LAPORAN PRAKTIKUM FITOFARMAKA
Disusun Untuk Memenuhi Tugas Praktikum Fitofarmaka
KELOMPOK: 1 KELAS: C
Novelia
(201410410311007) (201410410311007)
Aprilia Kartika Putri (201410410311011) (201410410311011) Anis Khoirun Sauma (201410410311013) (201410410311013) Sukmawansyah
(201410410311016)
Imanda Gita R.
(201410410311120) (201410410311120)
Nur Cholidah
(201410410311124) (201410410311124)
Qardina Annisa H.
(201410410311127) (201410410311127)
Fardhiyanti
(201410410311156)
Aida Rakhiba
(201410410311158) (201410410311158)
Langlang Kurniawan (201410410311220) (201410410311220) Abelia M Alhamid
(201410410311259) (201410410311259)
DOSEN PEMBIMBING: PEMBIMBING: Dra. Herra Studiawan, M.Si, Apt Siti Rofida, S,Si., M.Farm.,Apt M.Farm.,Apt
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG 2017
KATA PENGANTAR
Ucapan puja-puji dan syukur hanya semata milik Allah SWT. Hanya Kepadanya lah kami memuji dan bersyukur, meminta ampunan dan pertolongan. Kepadanya juga lah kita meminta perlindungan dari kejelekan diri dari syetan yang senantiasa membisikkan kebatilan kepada kepada hati kita. Dengan rohmat serta pertolongan-Nya, puji syukur, akhirnya laporan praktikum fitofarmaka ini bisa terselesaikan dengan lancar. Kami menyadari sepenuh hati bahwa tetap terdapat kekurangan yang ada pada makalah ini. Kami menantikan kritik dan saran yang membangun dari setiap pembaca untuk materi evaluasi kami mengenai penulisan makalah selanjutnya. Kami berharap hal itu semua dapat dijadikan cambuk buat kami supaya lebih mengutamakan kualitas makalah ini di mas a yang selanjutnya. Malang, Desember 2017 Penyusun
KATA PENGANTAR
Ucapan puja-puji dan syukur hanya semata milik Allah SWT. Hanya Kepadanya lah kami memuji dan bersyukur, meminta ampunan dan pertolongan. Kepadanya juga lah kita meminta perlindungan dari kejelekan diri dari syetan yang senantiasa membisikkan kebatilan kepada kepada hati kita. Dengan rohmat serta pertolongan-Nya, puji syukur, akhirnya laporan praktikum fitofarmaka ini bisa terselesaikan dengan lancar. Kami menyadari sepenuh hati bahwa tetap terdapat kekurangan yang ada pada makalah ini. Kami menantikan kritik dan saran yang membangun dari setiap pembaca untuk materi evaluasi kami mengenai penulisan makalah selanjutnya. Kami berharap hal itu semua dapat dijadikan cambuk buat kami supaya lebih mengutamakan kualitas makalah ini di mas a yang selanjutnya. Malang, Desember 2017 Penyusun
DAFTAR ISI
LAPORAN PRAKTIKUM ........................................... ................................................................. ............................................ ....................................... ................. 1 LAPORAN PRAKTIKUM I ............................................................... ..................................................................................... ....................................... ................. 2 Pembuatan Ekstrak Rimpang Kencur (Kaempferia Galanga L.) .......................................... ............................................... ..... 2 TUGAS 1 ............................................. ................................................................... ............................................ ............................................ ........................................... .....................3 Pembuatan Ekstrak Rimpang Kaempferia galanga ............................................... .................................................................... ..................... 3 LAPORAN PRAKTIKUM II ............................................ .................................................................. ............................................ ................................. ........... 21 TUGAS 2 ............................................. ................................................................... ............................................ ............................................ ......................................... ...................22 Penentuan Parameter Paramet er Mutu Ekstrak Kaempferia galanga L.............................................. .................................................... ....... 22 TUGAS 3 ............................................. ................................................................... ............................................ ............................................ ......................................... ...................44 Penetapan Kadar Senyawa Marker pada Ekstrak Rimpang Kaempferia galangaa L. .............. 44 TUGAS 4 ............................................. ................................................................... ............................................ ............................................ ......................................... ...................59 PEMBUATAN KAPSUL EKSTRAK KENCUR DAN PENETAPAN KADAR SENYAWA MARKER DALAM KAPSUL .................................. ........................................................ ............................................ ......................................... ................... 59 (Kaempferia galanga) ............................................ ................................................................... ............................................. ............................................ ...................... 59 TUGAS 5 ............................................. ................................................................... ............................................ ............................................ ......................................... ...................73 Penetapan Kadar Senyawa Marker pada Sediaan Kapsul .......................................... ........................................................ .............. 73
LAPORAN PRAKTIKUM I
langa L.) L. ) Pembuatan Ekstrak Rimpang Kencur ( K aempfer i a G alanga Disusun Untuk Memenuhi Tugas Praktikum Fitofarmaka
KELOMPOK: 1 KELAS: C
Novelia
(201410410311007) (201410410311007)
Aprilia Kartika Putri (201410410311011) (201410410311011) Anis Khoirun Sauma (201410410311013) (201410410311013) Sukmawansyah
(201410410311016)
Imanda Gita R.
