Laporan Spektrofotometri UV-Vis

LAPORAN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK  PENGUKURAN KADAR GLUKOSA DENGAN SPEKTROFOTOMETRI UV-VISIBLE

Disusun oleh : KELOMPOK 7D

 Nabila Mutiara

33111311 3311131143 43

Meidy Helena Latif

3311131147

 Nur Intan Fitrianti Kaharudin

33111311 3311131153 53

Gita !ta"riyanti

33111311## $sisten: Ibu %uryani

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI FAKULTAS FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS JENDERAL JEN DERAL ACHMAD YANI CIMAHI 2016

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Pr!"# Pr!"# P$r%&'((! P$r%&'((! a& 'erdasar!an 'erdasar!an "eny "enyera"an era"an (absor"s (absor"si) i) ener*i ener*i sinar sinar oleh +ole!ul +ole!ul , +ole!u +ole!ull

tere!sitasi dala+ daerah ultra -iolet dan -isible GD  b& Glu!osa . / . / H/ asa+ *lu!onat . H// 0D / H// . "henol . 4a+inoanti"irin

2uinonei+ine . 4 H/

1.2 T) T)*)(! *)(! P$r%&'((! P$r%&'((! /&1 Menent Menentu!a u!an n !adar !adar *lu!os *lu!osaa dala+ dala+ sa+"el sa+"el sear searaa eni+ eni+atis atis /&/ /&/ Me+b Me+bua uatt !ur!ur-aa !ali !alibr bras asii

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

Glu!osa +eru"a!an !arbohidrat yan* "alin* "entin* dala+ bio!i+ia +a+alia !arena ha+"ir se+ua !arbohidrat dala+ +a!anan a!an di!onersi +enadi *lu!osa untu! untu! +etabolis+e +etabolis+e selanutnya selanutnya Glu!osa Glu!osa adalah suatu aldohe! aldohe!sosa sosa dan serin*

disebut de!strosa !arena +e+"unyai sifat da"at +e+utar ahaya ter"olarisasi !e arah !anan& Di ala+6 *lu!osa terda"at "ada buahbuahan dan +adu lebah& Dala+ ala+6 *lu!osa dihasil!an dari rea!si antara !arbon dio!sida dan air den*an  bantuan sinar +atahari dan !lorofil dala+ daun& 0en**unaan *lu!osa diatur dala+ tubuh oleh insulin& Kelebihan *lu!osa a!an diubah +enadi *lu!a*on dan a!an disi+"an dala+ hati dan otot dan a!an di*una!an bila di"erlu!an dan a!hirnya diubah +enadi le+a! dan disi+"an seba*ai arin*an le+a!& Kadar *lu!osa dala+ darah +eru"a!an fa!tor yan* san*at "entin* untu! !elanaran !era tubuh& Kadar  nor+al *lu!osa dala+ darah adalah 78 +*91 +l& !eadaan di +ana !adar  *lu!osa berada di baah 7 +*9 1 +l disebut hi"o*lise+ia6 sedan*!an i!a di atas 8+*9 1 +l disebut hi"er*lise+ia& Hi"o*lise+ia e!stri+ da"at +en*hasil!an suatu rentetan rea!si *onan*an yan* ditunu!!an oleh *eala *e+etarnya otot6 "erasaan le+ah badan dan "uatnya arna !ulit& Hi"o*lise+ia yan* serius da"at +enyebab!an !ehilan*an !esadaran ("in*san) seba*ai a!ibat !e!uran*an *lu!osa dala+ ota! yan* "erlu untu! "e+bentu!an ener*i6 sehin**a !e+udian da"at +enyebab!an !e+atian& Kadar *lu!osa yan* tin**i +eran*san*  "e+bentu!an *li!o*en dari *lu!osa6 sintesis asa+ le+a!6 dan !olesterol dari *lu!osa& Kadar *lu!osa antara 1417 +*9 1+L disebut !adar a+ban* *inal& Geala ini disebut *li!osuria6 yaitu !eadaan !etida!+a+"uan *inal untu!  +enyera" !e+bali *lu!osa yan* telah +en*ala+i filtrasi& Hor+on insulin  ber"eran sentral dala+ +en*atur *lu!osa darah& Hor+on ini dihasil!an oleh sel ;  "ulau Lan*erhans di "an!reas seba*ai res"ons terhada" hi"er*li!e+ia& %elsel ;  "ulau Lan*erhans bersifat "er+eabel bebas terhada" *lu!osa +elalui "en*an*!ut GL<= /6 dan *lu!osa +en*ala+i fosforilasi oleh *lu!o!inase& leh !arena itu  "enin*!atan *lu!osa darah a!an +enin*!atan aliran +etaboli +elalui *li!olisis6 si!lus asa+ sitrat6 dan "e+bentu!an $=0& leh !arena itu6 !adar insulin dala+ darah setara den*an !onsentrasi *lu!osa darah& Mes!i"un tida! seara lan*dun* +e+"en*aruhi "enyera"an *lu!osa oleh hati6 na+un insulin +enin*!at!an  "enyera"an

