el agar sangre (preferentemente de oveja), medio en que puede apreciarse la capacidad hemolítica producido por las bacterias.

Existen varios medios selectivos para los estafilococos, como el agar sal manitol y el medio de Baird-Parker, que se utiliza principalmente para análisis de alimentos. Las EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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colonias aparecen normalmente a las 24 horas de incubación pueden alcanzar los 4 mm de diámetro. Estas colonias son redondas, lisas y brillantes y en agar sangre opacas, lo que las diferencia de las colonias de los estreptococos beta-hemolíticos, que son más pequeñas y translúcidas. Las colonias pueden ser o no pigmentadas mostrando en este caso distintas tonalidades, desde el crema pálido al amarillo vivo (Vadillo et al., 2002).

El criterio generalmente utilizado para la identificación de las especies patógenas es la capacidad de coagular el plasma. Esta capacidad se determina bien con una prueba de tubo, o bien con una prueba en portaobjetos. La prueba en tubo, permite detectar la coagulasa libre y se realiza añadiendo a 0.5 ml de plasma de conejo citratado o con EDTA un par de gotas bien en un cultivo líquido de 18 horas, o bien de una suspensión densa preparada a partir de un cultivo de agar. La lectura de la prueba se hace a las 4 y a las 24 horas.

La prueba de la coagulasa en parte permite detectar el clumping factor y se realiza preparando una suspensión muy densa de bacterias en una gota de agua depositada en un portaobjetos y sobre la suspensión se añade con un asa de platino una gota de plasma de conejo y se mezcla rotando el asa (Vadillo et al., 2002).

Staphylococcus aureus

El Staphylococcus aureus (S. aureus) es la principal causa de infección intramamaria en los rumiantes (Bayles et al.,1998; Yugueros et al.,1999; Zadoks et al., 2000; Mullarky et al., 2001) por lo que se le considera el agente causal más importante y frecuente de la mastitis bovina (Ferens et al., 1998; Lammers et al., 2000; Sordelli et al., 2000; Tollersrud et al., 2000; Fitzgerald et al., 2001; dos Santos et al., 2002).

Aunque varios patógenos bacterianos pueden causar la mastitis, el S. aureus es el primer agente etiológico en la mayor parte del mundo (Tollersrud et al., 2000), ha EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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surgido como el más prevaleciente, y una vez establecido en la glándula mamaria es muy difícil de erradicar (Sordelli et al., 2000) y causa las pérdidas económicas más considerables en la industria de la leche (Lammers et al., 2000).

En muchos países el S. aureus es un patógeno de la ubre, muy importante que causa la mastitis (Bjorland et al., 2001). En 1998 Smith, informo de un brote de mastitis causada por S. aureus, en el estado de Washington, en un hato lechero (Middleton et al., 2002); el S. aureus y las bacterias estreptococales son los agentes etiológicos más comunes involucrados en los casos clínicos y subclínicos de mastitis en los hatos lecheros de Nueva Zelanda (Douglas et al., 2000).

El S. aureus es el patógeno principal responsable de una amplia gama de infecciones agudas y crónicas. El primer paso en las infecciones por S. aureus es la adherencia a las diferentes superficies y colonización de tejidos del organismo infectado. Para este propósito el S. aureus presenta una familia de adherencias llamada MSCRMMs (componentes de la superficie microbiana que reconocen las moléculas adhesivas de la matriz).

Estas interacciones permiten al S. aureus adherirse a una variedad de líneas celulares y promover la invasión y muerte por apoptosis de células epiteliales infectadas. Otro paso en la colonización del S. aureus es la formación de una biopelícula. La formación de esta biopelícula es una inquietud importante en las infecciones porque protege a los microorganismos de los leucocitos y antibióticos, llevando a la infección crónica y septicemia. Fenómenos similares ocurren con otras bacterias patógenas, como Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Neisseria meningitisdis, Escherichia coli y Haemophylus influenzae (Cucarella et al., 2002).

El S. aureus se reconoce mundialmente como una causa frecuente de infecciones intramamarias subclínicas en las vacas lecheras (Riollet et al., 2001). El reservorio principal del S. aureus parece ser el cuarto infectado y la transmisión entre las vacas, EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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normalmente, ocurre durante la ordeña (Akineden et al., 2001), la interacción del S. aureus con las células de la glándula mamaria bovina es considerada esencial en el rol que desempeña en la patogénesis de la mastitis (Lammers et al., 1999).

Recientemente se ha demostrado que el S. aureus induce la apoptosis en las células epiteliales de la glándula mamaria bovina, indicando que este proceso pudiera estar involucrado en la persistencia o patogénesis de este patógeno (Wesson et al., 1998).

En recientes experimentos que evalúan la invasión y supervivencia intracelular del S. aureus en las células del tejido endotelial, epitelial y osteoblasto; se ha indicado que la supervivencia intracelular pudiera contribuir a la persistencia del patógeno, induciendo endocarditis, mastitis bovina y osteomielitis (Gresham et al., 2000).

El S. aureus es actualmente uno de los patógenos más difíciles de controlar porque puede extenderse rápidamente entre el hato y puede responder pobremente a una terapia antibiótica convencional (Soltys y Quinn, 1999); la naturaleza crónica de la mastitis bovina por S. aureus, indica que algunos productos o componentes de este patógeno pueden interferir en el desarrollo de la inmunidad protectora (Ferens et al., 1998).

Este patógeno puede causar muchas enfermedades en los humanos y animales (Fitzgerald et al., 2001), es el agente causal de muchas infecciones oportunas en los humanos y los animales (Yugueros et al., 1999). Las infecciones debidas al S. aureus es de la mayor importancia en la medicina veterinaria y humana (Zadoks et al., 2000). En el humano el S. aureus es un patógeno responsable de la septicemia, endocarditis y el síndrome del shock tóxico; ocasionando la mastitis en las vacas y ovejas (Fitzgerald et al., 2001).

El S. aureus exporta una gran variedad de enzimas, algunas de las cuales tienen factores de virulencia conocidos (Reed et al., 2001), algunas de estas enzimas son


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capaces de incrementar las características invasoras del microorganismo y lo protegen de los mecanismos corporales de defensa.

El S. aureus sigue siendo un patógeno persistente alrededor del mundo que causa serias infecciones. Las enfermedades que se han asociado con el S. aureus son diversas, yendo de las infecciones en heridas menores a las enfermedades más serias, incluso la endocarditis, osteomielitis y el shock séptico (Wesson et al., 1998).

Resistencia del Staphylococcus aureus a los antibióticos

La resistencia no es un fenómeno nuevo; al principio se reconoció como una curiosidad científica y luego como una amenaza a la eficacia del tratamiento. Sin embargo, el desarrollo de nuevas familias de antimicrobianos en décadas de 1950 y 1960, y las modificaciones de esas moléculas en las de 1960 y 1980 nos indujo a creer que siempre podríamos adelantarnos a los agentes patógenos. Al comenzar el nuevo siglo, estamos pagando muy cara esa complacencia. La generación de medicamentos nuevos se está estancando y son pocos los incentivos para elaborar antimicrobianos nuevos que permitan combatir los problemas mundiales de la farmacorresistencia (Patiño, 2008).

Las bacterias adquieren la capacidad de resistir la acción de los antibióticos a través de varios mecanismos como lo son:

La variabilidad genética La modificación de la permeabilidad de la membrana interna La extracción del compuesto y la inhibición enzimática La modificación del blanco ribosomal o la alteración de la composición y el contenido de glicoproteínas de la pared bacteriana. Esta resistencia es transmitida entre microorganismos de un mismo género (transmisión horizontal) y entre microorganismos de géneros diferentes (transmisión EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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vertical). A todo lo anterior se adiciona el hecho de que se dispone de escasos datos de susceptibilidad a los antimicrobianos y la vigilancia de la resistencia no se lleva a cabo en todos los países (Patiño, 2008)

La mastitis causada por S. aureus es casi imposible de controlar con terapia de antibióticos únicamente.

La efectividad de la terapia tiene un rango de un 20 a un 70%, dependiendo de si las infecciones son crónicas y/o acompañadas de formaciones grandes de tejido de cicatrizante. Sin embargo, muchas infecciones persisten, provocando manifestaciones clínicas durante el inicio de la lactancia. Los animales que presentan estos signos deben separarse del hato pues representan una reserva significativa de contagio a otras vacas.

