Practica 2 Susceptibilidad Antimicrobiana Kirby 2015

PRACTICA 2 SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA KIRBY-BAUER.

Práctica No. 2

Prueba sensibilidad in vitro a los antimicrobianos (Metodo de Kirby- Bauer)

Objetivo:

 Aplicar el criterio de difusión en placa del antimicrobiano antimicrobiano propuesto propuesto por Bauer, Bauer, Kirby Kirby,, Sherris Sherris y Turk Turk (1966 (1966 modific modificad ada a y recome recomenda ndada da por la !"A !"A y #$S% #$S% (&##$S para determinar la susceptibilidad antimicrobiana in 'itro

uraci!n de la "ráctica: ) hrs. #ntroducci!n:

*n la cl+ni cl+nica, ca, el tratam tratamien iento to de las las enfer enfermed medad ades es infecc infeccio iosas sas de etiol etiolo+ o+a a bacteriana, se re-uiere de la elección adecuada de los antimicrobianos a utili.ar  para control controlar ar una infecció infección n de esta naturale. naturale.a, a, ya -ue si no es as+ el cuadro cuadro cl+nic cl+nico o corres correspo pond ndien iente te se puede puede compl complica icarr alcan alcan.a .and ndo o ni'el ni'eles es de ries rieso o comp compat atib ible les s con con la muer muerte te del del pac pacient iente e o en el me/o me/orr de los los casos asos con con complica complicacion ciones es -ue determi determinan nan mayores mayores riesos riesos y estancia estancias s hospita hospitalaria larias s o mayores tiempos de recuperación de la salud del paciente a ni'el comunitario

*l cono conoci cimi mien ento to del del comp compor orta tami mien ento to actu actual al de los los ni'e ni'ele les s de resi resist sten enci cia a antimicrobiana de las cepas patóenas com0nmente asociadas a cudros cl+nicos de los pacientes a ni'eles locales, permite determinar acciones enerales -ue prete pretende nden n ba/o ba/o esta esta infor informac mación ión brind brindar ar la me/or me/or opció opción n terap teraputi utica ca en la

prescripción de los antimicrobianos correctos para tratar estas infecciones, represent2ndose estos criterios en los denominados 3tratamientos de elección emp+ricos o de tipo primario4

Sin embaro la e'olución permanente y en ocasiones sorprendente de la resistencia bacteriana a los antimicrobianos, re-uiere de una 'iilancia efecti'a para detectar sus tendencias y comportamiento actual, con lo -ue se podr2 aranti.ar tratamientos cl+ncios efecti'os de los pacientes al emplearse los antimicrobianos adecuados y con ello recuperar la salud de los mismos

5or lo tanto con ste propósito, se deber2 considerar en la practica cl+nica, la prescripción de antimicrobianos descritos en las opciones -ue hemos denominado emp+ricas o de primera elección, pero con/untamente el mdico responsable de prescribir estos tratamientos deber2 remitir al laboratorio una muestra cl+nica apropiada se0n el caso, para confirmar la etiolo+a del cuadro cl+nico y sobre todo la suceptibilidad antimicrobiana del microoranismo aislado de acuerdo a la prescripción eleida con el propósito de mantenerla o modificarla se0n sea re-uerido

 Alunos microoranismos presentan alta sensibilidad a uno u otro antimicrobiano en condiciones normales dentro de la cl+nica, a los cuales no es necesario reali.ar  antibioramas de rutina, sin embaro los informes epidemiolóicos sealan aun-ue en ba/a frecuencia casos de resistencia antimicrobiana7 dentro de estos rupos de bacterias se encuentran8 S. penumoniae, N. meningitidis, N. gonorrhoeae, C. perfringes, otros Clostidia; Finalmente bacterias como S.  pyogenes B. anthracis, C. diptheriae, A. israelii. B. pertusis, B. melitensis siuen presentando suceptibilidad a los antimicrobianos de elección primarios