an*!a

"anan*

a!ibat

!eranya

"ada

eni+eni+

yan*

+en*endali!an *li!olisis6 *li!o*enesis6 dan *luoneo*enesis& Glu!osa diteta"!an !adarnya setelah dio!sidasi seara eni+atis +en**una!an eni+ GD (Glucose oksidase)& H// yan* terbentu! !e+udian berea!si den*an fenol dan 4

a+inoanti"irin den*an !atalis eni+ "ero!sidase (0D) yan* +e+bentu!  2uinonei+ine& Intensitas arna yan* terbentu! sebandin* den*an !onsentrasi *lu!osa dala+ sa+"el& GD (Glukosa-oksidase) adalah suatu eni+ s"esifi! F$D yan* di"eroleh dari a+ur6 !arena di"a!ai untu! "enafsiran *lu!osa& %e+ua aerobi dehydro*enase yan* diteran*!an +en*andun* / +ole!ul *lu!osa nu!leotida& 0$0 (0henol $+ino 0ero!sidase) +en*andun* anti*en atau antibodi dala+ "ato*en arin*an& Me+"ertahan!an !adar *lu!osa dala+ darah hin**a stabil adalah salah satu yan* "alin* bai! "en*aturannya dari se+ua +e!anis+e ho+eostati!& GD Glu!osa . / . / H/

asa+ *lu!onat . H// 0D

/ H// . "henol . 4a+inoanti"irin

2uinonei+ine . 4 H/

+.1 G,)&"( D(r(

Glu!osa disera" oleh hati dan seba*ian disi+"an seba*ai *li!o*an atau asa+asa+ le+a! sehin**a !adar *lo!osa darah da"at di"ertahan!an dala+ batas nor+al >1/ +*9dL atau 3676 ++ol9L& "en*aturan !adar  *lu!osa darah san*at ditentu!an oleh bebera"a hor+on& Hor+on insulin da"at +enurun!an !adar *lu!osa darah sedan*!an *lo!a*on da"at +enai!!an !ada *lo!osa darah& Kadar *lu!osa darah yan* tin**i dala+ a!tu la+a a!an +enyebab!an diabetes +ellitus& (/:35) 0ada !eadaan setelah "enyera"an +a!anan6 !adar *lu!osa darah  "ada +anusia dan banya! +a+alia ber!isar antara 465565 ++ol9L& %etelah in*esti +a!anan yan* +en*andun* !arbohidrat 6 !adar tersebut da"at nai! hin**a #6576/ ++ol9L& Di saat "uasa6 !adar *lu!osa darah a!an turun +enadi se!itar 363368 ++ol9L& Kadar *lu!osa darah  ber!uran*& 0enurunan +endada! !adar *lu!osa darah a!an +eni+bul!an seran*an !on-ulsi6 se"erti terlihat "ada !eadaan o-erdosis indulin6 !arena !ete*antun*an ota! seara lan*sun* "ada "aso!an *lu!osa& Na+un6 !adar  yan* auh lebih rendah da"at ditoleransi asal!an terda"at ada"tasi yan*  "ro*resif&

+.2 P$/'$!)(! G,)&"( %eba*ian besar !arbohidrat yan* da"at dierna di dala+ +a!anan

a!hirnya a!an +e+bentu! *lu!osa& Karbohidrat di dala+ +a!anan yan* dierna seara a!tif +en*andun* residu *lu!osa& Glu!osa dibentu! dari senyaasenyaa

*lu!o*eni!

yan*

+en*ala+i *lu!oneo*enesis& Glu!oneo*enesis +eru"a!an instilah yan* di*una!anunt! +ena!uo +e!anis+e dan lintasan yan* bertan**un*  aab untu! +en*ubah senyaa non!arbohidrat +enadi *lu!osa atau *li!o*en&

