LAPORAN PRAKTIKUM STANDARISASI BAHAN ALAM PERCOBAAN 10 PEMANFAATAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS (KLT) DALAM ANALISIS IDENTIFIKASI JAM PALSU
Disusun oleh: Kelompok G/3 Risa Apriani Hilyah Miranda Dwi Putri Neng Aneu Nurul H Diah Rohaeni
10060316203 10060316203 10060316204 10060316204 10060316207 10060316207 10060316208 10060316208
Asisten: Aisya Qisthi.,S.Farm Tanggal Praktikum : 14 Maret 2018 Tanggal Pengumpulan : 21 Maret 2018
LABORATORIUM FARMASI FARMASI TERPADU UNIT B PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS ISLAM BANDUNG 1439H/ 2018
PERCOBAAN 10 PEMANFAATAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS (KLT) DALAM ANALISIS IDENTIFIKASI JAM PALSU I.
Tujuan Percobaan
Mendeteksi adanya bahan kimia obat (BKO) pada jamu dengan metode kromatografi lapis tipis (KLT) II.
Alat dan Bahan a. Alat
1. Chamber KLT 2. Mikroskop 3. Lampu UV 254 dan 365 nm 4. Penampak bercak 5. Pengering ( Hair dryer ) 6. Pipa kapiler b. Bahan
1. Etanol 2. Jamu dari kelompok 3. Jamu simulasi dari asisten 4. Plat KLT 5. Zat kimia pembanding:
III.
-
Antalgin
-
Ibuprofen
-
Parasetamol
Prosedur Percobaan
Jamu simulasi dan jamu yang telah dibeli oleh setiap kelompok disiapkan. Larutan sampel dan larutan pembanding dibuat dengan cara 10 mg jamu dilarutkan dalam 5 mL etanol dan pembanding 10 mg dalm 5 mL etanol. Lalu larutan pengembang berupa kloroform : metanol (9:1) atau pengembang yang lain yang cocok disiapkan untuk zat kimia pembanding yang digunakan dengan mengacu pada pustaka. Kemudian larutan pengembang dijenuhkan terlebih dahulu.
Sebelum dilakukan penotolan plat KLT diaktivasi terlebih dahulu di dalam oven pada suhu 105 oC selama 15 menit . Larutan jamu sampel, jamu simulasi dan BKO pembanding ditotolkan ke plat KLT. Lalu dilakukan pengelusian dengan pengembang hingga batas 1 cm dari ujung plat. Kemudian dikeringkan dan diamati secara visual dibawah sinar UV 254 nm dan 365 nm. Hasil pengamatan yang didapat didiskusikan. Khusus untuk jamu simulasi, diwajibkan untuk diidentifikasi senyawa yang terdapat di dalam jamu tersebut. IV.
Data Pengamatan dan Perhitungan
4.1. Data pengamatan
Fase Diam
: Silica F 254
Fase Gerak
: kloroform: metanol 9:1
Sampel
: - Jamu Simulasi - Jamu Ar Ma Lin
Zat pembanding
: Antalgin, Ibuprofen, Paracetamol
Jumlah sampel
: 2 totolan
Jarak Pengembangan : 5 cm Larutan
Rf
Jamu Uji
0,52
Jamu Simulasi
0,72
Antalgin
0,74
Ibuprofen
0,9
Parasetamol
0,54
Gambar
Keterangan
Jamu Uji
Jamu Uji dan Jamu Simulasi yang telah dilarutkan dengan 5 ml etanol
Larutan Pembanding yang digunakan
Elusi
Proses pengeringan plat KLT setelah dielusi
Hasil pengamatan KLT jamuuji, jamu simulasi dan larutan pembanding dibawah sinar UV 254 nm
4.2. Perhitungan
Diketahui :
Jarak yang ditempuh pelarut (b) : 5 cm Jarak yang ditempuh senyawa (a) : Jamu Uji
: 2,6 cm
Jamu Simulasi
: 3,6 cm
Larutan Antalgin
: 3,7 cm
Larutan Ibuprofen
: 4,5 cm
Larutan Paracetamol
: 2,7 cm
Ditanyakan : Rf masing-masing senyawa Jamu Uji
: Rf =
Jamu Simulasi
: Rf =
Larutan Antalgin
: Rf =
Larutan Ibuprofen
: Rf =
Larutan Parasetamol
: Rf =
2,6 5
= 0,52
3,6 5
= 0,72
3,7 5
= 0,74
4,5 5 2,7 5
= 0,9
= 0,54
V.
