Practica 6 Pruebas Bioquimicas

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE INGENIERÍA CAMPUS GUANAJUATO.

Laboratorio de Microbiología

REPORTE DE PRÁCTICA #6:

“

”

Pr Pr u ebas Bi oquími cas para par a identi f i car bacteri as

Equipo # 3 González Cervantes Nancy Ivette Villanueva Fernández María Goretty Hernández Arrona Jesús Alejandro Loredo Vázquez María María Guadalupe Guadalupe Monzerrat Monzerrat

Grupo: 4FM1

Fecha de realización: 25/septiembre/2014 25/septiembre/2014 Fecha de entrega: entrega: 9 /octubre/2014 /octubre/2014

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OBJETIVOS 

Identificar diferentes especies de bacterias, a través de su metabolismo celular.

INTRODUCCIÓN Los procedimientos que se llevan a cabo para la identificación de bacterias van desde los que son simplemente descriptivos que incluyen morfología y tinción, pasando por las pruebas bioquímicas simples las cuales sirven para la detección d etección de productos metabólicos o de una determinada reacción enzimática, hasta llegar a técnicas muy sofisticadas, tal como el cálculo del porcentaje G+C en bacterias o el empleo de sondas de ADN. Un proceso profundo para la identificación bacteriana contaría con los siguientes pasos: 1. Características macroscópicas. 2. Características microscópicas. 3. Condiciones de crecimiento. 4. Propiedades bioquímicas. 5. Susceptibilidad a los antibióticos. 6. Estructura antigénica (serotipia) y fagotipia. 7. Composición química. 8. Producción de bacteriocinas. 9. Patogenicidad. 10. Composición del ADN Las pruebas bioquímicas indican una serie de características metabólicas que, en conjunto permiten diferenciar unas bacterias de otras. En otras palabras el empleo de pruebas bioquímicas permite identificar de manera altamente precisa muchas cepas, estas pruebas del metabolismo bacteriano son hechas especialmente para cada bacteria. (García. S, et al, 2000) La mayoría de las pruebas utilizadas para estudiar la actividad bioquímica o metabólica de bacterias, se lleva a cabo mediante el cultivo en un medio con sustrato para la obtención de colonias aisladas, a las cuales posteriormente se les realizara pruebas bioquímicas, y después de uno o dos días de incubación pueden interpretarse los resultados obtenidos. (García. S, et al, 2000)

Fermentación de carbohidratos: La fermentación es un proceso metabólico de óxido-reducción el cual ocurre en un medio ambiente anaerobio, en el que en vez de utilizar oxígeno se utiliza un sustrato orgánico que

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sirve como el aceptor final de hidrógeno (electrones). En pruebas bacteriológicas este proceso se detecta observando cambios de color en indicadores de pH a medida que se forman productos ácidos. (Bailón, 2003) Aquellas bacterias que logran fermentar un hidrato de carbono por lo general son anaerobios facultativos. Por medio de este proceso de fermentación un hidrato de carbono es degradado y descompuesto en dos moléculas de carbono, las cuales son llamadas triosas, estas son nuevamente degradadas en un número de compuestos de 1, 2, 3 y 4 carbonos. Los resultados varían de acuerdo a cada especie bacteriana, las condiciones en las que se encuentra el medio ambiente y del sistema enzimático existente en la especie. (Collins. C. H. 1989) Al utilizarse un indicador de pH con determinado hidrato de carbono se puede determinar si una bacteria ha degradado el mismo en varios productos terminales, observando un cambio de color visible en el medio. Esta prueba da positivo si presenta una coloración amarilla, en cambio es negativa si presenta una coloración rosa-rojizo. (Bailón, 2003)

Prueba de TSI: La prueba de agar con hierro de Kliger/ azúcar triple y hierro o TSI determina la capacidad de una bacteria para atacar un especifico hidrato de carbono que se encuentre en un medio de desarrollo basal, además determina la posible producción de ácido sulfhídrico. La prueba es positiva para la producción de ácido sulfhídrico si se observa un precipitado negro (sulfuro ferroso) en todo el fondo, el cuál enmascara la acidez. La prueba es positiva para glucosa si se puede observar una coloración amarilla en el fondo, es negativa si no se observa ningún cambio de coloración. La prueba es positiva para sacarosa y lactosa si en la superficie puede observarse una coloración amarilla, en cambio sí hay una coloración roja en la superficie es negativa. (Mac Faddin, 2000)