5or otra parte, para un n0mero importante de microoranismos es indispensable reali.ar las pruebas de suceptibilidad antimicrobiana por presentar porcenta/es importantes de resistencia in 'i'o e in 'itro conforme ha transcurrido el tiempo, como es el caso de S. aureus, Staphylococcus #oaulasa &eati'os , P. aeruginosa,  Acinetobacter spp, H. influenae, *nterobacterias como !. coli, "lebsiella pneumoniae y !nterobacter, e igualmente !nterococcus faecium y !. faecalis entre otros $a terapia antimicrobiana re-uiere del conocimiento pre'io de la susceptibilidad del microoranismo, de las propiedades farmacolóicas de los antibióticos, eperiencia cl+nica al respecto y la historia natural de la enfermedad, as+ como del

estado inmune del hospedero y la confiabilidad de los resultados del laboratorio para lorar el ito esperado en el control de una enfermedad infecciósa $as pruebas de susceptibilidad 3 in #itro4 se reali.an ba/o dos fundamentos8 dilución seriada en tubos y difusión en placa del antimicrobiano As+ el fundamento de difusión se puede reali.ar en discos de papel, en po.os o en cilindros *n la 0ltima dcada se ha 'enido empleando cada 'e. m2s las tiras *:Test, las cuales presentan un radiente de concentración del antimicrobiano, e-ui'alente a las concentraciones empleadas para la determinación de las #;%, combinando la difusión y los diferentes concentraciones del antimicrobiano

*n la practica cl+nica se aplica en forma com0n el mtodo de difusión en placa con discos de papel filtro imprenados con el antimicrobiano a una concentración fi/a determinada, -ue suele indicar la respuesta a la concentración srica del f2rmaco -ue se lora 3in 'itro4 con los re+menes posolóicos con'encionales, proporcionado as+ una información 'aliosa para la elección de un tratamiento antimicrobiano efica.

*l fundamento de esta prueba se relaciona a la inhibición microbiana por la difusión del antimicrobiano en la placa de aar y su interacción con las bacterias en culti'o puro

"entro de los factores -ue influyen en la definición de la .ona de inhibición est2n principalmente8 la composición, 'olumen o altura del medio de culti'o, producción de en.imas beta lactamasas, cantidad del inóculo, edad microbiana, difusibilidad del antibiótico (solubilidad, peso molecular, estabilidad y modo de acción, temperatura y tiempo de incubación, pure.a del culti'o, formas 3$47 procedimientos, lectura e interpretación Todas estas 'ariables deber2n estar  perfectamente controladas para e'itar la obtención de resultados erróneos y poner  en rieso la salud del paciente

*sta metodolo+a se considera limitada para aplicarla con microoranismos de crecimiento lento, anaerobios estrictos y capnof+licos

*l medio de culti'o de elección para esta prueba in 'itro es el ;ueller a =), aun-ue en casos de emerencia se puede emplear TSA

Material y e$ui"o de laboratorio:

#epas problema en culti'o puro (1?:>) horas de incubación @:@=# > placas de ;ueller 9>> y Staphylococcus aureus AT## >9>@

Procedimento8

1 "e un culti'o /o'en de 1? a >C  A/uste con caldo ;uller C cm y de 1 cm a la pared de la ca/a y entre ellos 6 5resione lieramente sobre el aar aseurando el contacto o adherencia del unidisco con la superficie

= %ncube a @ o# durante 1? ) horas ? Ibser'e y mida los di2metros de los halos de inhibición con Fernier, rela o plantilla por el fondo de la ca/a 9 Helacione sus resultados con las tablas de referencia (#$S% se0n la cateor+a de susceptible (S, intermedio (% o resistente (H 1CHeporte la acti'idad del antibiótico contra el microoranismo 11 Healice una discusión y obtena las conclusiones pertinentes se0n los resultados obser'ados

%lujo&rama

#ulti'o puro (1?:>C hrs %ncubar a @#

Tres a cinco colonias, suspender en sol salina ó aua destilada estril

 A/ustar suspensión a ;ac!arland C

Sembrar masi'amente en la superficie de la placa de ;ueller
*sperar  minutos y distribu+r los discos sobre la superficie de la placa de ;ueller
%ncubar G1? hrs m+nimo, a @#, preferentemente >) horas

%nterpretar resultados y reportar

"ispensador de unidisco

Hesistencia y suceptibilidad (halos de inhibición antimicrobiana Dnidiscos y tiras *: Test

;edición del di2metro del halo de inhibición

'valuaci!n de la "ráctica:

*amen escrito sobre la tem2tica Heporte de la pr2ctica
nálisis y discusi!n de resultados

onclusiones y su&erencias

uestionario.

$. "iscuta la 'alide. o no, de la consideración de reali.ar pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos in 'itro a microoranismos como8 Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae y Haemophilus influenae.