Pembahasan
Pada
percobaan
kali
ini
yaitu
membahas
tentang
pemanfaatan
kromatografi lapis tipis (KLT) dalam analisis identifikasi jamu palsu dengan tujuan untuk mengetahui kandungan bahan kimia obat (BKO) dalam jamu palsu. Pada prinsipnya metode KLT ini yaitu pemisahan berdasarkan sifat kepolaran suatu senyawa. (Hendayana, 2010) Berdasarkan
PERMENKES No. 246/Menkes/Per/V/1990
menyatakan
bahwa Obat tradisional adalah bahan atau ramuan bahan yang berupa bahan tumbuhan, bahan hewan, bahan mineral, sediaan galenik atau campuran dari bahan-bahan tersebut yang secara tradisional telah digunakan untuk pengobatan berdasarkan pengalaman. Sehinga Obat Tradisional dilarang mengandung BKO. Berdasarkan Permenkes No. 246/Menkes/Per/V/1990 Pasal 3 menyatakan bahwa obat tradisional harus memenuhi persyaratan: a. Secara empirik terbukti aman dan bermanfaat untuk digunakan manusia; b. Bahan obat tradisional dan proses produksi yang digunakan memenuhi per syaratan yang ditetapkan; c. Tidak mengandung bahan kimia sintetik atau hasil isolasi yang berkhasiat sebagai obat; d. Tidak mengandung bahan yang tergolong obat keras atau narkotika. BKO yang ditambahkan ke dalam obat tradisional umumnya dimaksudkan untuk
meningkatkan
khasiat
dari
obat
tradisional
itu
sendiri
seperti
menghilangkan gejala sakit dengan segera (seperti pada pegal linu), secara farmakologis menekan rangsang makan pada susunan syaraf pusat (seperti pada jamu pelangsing), meningkatkan aliran darah ke corpus kevernosum dengan segera (pada jamu peningkat stamina pria). Penggunaan bahan kimia obat dalam obat tradisional ternyata dapat menimbulkan efek samping yang berbahaya terhadap kesehatan apabila digunakann secara terus-menerus dalam jangka waktu yang relatif lama karena tidak diketahui berapa jumlah dosis yang ditambahkan kedalam produk obat tradisional tersebut. Selain itu apabila dikonsumsi secara terus-menerus dengan dosis yang tidak sesuai dalam jangka waktu tertentu dapat mengakibatkan kerusakan organ tubuh bahkan dapat menimbulkan kematian.
Menurut temuan Badan POM, obat tradisional yang sering dicemari BKO umumnya adalah obat tradisional yang digunakan pada: Klaim kegunaan obat tradisional
BKO yang sering ditambahkan
Pegal linu / encok / reumatik
Fenilbutason, antalgin, diklofenak sodium, piroksikam, parasetamol, prednison, atau deksametason
Pelangsing
Sibutamin Hidroklorida
Peningkat stamina / Obat Kuat pria
Sildenafil Sitrat
Kencing manis / diabetes
Glibenklamid
Sesak nafas / asma
Teofilin
Penambah nafsu makan
Dexamethason dan siproheptadine
Berikut Khasiat yang diinginkan dan efek samping dari zat pembanding yang digunakan: Bahan Kimia Obat
Khasiat yang diinginkan
Metampiron/ Antalgin
Menghilangkan rasa nyeri Pada jamu pegal linu bekerja dengan menghambat sintesis prostaglandin yang berperan sebagai mediator nyeri.
Paracetamol
Menghilangkan rasa nyeri Pada jamu pegal linu bekerja dengan menghambat sintesis prostaglandin yang berperan sebagai mediator nyeri.
