Analisis
Pada praktikum kromatografi lapis tipis, digunakan 2 sampel yaitu kunyit dan daun pandan suji. Tahap awal adalah persiapan sampel, dimana sampel daun suji yang ada dicuci lalu ditumbuk kemudian ditimbang sebanyak 15 gram. Dari sampel sejumlah 15 gram inilah kemudian ditambahkan pelarut methanol sebanyak 5 mL. setelah itu sampel diaduk dan diperas menggunakan spatula, hasil dari perlakuan ini adalah campuran berwarna hijau, filtrate berupa laurtan hijau dan residu berupa daun yang berwarna hijau. Campuran ini kemudian didekantasi dan dimasukkan ke dalam corong pisah, lalu di ekstraksi dengan ditambah diklorometana sebanyak 25 mL. setelah larutan dikocok dan didiamkan terbentuk 2 lapisan dimana lapisan atas berwarna hijau yang lebih muda daripada lapisan bawah yang juga berwarna hijau lebih tua. Lapisan bawah yang kemudian dijadikan sebagai sampel dalam praktikum ini. Hal yang sama juga dilakukan pada kunyit setelah ditimbang seberat 16 gram ditambahkan pelarut ethanol sehingga menghasilkan campuran berwarna kuning, filtrate berupa larutan kuning dan residu berupa kunyit. Setelah itu di dekantasi dan diekstraksi dengan 25 mL diklorometana. Setelah dikocok terbentuk 2 lapisan dimana lapisan atas lebih terang daripada lapisan bawah dan berwarna kuning. Lapisan atas yang dijadikan sebagai sampel dalam praktikum ini. Kedua sampel kemudian ditotolkan pada 2 buah pelat selebar 3 x 5 cm dimana pada tiap pelat telah diberi titik tipis sebanyak 6 titik dengan jarak satu sama lain sebesar 1 cm. Setelah penotolan sebanyak 2 kali ditambahkan eluen dengan kode vial A, B, C, D, E, F. Hasil penotolan sampel dan eluen adalah noda berbentuk cincin yang memiliki beberapa lingkaran dan disebut sebagai cincin terkonsentrasi. Dari 6 sampel didapatkan eluen polar untuk smapel pandan suji adalah eluen yang berkode vial E dan untuk sampel kunyit eluen yang polar adalah eluen berkode vial E. untuk eluen dengan kode vial C, D, dan F eluen terlau polar sedangkan untuk eleun dengan kode vial A dan B kurang polar. Kemudian kedua sampel ditotolkan kembali pada 2 buah pelat berukuran 2 x 7 cm, dengan jarak bawah pada pelat sebesar 1 cm dan jarak atas pada pelat sebesar 0,5 cm. Setelah penotolan pada pelat, pelat , pelat yang bernoda dimasukkan chamber yan berisi eluen dengan kode vial E. Dari perlakuan ini dihasilkan noda yang terangkat naik, jumlah titik noda pada 2 noda pandan suji adalah 6 buah. Sedangkan untuk sampel kunyit jumlah noda pada kedua nodanya sebanyak 4 buah.
