Pruebas bioquimicas E. coli.docx

ESCHERICHIA COL I REACCIONES BIOQUIMICAS DE ESCHERICHIA PRUEBA SIM ( PRUEBA DE SULFURO, SULFURO, INDOL Y MOVILIDAD])

Este medio se utiliza para comprobar la motilidad, la formación de H 2S y la producción de indol por parte de la bacteria. Se siembra por picadura La motilidad se pone de manifiesto por la turbidez difusa del medio de cultivo alrededor del canal de la picadura. La no motilidad se caracteriza por el crecimiento producido exclusivamente a lo largo de la línea de inoculación. La producción de H 2S se reconoce por el ennegrecimiento de la zona de crecimiento o del medio debido a la presencia del tiosulfato sódico. Para la demostración del indol se usa el Reactivo de Kovac, que manifiesta la degradación del triptófano por la enzima triptofanasa en indol, que se combina con el aldehído presente en el reactivo de Kovacs, para producir un color rojo.

PRUEBA SIM PARA E s c h e r i c h i a C o l i

Indol positivo

H2S (negativo)

Movilidad (+) Presencia de turbidez difusa en el medio

ROJO DE METILO/ VOGES – PROSKAUER

Prueba de rojo de metilo (RM ): Identifica especies de bacterias que producen ácidos a partir de glucosa. Detecta la fermentación ácido-mixta. Se acumulan ácidos (acético, fórmico, etc.), relativamente fuertes y bajan el pH del medio hasta 4-5. Dicho cambio de pH se detecta añadiendo un indicador (rojo de metilo) al cultivo. 99% de positividad para cepas de E. coli. produc ción de acetilac etilPrueba de Voges – Proskauer (VP): En esta prueba se detecta la producción metilcarbinol (acetoína), el cual se convierte a diacetilo en presencia de KOH y O2 atmosférico. El diacetilo es convertido posteriormente en un complejo rojo en presencia de α-naftol y creatinina. La producción de acetoína es una vía alternativa del metabolismo del ácido pirúvico, donde se producen cantidades pequeñas de ácidos mixtos que pueden ser insuficientes para dar una prueba RM positiva. Por este motivo, la mayoría de las especies de la familia Enterobacteriaceae son VP positivo y RM negativo y viceversa. Esta prueba es negativa para cepas de E. coli.)

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MIO MEDIO

Movilidad Esta prueba determina la movilidad de los bacilos fermentadores.95% de positividad para cepas de E. coli . Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas alla de la linea de siembra. Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra Ornitina decarboxilasa 5% de positividad para Ornitina. Resultado positivo: color púrpura Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color vialáceo en la superficie del modelo. Prueba indol 98% de positividad para esta prueba en E. coli . Resultado positivo: color rojo. Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento

CITRATO DE SIMMONS Esta prueba determina la capacidad de un microorganismo de utilizar el citrato de sodio como única fuente de carbono para el metabolismo y crecimiento. El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico.. Positivo: crecimiento bacteriano con un intenso color azul en el pico de flauta Negativo: ausencia de crecimiento y permanencia del color verde del medio de cultivo

1% de positividad para cepas de E. coli.





TSI Superficie alcalina/profundidad ácida (pico rojo/fondo amarrillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa

Superficie ácida/profundidad ácida (pico amarillo/fondo amarrillo): el microorganismo fermenta la glucosa, lactosa y/o sacarosa Superficie alcalina/profundida alcalina (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo no es fermentador de azucares. La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo indican que el microorganismo produce gas.

El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce H 2S

LIA El color del pico es púrpura al igual que el color de la base del tubo (todo el medio es de color púrpura), esto nos indica que no hubo cambio en el medio, por lo tanto la descarboxilacion de la lisina es positivo. La producción de sulfuro de hidrógeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro de hierro. Es negativo en la producción de ácido sulfhídrico y positivo en la lisina descarbosilaxa en E. Coli.





UREASA Los microorganismos que hidrolizan la urea a través de la enzima ureasa, liberan amoníaco lo cual produce un cambio de color rojo en el medio. El agar urea de Christensen permite la detección de menores cantidades de amoníaco para aquellos microorganismos que producen menores cantidades de ureasa se evalúan con este método. 1% de po sitividad para esta prueba de hidrolisis d e urea en E. coli. Prueba de Ureasa: su resultado es Negativo ( co lor amarillo).