Prueba de LIA: Esta prueba se realiza con medio de agar lisina hierro el cual posee una coloración violeta y debe estar entubado en pico de flauta. Se debe sembrar sobre la superficie inclinada por picadura y se deja incubando a una temperatura de 35°-37° C en un tiempo de 18-24 horas. La prueba de la descarboxilación de la lisina es positiva si la pendiente del pico de flauta y el fondo tienen una coloración violeta, en cambio la prueba es negativa si el fondo tiene coloración amarilla y la pendiente tiene una coloración violeta. (Guillem, 2005) La prueba de desaminación de la lisina es positiva si se observa un color rojo vinoso en la superficie inclinada, la prueba es negativa si hay ausencia de coloración rojiza en la

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pendiente. La prueba de producción de H2S es positiva si hay ennegrecimiento del medio y es negativa si hay ausencia de ennegrecimiento. (Guillem, 2005)

RESULTADOS Y DISCUSIÓN A continuación se muestran los resultados obtenidos de las diferentes pruebas bioquímicas que se hicieron en el laboratorio con diferentes microorganismos, incluyendo después de cada resultado la discusión respectiva de cada prueba.

1) Prueba de Hidrolisis de almidón. Después de inocular, se dejó la muestra con una temperatura de 37°C por 24 horas y se le agrego lugol para revelar los resultados (tabla 1). Tabla 1.- Resultados obtenidos por la prueba de hidrolisis de almidón, con los microorganismos Bacill us subtil is y Escheri chia coli . Después de haber agregado el reactivo de lugol. Microorganismo Imagen Resultado

Bacillus subtilis

Escherichia coli

Se formó un halo al añadirle lugol a la muestra, del microorganismo Bacillus subtilis. La muestra fue positiva.

No se formó un halo en la parte que contenía Escherichia coli al agregarle lugol. Siendo negativa esta prueba para dicho microorganismo.

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Discusión: El almidón es producido principalmente por plantas superiores, este compuesto de amilosa y amilo pectina. Diversas enzimas amiloliticas hidrolizan el almidón y sus productos. Sustrato: almidón (polímero de glucosa) Enzima: Amilasa (exoenzima). Producto: Glucosa. El lugol con el almidón al combinarse forman un precipitado color café-púrpura que desaparece cuando el almidón ha sido degradado. -

La amilasa: tiene la función de catalizar la reacción de hidrolisis de los enlaces 1-4 del componente alfa-amilasa al digerir el almidón y esto produce que se formen azúcares simples. (UNAM, 2012). Las alfa-amilasas son producidas por hongos y bacterias (Papaloapan, 2013). Algunos bacilos como Bacillus subtilis puede producir amilasa, produciendo dextrinas, glucosa y maltosa como producto de la hidrolisis. (Vega, 2011). Con respecto a E. coli se puede observar (tabla 1) que los resultados fueron negativos y se puede sugerir que esta bacteria no contiene la enzima amilasa para poder hidrolizar el almidón, en cambio esta misma bacteria fermenta la glucosa más no puede hidrolizar el almidón. (Papaloapan, 2013). En cambio se puede observar que la muestra que contiene Bacillus subtilis se muestra un halo claro sugiriendo que a partir del indicar del lugol desapareció el color café intenso debido a que hubo degradación del polisacárido. Como se puede observar en la imagen (figura 1) muestra el resultado de (Anda, 2011). Ellos realizaron su trabajo mediante Bacillus subtilis y E. coli sugiriendo los mismos resultados obtenidos en la práctica, utilizando como indicador el lugol para demostrar un halo claro en la degradación del almidón. Figura 1. Resultados de (Anda, 2011) Hidrolisis del almidón.

Realizando una segunda comparación con otros trabajos y discutiendo lo observado en los resultados obtenidos, según (Vega, 2011) realizo la prueba con B. subtilis obteniendo como resultado lo mostrado en la figura 2. Figura 2. Muestra los resultados de (Vega, 2011). Hidrolisis del almidón.