%ubstrat

uta+an

*lu!oneo*enesis

adalah

asa+

a+ino

*lu!o*eni!6 la!tat6 *liserol dan "ro"ionat& Hati dan *inal +eru"a!an  arin*an uta+a yan* terlibat6 Karen !edua or*an tersebut +en*andun* !o+"le+en len*!a" eni+eni+ yan* di"erlu!an& Glu!osa u*a dibentu! dari *li!o*en hati +elauli *li!o*enolisis& Gli!o*en disintesis dari *lu!osa dan "reursor lainnya leat lintasan *li!o*enesis& 0e+eahannya teradi +elalui sebuah lintasan ter"isah yan* di!enal seba*ai *li!o*enolisis& Gli!o*enolisis +enyebab!an "e+bentu!an *lu!osa di hati dan "e+bentu!an la!tat di otot yan* +asin*+asin* teradi a!ibat adanya atau tida! adanya eni+ *lu!osa#fosfatase& +.+ M$(!"/$ /$('&,% (! &r/&!(, ,)&"( (r(

0roses +e+"ertahan!an !adar *lu!osa yan* stabil di dala+ darah +eru"a!a salah satu +e!anis+e ho+eostatis yan* diatur "alin* halus dan  u*a +enadi salah satu +e!anis+e den*an hati6 arin*an e!strahe"ati!  serta bebera"a hor+on turut +en*a+bil ba*ian& (.

G,)&!("$.

Glu!o!inase6 yan* +e+"unyai  K m yan* lebih tin**i (afinitas lebih rendah)

untu! *lu!osa dari"ada

nilai  K m

he!so!inase6 +enin*!at a!ti-itasnya +elebihi !isaran !adar  *lu!osa yan* fisiolo*i!6 dan eni+ ini a*a!nya +e+"unyai hubun*an !husus den*an a+bilan *lu!osa !e hati "ad !onsentrasi lebih tin**i yan* dite+u!an "ada -ena "orta hati sesudah +e+a!an +a!anan yan* +en*andun* !arbohidrat& '.

I!"),!

Disa+"in*

"en*aruh

lan*sun*

hi"er*li!e+ia

dala+

+enin*!at!an a+bilan *lu!osa bai! !e hati +au"un arin*an  "erifer6 hor+one insulin u*a +e+"unyai "eranan sentral dala+ +en*atur !onsentrasi *lu!osa darah& Hor+on ini dihasil!an oleh selsel ' "ada "ulau"ulau Lan*erhans "anreas seba*a*i rea!si lan*sun* terhada" !eadaan hi"er*li!e+ia& Insulin +e+"unyai efe! se*era +enin*!at!an a+bilan *lu!osa di arin*an se"erti  arin*an adi"ose dan otot& Kera insulin ini disebab!an oleh  "enin*!atan trans"ort *lu!osa

dari ba*ian dala+ sel !e

+e+brane "las+a& %.

G,)&&!

Glu!a*on +eru"a!an hor+one yan* dihasil!a oleh selsel $ "ada "ulau"alau Lan*erhans "anreas& %e!!resi hor+on ini diran*san* oleh !eadaan hi"o*li!e+ia& 0ada saat +ena"ai hati (leat

-ena

"orta)

hor+one

*lua*on

+eni+bul!an

*li!o*enolisis den*an +en*a!tif!an eni+ fosforilase& Karbohidrat terda"at dala+ berba*ai bentu!6 ter+asu! *ula sederhana atau +onosa!arida dan unit !i+ia yan* !o+"le!s se"erti disa!arida atau "olisa!arida& Karbohidrat yan* !ita +a!an a!an dierna +enadi +onosa!arida dan diabsorbsi (*lu!osa ter+asu! di dala+nya)& ?adi "e+bentu!an *lu!osa berasal dari +onosa!arida atau suatu unit !o+"le!s !arbohidrat yan* lain& %etelah diabsorbsi !adar *lu!osa darah a!an +enin*!at untu! se+entara a!tu dan a!hirnya a!an !e+bali la*i !e !adar se+ula6 u+lah *lu!osa yan* dia+bil dan dile"as!an oleh hati dan yan*

di*una!an

oleh

arin*anarin*an

"erifer

ber*antun*

"ada

!esei+ban*an bebera"a hor+one yaitu : hor+one yan* +erendah!an !adar *lu!osa darah dan hor+one yan* +enin*!at!an !adar *lu!osa darah&

