LAPORAN RESMI PRAKTIKUM KROMATOGRAFI “KROMATOGRAFI “KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS”
Disusun Oleh: (Kelompok 15 ) 1. 2. 3. 4.
Larial Tri Julisah Lidya Aprilian Elkel Linda Linda Mailiya Safriani
(050217A058) (050217A059) (050217A060) (050217A061)
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS NGUDI WALUYO 2017/2018
I
JUDUL PERCOBAAN “ Identifikasi Paracetamol Secara Kromatografi Lapis Tpis”
II
TUJUAN PERCOBAAN
Untuk mengidentifikasi kromatografi lapis tipis. III
parasetamol
dalam
sampel
secara
DASAR TEORI
Kromatografi merupakan teknik pemisahan tertentu, pada dasarnya kromatografi menggunakan dua fase yaitu fase tetap (stationary) dan fase bergerak (mobile), pemisahan tergantung pada gerakan relatif dari dua fase ini. Dari beberapa jenis kromatografi, satu diantaranya adalah kromatografi lapis tipis (KLT), kromatografi jenis ini membutuhkan waktu yang lebih cepat dan diperoleh pemisahan yang lebih baik (Susilo, 2005). Kromatografi lapis tipis (KLT) adalah salah satu metode pemisahan komponen menggunakan fase diam berupa inert. KLT juga merupakan salah satu jenis kromatografi analitik dan termasuk dalam kategori kromatografi planar (Fessenden, 2003). Prinsip KLT adalah adsorbsi dan partisi dimana adsorbsi adalah penyerapan pada permukaan, sedangkan partisi adalah penyebaran atau kemampuan suatu zat yang ada dalam larutan untuk berpisah kedalam pelarut yang digunakan (soebagio, 2002). Metode KLT adalah menggunakan lempeng kaca atau lembaran plastik yang ditutupi penyerap atau lapisan tipis dan kering. Untuk menotolkan larutan cuplikan pada lempeng kaca, pada dasarnya menggunakan mikro pipet atau pipa kapiler ( Soebagio, 2002). Metode KLT memiliki beberapa keuntungan dan kerugian. Keuntungannya, waktu yang dibutuhkan tidak terlalu lama dan jumlah sampel yang digunakan sedikt (2 – 20 ug). Adapun kerugiannya adalah tidak efektif dalam skala besar. Pemakaian dalam skala besar akan menghabiskan plat KLT yang lebih banyak sehingga biaya analisis pun akan semakin meningkat (Tambunan, 2011). Kepolaran eluen berpengaruh terhadap Rf (Faktor retensi) atau Derajat retensi pada kromatografi lempeng, dan dinyatakan sebagai faktor retensi. Nilai Rf sangat karakteristik untuk senyawa tertentu pada eluen tertentu. Hal ini dapat digunakan untuk mengidentifikasi adanya perbedaan senyawa dalam sampel. Fase gerak atau pelarut pengembang
akan bergerak naik sepanjang fase diam karena adanya gaya kapilaritas pada sistem pengembangan menaik (assending). Nilai Rf diperoleh dari jarak rambat sampel dibagi dengan jarak rambat fase gerak. Nilai Rf yang baik adalah 0,2 – 0,8 (Gandjar, 2007). Faktor – faktor yang (Sastrohamidjojo,1985) antara lain :
mempengaruhi
Struktur kimia dari senyawa yang dipisahkan
sifat penyerap dan aktivitasnya,
tebal dan kerataan lapiasan penyerap,
tingkat kemurnian fase gerak,
tingkat kejenuhan uap,
nilai
Rf
jumlah cuplikan yang diinginkan dan suhu
Parasetamol atau asetaminofen adalah turunan a para-aminophenol yang memiliki khasiat sebagai analgesik, antipiretik dan aktivitas terhadap antiradang lemah. Parasetamol (C8H9N02) mengandung tidak kurang dari 90% dan tidak lebih dari 110 % dari jumlah yang tertera pada etiket, pemerian parasetamol berupa hablur putih, tidak berbau, rasa sedikit pahit. Kelarutan, Larut dalam 70 bagian air, 7 bagian (85%), 13 bagian aseton P,40 bagian gliserol dan 9 bagian propilenglikol P serta larut dalam alkali hidroksida (Dirjen POM, 1979). Kloroform atau Chloroformum mengandung tidak kurang dari 99,0% dan tidak lebih dari 99,5 % CHCL3, sisanya terdiri dari alkohol. Pemeriannya cairan jernih, tidak berwarna, mudah mengalir, mempunyai sifat khas bau eter, rasa manis dan membakar. Mendidih pada suhu lebih kurang 61 derajat dipengaruhi oleh cahaya. Kelarutan sukar larut dalam air, dapat bercampur dengan etanol, dengan eter,dengan benzena, dengan heksana, dan dengan lemak dan minyak menguap (FI IV, 1995) Etanol atau Aethanolum mengandung tidak kurang 92,3% b/b dan tidak lebih dari 93,8 % b/b, setara dengan tidak kurang dari 94,9 % v/v dan tidak lebih dari 96,0% v/v, C2H5OH, pada suhu 15,56. Pemeriannya cairan mudah menguap, jernih, tidak berwarna. Bau khas dan menyebabkan rasa terbakar pada lidah. Mudah menguap walaupun pada suhu rendah mendidih pada suhu 78 derajat, Mudah terbakar . Kelarutan bercampur dengan semua pelarut organik (FI IV, 1995).