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Se puede analizar que se obtuvo positivo el experimento al compararlos con otros trabajos al cual se puede concluir contrastando con la literatura que la bacteria B. subtilis contiene la enzima amilasa, la cual, puede degradar el almidón convirtiéndolo en glucosa como su producto y esto se verifica por el halo claro que se produce, debido al indicador del lugol. Con respecto a E. coli no se observó ningún halo claro se mantuvo el halo obscuro el cual no se forma debido a que el lugol mas el almidón producen un precipitado obscuro café concluyendo que no se degrado dicho polisacárido.

2) Prueba en agar triple azúcar y hierro (TSI). Después de inocular, se incubo la muestra a una temperatura de 37°C por 24 horas. En esta prueba se observó más de una característica en los resultados, los cuales fueron; ausencia o presencia de glucosa, Lactosa y sacarosa, producción de H2S, producción de CO2 y H2. (Tabla 2)

Tabla 2.- Se observan los resultados de la prueba TSI con los microorganismos Bacill us subtil is y Escheri chia coli . Microorganismo Imagen Resultado -Glucosa positiva: Se observó la formación de un fondo amarillo. -Lactosa y sacarosa positiva: La superficie se ve puede Escherichia coli notar amarilla -Sin producción de H2S. -Producción de CO2 y H2, se observa muesca en la parte inferior del tubo.

Bacillus subtilis

-Glucosa positiva: Se formó un fondo amarillo. -Lactosa y sacarosa negativa: Se observa una superficie rojiza. -No hay producción de H2S. -Positivo para la producción de CO2 y H2, se observa una muesca en la parte inferior.

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Discusión: Hay microorganismos capacitados para fermentar glucosa, se manifiestan cuando pueden crecer en un medio nutritivo como el medio TSI. Sí el microorganismo elegido no puede fermentar la glucosa, no se observa cambio en el medio de cultivo, indicando ausencia de ácido. En esta prueba se puede identificar bacterias que fermentan glucosa, sacarosa y lactosa, como las que no fermentan ninguno de los azúcares mencionados anteriormente (Winn, 2008). Para Escherichia coli: La prueba de agar triple azúcar hierro resulto positiva en la fermentación de hidratos de carbono y negativa para la producción H2S (tabla 2). De acuerdo a lo encontrado en la literatura estos resultados para Escherichia coli son correctos puesto que esta bacteria es catalasa-positiva, oxidasa-negativa y anaerobio facultativo. Además fermenta lactosa y glucosa. (Rodriguez, 2009) Para Bacillus subtilis: El resultado de esta prueba fue correcto (tabla 2) pues de acuerdo a lo consultado debía salir negativo en la producción de H2S y positivo para la fermentación de hidratos de carbono. (Koneman, 2008).

3) Prueba en medio LIA (lysine iron agar) Se muestran los resultados después de inocular los microorganismos Escherichia coli, Salmonella y Proteus Vulgaris. Después de ser incubados durante 24 horas a 37°C. (Tabla 3). Tabla3.- Muestra los resultado a la prueba de LIA con los diferentes microorganismos; Escheri chia coli , Salmonella y Proteus Vu lgar is. Microorganismo Imagen Resultado

Escherichia coli

Desaminación de aminoácidos: negativa, la superficie es color purpura. Descarboxilación de aminoácidos: positiva, fondo del tubo purpura Sin producción de H2S.

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Salmonella

Proteus vulgaris

Desaminación de aminoácidos: negativa, la superficie es color purpura. Descarboxilación de aminoácidos: negativa, fondo del tubo oscuro. Producción de H2S se observa ennegrecimiento.

Esta prueba es negativa para la Desaminación de aminoácidos, Descarboxilación y producción de H2S.

Discusión: Esta prueba establece la capacidad enzimática de algunos microorganismos para descarboxilar y desaminar la lisina. El medio LIA, puede mostrar una producción de ácido sulfhídrico debido a que este medio tiene como componentes; citrato amónico férrico y Tiosulfato (Olivas, 2004). Para Escherichia coli: La prueba fue negativa (tabla 3) para descarboxilación de lisina y desaminación, siendo este un resultado correcto comparándolo con lo leído en la literatura. (Rodriguez, 2009) Para Salmonella: Miembro de la familia Enterobacteriaceae, anaerobia facultativa, catalasa positiva y oxidasa-negativa (tabla 3). De acuerdo a la literatura esta prueba debía salir positiva para la descarboxilación de la lisina, lo cual no sucedió y se pudo deber a contaminación del medio. En la producción de H2S el resultado fue el esperado. (Rodriguez, 2009)