El tratamiento con antibióticos en la lactancia es de poco beneficio. Sólo de un 10 a un 30% de los cuartos infectados serán curados. La infusión de drogas puede reducir temporalmente el conteo de células somáticas y hasta mejorar la apariencia de la leche en cuartos clínicamente

infectados, pero realmente no eliminan muchas

infecciones. Esto se debe a que los microorganismos quedan amurallados con el tejido cicatrizante el cual los protege de los antibióticos (Patiño, 2008).

El S. aureus también desarrolla una resistencia a ciertos antibióticos y puede producir una enzima (penicilinasa) que inactiva a la penicilina. Por eso el método para infecciones subclínicas usando terapia convencional durante la lactancia, no debe recomendarse.

Se han descrito a lo menos, tres mecanismos de resistencia del S. aureus a los Blactámicos, en muchas ocasiones relacionados entre sí: producción de B-lactamasas, fenómenos de tolerancia, y resistencia

por proteínas

fijadoras de penicilina

modificadas o supernumerarias, conocida como resistencia intrínseca a meticilina (Patiño, 2008). EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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Cuando se detecta una cepa resistente a oxacilina, ninguna otra penicilina resistente a penicilinasa, cefalosporina, combinación de B-lactámicos, con inhibidores de Blactamasa o incluso imipenem, serán eficaces para el tratamiento del S. aureus, independientemente de que las distintas cepas muestren sensibilidad in vitro en los estudios de laboratorio (Patiño, 2008).

FÁRMACOS EMPLEADOS PARA EL TRATAMIENTO DE LA MASTITIS BOVINA

Los antimicrobianos son sustancias producidas por fermentación de microorganismos o en forma sintética y que se utilizan para curar infecciones bacterianas, favorecen la recuperación de los animales enfermos y alivian el sufrimiento y las lesiones asociados con la enfermedad.

El tratamiento de los animales con antibióticos debe tener una adecuada relación costobeneficio, un claro ejemplo es el tratamiento de todas las glándulas mamarias de todas las vacas que finalizan lactación.

Las mastitis subclínicas por lo general no se tratan ya que realizando medidas de higiene y desinfección, buen ordeño y buen funcionamiento de la máquina de ordeño se corrigen estos problemas (Patiño, 2008).

Si bien existe una gran variedad de medidas de control de la enfermedad, la terapia con antibióticos desempeña un papel determinante en la eliminación de la mastitis bovina. La mayoría de las drogas antimicrobianas utilizadas son β-lactámicos, aminoglucósidos y macrólidos). La respuesta a estos antibióticos varía según el agente etiológico (Patiño, 2008; Pellegrino et al., 2011).


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Aminoglucósidos

Se denominan así, por estar formados por aminoazúcares unidos por enlaces glucosídicos. Su mecanismo de acción incluye la inhibición de la síntesis proteica bacteriana debido a la unión de la sub-unidad ribosómica 308 de la bacteria. Estos son captados activamente por la bacteria mediante un proceso que requiere condiciones aeróbicas. La resistencia bacteriana a estos antimicrobianos se desarrolla rápidamente y se produce como resultado de la modificación enzimática del fármaco en varios lugares. Un microorganismo resistente a un aminoglucósido puede ser todavía sensible a otro del mismo grupo. Tienen una rápida absorción por la vía intramuscular y subcutánea. Estos se distribuyen en los líquidos extracelulares, pero tienen una escasa acumulación en el líquido cefalorraquídeo. Se inactivan rápidamente en altas concentraciones de pus (Fuentes, 1992; Patiño, 2008). Los de mayor uso en el bovino son la gentamicina, estreptomicina y dihidroestreptomicina (derivado sintético de la estreptomicina).

Cefalosporinas

Este grupo está estrechamente relacionado con las penicilinas y tiene un núcleo 7– amino-cefalosporánico, siendo similar a su modo de acción, disposición fisiológica y toxicidad. Tienen una resistencia superior a la inactivación por las enzimas Blactamasas producidas por los estafilococos. Inhiben la formación de la pared celular (Meyer, 1982; Patiño, 2008).

Fenicoles

Son compuestos bacteriostáticos de amplio espectro y presentan acción contra bacilos gram-positivos y gram-negativos. Actúa interfiriendo con la síntesis proteica mediante el bloqueo de la síntesis en el ribosoma. Se combina competitivamente con la subunidad EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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ribosómica 50S, bloqueando la entrada de aminoácidos en la cadena peptídica en desarrollo. La conjugación del cloranfenicol tiene lugar en el hígado y la eliminación es principalmente por vía urinaria. Actualmente la utilización del cloranfenicol está limitada en México y otras partes del mundo debido a los casos de reacciones tóxicas, provocando particularmente discrasias sanguíneas. Este compuesto inhibe el metabolismo microsomal del fármaco en el hígado y por lo tanto prolonga los efectos de otros fármacos, que normalmente son eliminados del organismo por oxidación. Además de los efectos tóxicos de este compuesto, su utilización está restringida por su implicación en las resistencias transmisibles (Meyer, 1982; Patiño, 2008).

Macrólidos

Este grupo de componentes antimicrobianos posee un gran anillo lactónico. Son activos contra la mayoría de los microorganismos gram-positivos. La mayoría de los macrólidos son bacteriostáticos, pero en altas concentraciones y contra determinadas bacterias pueden ser bactericidas. Su modo de acción es por interferencia con la síntesis proteica por alteración de los ribosomas bacterianos (Sumano y Ocampo, 1997; Fuentes, 1992).

Penicilinas

Se distribuyen en los líquidos extracelulares, incluyendo las articulaciones, los líquidos de las heridas, la glándula mamaria y el feto en el animal gestante. Sin embargo, cuando se administra parenteralmente no alcanza el líquido cefalorraquídeo ni el ojo. En general presenta eficacia para la mayoría de las bacterias Gram-positivas como los estafilococos. Su mecanismo de acción interfiere con la síntesis de la pared celular bacteriana, siendo por tanto bactericida, es decir, interfiere con la síntesis de los polipéptidos necesarios para la pared celular y presenta su eficacia máxima contra las bacterias en rápido crecimiento. Presenta poco efecto contra las bacterias maduras que no están en división. Determinadas cepas de las bacterias estafilocócicas producen EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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una penicilinasa (B-lactamasa), que transforma la penicilina en ácido peniciloico inactivo. Este grupo de compuestos no son inactivados por la sangre, el pus, los autolisados tisulares, ni por un gran número de bacterias. En algunos casos se pueden observar reacciones de hipersensibilidad que van desde urticaria y prurito hasta anafilaxia aguda (Sumano y Ocampo, 1997).

Quinolonas

Son el grupo farmacológico de mayor desarrollo en la actualidad. Se distinguen tres generaciones con potencia antibacteriana y rasgos farmacológicos progresivamente mayores. Las bacterias resistentes a las quinolonas aparecen en clínica como resultado de la terapia con estos agentes. Su efecto citotóxico depende de que penetren a través de la membrana bacteriana y alcancen su diana celular (DNA girasa o topoisomerasa IV) para inducir la muerte de la bacteria. En principio, las resistencias a las quinolonas puede deberse a mutaciones que afecten cualquier paso de este proceso. Así, los mecanismos de resistencia bacteriana a las quinolonas pueden agruparse en tres categorías: a) Resistencia de tipo cromosómico que dan lugar a mutaciones en segmentos definidos de los genes que codifican la DNA girasa (especialmente en la subunidad A y la topoisomerasa IV, dando lugar a las QRDR (regiones-determinantesde resistencia-a quinolonas); b) Resistencia por alteraciones en la membrana externa bacteriana que disminuyen la presión intracelular del fármaco. Estas modificaciones se originan en alteraciones de los genes que codifican los canales de las purinas, lo que impide la entrada del quimioterápico en la bacteria; c) Resistencias basadas en la expulsión del antibacteriano desde el medio intracelular al extracelular por acción de transportadores endógenos activos (Sumano y Ocampo, 1997; Patiño, 2008).