Efek samping Antalgin yang berat adalah gangguan darah yang disebut agranulositosis ( berkurangnya jumlah sel darah putih, khususnya neutrofil granulosit). Sehingga gampang terkena infeksi, tubuh terasa lemah ( tidak enak badan, lemah, pusing, sakit otot), diikuti dengan terjadinya tukak pada membrane mukosa lambung. Pada dosis besar parasetamol dapat merusak hati/liver menyebabkan gangguan liver. Di dalam tubuh. Parasetamol akan dimetabolisir menghasilkan zat radikal bebas yang bernama N-acetyl-pbenzoquinoneimine (NAPQI). Dalam
keadaan normal NAPQI akan didetoksikasi secara cepat oleh enzim glutation dari hati. Pada dosis berlebih. Hati tidak mampu lagi mendetoksinya dan zat radikal bebas tersebut justru dapat merusak hati Ibuprofen terutama digunakanuntuk mengobati atritis reumatik yang
Ibuprofen
bekerja dengan cara
Pada dosis besar menyebabkan
memasuki ruang sinovial
gastritis, konstipasi, nausea dan
secara lambat dan
pusing (Gilman, 1996).
terakumulasi dalam konsentrasi tinggi. (Gilman, 1996).
KLT merupakan suatu sistem kromatografi fase normal dimana fase diamnya lebih polar dibandingkan dengan geraknya (David, C. 2001) Di sini yang berperan sebagai fase gerak (berupa cairan) adalah kloroform dan methanol, dan fase diam (berupa padatan) adalah silica gel GF 254 nm dan 365 nm yang mengandung pengikat (Gypsum) dan senyawa yang mampu berfluoresensi (berpendar) ketika diamati dibawah sinar UV 254 dan 365 nm. Suatu senyawa dapat berfluoresen karena memiliki kemampuan untuk mengabsorbsi (menyerap) suatu cahaya untuk kemudian memancarkan cahaya lagi, namun cahaya yang dipancarkan kembali itu memiliki warna yang berbeda dengan warna cahaya awalnya (Iskandar, 2007). Prinsip kerja dari KLT ada 3 tahap yaitu adsorpsi, penjerapan senyawa kimia pada fase diam.Desorpsi, ketika fase diam yang digunakan lebih polar maka afinitas fase gerak terhadap fase diam akan lebih kuat dibandingkan senyawa kimia, sehingga senyawa kimia akan terlepas dari fase diam. Dan elusi, senyawa kimia yang terlepas dari fase diam selajutnya akan terelusi (Speight, 2003). Pada pengidentifikasi jamu palsu dengan metode kromatografi lapis tipis (KLT) larutan sampel yaitu jamu pegal linu dan jamu simulasi dilarutkan dalam methanol, karena metanol merupakan pelarut yang baik dan dilihat dari
kepolarannya metanol lebih polar dari pada etanol. Larutan pembanding yang digunakan adalah paracetamol, ibu profen , dan antalgin, hal ini dikarenakan Sampel jamu adalah jamu Pegal Linu yang dicurigai adanya bahan kimia obat dalam campuran jamu tradisional seperti Paracetamol, Antalgin, dan Ibu profen. Selanjutnya pembuatan larutan pengembang atau eluen dilakukan dengan cara mencampurkan kloroform: metanol 9:1 lalu dimasukkan ke dalam gelas kimia. Penggunaan perbandingan 9:1 ini karena eluen yang kita butuhkan harus bersifat non polar, dimana koloroform bersifat non polar sedangkan metanol bersifat polar maka jumlah kloroform harus lebih banyak dibandingkan metanol. Kecepatan proses KLT dipengaruhi oleh tingkat kejenuhan chamber dan daya serap plat terhadap fase gerak (Stahl, 1969). Chamber dijenuhkan dengan cara kertas saring dan dimasukkan kedalam chamber yang sudah diisi eluen, indikasi yang menandakan chamber sudah terjenuhkan oleh eluen yaitu jika eluen sudah naik dan membasahi kertas saring sampai bagian atas. Hal ini menunjukkan bahwa kekosongan ruang struktur kloroform yang diisi dengan metanol sudah penuh, apabila