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Para Proteus vulgaris: Los resultados fueron los esperados de acuerdo a la literatura (tabla 3), en esta prueba se tenía que volver rojo en el agar inclinado y acido en el fondo. (Forbes, Diagnostico Microbiologico, 2009)

4) Prueba Citrato Se muestran los resultados obtenidos después de la inoculación de los microorganismos E. coli y Bacillus subtilis y la incubación de estos de 24 hrs a una temperatura de 35°C (tabla 4). Tabla 4. Resultados observados de la prueba citrato con los microorganismos y Salmonella y la incubación de estos de 24hrs a una temperatura de Escheri chia coli 35°C (tabla 4). Microorganismo

Escherichi a coli

Salmonella

Imagen

Resultado

Negativo: No se observa ningún cambio de color, la coloración sigue color verde, por lo que no hubo ningún crecimiento.

Positivo: Se observa crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta.

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Discusión: Según la literatura la prueba de citrato se utiliza para determinar si los microorganismos Escherichia coli y Salmonella son capaces de utilizar citrato como única fuente de carbono para el metabolismo y crecimiento, provocando alcalinidad. (Mac Faddin, 2000) El medio incluye citrato de sodio, un anión como única fuente de carbono y fosfato de amonio como única fuente de nitrógeno. (Mac Faddin, 2000) Algunas precauciones que se deben tomar es que el inoculo debe ser liviano, ya que si este es demasiado grande, compuestos orgánicos preformados dentro de la pared celular de las bacterias que están muriendo pueden liberar suficiente carbono y nitrógeno como para dar un resultado falso-positivo. (Bailón, 2003) Para Escherichia coli: La prueba fue negativa (tabla 4), esto debido a que no hubo ningún crecimiento o cambio alguno en el pico de flauta, demostrando que este microorganismo es incapaz de usar el citrato como única fuente de energía (carbono), comparándolo con la literatura esta prueba resulta negativa, por lo que nuestro resultado es correcto. (Mac Faddin, 2000) Para Salmonella: La prueba fue positiva (tabla 4) observándose un color azul intenso en el pico de flauta, lo cual quiere decir de acuerdo a lo leído en la literatura, que este microorganismo es capaz de metabolizar el citrato como única fuente de carbono , mediante la condensación de acetilo con coenzima A y oxalacetato. (Bailón, 2003)

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5) Prueba Rojo de metilo. Se muestran los resultados obtenidos después de la inoculación de los microorganismos E. coli y Bacillus subtilis y la incubación de estos de 24 hrs a una temperatura de 35°C (tabla 5). Tabla 5. Resultados observados de la prueba rojo de metilo con los microorganismos . Escheri chia coli y Bacillu s subtil is Microorganismo Imagen Resultado

Sin inocular

Escherichia coli

Bacillus subtilis

Se observa únicamente el medio de cultivo MR/PV de cada tubo, con un color amarilloso.

Positivo: Una vez ya pasado el tiempo de incubación. Se observa un color rojo brillante en la superficie del tubo, justo cuando se agrega el indicador rojo de metilo.

Negativo: Una vez ya pasado el tiempo de incubación. Se observa un color amarillo en la superficie del tubo, justo cuando se agrega el indicador rojo de metilo.

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Discusión: La prueba se hizo para diferentes microorganismos y después de colocar el indicador de pH rojo de metilo se pudieron ver los cambios de color en el medio, esto sucede ya que se forman productos ácidos (Bailón, 2003). La finalidad de esta prueba ya que es cuantitativa, es poder establecer la concentración de acidez o alcalinidad del microorganismo, y puede determinarse cuando el organismo fermenta la glucosa, debido a las variaciones en las enzimas que se encuentran en el metabolismo de los microorganismos (Winn, 2008). Para E. coli, se apreció un color rojo brillante (tabla 5), ya que este microorganismo es MR positiva, puede conservar una alta concentración de iones hidrogeno. Además de que este microorganismo le gana al sistema buffer fosfato del medio. (Mac Faddin, 2000). Por lo tanto la prueba fue positiva, ya que hubo una producción de ácidos lo que originó un pH bajo (menor a 4.4). (Forbes, 2007) Se mantendrá un color rojo con un pH menor a 4.4 Para Bacillus subtilis, se observó color amarillo (tabla 5), ya que este es un microorganismo RM negativo, que si tienen producción de ácidos, pero tienen menor concentración de iones hidrógeno. (Mac Faddin, 2000). Ya que se metabolizaron los productos de fermentación por medio de descarboxilación para producir acetoína, esta hace que se reduzca la acidez y aumente el pH (mayor a 5.5) resultando una prueba negativa.