+.3 M$&$ P$!))r(! K((r G,)&"( (. M$&$ /(

%eba*ian besar "en*u!uran den*an +etode !i+ia yan* didasar!an atas !e+a+"uan redu!si sudah aran* di"a!ai !arena s"esifitas  "e+eri!saan !uran* tin**i& 0rinsi" "e+eri!saan6 yaitu "roses !ondensasi *lu!osa den*an a!ro+ati! a+in dan asa+ asetat *lasial "ada suasana "anas6 sehin**a terbentu! senyaa berarna hiau !e+udian diu!ur seara foto+etri& 'ebera"a !ele+ahan atau !e!uran*an dari +etode !i+ia adalah +e+erlu!an lan*!ah "e+eri!saan yan* "anan* den*an "e+anasan6 sehin**a +e+un*!in!an teradinya !esalahan besar bila dibandin*!an den*an +etode eni+ati!& %elain itu6 rea*enrea*en "ada +etode !i+iai ini bersifat !orosif "ada alat laboratoriu+& Dan *ula selain *lu!osa da"at teru!ur !adarnya sehin**a +enyebab!an hasil tin**i  "alsu& 0ada "enderita *a*al *inal6 !adar ureu+ tin**i a!an teradi hasil  "en*u!uran !adar *lu!osa yan* lebih tin**i& De+i!ian u*a "ada bayi yan* baru lahir6 a!an teta"i "enyebabnya !adar bilirubin yan* tin**i& 0enin*!atan !adar *lu!osa "ada bayi yan* baru lahir !arena terbentu!   bili-erdin yan* berarna hiau dan "ada +etode !i+iai ini hasil rea!si antara *lu!osa dan rea*en adalah arna hiau& '. M$&$ $!4/( 

Metode eni+ati! "ada "e+eri!saan *lu!osa darah +e+beri!an hasil den*an s"esifitas yan* tin**i6 !arena hanya *lu!osa yan* a!an teru!ur& @ara ini adalah ara yan* di*una!an untu! +enentu!an nilai  batas& $da / +aa+ +etode eni+ati! yan* di*una!an yaitu glucose oxidase dan +etode hexokinase& 1) M$&$ glucose oxidase Metode glucose oxidase +eru"a!an +etode yan* "alin*  banya! di*una!an di laboratoriu+ yan* ada di Indonesia& %e!itar  >5A dari "eserta 0ro*ra+ Nasional 0e+anta"an Mutu B!sternal  bidan* Ki+ia Klini! (0N0MBK) +e+eri!sa *lu!osa seru+ !ontrol den*an +etode ini& 0rinsi" "e+eri!saan "ada +etode ini adalah eni+ glucose oxidase +en*!atalisis rea!si o!sidasi *lu!osa +enadi asa+

*lu!onat dan hidro*en "ero!sida& Hidro*en "ero!sida

yan*

terbentu! berea!si den*an "henol dan 4a+ino "henaone den*an  bantuan

eni+

"ero!sidase

+en*hasil!an 2uinonei+ine yan*

 berarna +erah +uda dan da"at diu!ur den*an foto+eter "ada  "anan* *elo+ban* 54# n+& Intensitas arna yan* terbentu! setara den*an !adar *lu!osa darah yan* terda"at dala+ sa+"el& Di*una!annya eni+ glucose oxidase "ada rea!si "erta+a +enyebab!an sifat rea!si "erta+a s"esifi! untu! *lu!osa& /) M$&$ hexokinase Metode hexokinase +eru"a!an +etode "en*u!uran !adar  *lu!osa darah yan* dianur!an oleh CH dan IF@@& 'aru se!itar  1A laboratoriu+ yan* i!ut 0N0MBK +en**una!an +etode ini untu! "e+eri!saan *lu!osa darah& 0rinsi"

"e+eri!saan

"ada

+etode

ini

adalah hexokinase a!an +en*!atalis rea!si fosforilasi *lu!osa den*an $=0 +e+bentu! *lu!osa#fosfat dan $D0& Bni+ !edua yaitu *lu!osa#fosfat dehidro*enase a!an +en*!atalisis o!sidasi *lu!osa#fosfat

den*an nicotinamide

adenine dinocleotide

 phosphate (N$D0.)& 0ada +etode ini di*una!an dua +aa+ eni+ yan* bai!  !arena !edua eni+ ini s"esifi!& $!an teta"i6 +etode ini +e+butuh!an biaya yan* relatif +ahal&