Pembahasan
Telah dilakukan praktikum kromatografi lapis tipis. Sampel yang digunakan berupa daun pandan suji dan kunyit. Digunakan 2 sampel ini karena pada daun pandan suji terdapat suatu zat yang bernama klorofil, klorofil adalah zat warna hijau pada daun, zat ini mudah untuk diteliti proses kromatografinya. Sedangkan pada kunyit terdapat zat bernama karoten yang memberi warna kuning yang kuat pada kunyit. karoten juga mudah untuk diteliti proses kromatograinya sehingga digunakan pada proses ini. Adanya klorofil pada daun pandan suji dan karoten pada kunyit yang kuat, mampu membuat kedua bahan ini memberikan pewarna alami pada makanan. Struktur klorofil
Klorofil A
Klorofil B Struktur karoten
α-karoten
β-karoten Klorofil strukturnya bersifat non polar meskipun ada bagian yang bersifat polar, sifat non polar ini sama seperti hidrokarbon. Hal ini yang menyebabkan klorofil mudah larut dalam pelarut non polar seperti eter. Ada dua jenis klorofil yaitu klorofil a dan klorofil b, yang membedakan kedua jenis klorofil ini adalah adanya gugus aldehid pada struktur klorofil b yang menyebabkan klorofil b ini bersifat sedikit lebih polar dibandingkan klorofil a. Pada sampel daun pandan suji kemungkinan klorofil yang dominan adalah klorofil sehingga pelarut yang digunakan untuk mengekstrak klorofilnya adalah metanol yang bersifat lebih polar daripada alkohol yang lain. Sedangkan pada kunyit yang mengandung karoten digunakan pelarut etanol dimana etanol lebih non polar daripada metanol. Hal ini mengindikasikan bahwa karoten bersifat lebih non polar daripada klorofil. Karoten (C40H56) adalah senyawa alkena dengan rantai panjang dari sistem ikatan rangkap terkonjugasi.. Meskipun secara keseluruhan molekul karoten adalah non polar, akan tetapi mempunyai sifat dapat mengubah bidang polarisasi. Karoten juga ada dua jenis yaitu α-karoten dan β-karoten, yang membedakan kedua struktur ini adalah posisi ikatan rangkap pada cincin ujung. Pemilihan pelarut dalam proses pengekstrakan tidak boleh salah atau tertukar. Karena jika salah atau tertukar zar warna/pigmen dalam sampel tidak akan larut sehingga pigmen tidak dapat keluar atau tidak dapat digunakan. Setelah sampel diekstrak, filtrat yang berwarna hijau untuk daun pandan suji di dekantasi. Proses dekantasi lebih dipilih daripada filtrasi karena untuk mempertahankan pigmen klorofil
dalam filtrat. Jika menggunakan filtrasi kemungkinan klorofil dapat tersaring pada kertas saring. Sama halnya dengan pigmen karoten pada kunyit, proses yang digunakan adalah dekantasi bukan fitrasi karena mempertahankan pigmen karoten. Kemudian filtrat diekstraksi menggunakan corong pisah dengan ditambahkan pelarut non polar diklorometana agar kedua zat tidak bercampur dan terlihat pemisahannya. Campuran dalam corog pisah dikocok untuk memisahkan larutan dengan sesekali keran dibuka agar gas dari diklorometana keluar. Hasil untuk daun suji adalah 2 lapisan berwarna hijau, dimana lapisan atas lebih terang daripada lapisan bawah. Hal ini disebabkan lapisan atas bersifat nonpolar sehingga campuran dalam pigmen klorofil yang bersifat non polar (seperti klorofil