(201410410311120) (201410410311120)
Nur Cholidah
(201410410311124) (201410410311124)
Qardina Annisa H.
(201410410311127) (201410410311127)
Fardhiyanti
(201410410311156)
Aida Rakhiba
(201410410311158) (201410410311158)
Langlang Kurniawan (201410410311220) (201410410311220) Abelia M Alhamid
(201410410311259) (201410410311259)
DOSEN PEMBIMBING: PEMBIMBING: Dra. Herra Studiawan, M.Si, Apt Siti Rofida, S,Si., M.Farm.,Apt M.Farm.,Apt
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG 2017
TUGAS 1 Pembuatan Ekstrak Rimpang Kaempferia galanga I. Judul
Pembuatan Ekstrak Rimpang Kaempferia galanga II. Tujuan: Untuk mengetahui cara pembuatan ekstrak rimpang Kaempferia
galanga melalui berbagai macam metode. III. Tinjauan Pustaka a. Klasifikasi Tumbuhan
Kingdom
: Plantae
Ordo
: Zingiberales
Subkingdom : Traecheobionta
Famili
: Zingiberaceae
Super Divisi
: Spermatophyta
Genus
: Kaempferia
Divisi
: Magnoliophyta
Spesies
: Kaempferia
Kelas
: Liliopsida
Sub Kelas
: Commelinidae
galanga Linn.
b. Deskripsi Tanaman
Kempferia merupakan genus herbal yang memiliki anggota lebih dari 50 spesies asli dari Asia Timur tropis yang masuk dalam famili Zingiberaceae. Kaempferia merupakan rizoma herbal yang berukuran kecil yang biasanya berbentuk akar tuberous aromatik yang tebal dan r izoma yang pendek (Tang et al., 2014). Kencur ( Kaempferia galanga L.) merupakan salah satu dari lima jenis tumbuhan yang dikembangkan sebagai tanaman obat asli Indonesia.kencur merupakan tanaman obat yang bernilai ekonomis cukup tinggisehingga banyak dibudidayakan. Bagian rimpangnya digunakan sebagai bahan baku industri obat tradisioanl, bumbu dapur, bahan makanan, maupun penyengar minuman lainnya (Rostiana et al., 2003). c. Kandungan Kimia
Menurut Hargono (1995), bahwa kandungan senyawa Kaempferia galanga L. yaitu : 1. Daun : alkaloid, borneol, dan eucaliptol. 2. Rimpang : tanin, saponin, kalsium oksalat, borneol, kamfen, sineol, etil alkohol, minyak atsiri (2,4%- 3,9%) terdiri etil p- metoksisinamate, asam p- metoksinamat, asam transinamat, p- metoksi stirena, p- asam kumarat, n- pentadekana. Kandungan senyawa yang terdapat secara melimpah yaitu asam popanoat, pentadekana, etil p- metoksisinamat. Kandungan lainnya yaitu 1,8- sineol, undekanon, isopropil sinama, disikloheksilpropandinitril, dipenten dioksida, 9- hidroksi, 2- nonanon, 2,7- oktadien- 1- il asetat, etil sikloheksil asetat, cis 11- tetradesenil asetat, 2- heptadekanon, 4metilnisopulegon, champidin, trans- trans- okta- 2,4- dietil asetat, 10undesil-1- ol, ,7- dimetoksikumarin, delta-3carene, alfa pinen, champhene, borneol,
cymene,
alpha
gurjunene,
germacrenes,
cadinenes,
caryophyllenes, luteolin, dan apigenin (Umar et al., 2011). d. Manfaat Kaempferia galanga