Sulfamidinas-Trimetoprim

Las sulfonamidas son ácidos débiles y moderadamente solubles. Actúan interfiriendo con la síntesis de acido fólico a partir de acido paraminobenzoico (PABA). Dado que las EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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sulfonamidas actúan de esta forma, los gérmenes que pueden utilizar el ácido fólico transformado son insensibles. Ya que la síntesis de ácido fólico es necesaria para un rango amplio de bacterias, las sulfonamidas tienen un amplio espectro de acción. Su espectro incluye a bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. La frecuente utilización previa de sulfonamidas ha dado lugar a muchos gérmenes resistentes. Para evitar la resistencia se ha utilizado exitosamente la incorporación de trimetoprim, que actúa sinérgicamente con la sulfonamida bloqueando la síntesis de ácido fólico, por tanto esta asociación es eficaz contra un amplio rango de gérmenes. También aumenta la potencia utilizando mezclas múltiples (generalmente 3) de sulfonamidas las cuales ya se encuentran disponibles comercialmente (Sumano, 1997; Patiño, 2008).

Tetraciclinas

Tienen el espectro más amplio que todos los antibióticos y actúa bien contra los cocos Gram-positivos. Actúan interfiriendo la síntesis de proteica en la unidad ribosómica 30S, y en menor grado interfieren con la fosforilación oxidativa, con la oxidación de la glucosa y con permeabilidad de la membrana celular. Este grupo se distribuye ampliamente, atraviesan la placenta y alcanza el líquido cefalorraquídeo (Patiño, 2008).

DESVENTAJAS DE LOS ANTIBIÓTICOS EN SALUD PÚBLICA

Cada vez son más las pruebas científicas que relacionan la administración de antimicrobianos a los animales destinados al consumo y el desarrollo de resistencia de los agentes patógenos comunes (Patiño, 2008).

La resistencia de las bacterias a los antibióticos es un problema que tiene consecuencias para la salud animal y humana cuando los agentes patógenos se introducen en la cadena alimentaria. Grupos de expertos científicos tanto del Instituto de Medicina, la Sociedad Americana de Microbiología y la Organización Mundial de la EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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Salud han expresado preocupación acerca del incremento global de las resistencias (Patiño, 2008; Fedorka et al., 1998). En la pérdida de sensibilidad a un antibiótico intervienen varios factores. Las dos fuerzas principales son la prevalencia de genes de resistencia (que determinan proteínas que protegen a las bacterias de los efectos de los fármacos) y la difusión del uso de antibióticos. Si la flora bacteriana de una comunidad carece de genes que confieren resistencia contra un antibiótico, este podrá eliminar con éxito toda la infección, pero si en la flora existen genes de resistencia y la comunidad hace uso persistente de un antibiótico, las bacterias que escapen a la erradicación por ese fármaco harán acto de presencia y proliferarán y además la resistencia puede propagarse a lugares distantes.

Los antibióticos si bien son necesarios para el control de las infecciones bacterianas, pueden tener efectos indeseables sobre la ecología microbiana. Pudiendo producir cambios en las proporciones de las bacterias sensibles/resistentes a los antibióticos, tanto en el individuo sometido al tratamiento como en el medio y la comunidad en general (Stuart, 1998; Ruiz et al., 2001).

La contaminación de la leche con diferentes fármacos como son; antibióticos, antisépticos, promotores del crecimiento, etc., es una secuela frecuente posterior al tratamiento o prevención de enfermedades que afectan a los animales de producción. Existen pérdidas evidentes si se retiran de la ordeña de manera muy estricta y sin datos específicos a los animales tratados con fármacos. Por otro lado, la consecuencia de permitir la distribución de esos productos para la población, puede acarrear serios problemas de salud. Un claro ejemplo es la presencia de residuos antibióticos en la leche, puede inducir alergias y resistencias bacterianas; a otro nivel puede afectar los procesos de industrialización de la misma. Aunado a esto el aspecto que más temor causa es la incertidumbre de que aun no se sabe cuáles y qué tan graves efectos tendrán los residuos de tantos fármacos ingeridos de manera crónica. Por ejemplo, se ha estimado que la presentación de anemia aplástica en humanos se puede inducir con tan solo 1 ppm de cloramfenicol presente en productos de origen animal (Doyle, 2008; Patiño, 2008). EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA

Los clínicos en cualquiera de las áreas de la salud, dependen ampliamente de los datos microbiológicos de laboratorio para el tratamiento de sus pacientes. Por esto la importancia de las pruebas de sensibilidad a antibióticos, ya que proveen una información valiosa para las decisiones terapéuticas; y deben ser realizados en condiciones óptimas para su eficiente interpretación (National Committee for Clinical Laboratory Standars, 1999). Algunas de éstas son las siguientes:

1. Pruebas de difusión en gel de agar o método de Kirby - Bauer

Este método consiste en el cultivo de los agentes patógenos en medios apropiados para su crecimiento, en el cual se colocan antibióticos en discos que dependiendo de la concentración del antibiótico en este y de la sensibilidad del microorganismo al antimicrobiano, da como resultado zonas donde el crecimiento bacteriano es inhibido luego de varias horas de incubación (National Committee for Clinical Laboratory Standars, 1999).

Este método da como resultado datos cualitativos ordinales (sensible, intermedio y resistente), dichos resultados son la conclusión de varias consideraciones como la especie de microorganismo, la clase de antibiótico, concentración del antibiótico en el disco, el halo de inhibición del crecimiento (medido en mm) (Bauer et al., 1996).

2. Pruebas de dilución o concentraciones inhibitorias mínimas (C.I.M.)

La determinación de las Concentraciones Inhibitorias Mínimas (C.I.M.), para los patógenos específicos, provee datos, que conjuntamente con los parámetros farmacocinéticos de los agentes antibacteriales en el animal, permiten predecir la eficacia ―in vivo‖ del compuesto en el tratamiento de una enfermedad específica. Aunque existen regímenes terapéuticos para muchos agentes antibacteriales utilizados en el tratamiento de infecciones intramamarias, la sensibilidad del germen puede variar EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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de tal manera que es necesario replantear el esquema terapéutico; de acuerdo al patrón de sensibilidades desarrollado, y para esto las C.I.M. permiten a los veterinarios monitorear la sensibilidad antimicrobial de las cepas en los hatos lecheros (Watts et al., 1995).

La selección de los antibióticos se hace teniendo en cuenta el microorganismo a evaluar y los diferentes grupos farmacológicos que serian de primera elección para la terapéutica (de acuerdo con el espectro) y los resultados de los C.I.M. que se reportan con criterios de interpretación definidos como: sensible, intermedio y resistente.

2.1. Sensible: Esta categoría aplica a las infecciones por cepas que pueden ser apropiadamente tratadas con dosis de antibióticos recomendadas para ese tipo de infección y especie infectada.

2.2. Intermedio: Ésta categoría incluye aislamientos bacteriales, evaluados con agentes antibacterianos, cuyas C.I.M. se aproximan a los niveles alcanzables en tejidos y sangre, y para los que la tasa de respuesta puede ser más baja que los de las cepas sensibles. La categoría intermedia implica aplicabilidad clínica en los sitios corporales en donde la droga es fisiológicamente concentrada (por ejemplo, Quinolonas y Blactámicos en orina) o cuando altas dosis de la droga pueden ser usadas (por ejemplo B-lactámicos).

2.3. Resistente: Las cepas no son inhibidas por las concentraciones sistémicas usualmente alcanzables de un agente con régimen terapéutico normal y/o fallas atribuibles a mecanismos de resistencias (por ejemplo B-lactamasa) y cuya eficacia clínica no es confiable en estudios terapéuticos (National Committee for Clinical Laboratory Standars. 1999).

La determinación de las Concentraciones Inhibitorias Mínimas es una prueba con mejor poder predictivo de la eficacia ―in vivo‖ que las pruebas de difusión en gel de agar (Salomon et al., 1998). EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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Considerando pues lo anteriormente expuesto, el tratamiento de las mastitis bovina con antibióticos, es una práctica que debe hacerse con criterios profesionales debido a que son muchos los factores que intervienen no sólo para una eficiente terapéutica, sino también para la prevención en la generación de resistencia bacterial y la presencia de residuos de antibióticos en leche; problemas que competen no sólo a la salud animal sino también a la salud humana. Por tales motivos el desarrollo de un programa de control efectivo requiere un extenso conocimiento de la epidemiología de la mastitis bovina, incluyendo la evaluación de la susceptibilidad a los antibióticos de los microorganismos aislados de la glándula mamaria, así como programas de prevención (Ruiz et al., 2001).