a) larut dalam diklorometana sedangakan zat yang bersifat polar dibawah, zat yang berada dibawah inilah yang digunakan sebagai sampel uji. Untuk kunyit, diperlakukan hal sama yaitu ditambahkan dengan diklorometana dan dikocok. Hasilnya yaitu terbentuk 2 lapisan berwarna kuning, dimana lapisan atas berwarna lebih terang daripada lapisan bawah. Lapisan bawah mengandung karoten lebih banyak dan bersifat lebih polar daripada lapisan atas, sehingga sampel ini yang dijadikan sebagai sampel yang akan digunakan. Pelat yang akan digunakan dioven dalam suhu 110 0 C selama 10 menit. Hal ini dilakukan untuk mengaktifkan pelat dan untuk menghilangkan molekul air yang mungkin terikat dalam pelat, jika tidak dihilangkan air ini dapat bertindak sebagai fasa mobile sehingga memengaruhi hasil kromatografi dan hasil R f . Eluen yang digunakan adalah campuran antara etanol dan diklorometana dalam vial-vial dengan perbandingan sebagai berikut: A. 3 : 7
D. 6 : 4
B. 4 : 6
E. 7 : 3
C. 5 : 5
F. 8 : 2
Eluen dengan berbagai perbandingan di atas bertujuan untuk memilih eluen yang paling baik atau tepat untuk digunakan dalam penentuan R f . Untuk cincin terkonsentrasi, plat diberi titik-titik dan kode A-F dengan pensil, penitikan dilakukan dengan pinsil karena jika digunakan dengan bolpoin, tinta akan ikut tercampur pada eluen. Jarak antar titik sekitar 1 cm, adanya jarak pada titik-tititk difungsikan agar daerah cincin konsentrasi dapat terlokalisasi atau tidak meluber ke titik lainnya. Jika noda
sampai meluber ke titik yang lain menyebabkan sulitnya penentuan cincin yang polar. Selanjutnya sampel ditotolkan pada titik-titik tersebut sebanyak 2 kali, baru kemudian menambahkan eluen dengan kode A-F ditotolkan sesuai dengan kode sampel A-F pada plat. Berdasarkan percobaan diperoleh pada daun pandan suji dan kunyit didapatkan macammacam bentuk noda. Pada kode vial E cenderung bersifat polar, hal ini terlihat dari cincin yang dibentuk terlihat teratur antara lebar cincin satu dan yang lain. Pada kode A dan B cenderung bersifat kurang polar, terlihat dengan noda yang tidak membentuk cincin. Sedangkan untuk noda kode vial C, D, dan F cenderung terlalu polar karena cincin yang dibentuk terlalu lebar dan jarak antara cincinnya tidak sama, ada yang berjarak terlalu dekat dan ada yang jaraknya terlalu lebar. Dengan demikian eluen yang sesuai adalah kode vial E. Tabel cincin terkonsentrasi: Pelarut A
B
C
D
E
F
Kunyit
KP
KP
KP
TP
P
TP
Pandan
KP
KP
TP
TP
P
TP
Sampel
Keterangan : KP = Kurang Polar P
= Polar
TP = Terlalu Polar
Pada persiapan chamber keras saring dimasukkan ke dalam gelas yang tegak, dan permukaaan dalamnya rata, tinggi kertas saring tersebut + 2 cm dari dinding atas gelas. Kemudian memasukkan eluen yang perbandingan sesuai yaitu E sebanyak 5 mL dan ditutup dengan pelat kaca yang bertujuan untuk menjenuhkan eluen dan karena sifat eluen yang mudah menguap. Kejenuhan eluen ditunjukkan dengan kertas saring yang basah seluruhnya, karena sifat kapilaritas dari eluen. Chamber digunakan sebagai media kapilaritas eluen yang cocok yang kemudian eluen ini digunakan untuk uji kromatografi lapis tipis.