PRUEBA DE FENILALANINA DESAMINASA La determinación de la enzima fenilalanina desaminasa es útil para diferenciar inicialmente a las especies de: Proteus, Morganella y Providencia de otros bacilos gram negativos. Positivo: desarrollo de color verde pálido a intenso en el pico de flauta y en el líquido de condensación Negativo: sin cambio de color. El medio permanece amarillo debido al color del reactivo 0% de positividad para cepas de E. coli.

MOELLER MEDIO BASE PARA DECARBOXILASAS Muchas especies bacterianas poseen enzimas que tienen la capacidad de descarboxilar o de hidrolizar aminoácidos específicos entre ellos la arginina, lisina, ornitina en pruebas específicas, liberando animas de reacción alcalina y CO 2.





Arginina deshidrolasa (-)

Ornitina descarboxilasa (+)

Lisina descarboxilasa (+)

PRUEBA DE GELATINASA Determina la producción de la enzima gelatinasa, la cual produce la hidrólisis de la gelatina. Positivo: la gelatina se mantiene liquida al sacarla de la nevera, negativo: la gelatina se solidifica E. coli es es negativa para esta

prueba

PRUEBA DE FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS: Uso del caldo de base púrpura de bromocresol conteniendo un determinado sustrato a una concentración del 1% para la determinación de la fermentación de carbohidratos y alcoholes para especies de la familia Enterobacteriaceae.





D-Sorbitol 94% de positividad. Lactosa 95% de positividad. Sacarosa 50% de positividad. D-Manitol 98% de positividad.

D-Adonitol 5% de positividad. L-Arabinosa 99% de positividad. Maltosa 96% de positividad.

Positivo: el medio se ve amarillo, igual a la producción de ácidos a partir de la fermentación, igual a la utilización de carbohidratos. Puede haber una producción de gases (acumulación de gases en el tubo de Durham) Negativo El medio se me rojo (pH se quedó igual o aumentó). Se producen sustancias alcalinas. LA bacteria utilizo peptonas.

CALDO ROJO DE FENOL CON DULCITOL Para identificación bioquímica de microorganismos en base a su capacidad de fermentar el dulcitol.El dulcitol es el carbohidrato de prueba y su fermentación se manifiesta por un cambio de color del indicador rojo de fenol, que vira de rojo a amarillo

Escherichia coli Positivo +, en la fermentación de dulcitol

CALDO DE ROJO FENOL CON ADONITOL Ó FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS Adonitol Escherichia Escherichia coli crece en caldo de rojo fenol con Adonitol .Se incubaron incubaron aeróbicamente durante 24 horas a 35 grados. C. El crecimiento y un cambio de color amarillo era indicativa como positivo para fermentación de adonitol. La burbuja en el tubo Durham era indicativa de la producción de gas

D-Adonitol 5% de positividad

microoganismos de E. Coli.







microorganismo fermenta Superficie ácida/profundidad ácida (pico amarillo/fondo amarrillo): el microorganismo la glucosa y lactosa

Superficie alcalina/profundidad alcalina (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo no es

fermentador de azucares. La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo indican que el microorganismo produce gas. el ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce H 2S

CALDO BÁSICO ROJO DE FENOL Y CARBOHIDRATOS Se pueden utilizar principalmente rafinosa .Esta prueba determina la capacidad de un organismo de fermentar (degradar) un carbohidrato especifico incorporado a un medio basico. Las bacterias que fermentan un hidrato de carbono son por lo general anaerobios facultativos. Este proceso se detecta observando cambios de color en indicadores de pH a medida que se forman productos ácidos Acido: color color amarillo amarillo Alcalino: color color rojo





presencia de lactosa y ausencia de glucosa. Por lo tanto, se requiere que las bacterias hayan sido crecidas en un medio con lactosa como el Agar TSI o el Agar MacConkey. Positivo: observación de color amarillo en la suspensión. Negativo: la suspensión permanece sin cambio de color. Escherichia Coli es positiva para esta prueba

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