IV
ALAT DAN BAHAN
a. Alat
Chamber Kromatografi
Gelas ukur
Beakerr glass
Pipa Kapiler
Lempeng KLT
Kertas Saring
Water Bath b. Bahan
V
Paracetamol
Kloroform
Etanol
CARA KERJA
Melakukan uji organoleptis pada sampel
Menyiapkan sampel yang akan diuji
Menyiapkan baku Pracetamol
Membuat Eluen yaitu degan mengambil 9 ml Kloroform dan dicampur dengan 1 ml etanol yang diencerkan sampai 5 ml
Masukkan eluen tersebut ke dalam chamber dan dijenuhkan sampai kertas saring basah
Penotolan pada lempeng KLT
Identifikasi KLT
VI
PENGAMATAN
Tabel 4.1 Harga Rf KLT identifikasi parasetamol dalam sampel Rf
Sampel Baku Paracetamol
VII
0,3/5 = 0,06 4,1/5 = 0,82
Sinar Tampak -
Sinar UV 254
Ungu Ungu
Karakteristik Senyawa Polar Non polar
PEMBAHASAN
Hasil KLT pada identifikasi parasetamol dalam sampel menggunakan eluen kloroform : Etanol (9 : 1). Pemilihan eluen tersebut menganut prinsip kelarutan yaitu like disolves like diharapkan sifat komponen dapat memisah akibat perbedaan kepolaran larutan. Menurut (Harmita, 2006) pemilihan fase gerak dapat dimulai dengan pelarut non polar kemudian ditingkatkan kepolarannya secara bertahap, baik pelarut tunggal maupun kombinasi dua pelarut yang bebeda kepolarannya dengan perbandingan tertentu sesuai tingkat kepolaran yang dibutuhkan. Nilai Rf masing – masing zat uji disajikan pada tabel 5.1 Identifikasi warna bercak dengan sinar UV 254 dan profil kromatogram disajikan pada gambar 5.1 Tabel 5.1 Harga Rf KLT identifikasi parasetamol dalam sampel Rf
Sampel Baku Paracetamol
0,06 0,82
Sinar Tampak -
Sinar UV 254 Ungu Ungu
Karakteristik Senyawa Polar Non polar
Keterangan : S
: Hasil KLT identifikasi sampel pada sinar UV 254
B
: Hasil KLT identifikasi Baku parasetamol pada sianr UV 254
Gambar 5.1 Profil kromatogram KLT identifikasi parasetamol dalam sampel. Pada profil kromatogram menunjukkan bahwa bercak noda pada sampel bukan merupakan parasetamol. Terlihat pada bercak noda sampel tidak mengalami pergerakan dibanding jarak bercak noda baku parasetamol. Akan tetapi bercak noda sampel memiliki nilai Rf dikarenakan terjadi Tailling. Bercak noda baku parasetamol juga terjadi Tailling. Hal ini diduga pada penotolan sampel dan baku parasetamol terlalu banyak sehingga bercak noda menjadi Tailling. Karakteristik senyawa yang digambarkan pada kromatogram sampel adalah bersifat polar ditunjukkan dengan adanya bercak ungu pada sinar UV 254 dan harga Rf 0,06. Hal ini dikarenakan fase diam bereaksi menahan sampel dan didukung oleh (Chairunnisa,2013) bahwa silka gel adalah fase diam yang bersifat polar sehingga semakin polar molekul maka akan terabsorbsi semakin kuat dan elusi akan bejalan dengan lambat. Menurut (Aprianti, 2011) Kloroform bersifat non polar karena semakin kecil indeks polaritas yang dimiliki oleh pelarut maka semakin bersifat non polar pelarut yang digunakan. Eluen yang digunakan dalam penelitian ini adalah Pelarut kloroform dan etanol (9:1). Dimana pelarut kloroform tersebut lebih banyak dibanding etanol. Sehingga baku parasetamol yang ikut terbawa oleh fase gerak bersifat non polar hal ini terbukti dengan nilai Rf 0,82 pada sinar UV 254. VIII
KESIMPULAN
Pada profil kromatogram menunjukkan bahwa bercak noda pada sampel bukan merupakan parasetamol. Pada identifikasi sampel, sampel bersifat polar dan identifikasi baku parasetamol bersifat non polar.
DAFTAR PUSTAKA
Aprianti. Dian 2011. Aktivitas Anti Bakteri Ekstrak Biji Picung ( Pangium Edule Reinw) dan Pengaruhnya Terhadap Stabilitas Fisiko Kimia, Mikrobiologi dan Sensori Ikan Kembung ( Rastrelliger neglectus). UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Chairunnisa. Ratu Feni 2013. Isolasi Senyawa Aktif Anti Bakteri Ekstrak Metanol Akara Tumbuhan Lasianthus reticulatusBume. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Dirjen POM. 1979. Farmakope Indonesia Edisi III. Departemen Kesehatan RI: Jakarta. Dirjen POM. 1995. Farmakope Indonesi Edisi IV. Departemen Kesehatan RI : Jakarta. Fessenden R.J dan J.S Fessenden., 2003, Dasar - dasar kimia Organik . Jakarta, Erlangga Gandjar, IG dan Rohman , A. 2007. Kimia Farmasi Analisis . Pustaka Pelajar. Yogyakarta Harmita. 2006. Analisis Fisiko Kimia. Depok: Departemen Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Inndonesia Satrohamidjojo. 1985. Kromatografi. Penerbit Liberty. Yogyakarta Soebagio., 2002, Kimia Analitik , Universitas Negeri Makassar Fakultas MIPA, Makassar. Susilo, Jatmiko. 2005. Penetapan Kadar Co-Trimoksazol yang dilakukan dengan menggunakan spektrofotometer Ultraviolet Secara Simultan – KLT . Jurnal Litbang. Universitas Muhammadiyah Semarang. Semarang Tambunan A.P. 2011. Profil Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Ekstrak Tempuyung Sonchus arvensis L. Dan Toksisitasnya Terhadap Artemia Salina. Skripsi. Departemen Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor. Bogor