+.5 Pr!"# R$("

0enentuan !adar *lu!osa dila!u!an +en**una!an +etode eni+atis den*an rea!si uta+a yaitu o!sidasi terhada" *lu!osa den*an  bantuan Glu!osa !sidase (GD) +e+bentu! asa+ *lu!anoat dan  "ero!sida& ea!si indi!asi dila!u!an terhada" "ero!sida yan* dihasil!an den*an 4a+inoanti"irin yan* di!o"lin* den*an fenol +en*hasil!an senyaa 2uinonei+ina& =aha"an rea!si eni+atis yan* teradi adalah seba*ai beri!ut:

GOD

oksige Hidrogen peroksida

Air Asam

Glukos

 Reaksi utama pada pemeriksaan kadar glukosa secara enzimatik 

Gugus

Hidrogen peroksida

Quinineimi

Fenol 4-

 Reaksi indikasi pada pemeriksaan kadar glukosa secara enzimatik 

+.6 S#$r&&&/$r U-V"

%"e!trofoto+eter adalah alat untu! +enu!ur trans+itan atau absorban

suatu

sa+"el

seba*ai

fun*si

"anan*

*elo+ban*&

%"e!trofoto+eter +eru"a!an *abun*an dari alat o"ti! dan ele!troni!a serta sifatsifat !i+ia fisi!nya& Di+ana detetor da"at +en*u!ur intensitas ahaya yan* di"anar!an seara tida! lan*sun* ahaya yan* diabsorbsi& =ia" +edia a!an +enyera" ahaya "ada "anan* *elo+ban* tertentu ter*antun* "ada senyaa atau arna yan* terbentu!& %"e!trofoto+etri


+eru"a!an

*abun*an

antara

s"e!trofoto+etri
ta+"a!nya& Konsentrasi larutan yan* dianalisis a!an sebandin* den*an  u+lah sinar yan* disera" oleh at yan* tera"at dala+ larutan tersebut& 2.6.1

Pr!"# $r*(

%"e!trofoto+etri u--is +en*au "ada hu!u+ La+bert 'eer& $"abila ahaya +ono!ro+ati! +elalui suatu +edia (larutan)6 +a!a seba*ian ahaya tersebut a!an disera"6 seba*ian di"antul!an dan seba*ian la*i a!an di"anar!an&

BAB III PROSEDUR PERCOBAAN

+.1

P$/')((! K)r( K(,'r(" L(r)(! S(!(r

1& Disedia!an larutan sto! den*an !onsentrasi 1& ""+& /& Dibuat "en*eneran dari larutan sto! tersebut !e dala+ berba*ai !onsentrasi (56 16 156 /6 /56 36 356 4 ""+) den*an u+lah larutan +a!si+al / +L untu! setia" !onsentrasi& 3& Di!alibrasi > tabun* rea!si den*an "i"et -olu+e / +L&

4& Di+asu!!an 61  6/  63  64  65  6#  67  6> +L larutan sto!  !e dala+ +asin*+asin* tabun* rea!si6 dita+bah den*an a2uadest hin**a / +L& 0en*eneran tersebut berurutan untu! !onsentrasi 56 16 156 /6 /56 36 356 dan 4 ""+& 5& Diu!ur

sera"an

+asin*+asin*

larutan

+en**una!an

%"e!trofoto+eter
+.2

P$!$(#(! K((r S(/#$,

1& Di"i"et 3 L larutan sa+"el +en**una!an +i!ro"i"et& /& Dita+bah!an 3 +L rea*en *lu!osa& 3& Disha!er dan diin!ubasi den*an total a!tu 1 +enit "ada suhu ruan* (/5@)& 4& Diu!ur sera"annya +en**una!an %"e!trofoto+eter
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

3.1

H(", P$!(/((!

$bsorbansi Larutan %tandar Kelas $  No

Konsentrasi (""+)

%era"an ($)

1

5

61/>

/

1

6/8#7

3

15

6434

4

/

65##5

5

/5

674/

#

3

68

7

35

161

>

4

161#>

0anan* *elo+ban* +as!i+u+ ba!u standar  5765 n+

$bsorbansi Larutan %tandar Kelas D  No

Konsentrasi (""+)

%era"an ($)

1

5

6/>/

/

1

648

3

15

6/4

4

/

65>8

5

/5

67#7

#

3

6738

7

35

6#81

>

4

68>1

$bsorbansi sa+"el no 7  6#> Kadar larutan sa+"el no 7  /8#6#7 μ*9+l

3.2

P$/'(("(!

