BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang
Prosedur
dan
pemeriksaan
khusus
dalam
Laboratorium
merupakan bagian dari tindakan untuk mengatasi masalah kesehatan yang dilaksanakan secara tim, Analis melakukan fungsi kolaboratif dalm memberikan tindakan. Hasil suatu pemeriksaan laboratorium sangat penting dalam membantu diagnosa, memantau perjalanan penyakit serta menentukan
prognosa.
Karena
itu
perlu
diketahui
faktor
yang
mempengaruhi hasil pemeriksaan laboratorium. Terdapat 3 faktor utama yang dapat mengakibatkan kesalahan hasil laboratorium yaitu :
1.
Faktor Pra Analitik: sebelum dilakukan pemeriksaan.
2.
Faktor Analitik : saat pemeriksaan ( analisa ) sample.
3.
Faktor Pasca Analitik : saat penulisan hasil pemeriksaan.
Pada tahap pra analitik sangat penting diperlukan kerjasama antara petugas, pasien dan dokter. Karena tanpa kerja sama yang baik akan mengganggu/mempengaruhi mengganggu/mempeng aruhi
hasil
pemeriksaan
laboratorium. laboratorium.
Yang
termasuk dalam tahapan pra instrumentasi meliputi : 1. Pemahaman instruksi dan pengisian formulir laboratorium. 2. Persiapan penderita. 3. Persiapan alat yang akan dipakai.
1
4. Cara pengambilan sample. 5. Penanganan awal sampel (termasuk pengawetan ) & transportasi.
Uapaya untuk meningkatkan mutu laboratorium dilaksanakan dengan pemntapan mutu (Quality Assurance) secara keseluruhan yang terdiri dari berbagai kegiatan yang satu dengan yang lainnya saling melengkapi. Salah satu upaya meningkatkan mutu pelayanan laboratorium tersebut adalah dengan melakukan praktek laboratorium yang benar. Untuk itulah perlu adanya praktikum pemantapan mutu dijenjang pendidikan, agar mahasiswa dapat mengetahui bagamana praktek laboratorium yang benar sebelum menghadapi dunia kerja yang sesungguhnya. B. Tujuan
Mengetahui bagaimana praktek laboratorium yang benar. C. Manfaat
Meningkatkan mutu pelayanan laboratorium kesehatan.
2
BAB II PEMBAHASAN A. Peralatan
Secara umum peralatan yang digunakan harus memenuhi syarat-syarat : 1. Bersih dan kering. 2. Tidak mengandung bahan kimia atau deterjen. 3. Terbuat dari bahan yang tidak mengubah zat-zat pada spesimen. 4. Mudah dicuci dari bekas spesimen sebelumnya. 5. Pengambilan spesimen untuk pemeriksaan biakan harus menggunakan peralatan yang steril.
B. Wadah Spesimen
Wadah spesimen harus memenuhi syarat : 1. Terbuat dari gelas atau plastik. Untuk spesimen darah harus terbuat dari gelas. 2. Tidak bocor atau merembes. 3. Harus dapat ditutup rapat dengan tutup berulir. 4. Besar wadah disesuaikan dengan volume spesimen 5. Bersih dan kering 6. Tidak mempengaruhi sifat zat-zat dalam spesimen 7. Tidak mengandung bahan kimia atau deterjen. 8. Untuk pemeriksaan zat dalam spesimen yang mudah rusak atau terurai karena pengaruh sinar matahari, maka digunakan botol coklat.
3
9. Untuk pemeriksaan biakan dan uji kepekaan kuman wadah harus steril.
C. Pengawet
Diberikan agar sampel yang akan diperiksa dapat dipertahankan kondisi dan jumlahnya dalam waktu tertentu. Antikoagulan digunakan untuk mencegah pembekuan darah.
Tabel 2. Macam-macam pengawet yang digunakan untuk mengawetkan urine Fisik
Almari es
Universal Pengawet urin
Toluena Timol
Kimia Na 2 CO 3 H 2 SO 4 (p) ( p)
Khusus
HCL (p) Na fluorida Formalin Cloroform
4
D. Waktu Pengambilan
Pada umumnya pengambilan spesimen dilakukan pada pagi hari, terutama untuk pemeriksaan Kimia klinik, Hematologi dan Imunologi karena umumnya nilai normal ditetapkan pada keadaan basal.