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OBJETIVO El objetivo del presente estudio fue determinar la resistencia antibiótica de Staphylococcus aureus aislados de leche de vacas con mastitis de Téjaro, municipio de Tarímbaro, Michoacán.


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MATERIAL Y MÉTODOS

El presente trabajo se realizó de Septiembre de 2010 a Enero de 2011 en la comunidad de Téjaro, municipio de Tarímbaro Michoacán, la cual se encuentra ubicada en las coordenadas entre los paralelos 19°44‖ y 19°54‖ de latitud norte; los meridianos 101°03‖ y 101°17‖de longitud oeste; altitud entre 1 900 y 2 400 metros sobre el nivel del mar (INEGI, 2002).

Prueba de California y toma de muestras de leche

Antes de la toma de muestras y de realizar la prueba de California, los pezones fueron desinfectados con alcohol al 70% y secados con papel absorbente y el primer chorro de leche descartado.

La prueba de California (CMT), se realizó utilizando para ello una paleta de plástico, depositando en ella una muestra de leche de cada pezón, la cual se mezcló con un reactivo de nombre comercial Diagmastin (aquil-aril sulfonato de sodio más purpura de bromocresol), haciendo movimientos rotativos, la leche de los pezones infectados forman un gel, la consistencia del gel se evalúo en forma visual, por lo que los resultados fueron leídos como negativos, trazas, 1+, 2++, 3+++, y mastitis clínica.

Se recolectaron 484 muestras de leche, provenientes de 122 vacas en producción (de 16 establos). La toma de muestras se realizó de acuerdo a las instrucciones recomendadas por el National Mastitis Council (NMC) (1999). Es decir, se utilizó para ello tubos de ensayo estériles los cuales fueron llenados en dos tercios como máximo e identificados previamente con el número de vaca y pezón. La toma de muestra se hizo ejerciendo una sola vez una presión mínima del pezón. Posteriormente, las muestras fueron colocadas inmediatamente dentro de una hielera cerrada herméticamente y transportadas refrigeradas al Laboratorio de Bacteriología de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la UMSNH, en donde se mantuvieron a 4° C hasta su procesamiento al día siguiente durante un tiempo inferior a 18 horas de su recolección. EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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Aislamiento e identificación de cepas de S. aureus

Las muestras de leche se homogeneizaron y se sembraron en agar 110 estafilococos (Bioxon) y en placas de agar sangre de borrego (Agar sangre más sangre de borrego al 5%) y se incubaron durante 48 h a 37ºC. Los aislamientos fueron seleccionados de acuerdo con Sears

y McCarthy (2003), es decir, según su morfología, tamaño y

pigmentación de la colonia, prueba de catalasa, tinción Gram, prueba de coagulasa, así como también a la presencia y tipo de hemólisis. Las colonias presuntivas de pertenecer al género Staphylococcus se identificaron en base a su morfología y características microscópicas: tinción de Gram, producción de catalasa y coagulasa, crecimiento a 37ºC (Pellegrino et al., 2011). Los cocos Gram-positivos, catalasa, manitol, gelatinasa, y coagulasa positivos y que presentaron hemolisis, fueron clasificados como pertenecientes a la especie S. aureus.

Los casos de mastitis que mostraron al momento de realizar la prueba de California un conteo de células somáticas arriba de 200.000 cel/ml, con o sin aislamiento de microorganismo, se los consideró como afectados por mastitis subclínica. Por otro lado, las vacas que presentaron signos clínicos, leche con presencia de coágulos o sangre, alteraciones de la ubre (enrojecimiento, hinchazón, calentamiento, dolor) elevado conteo de células somáticas y aislamiento de microorganismos se les consideró como afectados por mastitis clínica.

Prueba de sensibilidad a antibióticos

Las cepas aisladas de S. aureus fueron analizadas con el método de difusión en disco de BIO RAD de acuerdo con Torutoglu et al. (2006). 3 a 5 colonias de cada cepa previamente identificada, fueron suspendidas en 2 ml de solución salina estéril a una densidad aproximadamente igual a la densidad del estándar 0.5 de McFarland. Enseguida, la suspensión bacteriana se homogenizó y se incubó a 37ºC por 24 horas. Posteriormente, un hisopo estéril seco de algodón fue colocado en la suspensión, EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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enseguida se quitó el exceso de caldo presionando y girando el hisopo contra el interior del tubo. La suspensión bacteriana fue inoculada sobre el agar Mueller-Hinton (Oxoid) con el hisopo estéril realizando estrías en todas direcciones con el fin de cubrirla completamente, de tal manera que la superficie entera del agar quedo cubierta. Posteriormente los discos que contenían los siguientes antibióticos: ampicilina (Bio-Rad, 10 μg), cefalotina (Bio-Rad, 30 μg), cefotaxima (Bio-Rad, 30 μg), ceftazidima (Bio-Rad, 30 μg ), cefuroxime (Bio-Rad, 30 μg), Dicloxacilina (Bio-Rad, 1 μg), eritromicina (BioRad, 15 μg), gentamicina (Bio-Rad, 10 μg), pefloxacina (Bio-Rad, 5 μg), penicilina (BioRad, 10 UI), tetraciclina (Bio-Rad, 30 μg), y trimetoprim/sulfametoxazol (Bio-Rad, 25 μg) fueron colocados en condiciones de esterilidad en la superficie del medio haciendo presión sobre estos cuidadosamente para asegurar el completo contacto con la superficie del agar e incubados aerobicamente a 37ºC por 18 horas. Los resultados fueron registrados como sensibles (S) o resistentes (R) por el diámetro del halo de inhibición de acuerdo a los estándares interpretativos de BIO-RAD (recomendaciones de la FDA y CLSI, 2008) (Cuadro 2). La cepa de referencia utilizada para los ensayos de susceptibilidad antibiótica fue la ATCC 25923 de S. aureus. Cuadro 2. Interpretación del diámetro de las zonas de inhibición para patógenos de interés veterinario Agente antimicrobiano Concentración Zona de inhibición (mm) Sensible Intermedio Resistente Ampicilina

10 μg

≥ 29

-

≤ 28

Cefalotina

30 μg

≥ 18

15-17

≤ 28

Cefotaxima

30 μg

≥ 23

15-22

≤ 14

Cefepime

30 μg

≥ 18

15-17

≤ 14

Cefuroxima

30 μg

≥ 23

15-22

≤ 14

Dicloxacilina

1 μg

≥ 13

11-12

≤ 10

Eritromicina

15 μg

≥ 23

14-22

≤ 13

Gentamicina

10 μg

≥ 15

13-14

≤ 12

Levofloxacina

5 μg

≥ 17

14-16

≤ 13

Penicilina

10 UI

≥ 29

-

≤ 28

Tetraciclina

30 μg

≥ 19

15-18

≤ 14

TrimetropimSulfametoxazol

25 μg

≥ 16

11-15

≤ 10

* Diámetros del halo de inhibición según BIO RAD (recomendaciones de la FDA y CLSI), 2010. Cuadro modificado de Pellegrino et al., 2011. EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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RESULTADOS y DISCUSIÓN

A partir del muestreo realizado a los 16 hatos lecheros, se obtuvieron 484 muestras de leche (ya que 4 cuartos estaban ciegos y no se consideraron) de las cuales se aislaron 102 cepas bacterianas correspondientes al género Staphylococcus. De éstas, 41 (40.2%) fueron identificadas como S. aureus (Cuadro 3), mientras que el resto 61 (59.8%) correspondieron a estafilococos coagulasa negativos (ECN), mismas que se obtuvieron de los casos de mastitis clínica y subclínica de los hatos lecheros de Téjaro Michoacán.