0ada "ra!ti!u+ ini6 dila!u!an "rosedur untu! "en*uian !adar  *lu!osa seara eni+atis& 0rinsi" !era +etode eni+ati! adalah den*an  bantuan eni+ !atalase (rea!si Hant) dan "ero!sidase (rea!si trinder)& ea!si uta+a +etode eni+ati! yaitu o!sidasi terhada" *lu!osa den*an  bantuan Glu!osa !sidase (GD) +e+bentu! asa+ *lu!onat dan hidro*en "ero!sida (H//)& Den*an adanya o!si*en atau udara6 *lu!osa dio!sidasi oleh eni+ +enadi asa+ *lu!onat disertai "e+bentu!an H//&

Bni+ "ero!sidase (0D) +en*a!ibat!an H// +e+bebas!an / yan* +en*o!sidasi a!se"tor !ro+o*en yan* +e+beri!an arna +erah -iolet ("in!)& Kadar *lu!osa da"at ditentu!an berdasar!an intensitas arna yan* teradi yan* diu!ur seara s"e!trofoto+etri& %e+a!in tin**i !onsentrasi !adar *lu!osa +a!a a!an se+a!in "e!at arna yan* terbentu!& Hidro*en  "ero!sida a!an berea!si den*an 4a+inoanti"irin dan fenol den*an !atalis  "ero!sidase (0D) +e+bentu! 2uinoni+ine dan air& Juinoni+ine ini +eru"a!an indi!ator yan* +enunu!an !adar *lu!osa dala+ darah& Kelebihan dari +etode eni+ati! ialah s"esifi!6 "resisi tin**i6 relatif bebas dari *an**uan dan oo! diada"tasi!an untu! oto+atisasi& %edan*!an !e!uran*annya antara lain adanya efe! steroid na+un san*at +ini+ !arena !adar yan* san*at !eil& =aha"an aal dari "erobaan ini adalah "enyia"an alat dan bahan& Instru+en yan* di*una!an untu! "erobaan ini adalah s"e!trofoto+etri <-Eis6 sedan*!an bahan yan* di*una!an terdiri dari *lu!osa6 eni+

GD (Glu!osa !sidase) dan 0ero!sidase6 a2uadest6 dan rea*en arna yaitu 4a+inoanti"irin& Keti!a *lu!osa tersebut dia+"ur den*an rea*en6 +a!a teradi rea!si eni+ati! yan* terdiri dari re!asi uta+a dan rea!si indi!asi6 di+ana rea!si uta+anya adalah :

0ada rea!si diatas6 *lu!osa o!sidase (GD) yan* terda"at dala+

rea*en +en*!atalisis o!sidasi *lu!osa& Dilihat dari stru!turnya

*lu!osa terdiri dari *u*us aldehid dan *u*us al!ohol& Gu*us  *u*us ini !eti!a tero!sidasi den*an bantuan eni+ GD a!an +e+bentu! asa+ !arbo!silat yaitu beru"a asa+ *lu!anoat den*an hasil sa+"in* "ero!sida

(H//)& Hasil sa+"in*

dari

rea!si

ini yaitu hydro*en "ero!sida

(H//) a!an +enadi dasar rea!si indi!asi6 di+ana hidro*en "ero!sida a!an

berea!si

arna

den*an

4a+inoanti"irin

yan* dita+bah!an den*an

 "ero!sidase&

Hasil

dari

yan*

fenol

rea!si

+eru"a!an

den*an

!atalis

rea*en eni+

ini +en*hasil!an senyaa

2uinonei+ine6 di+ana senyaa ini +eni+bul!an arna yan* intensitasnya sebandin*

den*an

!adar

*lu!osa

yan*

da"at

diu!ur

den*an

s"e!trofoto+etri& ea!si indi!asi da"at di*a+bar!an seba*ai beri!ut :

Bni+ GD dan 0ero!sidase dilarut!an dala+ "elarutnya sa+"ai tera+"ur bai! dan stabil6 !e+udian disia"!an blan!o yan* terdiri dari a2uadest dan rea*en arna sebanya! 3 +l& 0e+buatan larutan blan!o adalah untu! !alibrasi atau seba*ai analisis

foto+etri&

Larutan

blan!o

larutan

"e+bandin*

dala+

tida! +en*andun* analit yan*

a!an dianalisis6 hanya saa berisi "elarut dan rea*en yan* di*una!an untu!