E. Lokasi Pengambilan
Sebelum mengambil spesimen, harus ditetapkan terlebih dahulu lokasi pengambilan
yang
tepat
sesuai
dengan
jenis
pemeriksaan
yang
diminta.Spesimen untuk pemeriksaan menggunakan darah vena umumnya diambil dari vena cubiti daerah siku.Spesimen darah arteri umumnya diambil dari arteri radialis di pergelangan tangan atau arteri femoralis di daerah lipat paha. Spesimen darah kapiler diambil dari ujung jari tengah tangan atau jari manis tangan bagian tepi atau pada derah tumit 1/3 bagian tepi telapak kaki atau cuping telingan pada bayi. Tempat yang dipilih tidak boleh memperlihatkan gangguan peredaran darah seperti cyanosis atau pucat, bekas luka dan radang.
F. Volume Specimen
Volume spesimen yang diambil harus mencukupi kebutuhan pemeriksaan laboratorium yang diminta atau dapat mewakili objek yang diperiksa. Tabel 1. Volume specimen No 1
Jenis pemeriksaan
a. Darah Rutin
Jumlah sampel
Wadah sampel
2 ml
Botol EDTA, spuit
5
2
b. LDT
steril
c. Malaria
(G/P)
a. Kimia Darah
3 ml
b. Widal
Tabung Reaksi Steril (Dalam
c. Hbs-Ag
Spuit Sementara)
d. CRP
G/P
e. ASTO 3
a. T3
5 ml
Tabung Reaksi
b. T4
( Jangan Sampai Ada
Steril
Gelembung Udara )
(G/P)
3 – 8 – 8 ml
Botol Steril
c. TsHs d. FT4 e. CAE 4
a. Urine Rutin, b. Urine Lengkap
5
a. Feaces Rutin, b. Faeces Lengkap
6
Sputum
(P) Sebesar biji jagung/
Botol Steril
0,5 ml
(P)
3 – 5 3 – 5 ml
Pot Steril (P)
7
a. Sekret Vagina, b. Sekret Uretra
8
Sekret Mata
2 Sediaan kering, 1
Kaca Objektif
Sediaan basah
Steril
1 Sediaan Kering
Kaca Objektif
6
Steril Analisa Sperma
9
a. Analisa
10
Cairan
Sebanyak Volume
Botol steril
Yang dikeluarkan
(P)
3 – 5 – 5 ml
Spuit Steril
1 – 3 3 ml
Botol Steril
( Dalam waktu
(G/P)
Pleura, b. Acites Analisa Cairan Otak
11
maksimal 20 menit setelah dilakukan fungsi lumbal sampel harus diperiksa di laboratorium )
G. Teknik Pengambilan Spesimen
Pengambilan spesimen harus dilaksanakan dengan cara yang benar, agar spesimen tersebut mewakili keadaan yang sebenarnya. 1.
Darah vena a) Posisi lengan pasien harus lurus dan dipilih lengan yang banyak melakukan aktivitas. b) Pasien diminta untuk mengepalkan tangan. c) Dipasang torniquet ± 10 cm di atas lipat siku. d) Pilih bagian vena median cubital atau chepalic.
7
e) Dibersihkan kulit pada bagian yang akan diambil darahnya dengan alkohol 70% dan biarkan kering untuk mencegah terjadinya hemolisis dan rasa terbakar. Kulit yang sudah dibersihkan jangan dipegang lagi. f) Ditusuk bagian vena tadi dengan lubang jarum menghadap ke atas dengan kemiringan 150, bila menggunakan tabung vakum tekan tabung vakum hingga vakumnya bekerja dan darah terhisap ke dalam tabung. Bila jarum berhasil masuk vena, akan terlihat darah masuk dalam semprit, bila darah tidak keluar ganti posisi penusukan (bila terlalu dalam tarik sedikit dan sebaliknya), usahakan darah dapat keluar dalam satu kali tusukan. g) Setelah volume darah dianggap cukup, torniquet dilepas dan pasien diminta membuka kepalan tangannya. Volume darah yang diambil ± 3 kali jumlah serum atau plasma yang diperlukan untuk pemeriksaan. h) Dilepaskan/ tarik jarum dan segera letakkan kapas alkohol 70% di atas bekas suntikan untuk menekan bagian tersebut selama ± 2 menit. Setelah darah berhenti, plester bagian ini selama ± 15 menit. Jangan menarik jarum sebelum torniquet dibuka.