Cuadro 3. Resistencia antibiótica de S. aureus aislados de leche de vacas con mastitis. ________________________________________________ S. aureus (n= 41) ________________________________________________ Antibiótico Susceptible Resistente n % n % Ampicilina 32 78.4 9 21.9 Cefalotina 41 100 0 0 Cefotoxina 41 100 0 0 Cefepime 41 100 0 0 Cefuroxima 41 100 0 0 Dicloxacilina 41 100 0 0 Eritromicina 37 90.2 4 9.7 Gentamicina 41 100 0 0 Levofloxacina 41 100 0 0 Penicilina 29 70.7 12 29.2 Tetraciclina 40 97.5 1 2.4 Trimetropim41 100 0 0 Sulfametoxazol _________________________________________________

En el presente trabajo se determino la resistencia a antimicrobianos de uso frecuente en el tratamiento de la mastitis bovina de cepas de Staphylococcus aureus aisladas de muestras de leche provenientes de 16 establos lecheros de la población de Téjaro, Michoacán.


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Para evaluar los perfiles de resistencia de las cepas de S. aureus, se realizaron ensayos de resistencia in vitro frente a 12 agentes antimicrobianos de uso frecuente para el tratamiento de la mastitis bovina. De las 41 cepas de S. aureus estudiadas, 26 (63.41%) fueron resistentes a cuatro antibióticos, de ellas el 100% fueron aisladas de vacas con mastitis subclínica. El 29.2% (12) del total de las cepas aisladas de S. aureus fueron resistentes a la penicilina, 21.9% (9) a la ampicilina, 9.7% (4) a la eritromicina y solamente el 2.4% (1) de las cepas resultaron resistentes a las tetraciclinas (Cuadro 1).

El análisis del comportamiento de las cepas de S. aureus aisladas frente a los antimicrobianos de uso frecuente en mastitis bovina, mostró que el porcentaje de resistencia encontrado para penicilina (29.2%) fue superior a lo encontrado por Faría et al. (2005) en Venezuela (13%), y similar en comparación con lo informado por San Martín. (2006) en Chile; Reinoso et al. (2008), y Pellegrino et al. (2011) en Argentina, quienes informaron un 26%, 28% y 22.2%, respectivamente.

Este mismo resultado de resistencia a la penicilina fue relativamente menor a lo reportado por Bezek, (1998) en un estudio realizado con vacas con mastitis en Estados Unidos (44%), por Gentilini et al. (2002) en Argentina (40%), e inferior a lo observado por Malinowski et al. (2002) en Polonia (66.7%), por Ruiz et al. (2001) en Colombia y por Mylus et al. (1998) en Finlandia (50%).

Lo anterior, puede ser debido a que el S. aureus es una bacteria que desarrolla rápidamente resistencia a antibióticos como la penicilina, sobre todo posterior a su uso terapéutico en terreno como es el caso de los tratamientos de mastitis bovina, debido al aumento de la presión de selección sobre las susceptibles lo que es de gran preocupación en Medicina Veterinaria (Betancourt et al., 2003).

Esta resistencia observada en este estudio y en diversas investigaciones realizadas a nivel mundial en donde reportan este fenotipo de resistencia como el más comúnmente observado en cepas de origen bovino, también puede ser debido a que este antibiótico EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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representa el principal antibiótico recomendado para el tratamiento de la mastitis en las vacas (Li et al., 2007; Turutoglu et al., 2006; Guardabassi y Courvalin, 2006).

Por otro lado, la resistencia observada en este estudio para ampicilina (21.9%) fue inferior a lo encontrado por Ruiz et al., 2001) en Colombia (71.4%).

Debido a que la ampicilina pertenece a un extenso grupo de penicilinas conocido como aminopenicilinas, similares en espectro de actividad a las penicilinas naturales, pero más resistente a betalactamasa. Los resultados muestran que la actividad de este antimicrobiano fue menos afectada que la de la penicilina, lo que concuerda con otros autores (Betancourt et al., 2003).

En cuanto a los resultados de resistencia a eritromicina el valor obtenido (9.7%) se encuentra por encima de lo obtenido por Valero et al. (2010) en Venezuela (3.7%), y fue similar a lo observado por Valero et al. (2010) y por Gentilini et al. (2000) en Argentina (11,6%). Sin embargo, la resistencia a este macrólido está por debajo de los resultados encontrados por

Aslantas et al. (2006) en Hatay (28%), por Patiño, (2008) en

Michoacán y por Adwan, (2006) en Palestina (40.9%).

Los resultados del presente estudio sobre la resistencia a tetraciclinas del 2.4% (1/41 cepas), son comparables a los obtenidos por Pitkälä, et al. (2004) en Finlandia (5,1%) y por Anderson et al. (2006) en Carolina del Norte y Virginia (Estados Unidos de Norteamérica) (0,5%). Sin embargo, es menor a la reportada por Faría et al. (2005) previamente en la región (9,09%). Mientras que otras investigaciones efectuadas en diferentes países revelan un mayor porcentaje de resistencia a tetraciclina desde un 9 hasta un 67% (Ruiz et al., 2001; Adwan, 2006; Aslantas et al., 2006; Malinowski et al., 2002; Turutoglu et al., 2006).

Respecto a la sensibilidad de las cepas de S. aureus, se encontró que el 100% (41) de estas fueron sensibles a la cefalotina, cefotoxina, cefepine, cefuroxima, dicloxacilina, lo cual fue similar a lo obtenido en un estudio realizado por Morales y Huerta (2004), en un EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

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estudio realizado de sensibilidad al Ceftiofur, que es uno de los principios activos de mayor uso en medicina veterinaria. Lo anterior, probablemente se deba a que por el elevado precio de esta familia de antimicrobianos no sea uno de los principios activos de primera elección para el granjero y aun no se ha desarrollado tanta resistencia (Patiño, 2008).

En cuanto a gentamicina, investigadores en Argentina (François et al., 2000; Gentilini et al., 2000; Revelli et al., 2001,), Uruguay (Giannechini et al., 2002), Venezuela (Faría et al., 2005) y Estados Unidos (Trinidad et al., 1990; Owens et al., 1997) observaron también una sensibilidad total (100%) de las cepas de S. aureus, igual a lo obtenido en este estudio.

Asimismo, mostró el 100% de sensibilidad hacia el trimetoprim-sulfametoxazol igual a lo reportado por Myllys et al. (1998) y Ruiz et al. (2001). Sin embargo debemos tener en cuenta que la eficacia de estos medicamentos en ubre bovina es limitada, debido a su pobre distribución y la disminución de su potencia en medios lácteos (Ruiz et al., 2001). Por otro lado, en cuanto a tetraciclinas este estudio mostró un 97.5% de susceptibilidad similar a lo informado por Morales y Huerta (2004) y por Valencia y Ansalmeti, los cuales reportaron una sensibilidad del 100% a la tetraciclina de Staphylococcus aureus aislados de leche de vacas con mastitis subclínica en el estado de Veracruz, México (Patiño, 2008).


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CONCLUSIÓN

Se concluye que las cepas de Staphylococcus aureus aisladas en este trabajo mostraron mayor resistencia in vitro a los antibióticos de uso frecuente en la terapia de la mastitis bovina como son la Penicilina y Ampicilina.

Esta resistencia trae como consecuencia por un lado una disminución en la respuesta al tratamiento en caso de mastitis clínica y por el otro, la transmisión de bacterias resistentes a antibióticos a los consumidores a través de la cadena alimentaria, cuando se consumen productos elaborados a partir de leche cruda, por lo que en el tratamiento de los animales infectados por S. aureus, es importante determinar a través de un antibiograma la resistencia que estos presentan a los antibióticos y así aplicar el tratamiento adecuado.


34


LITERATURA CITADA

Adwan, G. 2006. Antibiotic resistance against staphylococcal isolates recovered from subclinical mastitis in the north of Palestine. Islam. Univ. J. 14: 1-9.

Anderson, K., Iyman, R., Bodeis-Jones, S., White, D. 2006. Genetic diversity and antimicrobial susceptibility profiles among mastitis causing Staphylococcus aureus isolated from bovine milk samples. AJVR. 67: 1185-1191.

