CAMINO A LA IDENTIFICACION DE LEVADURAS
Una de las tareas fundamentales de la microbiología es la aplicación de una metod metodolo ología gía preci precisa sa que que permit permita a la identi identific ficac ación ión de los los micro microorg organ anis ismos mos implicados en procesos clínicos asociados a infecciones o de aquellos que tienen relación con el hombre como lo es en el campo de la industria; un claro ejemplo de esto estos s micr microo oorg rgan anis ismo mos s son son los los hong hongos os que que cump cumple len n dive divers rsas as func funcio ione nes s importante importante como lo es transformar transformar la materia orgánica orgánica en materia inorgánica inorgánica para mantener el equilibrio en los ecosistemas; dentro de este gran grupo o reino se encuentran encuentran las levaduras levaduras que son un tipo de hongos microscópico microscópicos s unicelulares unicelulares importantes por su capacidad de realizar el proceso de fermentación de diversos compuestos orgánicos como lo son azúcares o hidratos de carbono, carbono , produciendo distin distintas tas susta sustanci ncias as que que sean sean utilic utilices es para para otro otros s seres seres vivos vivos y gener generand ando o asoci asociac acion iones es de ben benfic fico o mutuo mutuo e indivi individu duale ales, s, estas estas al forma formarr part parte e de la microbiota de la piel y mucosas son las causantes de muchas infecciones que son provocad provocadas as por una variedad variedad de especie especies s razón por la cual es indispe indispensa nsable ble utilizar una tcnica capaz de identificar el agente causante para dar un diagnóstico preciso y eficaz! eficaz! "egún #inares, #inares, y $ol; %&&' e(isten una una serie de mtodos mtodos para llevar a cabo este proceso en los cuales se debe tener en cuenta cuatro criterios y que son compleme complementar ntarios ios entre entre sí) morfoló morfológico gicos, s, inmunoló inmunológico gicos, s, gentic genticos os y bioqu bioquími ímico cos, s, este este último último se basa basa en la utili utiliza zació ción n de medio medios s cromog cromogn nico icos s teniendo en en cuenta pruebas pruebas enzimáticas enzimáticas y de asimilación asimilación de nutrientes nutrientes que se cara ca ract cter eriiza zan n por se serr métodos ráp rápid idos os espec! espec!"ic "icos os## p$es p$es perm pe rmit iten en identi"icar e% a&ente a partir de% c$%ti'o primario con %a partic$%aridad de no re($erir m$c)a e*periencia técnica+ *ctualmente *ctualme nte estas pruebas bioquímicas bioquímicas se emplean en diferentes áreas, desde desde la clínic clí nica a ha hasta sta la ind indus ustri tria, a, do dond nde e ofr ofrec ecen en mej mejorí oría a al mom moment ento o de el elimi imina narr la necesidad del subcultivo, evitando así; que un cultivo se contamine durante la resiembra,, puesto que la levadura puede resiembra puede sufrir cambios genticos genticos y bioquímicos bioquímicos asíí mi as mism smo o ec econ onom omiz iza a ti tiem empo po y di dine nero ro,, de debi bido do a qu que e se lo logr grar aría ía om omit itir ir la elaboración de numerosas pruebas bioquímicas!
+l fundame fundamento nto de estas estas pruebas pruebas se basa basa en la localiza localización ción de determin determinada adas s activ activida idades des enzim enzimáti ática cas s por por parte parte de las las levadu levadura ras s al realiz realizar ar el proc proceso eso de hidrólisis de un sustrato cromognico en presencia de un indicador de la enzima que al actuar sobre estos sustratos genera genera en ellos un cambio en su estructura, la cual se evidencia por un cambio de color en el medio producido producido por una variación variación de p para facilitar el proceso de identificación ya sea según el tipo de azúcar capaz de fermentar!