2.
Darah kapiler
8
a) Bagian yang akan ditusuk dibersihkan dengan alkohol 70% dan dibiarkan kering. b) Dipegang bagian tersebut supaya tidak bergerak dan tekan sedikit supaya rasa nyeri berkurang. c) Dengan lanset steril ditusuk dengan cepat tegak lurus (jangan sejajar) pada garis sidik jari. d) Pada daun telinga ditusuk pada bagian pinggirnya, jangan sisinya. e) Tetesan darah yang pertama keluar disapu dengan kapas kering, tetesan darah yang selanjutnya dapat dipakai untuk pemeriksaan.
3. Urine a) Urin Wanita 1) Penderita harus mencuci tangan dengan sabun dan dikeringkan dengan handuk. 2) Pakaian dalam ditanggalkan dan labia dilebarkan dengan satu tangan. 3) Bagian labia dan vulva dibersihkan dengan kasa steril arah depan ke belakang. 4) Bilas dengan air hangat dan keringkan dengan kasa steril yang lain.
9
5) Selama proses ini berlangsung, labia harus tetap terbuka lebar dan jari tangan jangan menyentuh daerah yang sudah steril. 6) Urin dikeluarkan, aliran urin yang pertama keluar dibuang, aliran urin selanjutnya ditampung dalam wadah yang sudah disediakan. Pengambilan urin selesai sebelum aliran urin habis. Wadah ditutup rapat dan dikirim ke laboratorium. b) Urin Laki-laki 1) Penderita harus mencuci tangan dengan sabun. 2) Jika tidak disunat tarik kulit preputium ke belakang, keluarkan urin, aliran yang pertama keluar dibuang, aliran selanjutnya ditampung dalam wadah yang tersedia. Hindari urin mengenai lapisan tepi wadah. Pengumpulan urin selesai sebelum aliran urin habis. 3) Wadah ditutup rapat dan dikirim ke laboratorium. c)
Urin Kateter 1) Pada bagian selang kateter yang terbuat dari karet didesinfeksi dengan alkohol 70%. 2) Urin diaspirasi menggunakan semprit kira-kira 10 ml. 3) Dimasukkan dalam wadah ditutup rapat dan dikirim ke laboratorium.
d) Urin Aspirasi Suprapubik Urin suprapubik harus dilakukan pada kandung kemih yang penuh, dengan cara:
10
1) Kulit di daerah suprapubik didesinfeksi dengan povidone Iodine 10%, kemudian dibersihkan sisa povidone Iodine dengan kapas alkohol 70%. 2) Urin diaspirasi tepat dititik suprapubik menggunakan semprit sebanyak 20 ml. 3) Dimasukkan dalam wadah ditutup rapat dan dikirim ke laboratorium.
4. Tinja Tinja untuk pemeriksaan sebaiknya berasal dari defekasi spontan, jika pemeriksaan sangat diperlukan, sampel s ampel tinja dapat diambil dari rektum rek tum dengan jari bersarung tangan.
5. Sputum Sebelumnya pasien diberi penjelasan mengenai pemeriksaan dan tindakan yang akan dilakukan, serta perbedaan sputum dengan ludah. Bila pasien kesulitan mengeluarkan sputum, pada malam hari sebelumnya diminta minum teh manis atau obat gliseril guayakolat 200 mg. Kemudian diambil sputumnya dengan cara: a) Pasien diminta untuk berkumur dengan air, bila memakai gigi palsu sebaiknya dilepas. b) Pasien berdiri / duduk tegak.
11
c) Pasein diminta untuk menarik napas dalam 2-3 kali kemudian keluarkan napas bersamaan dengan batuk yang kuat dan berulang kali sampai sputum keluar. d) Sputum yang dikeluarkan langsung ditampung dalam wadah dengan cara mendekatkan wadah ke mulut. e) Diamati keadaan sputum, sputum yang berkualitas baik tampak kental purulen dengan volume 2 ml.