Akineden, Ö., Annemüller, C., Hassan, A. A., Lämmler, C., Wolter, W. y Zschöck, M. 2001. Toxin Genes and other Characteristics of Staphylococcus aureus Isolates From Milk of Cows with Mastitis. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology.

Ariznabarreta, A., Gonzalo, C., San Primitivo, F. 2002. Microbiological Quality and Somatic Cell Count of Ewe Milk with Special Reference to Staphylococci. J. Dairy Sci. 85: 1370-1375.

Aslantas, Ö., Óztürk, F., Celebi, A., Açik, l., Ergün, Y. 2006. Characterization of Staphylococcus aureus strains isolated from subclinic bovine mastitis by protein patterns, antibiotic resistance and plasmid profile. Ankara Üniv. Vet. Derg. 53: 47-51.

Ávila, T. S. 2004. Mastitis en Ganado Bovino. Seminario Pre-Congreso del XXVIII Congreso Nacional de Buiatria, Morelia Michoacán, México.

Barkema, H. W., Schukken, Y. H., Lam, T. J. G. M., Beiboer, M. L., Benedictus, G., Brand, A. 1999. Management Practices Associated with the Incidence Rate of Clinical Mastitis. J Dairy Sci. 82: 1643–1654.

Barker, A. R., Schrick, F.N., Lewis, M. J., Dowlen, H. H., Oliver, S. P. 1998. Influence of Clinical Mastitis During Early Lactation on Reproductive Performance of Jersey Cows. J Dairy Sci. 81: 1285–1290. EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

35


Bauer, A. W., Kirby, W. M., Sherrisj, C. y col. 1996. Antibiotic susceptibility testing by standardized single disck method. American Journal Clinical Pathology. 45 : 493 - 496.

Bayles, K. W., Wesson, C. A., Liou, L. E. , Fox, L, K., Bohach, G. A., y Trumble, W. R., 1998. Intracelular Staphylococcus aureus escapes the endsome and induces apoptosis in epithelial cell. Infection and Immunity. 66: 336-342

Bedolla, C. C. y Castañeda, V. H. 2003. Agentes patógenos causantes de la mastitis bovina. Cuatro Vientos. No. 38:27-29.

Bedolla, C. C. 2011. Mastitis contagiosa. Monografias.com. 31 de Mayo. pp. 1-15.

Betancourt, O., Scarpa, C. y Villagrán, K. 2003. Estudio de resistencia de cepas de Staphylococcus aureus aisladas de mastitis subclínica bovina frente a cinco antibióticos en tres sectores de la ix región de chile (Nota Técnica). Revista Científica, FCV-LUZ / Vol. XIII, Nº 5, 413-417, 2003

Bezek, D. M. 1998. Genus identification and antibiotic susceptibility patterns of bacterial isolates from cows with acute mastitis in a practice populations. Journal American Veterinary Medical Association. 212 (3) : 404-406.

Bjorland, J., Sunde, M., y Steinar, W. 2001. Plasmid- Borne smr Gene Causes Resistance to Quaternary Ammonium Compounds in Bovine Staphylococcus aureus. Jornal of Clinical Microbiology. 39: 3999-4004.

Calvinho, L. F., Almeida, R. A. y Oliver, S. P. 1998. Potential virulence factors of Streptococcus dysgalactiae associated with bovine mastitis. Veterinary Microbiology. 61: 93-110.


36


Ceron-Muñoz, M., Tonhati, H., Duarte, J., Oliveira, J., Muñoz-Berrocal, M., JuradoGámez, H. 2002. Factors Affecting Somatic Cell Counts and Their Relations with Milk and Milk Constituent Yield in Buffaloes. J. Dairy Sci. 85: 2885-2889.

Correa, M. G. P. y Marin, J. M. 2002. O-serogroups, eae gene and EAF plasmid in Escherichia coli isolates from cases of bovine mastitis in Brazil. Veterinary Microbiology. 85: 125-132.

Cucarella, C., Tormo, M. A., Knecht, E., Amorena, B., Lasa, I., T. J. y Penadés, J. R. 2002. expression of the Biofilm-Associated Protein Interferes with Host Protein Receptors of Staphylococcus aureus and Alters the infective Process. Infection and Inmunity. 70: 3180-3186. De Mol, R. M. 2000. Chapter 1 ―A framework for automated dairy cow status monitoring‖. Automated detection of oestrus and mastitis in dairy cows. PhD. thesis. Wageningen University, Netherlands. pp. 1-13.

Djabri, B., Barielle, N., Beaudeau, F., Seegers, H. 2002. Quarter milk somatic cell count in infected dairy cows: a meta-analysis. Vet. Res. 33: 335-357.

Dos Santos, J. N., Netto dos Santos, K.R., Gentiline, E., Sordelli, D., de Freire Bastos, M. C. 2002. Phenotypic and genetic characterization of bacteriocin-producing strains of Staphylococcus aureus involved in bovine mastitis. Veterinary Microbiology. 85: 133144.

Douglas, L., Fenwick, S. G., Pfeiffer, D. U., Williamson, N. B., Holmes, C. W. 2000. Genomic typing of Streptococcus uberis isolates from cases of mastitis, in New Zealand dairy cow, usig pulsed – gel electrophoresis. Veterinary Microbiology.

Doyle, P. M. 2008. Dealing Whith Antimicrobial Resistance, Food Technology, En línea. http/:www.ift.org EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

37


Faría, R. J. F., Valero-Leal, K., D´Pool, G., García, A., Allara, M. 2005. Sensibilidad a los agentes antimicrobianos de algunos patógenos mastitogénicos aislados de leche de cuartos de bovinos mestizos doble propósito. Rev. Científica. FCV-Luz. Maracaibo. 15 (3): 227-234.

Fedorka-Cray, P. J., Dargatz, D. A., Wells, S. J. y col. 1998. Impact of antimicrobic use in veterinary medicine. Journal American Veterinary Medicine Association. 213 (12): 1739 – 1741.

Ferens, W. A., Davis, W. C., Hamilton, M. J., Park, Y. H., Deobald, C. F., Fox, L. and Bohach, G. 1998. Activation of bovine Lymphocyte Subpopulations by Staphylococcal Enterotoxin C. Infection and Immunity. 66: 573-580.

Fitzgerald, R. J., Monday, S. R., Foster, T. J., Bohach, G. A., Hartigan, P. J., Meaney, W. J., y Smyth, C. J. 2001. Characterization of a Putative Pathogenicity Island from Bovine

Staphylococcus

aureus

Encoding

Multiple

Superantigens.

Journal

of

Bacteriology. 183: 63-70.

François, S., Meregalli, S., Sutich, E. 2000. Mastitis bovina: tipificación de cocos Gram positivos y determinación de su sensibilidad a quimioterápicos. Disponible en Internet: http://www.e-campo.com.

Fuentes, H. V. O. 1992. Farmacología y Terapéutica Veterinarias, 2ª Ed, McGraw-Hill Interamericana, pp. 65-153.

Gallegos, S. A., y Moncada, C. J. N. 2011. Uso de extractos de semillas de cítricos para el control de la mastitis bovina. Tesis de Licenciatura. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo. Morelia, Michoacán. 47 pp.


38


Gentilini, E., Denamiel, G., Llorente, P., Godaly, S., Rebuelto, M., DeGregorio, O. 2000. Antimicrobial Susceptibility of Staphylococcus aureus Isolated from Bovine Mastitis in Argentina. J. Dairy Sci. 83, 1224–1227.

Gentilini, E., Denamiel, G., Betancor, A., Rebuelto, M., Rodriguez, F. M. De Torres, R. A. 2002. Antimicrobial Susceptibility of Coagulase-Negative Staphylococci Isolated from Bovine Mastitis in Argentina. J. Dairy Sci. 85, 1913–1917.

Giannechini RE, C Concha, A Franklin. 2002. Antimicrobial Susceptibility of Udder Pathogens Isolated from Dairy Herds in the West Littoral Region of Uruguay. Acta Vet. Scand. 43, 31-41.

Gresham, H. D., Lowrance, H. H., Caver, T. E., Wilson, B. S., Cheung, A. L., y Lindberg, F. P. 2000. Survival of Staphylococcus aureus Inside Neutrophils Contributes to Infection. The Journal of Immunology. 164: 3713-3722.