6) Prueba de ureasa Se muestran los resultados después de una incubación a 37°C por 24 horas, de los microorganismos Proteus vulgaris y Escherichia coli. Produciéndose un cambio de color. (Tabla 6) Tabla 6.- Se observan los resultados después de hacer la prueba de ureasa de los microorganismos; Proteus vulgar is y Escheri chia coli . Microorganismo Imagen Resultado

Proteus vulgaris

Resultado positivo debido al cambio de color, aunque no se consiguió un color rojo fuerte pero cambio de color a rosa.

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Escherichia coli

Medio nutritivo

No hubo cambio de color resultado negativo.

Tubos antes de inocular con los microorganismos para la prueba de urea.

Discusión: La ureasa ataca el enlace entre el carbono y nitrógeno de la urea produciendo CO2, agua y amoníaco. Usualmente se utiliza un indicador rojo fenol, puesto que este cambia de color de amarillo cuando se encuentra en un ambiente alcalino y toma un color rojo al estar en un ambiente ácido. Esta prueba es útil para distinguir Proteus de otras bacterias entéricas Gram negativas. Esta prueba indica que existe la enzima ureasa y se conoce debido al cambio de color del indicador debido a la disminución del pH, puesto que la urea siendo una base y al reaccionar con la ureasa forma amoniaco siendo este una base débil pero más ácido que la ureasa por eso el cambio de color si se forma este producto más el CO2 (Jr, 2012). Conforme a que esta prueba es específica para identificar bacterias que son Proteus se obtuvo un resultado positivo al utilizar Proteus vulgaris (Tabla 6) debido al cambio de color (rosa), como ya se explicó se puede concluir que dicho microorganismo contiene la enzima ureasa obteniendo un cambio en el color de la muestra. Este microorganismo es anaeróbico en forma de bacilo se encuentra en el tracto intestinal de animales y seres

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humanos, es un patógeno oportunista y causa infecciones urinarias, de heridas y abcesos hepáticos. (Ecured, 2009). Al analizar comparar con otros trabajos los resultados obtenidos, según (salud, 2009) obtuvieron los resultados mostrados en la figura 3 utilizando Proteus vulgaris y E. coli de igual manera que se utilizó en la práctica, la única diferencia es el color de la muestra negativa conforme al color obtenido y esto se puede discutir por contaminación en el medio, aunque en conclusión se obtuvieron resultados claros. Concluyendo que las bacterias de genero Proteus pueden generar una enzima ureasa para degradar la urea y se explica por el cambio de color del pH básico terminando a un pH ácido (Amarillo a rojo). Figura 3.- muestra los resultados de (Ecured, 2009) en la prueba de urea.

7) Prueba MIO Se muestran los resultados obtenidos después de la inoculación de los microorganismos Proteus vulgaris, Salmonella y Escherichia coli y la incubación de estos de 24 hrs a una temperatura de 35°C (tabla 7). Tabla 7. Se observan los resultados después de hacer la prueba MIO de los microorganismos; Proteus vul gari s, Salmonell a y Escheri chia coli . Microorganismo

Proteus vul gari s

Imagen

Resultado Movilidad: Positivo, se observa diseminación a partir de la línea de siembra (turbidez). Descarboxilación de Ornitina: Negativo, se observa color amarillo. Presencia de indol: Negativo no hay cambio de color.

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Salmonella

Escheri chi a coli

Movilidad: Negativo se observa crecimiento sobre la línea de siembra, no se observa diseminación. Descarboxilación de Ornitina: Negativo, se observa color amarillo. Presencia de indol: Negativo, no hay cambio de color. Movilidad: Negativo, se observa crecimiento sobre la línea de siembra, no se observa diseminación. Descarboxilación de Ornitina: Negativo, se observa color amarillo Presencia de indol: Positivo, hay desarrollo de color rojo fucsia.