H. Penanganan Spesimen
Laboratorium harus mempertimbangkan bagaimana cara menangani contoh uji/sampel melalui berbagai tahapan proses, mulai dari pengiriman ke laboratorium, penerimaannya di laboratorium, penanganan pada saat pengujian,
perlindungan
pada
saat
penyimpanan,
retensi
dan
pembuangannya. Laboratorium harus memiliki prosedur dan fasilitas bagi pengelolaan sampel uji pada setiap tahapan yang tercantum guna menjamin tidak adanya kerusakan pada sampel uji.Laboratorium harus memiliki suatu sistem dimana suatu sampel uji diberikan pengenal khusus yang berlaku selama sampel tersebut ada.Sistem tersebut akan menjamin bahwa sampel tersebut tidak tertukar baik secara fisik atau dalam rekamannya. Pada saat sampel uji diterima di laboratorium, kondisinya harus direkam, selain tanggal dan waktu penerimaannya. Untuk laboratorium yang menerima sampel uji dalam beberapa hari, kondisi sebenarnya dari sampel tersebut perlu direkam hanya bila terdapat masalah
12
dengan kondisi yang ada. Bila sampel uji memerlukan kondisi penyimpanan tertentu, maka sampel tersebut harus dimonitor dengan benar, dijaga dan direkam. Perlu adanya prosedur monitoring dan perekaman untuk kondisi tersebut. ters ebut. Jika sampel uji perlu disimpan dengan aman,
maka
laboratorium
harus
menyediakan
prosedurnya.
Dalam penanganan spesimen perlu diperhatikan berbagai hal sehingga bahan pemeriksaan memenuhi syarat untuk dapat diperiksa, antara lain: 1. Antara permintaan pemeriksaan dan sampel tidak sesuai, harus diteliti kembali. 2. Antikoagulan yang dipakai tidak sesuai, atau jumlahnya sedikit/terlalu banyak. 3. Adanya hemolisis pada saat pengambilan/pemisahan serum. 4. Spesimen keruh/lipemik, perlu ambil/pemisahan ulang. 5. Pemisahan serum yang tidak sempurna, perlu memperhatikan sentrifugasi. 6. Volume sampel yang sedikit/tidak memadai, sebaiknya jumlahnya cukup. 7. Seringkali spesimen bukan merupakan daerah yang “dicurigai”, misalnya pada pemeriksaan faeces. 8. Tempat pengiriman sampel tidak memenuhi syarat (seadanya). 9. Waktu pengiriman sampel. 10. Penyimpanan bahan pemeriksaan menyangkut suhu simpan. 11. Usahakan menggunakan bahan/spesimen yang segar.
13
I. Pemberian Identitas
Pemberian identitas pasien dan atau spesimen merupakan hal yang penting baik pada saat pengisian surat pengantar/formulir permintaan pemeriksaan, pendaftaran, pengisian label wadah spesimen. Pada surat pengantar/formulir
permintaan
pemeriksaan
laboratorium
sebaiknya
memuat secara lengkap : 1.