+n estos estos último últimos s a-os a-os se ha promov promovido ido el uso de prue pruebas bas enzimá enzimáti ticas cas y de asimilación de nutrientes, mtodos que resultan muy atractivos por la sencillez y rapidez con la que, según los fabricantes, se obtiene la identificación a nivel de especie .$ortes, et! *l! %&/&0, estos resultados pueden ser leídos en forma visual o aut automá omátic tica a a tra trav vs s de un "o "oft1 ft1ar are e co conv nvirt irti indo ndola la en un una a her herra ramie mient nta a de identificación fácil de usar gracias a la rapidez con que se manipulan las pruebas y a la fi fiab abil ilid idad ad de lo los s mi mism smos os!! *demás demás las las prueb pruebas as bioqu bioquími ímica cas s permit permiten en determinar las características metabólicas de las levaduras que están en objeto de identificación, algunas de estas pruebas son tcnicas rápidas, ya que evalúan la presencia de una enzima preformada y su lectura varía entre unos segundos hasta unas pocas horas! 2o obstante, algunas de estas pruebas pueden realizarse de forma rápida tras incubación de unas %34h; en general, se trata de reacciones enzimáticas enzimáticas cromognicas cromognicas o pruebas convencionales convencionales modificadas! modificadas! 5tras pruebas requieren para su lectura el crecimiento del microorganismo con una incubación previa de /6h a 76h; a este grupo pertenecen la mayoría de las pruebas que detectan componentes metabólicos o aquellas que determinan la sensibilidad de un microorganismo a una sustancia dada tras cultivo en medios de identificación que contienen el sustrato a metabolizar! *simismo estas prueba pruebas s tienen la particula particularidad ridad de ser fácilmente asequible por profe pr ofesio siona nales les y tc tcni nico co debido debido a la comodid comodidad ad de su sus s co costo stos s y po porqu rque e se encuentran ampliamente distribuidas en el mercado generado en ellas un alto nivel de conf confiabi iabilida lidad d y seg segurid uridad, ad, adem además ás no requ requiere ieren n de una infraestruc infraestructura tura tan especializada por lo que pueden ser utilizadas en laboratorios convecionales a diferencia de otras pruebas que son más complejas que requieren de aparatos más especializad especializados os y son son más utilizados utilizados en laborat laboratorios orios de investig investigación; ación; e ntre las desventajas que pueden generar se encuentran la interpretación de los colores por por part parte e del del oper operad ador or!! "in "in emba embarg rgo o con con resp respec ecto to a esto esto últi último mo se han han desarrollado desarrollado equipos equipos que facilitan la la lectura de de las placas placas como lo afirma $uical, %&//!
#os laborat laboratorio orios s deben deben elaborar elaborar y realizar realizar un proceso proceso de identif identificac icación ión en su activida actividad d diaria, diaria, que utilice utilice de forma forma secuenc secuencial ial o simultan simultanea ea un conjunt conjunto o de pruebas cuyo propósito final sea la identificación del microorganismo a nivel de gnero y especie y que incluya la mayoría de las levaduras desde el punto de vista infecc infeccios ioso! o! 8or lo lo anteri anteriorm orment ente e se-al se-alad ado, o, es impor importan tante te desta destaca carr que actualme actualmente, nte, se disponen disponen una serie serie de pruebas pruebas bioquím bioquímicas icas que permite permiten n la identi identific ficaci ación ón presu presunt ntiva iva de levadu levaduras ras prov proven enien iente tes s de muest muestras ras clíni clínica cas s e indu indust stri rial ales es cons consti tituy tuyen endo do una una herr herram amie ient nta a de ayud ayuda a en el diag diagnó nóst stic ico o microbi microbiológ ológico, ico, que permiten permiten no sólo sólo diferen diferenciar ciar las especie especies s , sino tambin, tambin, establecer establecer la implementación implementación de un tratamiento tratamiento y procedimiento procedimiento adecuado! adecuado! "in embargo, cabe se-alar que estas pruebas no requieren de una gran e(periencia tcnica para la interpret interpretación ación de las mismas siendo estas estas rápidas, específicas específicas y fácil de usar!
REFERENCIA ,I,LIO-RAFICA
9ernández, *!, 9ernández, *!, :arcía, $!, *ntonio, *ntonio, alde aldezate, zate, "! .%&/& 0! 8rocedimientos en microbiología clínica! 8ruebas
$orts *!, et al! "ensibilidad y especificidad entro dos medios cromogenicos para la identificación de candida spp! %&/&; =&.=0) '636%
#inares, "icilia, "olís, 9, .%&&'0! :uía 8ráctica de >dentificación y ?iagnóstico en @i @ico colo logí gía a $l $lín ínic ica! a! >d >den enti tifi fica caci ción ón de le leva vadu dura ra,, fu fund ndam amen ento to!! Ae Aevi vist sta a >beroamericana de @icología! $ap! //3 //3 88! 88! /, B
$uaical $uaical,, .%&//0 .%&//0!! @edios @edios cromoge cromogenico nicos, s, herrami herramient entas as para la identif identificac icación ión fenotípica y detección de mecanismos de resistencia! $apítulo @etropolitano de la "ociedad enezolana de @icrobiología! ?isponible en Chttp)DDgotasmicrobiologicas!blogspot!comD%&//D&%Dmedios3cromogenicos!htmlE