Guardabassi, l., y Courvalin, L. 2006. Modes and antimicrobial action and mechanisms of bacterial resistance. In: Antimicrobial resistance in bacteria of animal origin. Aarestrup, F. (Ed.). ASM. Press. Washington, DC. 1-19 pp. 2006.

Heringstad, B., Klemetsdal, G., Ruane, J., 2000. Selection for mastitis resistance in dairy cattle: a review with focus on the situation in the Nordic countries. Livestock Production Science. 64:95-106.

Hillerton, J. E. y Kliem, K. E. 2002. Effective Treatment of Streptococcus uberis Clinical Mastitis to Minimize the Use of Antibiotics. J. Dairy Sci. 85: 1009-1014.

Hockett, M. E., Hopkins, F.M., Lewis, M. J., Saxton, A. M., Dowlen, H. H., Oliver, S. P., Schrick, F. N. 2000. Endocrine profiles of dairy cows following experimentally induced clinical mastitis during early lactation. Animal Reproduction Science. 58: 241-251.


39


Hultgren, J. 2002. Foot leg and udder health in relation to housing changes in Swedish dairy herds. Preventive Veterinary Medicine. 53: 167- 189.

INEGI. (Instituto Nacional de Estadística Geográfica e Informática). 2002. Anuario Estadístico del Estado de Michoacán. Censo General de Población y Vivienda.

Lammers, A., Nuijten, P. J. M., Kruijt, E., Stockhofe-Zurwieden, N., Vecht, U. Smith. H. E. y van Zijdeveld, F. G. 1999. Cell tropism of Staphylococcus aureus in bovine mammary gland cell cultures. Veterinary Microbiology. 67: 77-89.

Lammers, A., Kruijt, E., van de Kuijt, C., Nuijten, P. J. M. y Smith, H. E. 2000. Identification of Staphylococcus aureus genes expressed during growth in milk: a useful model for selection of genes important in bovine mastitis. Microbiology. 146: 981-987.

Las Heras, A., Vela, A. I., Fernández, e., Legaz, E., Domínguez, L. y FernándezGarayzábal, J. F. 2002. Inusual Outbreak of Clinical Mastitis in Dairy Sheep Caused by Streptococcus equi subsp. Zooepidemicus. Journal of Clinical Microbiology. 40: 11061108.

Leigh, J. A. 1999. Streptococcus uberis: a permanent barrier to the control of bovine mastitis?. Veterinary Journal. 157(3): 225 -38.

Li, X., Mehrotra, M., Ghimire, S., Adewoye, l. 2007. Lactam resistance and lactamases in bacteria of animal origin. Vet. Microbiol. 121: 197-214. 2007.

Lin, J., Hogan, J. S. y Smith, K. L. 1999. Antigenic Homology of the Inducidle Ferric Citrate Receptor (FecA) of Coliform Bacteria Isolated from Herds with Naturally Occurring Bovine Intramammary Infections. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 6:920-927


40


Malinowski, E., Klossowska, A., Kaczmarowski, M., Lassa, H., Kuzma, K. 2002. Antimicrobial susceptibility of staphylococci isolated from affected with mastitis cows. bull. vet. inst. pulawy. 46: 289-294.

Meyer, L. J. A. 1982. Farmacología y Terapéutica Veterinaria, Hispano Americana, México, pp. 804-811.

Middleton, J. R., Fox, L. K., Gay J. M., Tyler, J. W. y Besser, T. E. 2002. Influence of Staphylococcus aureus Strain-type on Mammary Quarter Milk Somatic Cell Count and N-acetyl-â-D-glucosaminidase Activity in Cattle from Eight Dairies. J. Dairy Sci. 85:1133 –1140.

Mullarky I. K., Su, C., Frieze, N., Park, Y. H. and Sordillo, L. M. 2001. Staphylococcus aureus agr Genotypes with Enterotoxin Production Capabilities Can Resist Neutrophil Bactericidal Activity. Infection and Immunity. 69:45-51. Myllys, V., Asplund, K., Brofeldt, E., Hirvelä – Koski, V., Honknanen Buzalski, T. y col. 1998. Bovine mastitis in Finland in 1998 and 1995 – Changes in prevalence and microbial resistance. Acta vet Scand. 39 : 1 : 119 –126.

Nash, D. L, Rogers, G. W, Cooper J. B., Hargrove, G. L., Keown, J. F. 2002. Relationships Among Severity and Duration of Clinical Mastitis and Sire Transmitting Abilities for Somatic Cell Score, Udder Type Traits, Productive Life, and Protein Yield. J. Dairy Sci. 85:1273-1284.

National Committee for Clinical Laboratory Standars (NCCLS). 1999. Performance standars for antimicrobial susceptibility testing; Ninth Informational Supplement. M100S9. 19 (1): 104 pp.

National Mastitis Council (NMC), INC. 1999. Laboratory Handbook on Bovine Mastitis. Revised Edition Walton Commons West Madison. 222 pp. EDUARDO AUSTREBERTO BEDOLLA GARCÍA

41


Organización Mundial de la Salud (OMS). 2001. Estrategia Mundial OMS de Contención de

la

Resistencia

a

los

Antimicrobianos,

en

línea,

from:

http//:www.who.int/emc/diseases/zoo/who_global_principles.html

Owens, W. E., Ray, C. H., Watts, J. L., Yancey. R. J. 1997. Comparison of Success of Antibiotic Therapy During Lactation and Results of Antimicrobial Susceptibility Tests for Bovine Mastitis. J. Dairy Sci. 80, 313-317.

Patiño, S. N. 2008. Resistencia a antimicrobianos del Staphylococcus aureus en vacas lecheras con mastitis subclínica de tres municipios del estado de Michoacán. Tesis de licenciatura. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo. Morelia, Michoacán. 37 pp.

Pellegrino, M. S., Frola, I. D., Odierno, L. M., Bogni, C. I. 2011. Mastitis Bovina: Resistencia a antibióticos de cepas de Staphylococcus aureus asiladas de leche (Bovine Mastitis: Antimicrobial resistance of Staphylococcus aureus strains isolated from milk). Revista electrónica de Veterinaria. Volumen 12 Nº 7. pp. 1-14.

Phuektes, P., Mansell, P. D., Dyson, R. S., Hooper, N. D., Dick, J. S. y Browning G. F. 2001. Molecular Epidemiology of Streptococcus uberis Isolates from Dairy Cows with Mastitis. Journal of Clinical Microbiology. 39:1460-1466.

Pitkälä, A., Haveri, M., Pyörälä, S., Myllys, V., Honkanen-Buzalski, T. 2004. Bovine mastitis in finland 2001-prevalence, distribution of bacteria, and antimicrobial resistance. J. Dairy Sci. 87: 2433-2441. 2004.

Radostits, O. M., Gay, C. C., Blood, D. C. y Hinchcliff, K. W. 2002. Medicina Veterinaria. Tratado de las enfermedades del ganado bovino, ovino, porcino, caprino y equino. 9a ed. Vol. 1. Ed. McGraw – HiII Interamericana. Madrid, España, pp. 711-718.


42


Reed, S. B., Wesson, C. A., Liou, L. E., Trumble, W. R., Schlievert, P. M., Bohach, G. A., Bayles, K. W. 2001. Molecular Characterization of a novel Staphylococcus aureus Serine Protease Operon. Infection and Immunity. 69:1521-1527.

Reinoso, E. B., Bettera, S. G., CL Odierno, C. L., Bogni, C. I. 2008. rep-PCR of Staphylococcus aureus strains isolated from bovine mastitis in Argentine. Braz. J. vet. Res. Anim. Sci. 44, 115-121.

Revelli, G. R., Rodriguez, C. G. 2001. Prevalencia de agentes etiológicos causales de mastitis bovina. Tecnología Láctea Latinoamericana Nº23.

Riffon, R., Sayasith, K., Khalil, H., Dubreuil, P., Drolet, M. y Lagacé J. 2001. Development of a Rapid and Sensitive Test for Identification of Major Pathogens in Bovine Mastitis by PCR. Journal of Clinical Microbiology. 39:2584-2589.