Tanggal permintaan
2. Tanggal dan jam pengambilan spesimen 3. Identitas pasien (nama, umur, jenis kelamin, alamat/ruang) termasuk rekam medik. 4. Identitas pengirim (nama, alamat, nomor telepon) 5. Nomor laboratorium 6. Diagnosis.keterangan klinik. 7. Obat-obatan yang telah diberikan dan lama pemberian. 8. Pemeriksaan laboratorium yang diminta. 9. Jenis spesimen 10. Lokasi pengambilan spesimen 11. Volume spesimen 12. Pengawet yang digunakan 13. Nama 13. Nama pengambil spesimen. 14. Label wadah spesimen yang akan dikirim atau diambil ke laboratorium harus memuat : a) Tanggal pengambilan spesimen
14
b) Nama b) Nama dan nomor pasien c) Jenis spesimen
J. Pengolahan Specimen
Spesimen
yang
telah
diambil
dilakukan
pengolahan
untuk
menghindari kerusakan pada spesimen tersebut.Pengolahan spesimen berbeda-beda tergantung dari jenis spesimennya masing-masing. 1. Serum Biarkan darah membeku terlebih dahulu pada suhu kamar selama 2-30 menit, lalu di sentrifuge 3000 rpm selama 5-15 menit. Pemisahan serum dilakukan dalam waktu 2 jam setelah pengambilan darah. Serum yang memenuhi syarat harus tidak kelihatan merah dan keruh. 2. Plasma Kocok darah EDTA atau citrat dengan segera secara perlahan-lahan. Pemisahan plasma dilakukan dalam waktu 2 jam setelah pengambilan spesimen. Plasma yang memenuhi syarat harus tidak kelihatan merah dan keruh. 3. Darah Lengkap Darah yang diperoleh ditampung dalam tabung yang telah berisi antikoagulan yang sesuai, lalu dihomogenisasi dengan cara goyang perlahan tabung. 4. Urine Urine yang didapatkan tidak perlu ada perlakuan secara khusus,
15
kecuali pemeriksaan harus segera dilakukan sebelum 1 jam, sedangkan untuk pemeriksaan sedimen harus dilakukan pengolahan terlebih dahulu dengan cara dimasukkan tabung dan sentrifuge selama 5 menit 1500-2000 rpm, supernatan dibuang dan diambil sedimennya. Suspensi sedimen ini dicampur dengan cat Sternheirmer-Malbin Stain’s
untuk
menonjolkan
unsur
sedimen
dan
memperjelas
strukturnya. 5. Sputum Masukkan sputum ke dalam tabung steril yang berisi NaOH 4% sama banyak. Kocok dengan baik. Inkubasi pada suhu kamar 25-30OC selama 15-20 menit dengan pengocokan teratur tiap 5 menit. Sentrifuge dengan kecepatan tinggi selama 8-10 menit. Endapan diambil
dan
supernatan
dibuang
pada
air
lysol.
K. Pengiriman spesimen
Spesimen yang akan dikirim ke laboratorium lain, sebaiknya dikirim dalam bentuk yang reatif stabil. Untuk itu perlu diperhatikan persyaratan pengiriman spesimen antara lain : 1. Waktu pengiriman jangan melampaui masa stabilitas spesimen. 2. Tidak terkena sinar matahari langsung 3. Kemasan harus memenuhi syarat keamanan kerja laboratorium termasuk pemberian label yang bertuliskan “Bahan Pemeriksaan Infeksius” atau “Bahan Pemeriksaan Berbahaya”.
16
4. Suhu pengiriman harus memenuhi syarat.
L. Penyimpanan Spesimen
Spesimen yang sudah diambil harus segera dikirim ke laboratorium untuk diperiksa, karena stabilitas spesimen dapat berubah. Faktor-faktor yang mempengaruhi stabilitas spesimen antara lain : 1. Terjadi kontaminasi oleh kuman dan bahan kimia. 2. Terjadi metabolisme oleh sel-sel hidup pada spesimen. 3. Terjadi penguapan. 4. Pengaruh suhu. 5. Terkena paparan sinar matahari.
Beberapa spesimen yang tidak langsung diperiksa dapat disimpan dengan
memperhatikan
jenis
pemeriksaan
yang
akan
diperiksa.
