Instituto Politécnico Nacional de Ciencias Biológicas
Escuela Nacional
Práctica 5.4 Efecto de la temperatura sobre la velocidad de la reacción catalizada por invertasa Introducción La velocidad de una reacción enzimática varía al aumentar la temperatura. Esto es, la velocidad de una reacción enzimática se incrementa al aumentar la temperatura dentro de un determinado rango, alcanzando un valor máximo a la denominada temperatura óptima. A valores superiores la actividad disminuye debido a que la enzima, como cualquier otra proteína, sufre procesos de desnaturalización y, por lo tanto, de inactivación.
Objetivos
Demostrar cual es el efecto de la temperatura sobre las reacciones enzimáticas. Calcular el valor de la energía de activación (Ɛ a) de la reacción catalizada por la invertasa. Calcular el valor de Q10, a diferentes intervalos para la reacción catalizada por la invertasa.
Bioquímica General
Finalmente para calcular la velocidad en Unidades de Invertasa (U.I.) se aplica la siguiente formula:
[ AR] 2 mL Velocidad ( U . I . )= 10 Temperatu ra (°C) 1/T (K) ln(V0) (U.I.)
Tabla 1. Resultados del comportamiento de la actividad enzimática contra la temperatura Tubo 1 2 3 4 5 problema Temperat 0 17 37 50 75 ura (°C) Absorben 0.088 0.244 0.616 0.823 0.021 cia Azúcar 12.74 reductor 1.431 3.832 9.560 0.399 7 [µ moles]
0.5
Velocidad (Unidades de Invertasa)
0.071
0.191
0.478
0.637
0.019
0 0
10
20
30
40
50
0.00 36 2.63 7
0.00 35 2.13 8
0.00 34 1.67 2
0.00 33 1.23 8
0.00 31 0.83 1
0.00 30 0.45 0
0.7 0.6
92
0
Temperatura (°C)
Resultados
6
.
0.4 0.3 0.2 0.1 0
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90 100
0
1/T (K)
Tabla 2. Resultados (comparación entre absorbencias de los tubos testigo) Tubo 1 2 3 4 5 6 testigo Temperat 0 17 37 50 75 92 ura (°C) Absorben 0 0.051 cia 0.001 0.017 0.018 0.010
0
0
0
0
0
0
0
0
-0.5 -1 -1.5 -2
Cálculos El valor que se obtiene de la lectura de absorbencia en cada tubo corresponde a un valor específico de concentración de azúcar reductor producido por la acción de la enzima invertasa. Dicho valor de concentración es calculado al interpolar los valores de absorbencia de esta práctica con los obtenidos en la gráfica curva tipo de azucares reductores. Dicha grafica corresponde a una tendencia lineal entre los valores de absorbencia y concentración de azúcares reductores [AR], por lo que dicha grafica corresponde a la ecuación:
-2.5 -3
Discusión de resultados
Al aumentar la temperatura de la reacción catalizada por la enzima invertasa se observa un incremento de la velocidad de reacción hasta llegar a los 50°C donde se observa su máxima actividad, sin embargo al sobre pasar esta [ Concentración AR ] =[ (−0.00495 ) ( Absorbencia ) ]+0.06495 temperatura ésta decae abruptamente; esto debido a que, como se sabe, las enzimas son proteínas y De donde solo se sustituye el valor de absorbencia estas a cierta temperatura se desnaturalizan y en obtenido para obtener el valor de caso de las enzimas pierden su función.
[ Concentración AR ]
.
Conclusiones
0
Instituto Politécnico Nacional de Ciencias Biológicas Práctica 5.4 Efecto de la temperatura sobre la velocidad de la reacción catalizada por invertasa Las enzimas aumentan su actividad al aumentar la temperatura hasta llegar a su temperatura optima, al sobrepasar dicha temperatura comienzan a desanturalizarse y pierden actividad. Bibliografía
Escuela Nacional Bioquímica General 1. Manual de experimentos de laboratorio para bioquímica, Quesada S., Editorial EUNED, Costa Rica, 2007, págs. 40-42. 2. Fundamentos de bioquímica (2° edición), Voet P., Voet J., Pratt C., Editorial medica panamericana, Argentina, 2009, págs. 100103.