> #u2l es el concepto de antimicrobiano, antibiótico y antibacteriano

@ #u2les son los principales mecanismos bio-u+micos de la acción de los antimicrobianos sobre las bacterias

) #u2les son los mecanismos de resistencia bacteriana a los antimicrobianos

 Ju condición debe reunir un microoranismo -ue 'a a ser sometido a una prueba de sensibilidad a los antimicrobianos

6 Ju es una concentración m+nima inhibitoria  ;%#: y como se determina

*#+#', ' ,N*',#,:

*l alumno elaborar2 un resumen contrastando la prueba de sensibilidad por el mtodo de difusión en placa y la concentración m+nima inhibitoria

$+mites aceptables para las cepas de control de calidad empleadas para monitorear la confiabilidad de la prueba de difusión en disco de oranismos no fastidiosos (empleando medio de ;uller C1> (Adaptación

&ente ntimicrobiano  Amikacina  Amoicilina Acido #la'ul2nico  Ampicilina

oncentraci!n en el isco (&)

Escherichia coli  *

Staphylococcus aureus

Pseudomonas aeruginosa

2/022

* 2/021

* 23/1

@C

19:>6

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 Ampicilina: Sulbactam  A.itromicina 1

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#arbenicilina

1CC

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#efepime

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#efotetan

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#eftriaona

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#lindamicina

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#olistina

1C

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*rtapenem

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*ritromicina

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Eatifloacina

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Eentamicina

1C

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Kanamicina

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$e'ofloacina

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$ine.olid

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 A.treonam

;eropenem

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;eticilina

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 Acido &alid+ico

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&etilmicina

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Iacilina

1

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5iperacilina

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5iperacilina: Ta.obactam

1CCG1C

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Hifampicina

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Teicoplanina

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Tetraciclina

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Tieciclina

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1>G>@=

>@:>9

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1=:>1

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Trimetoprim: Lulfametoa.ol Fancomicina

Erupos de aentes antimicrobianos sueridos con indicaciones cl+nicas de la !"A -ue pueden ser considerados para pruebas de rutina y su reporte, para oranismos no fastidiosos por los laboratorios de microbiolo+a cl+nica (DSA #$S% >C1> (Adaptación

'nterobacteriaceae 456PO 

 Ampicilina

  Pseudomonas aeruginosa #efta.idima

Staphylococcus spp. A.itromicina o #laritromicina o

Pruebas "rimarias y re"orte

*ritromicina Iacilina("isco de #efoitina

Enterococcu  s spp.  Ampicilina 5enicilina

#lindamicina #efa.olina

Eentamicina Tobramicina

Eentamicina

5iperacilina

Tobramicina

5enicilina

Trimetoprim: Sulfametoa.ol M"aptomicina

 Amikacina

Amikacina

 Amoicilina:2cido cla'ul2nico

M"aptomicina

$ine.olid

 Ampicilina:sulbactam 5iperacilina:ta.obactam

456PO B Prueba "rimaria re"orte selectivamente

 A.treonam

Telitromicina

Ticarcilina:2cido cla'ul2nico

"oiciclina

#efuroima

Tetraciclina

;inociclina

#efepime

#efepime

#efotetan

#iprofloacina

#efoitina

$e'ofloacina

#efotaima o #eftriaona

Fancomicina

Fancomicina

"oripenem %mipenem ;eropenem

#iprofloacina $e'ofloacina

5ipera.ilina: ta.obactam Ticarcilina

"oripenem

$ine.olid

Hifampicina

*rtapenem %mipenem ;eropenem 5iperacilina

Trimetoprim: sulfametoa.ol

ontinuaci!n7777.

'nterobacteriaceae

  Pseudomonas aeruginosa

Staphylococcu  s spp.

Enterococcu  s spp.