Persyaratan penyimpanan beberapa spesimen untuk beberapa pemeriksaan laboratorium harus memperhatikan jenis spesimen, antikoagulan/pengawet dan wadah serta stabilitasnya. Beberapa cara penyimpanan spesimen : 1. Disimpan pada suhu kamar 2. Disimpan dalam lemari es suhu 2-8OC 3. Dibekukan suhu -20OC, -70OC atau -120OC 4. Dapat diberikan bahan pengawet 5. Penyimpanan spesimen darah sebaiknya dalam bentuk serum atau lisat. (Ahmadlabrsas)
17
M. Penggunaan Antikoagulan
Antikoagulan adalah bahan yang digunakan untuk mencegah pembekuan darah. Agar darah yang akan diperiksa jangan sampai membeku dapat dipakai bermacam-macam anticoagulant. Tidak semua macam antikoagulan dapat dipakai karena ada yang terlalu banyak berpengaruh terhadap bentuk eritrosit atau leukosit yang akan diperiksa morfologinya. Antikoagulan yang sering digunakan dalam pemeriksaan hematologi adalah : 1. EDTA (Ethylene Diamine Tetra Acetic Acid) Yang dipakai disini adalah garam kalium dan natriumnya, tetapi yang sering digunakan adalah garam kaliumnya (dipotassium EDTA) karena daya larutnya dalam air kira-kira 15 kali lebih besar daripada garam natriumnya. Cara kerjanya dengan garam kaliumnya (K2.EDTA) yaitu dapat mengubah ion Calcium dari darah menjadi bentuk yang bukan ion
membentuk
senyawa
kompleks
yang
larut
berdasarkan
pembentukan ikatan Chelate senyawa. Keuntungan : a) Tidak berpengaruh terhadap besar dan bentuknya erithrosit dan leukosit. b) Mencegah trombosit menggumpal c) Dapat digunakan berbagai macam pemeriksaan hematologi.
18
Kerugian : a)
Lambat larut karena sering digunakan dalam bentuk kering sehingga harus menggoncang wadah yang berisi darah EDTA selama 1-2 menit. Cara pembuatan : 1) Ambil botol yang bersih dan kering 2) Pipet EDTA 10% sebanyak 0,020 ml dengan pipet sahli 3) Masukkan kedalam botol dan keringkan. 4) Dengan jumlah EDTA 10% sebanyak 0,02 ml ini dapat mencegah membekunya darah sebanyak 2 ml atau 1 mg EDTA dalam 1 ml.
2. Trisodium Citrate Antikoagulan ini sering digunakan dalam bentuk larutan 3,8%. Cara kerjanya sebagai bahan yang isotonik dengan darah. Sering digunakan beberapa macam percobaan hemorragik dan laju endapan darah metode Westergren. Untuk LED digunakan perbandingan 1 : 4 yaitu 1 bagian natrium citrat dan 4 bagian darah, sedang untuk percobaan hemorragik dengan perbandingan 1 : 9. Keuntungan : Karena tidak toksis maka sering digunakan dalam dinas pemindahan darah (Unit transfusi darah). Kerugian : Pemakaiannya terbatas dalam pemeriksaan hematologi.
19
3. Heparin Cara kerjanya berdaya seperti anti tombin dan antitromboplastin. Heparin merupakan antikoagulan yang normal terdapat dalam tubuh tetapi
dalam
laboratorium
jarang
dipakai
pada
pemeriksaan
hematologi. Untuk tiap 0,1-0,2 mg heparin dapat mencegah pembekuan 1 ml darah. Sering digunakan dalam penentuan PCV cara mikrokapiler
yang
bagian
dalamnya
dilapisi
dengan
heparin.
Keuntungan : Hanya digunakan terutama dalam transfusi darah yang menggunakan banyak darah dan extracorporal circulation. Kerugian : a)
Tidak boleh digunakan dalam pemeriksaan hapusan darah karena dapat terjadinya dasar biru kehitam-hitaman pada preparat bila dicat dengan wright stain.
b)
Harganya mahal.
4. Double Oxalat Nama lainnya adalah adal ah anticoagulant dari Heller dan Paul atau Balanced Oxalate
Mixture.
Dipakai
dalam
bentuk
kering
agar
tidak
mengencerkan darah yang diperiksa. Kalium oxalat menyebabkan erythrosit mengkerut sedangkan amonium oxalat menyebabkan erytrosit mengembang, campuran keduanya dengan perbandingan 3 : 2 maka terjadi keseimbangan tekanan osmotik eryhtrosit. Setiap 2 mg
20
antikoagulant
ini
dapat
mencegah
pembekuan
1
ml
darah.
Keuntungan : Dapat
digunakan
dalam
berbagai
pemeriksaan
hematologi
Kerugian : a)
Tidak dapat digunakan dalam pemeriksaan hapusan darah karena bahan ini toksis sehingga dapat menyebabkan perubahan-perubahan morfologi sel leukosit leukosit dan eryhtrosit.
b)
Tidak boleh digunakan juga pada pemeriksaan osmotik fargility.
21