+en*!alibrasi

s"e!trofoto+etri&

Metode

yan*

di*una!an

 "ada "erobaan ini den*an +ela!u!an "erbandin*an antara larutan standar  dan larutan ui& Larutan standar dibuat den*an +e+asu!!an standar  sebanya! 3 L !e+udian dia+"ur den*an rea*en arna sebanya! 3 +l& Larutan standar ini di"erlu!an untu! +en*hitun* !adar *lu!osa den*an +e+bandin*!an absorbansi larutan ui dan larutan standar& Larutan ui terdiri dari *lu!osa sebanya! 3L yan* !e+udian dia+"ur den*an rea*en arna sebanya! 3 +l& larutan standar dan larutan ui diin!ubasi sela+a 1 +enit "ada suhu /5 @ yan* bertuuan untu! +ela!u!an "roses eni+atis& Hal tersebut berdasar!an "rinsi" lau rea!si6 di+ana lau rea!si

rea!si sebandin* den*an ener*i a!ti-asi& Fa!torfa!tor yan* da"at +enin*!at!an ener*i a!ti-asi diantaranya adalah "ena+bahan !atalis dan  "enin*!atan suhu6 sehin**a !eti!a disi+"an dala+ suhu !a+ar di"erlu!an a!tu yan* lebih la+a& %etelah diin!ubasi sela+a 1 +enit6 +a!a larutan ui6 dan larutan standar di+asu!!an !edala+ s"e!trofoto+etri& %"e!trofoto+etri +en*au

"ada

hu!u+


La+bert'eer6 di+ana absorbansi a!an

 berbandin* lurus den*an !onsentrasi& $rtinya !onsentrasi +a!in tin**i +a!a absorbansi yan*

dihasil!an a!an +a!in tin**i6 sebali!nya

!onsentrasi +a!in rendah +a!a +a!in rendah u*a absorbansi yan* dihasil!an& $"abila ahaya (larutan)6

+a!a

seba*ian

+ono!ro+ati!

+elalui

suatu

+edia

ahaya tersebut a!an disera"6 seba*ian

di"antul!an dan seba*ian la*i a!an di"anar!an& Keti!a larutan ui di+asu!!an

!e dala+

s"e!trofoto+etri6

+a!a

teradi "enyera"an

*elo+ban* ele!tro+a*neti! "ada daerah -isible (/ > n+) yaitu "ada  "anan* *elo+ban* 545 n+ oleh senyaa yan* +e+ili!i *u*us !ro+ofor  yan* terda"at "ada larutan ui (Juinoni+ine)& Karena ahaya yan* di"anar!an +en*andun* ener*i6 +a!a +enyebab!an teradinya e!sitasi ele!tron +ole!ul tersebut dari !eadaan dasar ( ground state) !e tin*!at ener*i yan* lebih tin**i& Keti!a ele!tronele!tron tersebut tere!sitsi6 +a!a s"e!trofoto+etri +en*hasil!an nilai absorbansi6 di+ana absorbansi ini setara den*an u+lah ener*i yan* diabsor"si oleh +ole!ul untu!  +en*e!sitasi ele!tron dari !eadaan dasar !e tin*!at ener*i yan* lebih tin**i& 'erdasar!an teori dasar6 rentan* /5# n+ +eru"a!an transisi eletron & Gu*us yan* +en*ala+i transisi eletron O ialah *u*us !arbo!silat6 yan* terda"at "ada sa+"el yaitu *u*us !arbo!silat yan*  berasal dari hasil rea!si dasar o!sidasi *lu!osa yan* +en*hasil!an senyaa *u*us fun*si asa+ !arbo!silat& =uuan "eneta"an "anan* *elo+ban* +a!si+u+ yaitu untu! +en*etahui "anan* *elo+ban* yan* +eru"a!an sera"an terbesar6 yaitu "ada saat senyaa berarna yan* terbentu! telah o"ti+u+6 sehin**a di"eroleh !e"e!aan yan* +a!si+u+&