 A.treonam #efta.idima (Ambas son indicadores 0tiles para beta: lactamasas de espectro etendido

#loramfenicol

456PO 

#iprofloacina o

dicionales 5e"orte selectivo

$e'ofloacina o Ifloacina

#loramfenicol

;oifloacina

Eentamicina (Alto ni'el de resistencia reali.ar prueba solamente *streptomicina (Alto ni'el de resistencia reali.ar prueba solamente

Juinupristin: "elfopristin Eentamicina Tetraciclina

$omefloaina

#efalotina

&orfloacina

$omefloacina o Ifloacina

456PO 6

&orfloacina dicionales "ara orina solamente

&itrofurantoina

&itrofurantoina $omefloacina o Ifloacina

#iprofloacina $e'ofloacina &orfloacina

&itrofurantoina

Sulfisoa.ol

&orfloacina Trimetoprim

Sulfisoa.ol

Tetraciclina

Trimetoprim

#nter"retaci!n de los 8alos de in8ibici!n "ara 'nterobacterias. 9,# 2;2. (da"taci!n) 456PO

N*#M#5OB#N

ON'N*5#<

#=M'*5O ' 9

O

N &

>ON (mm) 5

#

,

P'N##9#N,  A

Ampicilina

1C

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1):16

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B

5iperacilina

1CC

? 1=

1?:>C

@>1

B

Ticarcilina

=

?1)

1:19

@>C

OMB#N#ON', ' B'*-9*=M#O,A#N#B#O5', ' B'*-9*M,,  Amoicilina:2cido cla'ul2nico B B B B

 Ampicilina: sulbactam 5iperacilina: ta.obactam Ticarcilina:2cido cla'ul2nico

>CG1C 1CG1C 1CCG1C

=G1C

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1:19

@>C

'%'M, (P5'N*'59) (#N96C'NO '%9O,PO5#N, ' P5#M'5  65* 4'N'5#
#efa.olina

@C

?19

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 A

#efalotina

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B

#efamandole @C

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#efuroima parenteral

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B

#efepime

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B

#efopero.ona

=

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@>1

B

#efotetan

@C

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B

#efoitina

@C

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B

#efotaima o

@C

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@>6

B

#eftriaona

@C

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B

#eftio.ima

@C

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#

#efta.idima

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B

I

;oalactam

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'%'M, (O59) B

eDuroEima aEetil (oral)

@C

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I

eD"odoEima

1C

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1?:>C

@>1

5BP'N'M#O, B

*rtapenem

1C

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19:>1

@>>

B

%mipenem

1C

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B

;eropenem

1C

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@C

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@>1

MONOB*M#O, Ftreonam

#

M#NO49#<,#O,  A

Eentamicina

1C

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@1

B

Amikacina

@C

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1:16

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#

Kanamicina

@C

?1@

1):1=

@1?

#

&etilmicina

@C

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1@:1)

@1

#

Tobramicina

1C

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1@:1)

@1

I

*streptomicina

1C

?11

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@1

*'*5#9#N, #

Tetraciclina

@C

?11

1>:1)

@1

I

;inociclina

@C

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1@:1

@16

ontinuaci!nNNN %96O5OG6#NO9ON, B

#iprofloacina



?1

B

$e'ofloacina



?1@

@>1 16:

@1=

>C 1): 16 D

Eatifloacina

D

$omefloacina o



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1: 1= 19: >1

@1?

Ifloacina

1C

?1?

&orfloacin



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1C

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1CC

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1: 1?

@19

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@19

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1@: 1 1@: 16

@>> @16 @1=

G6#NO9ON, D

#inoacina

I

Acido &alid+ico

#N#B#O5', ' 9 + '9 %O9*O B

Trimetoprim  sulfametoa.ol

D

Sulfonamidas

D

Trimetoprim

%'N#O9', #

#loramfenicol

N#*5O%65N*O#N, D

&itrofurantoina

%O,%OM##N, D

5 O Hesistente  # O %ntermedio , O Sensible

!osfomicina

5eDerencias biblio&ráDicas:

1 Pi:Qei Tan, #harles Q Stratton (>CC6 Ad'anced Techni-ues in "ianostic ;icrobioloy *d Spriner Science DSA > Bailey R Scotts "ianostic ;icrobioloy !orbes BA, Sahm "!, Qeissfeld AS *ditors(>CC>*le'enth *dition;osby:*lse'ier Science DSA @ Schlossber " #linical %nfectious "isease 5art F Antimicrobial Therapy: Eeneral #onsiderations (>CC? #ambride Dni'ersity 5ress CC9;icrobiolo+a ;dica Seta *dición *lse'ier:;osbyBarcelona, *spaa  #linical and $aboratory Standards %nstitute:#$S% (&##$S (>C1> 5erformance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testin, Se'enteenth %nternational Supplement ;1CC:S>>, Fol>@ &U @