Riollet, C., Rainard, P. y Poutrel, B. 2000. Differential Induction of Complement Fragment and Inflammatory Cytokines during Intramammary Infections with Escherichia coli and Staphylococcus aureus. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 7:161167.

Rossitto, P. V., Ruiz, L., Kikuchi, Y., Glenn, K., Luiz, K., Watts, J. L. 2002. Antibiotic Susceptibility Patterns for Environmental Streptococci Isolated from Bovine Mastitis in Central California Dairies. J. Dairy Sci. 85:132-138.

Ruiz,

J. D., Ramírez, N. F., Arroyave, O. 2001. Determinación de concentraciones

inhibitorias mínimas a algunos antibióticos de las bacterias aisladas de glándula mamaria bovina en San Pedro de los Milagros, Antioquia. Rev Col Cienc Pec Vol. 14(2): 143-154.


43


Ruiz, S. H. y Romero, A. T. 2003. 10 Estrategias en la Prevención de la Matitis Bovina, Manual de Buenas Prácticas de Ordeño para el Aseguramiento de la Calidad de la Leche, AMMVEPA y AMMVEB.

Salomon, S. A., Watts, J. L., Aarestrup, F. M. y col. 1998. Minimum inhibitory concentrations for selected antimicrobialagents organisms isolated from the mammary glands of dairy heifers in New Zealand and Denmark. Journal Dairy Science. 81: 570 578.

San Martin B, Kruze, J., Morales, M. A., Agüero, H., Leon, B., Esppinoza, S., Iragüen, D., Puga, J., Borie, C. 2002. Resistencia bacteriana en cepas patógenas aisladas de mastitis en vacas lecheras de la V Región, Región Metropolitana y Xª Región, Chile. Arch. Med. Vet. 34(2), 1-18.

Saran, A. y Chaffer, M. 2000. Mastitis y calidad de leche, editorial Inter médica, Buenos Aires, Argentina.

Schrick, F. N., Hocket, M. E., Saxton, A. M., Lewis, M. J., Dowlen, H. H., Oliver, S. P. 2001. Influence of subclinical mastitis during early lactation on reproductive parameters. J. Dairy Sci. 84:1407-1412.

Sears, P. M. y McCarthy, K. K. 2003. Diagnosis of mastitis for therapy decisions. Vet Clin Food Anim. 19: 93-108.

Seegers, H., Fourichon, C. y Beaudeau, F. 2003. Production effects related to mastitis and mastitis economics in dairy cattle herds. Vet. Res. 34:475–491.

Smith, G. W., C. Peter D. y Morin, D. E. 2001. Ability of hematologic and serum biochemical variables to differentiate Gram-negative and Grampositive mastitis. J Vet Intern Med. 15:394-400.


44


Soltys, J. y Quinn, M. T., 1999. Selective Recruitment of T-Cell Subsets to the Udder During Staphylococcal and Streptococcal Mastitis: Analysis of Lymphocyte Subsets and Adhesion Molecule Expression. Infection and Immunity. 76:6293-6302.

Sordelli, D. O., Buzzola, F. R., Gomez, M. I., Steele-Moore, L., Berg, D., Gentilini, E. Catalano, M., Reitz, A. J., Tollersrud, T., Denamiel, G., Jeric, P. y Lee, J. C. 2000. Capsule Expression by Bovine Isolates of Staphylococcus aureus from Argentina: Genetic and Epidemiologic Analyses. Journal of Clinical Microbiology. 38: 846-850.

Stuart B L. La resistencia contra los antibióticos. Investigación y Ciencia. Mayo de 1998; 14 – 21.

Sumano, L. H. S., y Ocampo, C.L. 1997. Farmacología Veterinaria, 2ª Ed, McGraw-Hill Interamericana, México, pp. 95—189.

Tollersrud, T., Kenny, K., Reitz, A, J. Jr. y Lee, J.C. 2000. Genetic and Serologic Evaluation of Capsule Production by Bovine Mammary Isolates of Staphylococcus aureus and Other Staphylococcus spp. From Europe and the United States. Journal of Clinical Microbiology. Tomasinsig, L., De Conti, G., Skerlavaj, B., Piccinini, R., Maria Mazzilli, D’Este, F., Tossi, A. y Zanetti, M. 2010. Broad-Spectrum Activity against Bacterial Mastitis Pathogens and Activation of Mammary Epithelial Cells Support a Protective Role of Neutrophil Cathelicidins in Bovine Mastitis. Infection and Immunity. Vol. 78 (4): 1781– 1788.

Torutoglu, H., Ercelik, S., Ozturk, D. 2006. Antibiotic resistance of Staphylococcus aureus and coagulase negative staphylococci isolated from bovine mastitis. Bull. Vet. Inst. Pulawy. 50: 41-45.


45


Trinidad, P. S., Nickerson, C., Luther, D. G. 1990. Antimicrobial susceptibilities of Staphylococcal species isolated from mammary glands of unbred and primigravid dairy heifers. J. Dairy Sci. 73, 357-362.

Vadillo, S., Pìriz, S. y Mateos, E. 2002. Manual de Microbiología Veterinaria. Ed. McGraw-Hill-Interamericana. España.

Valero-Leal, K., Olivares, Y., Perozo, A., Valbuena, E., Boscán, L., Colina, G., Briñez, W. 2010. Susceptibilidad a los agentes antimicrobianos en cepas de Staphylococcus aureus aisladas en leche de bovinos con mastitis subclínica y leche de tanque. Revista Científica, vol. XX, No. 4, pp. 367-376.

Watts, J. L., Salmon, S. A. y Yancey, J. R. 1995. Antimicrobial susceptibility of microorganisms isolated from the mammary glands of dairy heifers. Journal Dairy Science. 78 (7): 1637 – 1648.

Wellenberg, G. J., van der Poel, W. H. M. y Van Oirschot, J. T. 2002. Viral infections and bovine mastitis: a review. Veterinary Microbiology. Article 2361.

Wesson, C. A., Liou, L. E., Todd, K. M., Bohach, G. A., Trumble, W. R. and Bayles., K. W., 1998. Staphylococcus aureus Agr and Sar Global Regulators Influence Internalization and Induction of Apoptosis. Infection and Immunity. 66:5238-5243.

White, L. J., Schukken, Y. H., Lam, T. J. G. M., Medley, G. F., Chappell, M. J. A. 2001. multispecies model for the transmission and control of mastitis in dairy cows. Epidemiol. Infect. 127:567-576.

Wolter, W., Castañeda, H., Kloppert, B., Zschöck, M. 2004. Mastitis bovina. Prevención diagnóstico y tratamiento. Editorial Universitaria. Universidad de Guadalajara. Mexico. 146pp.


46


Yugueros, J. M., Soriano, A. C., Salazar, M. S., Moral, C. H., Ramos, S. S., Smeltzer, M.S. y Carrasco, G. N. 1999. Rapid Identification and Typing of Staphylococcus aureus by PCR-Restriction Fragment Length Polymorphism Analysis of the aroA Gene. Journal of Clinical Microbiology. 37: 570-574.

Zadoks, R., van Leeuwen, W., Barkema, H., Sampimon O., Verbrugh, H., Schukken, Y. H. y van Belkum, A. 2000. Application of Pulsed-Field Gel Electrophoresis and Binary Typing as Tools in Veterinary Clinical Microbiology and Molecular Epidemiologic Analysis of Bovine and Human Staphylococcus aureus Isolates. Journal of Clinical Microbiology. 38: 1931-1939.

Zadoks, R. N., Allore, H. G., Barkema, H. W., Sampimon, O. C., Gröhn, Y. T., Schukken, Y. H. 2001. Analysis of an outbreak of Streptococcus uberis mastitis. J. Dairy Sci. 84(3): 590-599.

Zadoks, R. N. 2002. Molecular and mathematical epidemiology of Staphylococcus aureus and Streptococcus uberis mastitis in dairy herds. Dissertation Utrecht University, Faculty of Veterinary Medicine: 2-3, 239.

Zhao, X. y Lacasse, P. 2008. Mammary tissue damage during bovine mastitis: causes and control. J. Anim. Sci. 86:57–65.


47

Resist en CIA a de Staphylococcus Aureus Islados de Leche de Vacas Con Mastitis de Tjaro Michoacn

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