%era"an dibaa "ada "anan* *elo+ban* 5n+ sesuai den*an "anan* *elo+ban* rea*en GD0D& GD0D +eru"a!an eni+ yan* +e+erlu!an a!tu tertentu untu! berea!si o"ti+u+6 sehin**a dibutuh!an a!tu in!ubasi& ?i!a a!tu in!ubasi !uran* dari a!tu in!ubasi o"ti+u+ 9 operating timenya6 +a!a eni+ tida! a!an berea!si se+"urna& %edan*!an a"abila a!tu in!ubasi lebih dari a!tu in!ubasi o"ti+u+ 9 operating time6 +a!a senyaa yan* terbentu! a!an terde*radasi&Hasil absorbansi yan* telah di"eroleh !e+udian di+asu!!an !e dala+ "ersa+aan !ur-a standar den*an su+bu  x +eru"a!an "anan* *elo+ban*6 dan su+bu  y +eru"a!an absorbansi ($) sehin**a da"at di"eroleh !adar *lu!osanya& Hasil absorbansi untu! larutan standar "ada "erobaan yan* !a+i la!u!an yaitu !elas D berbeda den*an yan* dihasil!an oleh !elas $& Hasil yan* di"eroleh !elas D !uran* bai!6 dan +en*hasil!an re*resi linear dan !ur-a !alibrasi yan* tida! si*nifi!an& Kur-a !alibrasi adalah !ur-a antara absorbansi den*an "anan* *elo+ban*6 yan* da"at +enentu!an "anan* *elo+ban* +as!i+u+& %ehin**a a"abila +en*hasil!an absorbansi yan*  ele! +a!a a!an +en*hasil!an !ur-a !alibrasi yan* tida! si*nifi!an& %etelah dila!u!an "e+eri!saan nilai absorbansi6 +a!a selanutnya dila!u!an "erhitun*an !adar "ada sa+"el& Hal ini dila!u!an a*ar nilai *lu!osa dala+ sa+"el da"at di!etahui& 0anan* *elo+ban* sa+"el +e+"unyai nilai sebesar 5765 n+& Ma!a nilai *lu!osa yan* dida"at  "ada

sa+"el !elo+"o!

7 adalah

sebesar

/8#6#7

μ*9+l&

Hal

ini

+enunu!!an teradinya !esalahan6 !arena !adar *lu!osa !uran* dari 35 μ*9+l&

Kesalahan yan* +un*!in teradi "ada "en*u!uran !adar *lu!osa

den*an +etode GD0D adalah "e+i"etan larutan sa+"el dan rea*en yan* !uran* benar6 !etida! bersihan alat sehin**a +enyebab!an teradinya !onta+inasi6 serta a!tu dan suhu in!ubasi yan* !uran* te"at&

BAB V KESIMPULAN

Dari "erobaan yan* telah dila!u!an6 +a!a da"at dia+bil !esi+"ulan : 1& Kadar

sa+"el

*lu!osa

yan*

diu!ur

+en**una!an

instru+en

s"e!trofoto+etri
!arena !adar *lu!osa !uran* dari 35 *9+l&

DAFTAR PUSTAKA

$noni+6 //6 Kamus Kedokteran Dorland Bdisi /86 83183/6 0enerbit 'u!u Kedo!teran BG@6 ?a!arta Mayes6 0& $& $&6 18>46 Biokimia6 14#6 />46 />56 0enerbit 'u!u Kedo!teran BG@6 ?a!arta Murray6 & F&6 18886 Biokimia Harper edisi /46 14114/6 BG@6 ?a!arta 0oediadi6 $&6 18846 Dasar-Dasar Biokimia6 >116 46 Biokimia6 14#6 />46 />56 0enerbit 'u!u Kedo!teran BG@6 ?a!arta Murray6 & F&6 18886 Biokimia Harper edisi /46 14114/6 BG@6 ?a!arta

0oediadi6 $&6 18846 Dasar-Dasar Biokimia6 >116
LAMPIRAN 1 PERHITUNGAN

1. P$!$!%$r(! K)r( K(,'r(" L(r)(! S(!(r Larutan %to!  1& ""+

5 ""+



1 ""+



15 ""+



/ ""+



/5 ""+



3 ""+



35 ""+



4 ""+



2. K((r S(/#$, $bsorban sa+"el  6#> 0ersa+aan re*resi linier y  63P , 61/ 0erhitun*an !adar sa+"el 

y 6#> 63P P

 63P , 61/  63P , 61/  6#> . 61/ 

P  /8#6#7 *9+L LAMPIRAN 2 DOKUMENTASI

%"e!trofoto+etri
Mi!ro"i"et

0ena+bahan rea*en *lu!osa

%a+"el dala+ sha!er