Discusión: De acuerdo a la literatura la prueba MIO se utiliza para la identificación de Enterobacterias sobre la base de movilidad, la producción de ornitina descarboxilasa y de indol. (Bailón, 2003) La descarboxilación de ornitina mide la capacidad de un organismo para descarboxilar el aminoácido ornitina para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad. Este es el proceso mediante el cual las bacterias que poseen enzimas descarboxilasas específicas son capaces de atacar a los aminoácidos en su grupo carboxilo dando una amina o una diamina y anhídrido carbónico. La descomposición de los aminoácidos se produce anaeróbicamente, es irreversible, no oxidativo y requiere una coenzima común el fosfato de piridoxal. (Bailón, 2003)

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Prueba de la producción de indol: El triptófano es un aminoácido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar tres metabolitos principales: Indol, escatol e indolacético. (Mac Faddin, 2000) Diversas enzimas intracelulares que intervienen en éste proceso reciben el nombre de triptofanasas, lo que implica el sistema completo de enzimas vinculadas con la producción del indol. El principal intermediario en la degradación del triptófano es el ácido indolpirúvico. (Mac Faddin, 2000) La degradación del triptófano libera indol, ácido pirúvico, amoniaco y energía. La prueba de indol se basa en la formación de un complejo de color rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehído de p-dimetilaminobenzaldehído (sustancia activa del reactivo de Kovacs). (Mac Faddin, 2000) La formación de indol se produce solamente en aquellos organismos capaces de fermentar los hidratos de carbono. La elevada acidez producida por la fermentación de la glucosa puede impedir el crecimiento del organismo o inhibir la enzima. El agregado de triptófano estimula la producción de indol mientras que la glucosa la inhibe. (Mac Faddin, 2000) Movilidad. Determina si un organismo es móvil o inmóvil. Las bacterias tienen movilidad por medio de sus flagelos, que se encuentran principalmente entre los bacilos; sin embargo algunas formas de cocos son inmóviles. (Bailón, 2003) Las bacterias móviles pueden contener un solo flagelo o muchos; además su localización varía con su especie bacteriana y las condiciones de cultivo. A veces, las bacterias con movilidad producen variantes no móviles que parecen ser estables y raramente se revierten en formas móviles. Los organismos no móviles carecen de flagelos. (Bailón, 2003) Para los microorganismos Proteus vulgaris, Salmonella y Escherichia coli. La prueba para descarboxilación de ornitina resulto negativa para los tres, demostrando así como ya se mencionó antes que estos microorganismos no poseen enzimas descarboxilasas, por lo cual no tienen la capacidad de descarboxilar el aminoácido ornitina para formar una amina. Comparando con la literatura los resultados esperados de esta prueba están en lo correcto. Mientras que para la prueba de producción de indol dio negativo para Proteus vulgaris y Salmonella, en cambio para Escherichia coli. Fue positiva demostrando que esta tiene la capacidad de oxidar el aminoácido triptófano para producir indol, ácido pirúvico, amoniaco y energía mediante el uso de enzimas intracelulares (triptofanasas) y también de fermentar los hidratos de carbono.

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Finalmente para la prueba de movilidad Proteus vulgaris fue el único que dio positivo, demostrando que este puede poseer uno o más flagelos.

8) Licuefacción de gelatina. Se observan los resultados después de que los microorganismos; Staphylococcus aureus y Escherichia coli, estuvieron en incubación durante 96 horas (4 días) a una temperatura de 37°C. Pasado este tiempo se pusieron a refrigerar durante 20 minutos a -4°C. Tabla 8. - Se observan los resultados de la gelatina después de someterse a refrigerar, con los microorganismos; Staphylococcus aur eus y E scheri chia coli. Microorganismo Imagen Resultado

Staphylococcus aureus

Escherichia coli

Negativo: Después de que se puso a refrigerar el tubo con el medio de cultivo y el microorganismo este, permaneció solido

Negativo: Negativo: Después de que se puso a refrigerar el tubo con el medio de cultivo y el microorganismo este, permaneció solido

Discusión: Esta prueba es para microorganismos con la capacidad de producir enzimas proteolíticas (gelatinasas), que hidrolizan o licúan a la gelatina del medio de cultivo, y por ello se muestran cambios debido a los productos de degradación. Cuando se producen gelatinasas, ayudan a la identificación de bacterias fermentadoras. (Mac Faddin, 2000).