Selanjutnya, pada penentuan R f pelat diberi tanda batas atas 0,5 cm dan batas bawah 1 cm. Pelat tersebut diberi 2 titik dengan pensil dan setiap titik ditotolkan sampel sebanyak 2 kali. Kemudian plat dimasukkan dalam gelas dengan posisi tegak agar hasil laju titik warna tidak miring. Pelat diambil setelah eluen mencapai batas atas, dengan terbentuknya gradiasi warna, dikeringkan dan ditutup selotip agar warnanya tidak memudar. Dari proses diatas didapatkan noda yang berbeda beda. Untuk daun pandan suji didapatkan titik noda sebanyak 6 buah sedangkan pada kunyit didapatkan titik sebanyak 4 buah. Lalu, diukur R f nya dan didapat nilai R f sesuai perhitungan dibawah ini: Sampel
Rf 1
Rf 2
Rf 3
Rf 4
Rf 5
A
B
A
B
A
B
A
B
0,072
0,072
0,127
0,127
0,181
0,181
0,254
0,254
Rf 6
A
B
A
B
Kunyit Rata-
0,072
rata
0,127
0,181
0,254
A
B
A
B
A
B
A
B
A
B
A
B
0,218
0,218
0,364
0,364
0,618
0,618
0,673
0,673
0,745
0,745
0,818
0,818
Pandan Ratarata
0,218
0,364
0,618
0,673
0,745
0,818
Rata-rata Rf diperoleh dari
Diskusi
Dari percobaan diperoleh titik noda yang bagus untuk sampel daun pandan suji sedangkan pada kunyit titik noda yang terbentuk hanya empat, selain itu noda kurang dapat naik (ascending), tidak seperti noda pada sampel daun pandan suji. Hal ini terjadi karena kemungkinan ketika mengamati eluen yang cocok melalui proses cincin terkonsentrasi kurang cermat. Noda dengan eluen E yang terlihat polar kemungkinan sejatinya tidak bersifat polar melainkan bersifat kurang polar atau terlalu polar. Kekurang cermatan dalam pengamatan ini mempengaruhi dalam proses penentuan R f. Kesimpulan
Dari percobaan yang telah dilakukan dapat disimpulkan sebagai berikut: 1. Komposisi eluen yang sesuai untuk sampel pandan betawi berdasarkan metode cincin terkonsentrasi adalah eluen dengan kode vial E yaitu campuran dengan perbandingan kloroform-etanol (7:3) sedangkan eluen yang cock untuk kuyit yaitu vial E. 2. Nilai Rf rata-rata untuk 4 titik noda pada kunyit berturut-turut: 0,072; 0,127; 0,181; 0,254 3. Nilai Rf rata-rata untuk 6 titik noda pada daun suji berturut-turut: 0,218; 0,364; 0,618; 0,673; 0,745; 0,818
JAWABAN PERTANYAAN
1. Apa yang terjadi jika eluen yang digunakan sebagai pelarut pengembang pada KLT terlalu polar atau kurang polar? Mengapa? Jawaban : Jika eluen yang digunakan sebagai pelarut pengembang pada KLT terlalu polar akan menyebabkan noda merambat naik terlalu cepat atau noda berlari, sedangkan jika eluen yang digunakan sebagai pelarut pengembang pada KLT kurang polar akan menyebabkan noda sama sekali tidak bergerak.
2. Apa fungsi kertas saring pada percobaan penentuan R f ? Jawaban : Fungsi dari kertas saring adalah untuk mengetahui eluen dalam chamber sudah jenuh ataukah belum. Jika seluruh kertas saring telah basah, maka eluen dalam chamber telah jenuh karena sifat eluen yang mudah menguap dan uap itulah yang membasahi seluruh bagian dari kertas saring.
3. Mengapa permukaan pelat KLT tidak boleh rusak? Jawaban : Karena jika permukaan pelatKLT rusak, maka eluen akan terhambat naik dan noda juga akan terhalang sehingga hasil dari kromatografi juga tidak akan maksimal.
4. Mengapa pelat yang digunakan harus dikeringkan dulu dalam oven? Jawaban : Karena dalam plat sangat mungkin terdapat molekul air yang terikat yang akan menghalangi proses pengembangan sampel, sehingga untuk menghilangkan molekul air inilah dilakukan pengeringan dalam oven selain juga untuk mengaktifkan daya serap pelat terhadap eluen.
5. Mengapa batas atas dan batas bawah pelat harus diberi tanda dengan pinsil? Jawaban : Pemberian tanda berupa garis adalah untuk meluruskan totolan noda, sehingga eluen yang naik membawa sampel juga akan sama. Sedangkan penggunaan pensil adalah karena noda pensil tidak akan ikut terbawa oleh eluen, sehingga noda dari sampel tidak akan terkontaminasi. Jika digunakan bulpoin, maka tinta dari bulpoin akan terbawa eluen (ikut terelusi) dan noda juga akan terpengaruh, sehingga hasil kromatografi juga akan jadi kurang maksimal.