kloroform sudah sampai pada kondisi jenuh maka kloroform yang tidak dapat mengikat metanol akan terserap ke kertas Tujuan penjenuhan agar atmosfer dalam chamber penuh dengan uap eluen sehingga pada proses eluasi kecepatan penguapan eluen sama pada semua sisi permukaan plat KLT. Daya serap plat terhadap fase gerak juga mempengaruhi kecepatan proses KLT, sebelum digunakan plat KLT harus diaktivasi dengan cara dipanaskan dalam oven pada suhu 105 oC. Hal ini bertujuan agar fase gerak dapat bergerak cepat maka plat KLT harus dalam kondisi kering. Setelah penjenuhan eluen dan aktivasi plat KLT dilanjutkan dengan penotolan larutan sampel, larutan pembanding, dan zat kimia pemanding pada plat KLT . Maka disiapkan plat silika untuk penotolan dengan ukuran 7 X4 cm. Diberi batas bawah 1 cm dan batas atas 1 cm, sehingga diperoleh jarak eluen 5 cm. Tanda penotolan dilakukan dengan menggunakan pensil, hal ini dilakukan karena warna pada pensil tidak akan terbawa oleh eluen dan menjadi spot sedangkan bila kita menggunakan pulpen atau alat tulis berwarna lain maka zat warnanya akan ikut merambat bersama eluen dan akan mempengaruhi nilai Rf yang akan kita amati.
Langkah selanjutnya adalah melakukan penotolan sampel saat penotolan harus serba hati-hati jangan terlalu tebal dan jangan terlalu tipis, serta diperhatikan batas antara totolan dan pelarut fase gerak agar totolan tidak larut dalam fase gerak sehingga tidak terjadi elusi.dan monitor pada batas bawah plat silika. Batas atas dan bawah plat silika dibuat untuk memudahkan kita mengamati jarak rambat dari eluen sehingga memudahkan kita untuk menghitung harga Rf pada masingmasing sampel. Silika gel harus dijaga sebersih mungkin, karena apabila basah ataupun kotor akan menganggu disebabkan adanya pengotor jadi bukan dari sampel / zat murni yang akan diteliti. Hal ini bertujuan untuk mengecek fase gerak apakah mau memisah dan juga membersihkan fase gerak dari pengotor yang dapat menganggu jalannya pengamatan. Setelah dilakukan penotolan sampel dan monitor pada plat silika dan bercak dari masing-masing mengering, tempatkan lempengan plat kedalam chamber. Setelah eluene sampai pada batas atas dari plat KLT lalu diangin-anginkan dengan menggunakan hair dryer dan diamati secara visual di bawah sinar UV 254 nm. Hasi Rf pada 254 yaitu Jamu uji 0,52; jamu simulasi 0,72; Parasetamol 0,54; Antalgin 0,74; dan ibu profen 0,9. Pada pengindentifikasian BKO kami menyimpulkan bahwa BKO yang terkandung dalam jamu pegal linu kelompok kami adalah paracetamol karena nilai Rf jamu uji 0,52 mendekati nilai Rf paracetamol 0,52. Sedangkan pada jamu simulasi mengandung Antalgin.
VI.
Kesimpulan
BKO yang terkandung dalam jamu pegal linu kelompok kami adalah paracetamol karena nilai Rf jamu uji 0,52 mendekati nilai Rf paracetamol 0,52. Sedangkan pada jamu simulasi mengandung Antalgin.
Daftar Pustaka
Hendayana, Sumar. (2010). Kimia Pemisahan. Bandung: Rosda. David, C. (2001). Cromatography. London: Kogan Page. Iskandar, M.J. (2007). Pengantar Kromatografi Edisi Kedua. Bandung: ITB Lenny, S. 2006. Analisi Kromatografi dan Mikroskop. ITB. Bandung. Stahl, E. 1969. Thin Layer Cromatography. London: George Allen Unwin. Speight, H. M. (2003). Absorption Kromatography. New York : Academic Press. BPOM RI. 2008. Informasi Obat Nasional Indonesia. Jakarta BPOM RI. 2016. No. Hm. 03.03.1.431.11.16.4010 tentang obat tradisiobal yang mengandung bahan kimia obat . Jakarta.