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Las proteínas naturales que se producen a menudo son muy grandes para entrar en una célula, y para que puedan ser usadas se deben de catabolizar a unas más pequeñas. El catabolismo de las proteínas se da por medio las gelatinasas en dos procesos; primero se forman Polipéptidos y después se forma una mezcla de aminoácidos aislados (Mac Faddin, 2000). Para los microorganismos; Staphylococcus Aureus y E. Coli Ambas pruebas resultaron negativas (tabla 8) ya que posiblemente estos microorganismo no son idóneos para producir enzimas proteolíticas, por lo que no pueden desdoblar a proteínas como la gelatina (Bailón, 2003). Aunque para el microorganismo Staphylococcus Aureus, la prueba también se observó negativa, este debió ser positivo en esta prueba, ya que si tiene la capacidad de secretar enzimas proteolíticas como las gelatinasas (Mac Faddin, 2000). Esta prueba pudo resultar negativa ya que este microorganismo pudo requerir más tiempo de incubación, incluso hasta 14 días, para poder presentar licuefacción de las gelatinasas. (Forbes, 2007).

CUESTIONARIO 1. Explicar el significado de la presencia o ausencia de un halo claro, al agregar el lugol, en las pruebas de hidrolisis del almidón. Esto se debe a que el lugar al combinarse con el almidón producen un combinado de color café obscuro, entonces la prueba de hidrolisis de almidón se fundamenta en si el microorganismo tiene la facultad de tener la enzima amilasa al degradar el almidón este precipitado de color café que se produce por el almidón-lugol desaparece debido que la amilasa se encarga de degradar la amilasa y al no existir este polisacárido se forma un halo claro. 2. Explicar por qué en las pruebas de fermentación de azúcares en tubos con campana de Durham se emplea un indicador de pH, cual es el indicador y cuál es su intervalo de sensibilidad. En las pruebas de fermentación las moléculas orgánicas sirven como donadores o aceptores de electrones. Y los productos finales de la fermentación puede ser muy variado dependiendo del microorganismo se pueden generar: ácidos, diferentes moléculas orgánicas o gases, los cuales pueden ser utilizados para la identificación del organismo por eso es necesario usar un indicador de pH debido a que los ácidos que bajan el pH. El indicador que se emplea es el rojo de fenol (Olivas E., Alarcón R. 2004) Rojo de fenol

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Ácido: amarillo Base: Rojo El intervalo de cambio de color se da de (6.4 - 8.0 pH) (Wentworth, 1977)

3. ¿Qué otros azúcares se pueden utilizar para la fermentación de azúcares? Maltosa y Manitol (Evangelina Olivas E., 2004) 4. ¿Cuál es el indicador de pH que se emplea en las pruebas de utilización de sales orgánicas y cuál es su intervalo de sensibilidad? Azul de bromocresol Ácido: amarillo Base: Azul El intervalo de cambio de color se da de (6.0 - 7.6 pH) (Wentworth, 1977) 5. ¿Cómo se detectan los productos de la degradación de los aminoácidos: arginina, lisina y ornitina? Los productos detectados en la degradación de los aminoácidos es causada por la descarboxilación en el aminoácido por medio de la enzima descarboxilasa dando una amina y un anhídrido carbónico, estos cambios en el aminoácido causan un cambio de pH a alcalino (Evangelina Olivas E., 2004). 6. Explicar cuál es la utilidad de detectar la capacidad de hidrólisis de proteínas que tienen ciertos microorganismos. ¿De qué manera se detectan estas enzimas proteolíticas de los microorganismos? Estos la usan para liberar la aminoácidos que los microorganismos usaran como nutrientes, se hacen pruebas y se encuentra con cual enzima reaccionara esté. (Evangelina Olivas E., 2004) CONCLUSIÓN A pesar de que las pruebas bioquímicas son una herramienta muy útil en el reconocimiento de un microorganismo e identificación de su metabolismo, estas pruebas contienen sus limitantes puesto que no se puede concluir una clasificación en base a estas, pero cabe mencionar que la importancia es inmensa puesto que se comienza a conocer el comportamiento y utilidades que podría tener el microorganismo basándose en sus mismas rutas metabólicas que contienen. Al finalizar es importante mencionar que al realizar adecuadamente las técnicas para inocular el microorganismo en cada prueba se debe realizar tal como se menciona pues esto puede cambiar o alterar los resultados de la prueba.

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Practica 6 Pruebas Bioquimicas

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