Zingebraceae telah ditemukan sebagai sumber yang diperlukan sekali untuk agen pencegah kanker sejak tumbuhan dari famili Zingeberaceae didemonstrasikan kemungkinan efek hambatnya pada pertumbuhan kanker payudara (MCF-7), kanker kolon (HT- 29 dan Col2), kanker paru- paru (A549), kanker perut (SNU- 638), dan kanker servic (CaSki). Dilaporkan juga pada skrining ekstrak atau minyak esensial dari sejumlah anggota famili Zingiberaceae yaitu dapat melawan strain bakteri, jamur, dan ragi (Tang et al.,2014). Kebanyakan rizoma ginger banyak yang bisa dimakan yang telah lama digunakan sebagai bahan untuk pengobatan tradisional selama berabadabad tetapi ridak sepenuhnya telah dilakukan indentifikasi terhadap aktivitas bioaktifnya (Tang et al.,2014). Ekstrak dari Kaempfreia galangaL. memiliki aktivitas antiinflamasi, analgesik, nematasida, penolak nyamuk, larvisida, vasorelaksan, sedatif,
antineoplastik, antimikroba, antioksidan, antialergidan penyembuh luka (Umar et al., 2011). Etil p- metoksisinamat dan etil sinamat ditemukan sebagai senyawa vital yang berperan dalam kebanyakan sifat farmakologi. Efek aktinosiseptik dari ekstrak Kaempferia galanga L. sebanding dengan aspirin, mengingat efek nematisida Kaempferia galanga L. bahkan lebih poten dari pada Carbofuran dan Nametan (Umar et al., 2011). e. Ekstraksi
Menurut Tiwari et al.,(2011), keberagaman dari metode ekstraksi biasanya berdasarkan pada: a) Lamanya periode ekstraksi b) Pelarut yang digunakan c) pH dari pelarut d) Suhu e) Ukuran partikel dari jaringan tumbuhan f) Perbandingan pelarut terhadap sampel Ekstraksi dalam hal farmaseutik merupakan pemisahan bagian yang aktif secara medisinal dari jaringan tumbuhan dan hewan menggunakan pelarut tertentu melalui prosedur standart. Selama ekstraksi, pelarut berdifusi ke dalam material padat tumbuhan dan melarutkan senyawasenyawa dengan kepolaran yang sama (Tiwari et al.,2011). Parameter
dasar yang mempengaruhi kualitas dari sebuah ekstrak
adalah: a) Bagian tumbuhan yang digunakan sebagai material awal b) Pelarut yang digunakan dalam ekstraksi c) Prosedur ekstraksi Keberagaman dalam metode ekstraksi yang berbeda yaitu akan mempengaruhi kuantitas dan komposisi metabolit sekunder pada sebuah ekstrak yang tergantung pada: a) Tipe ekstraksi b) Waktu ekstraksi c) Suhu d) Sifat pelarut
e) Konsentrasi pelarut f) Polaritas Homogenasi jaringan tumbuhan dalam pelarut telah secara luas digunakan oleh para peneliti. Kering atau basah, bagian tumbuhan digiling menggunakan blender untuk mendapatkan ukuran partikel yang halus, diekstrak dalam pelarut tertentu dan dikocok dengan kuat selama 5-10 menit atau dibiarkan selama 24 jam setelah selesai kemudian ekstrak tersebut disaring. Filtrat kemudian diuapkan pelarutnya dan dilarutkan kembali dalam pelarut untuk menentukan konsentrasi. Beberapa penelitian melakukan sentrifugasi untuk menjernihkan ekstrak (Tiwari et al.,2011). Matode ekstraksi yang telah berhasil yaitu dengan menggunakan kenaikan kepolaran pelarut, dari mulai pelarut non polar (heksan) sampai pelarut yang lebih polar (metanol) untuk menjamin bahwa rentang kepolaran yang luas menyebabkan banyak senyawa yang dikandung dapat diektraksi (Tiwari et al.,2011). a) Metode Ekstraksi Metode ekstraksi berdasarkan ada tidaknya proses pemanasan dapat dibagi menjadi dua macam, yaitu ekstraksi cara dingin dan ekstraksi cara panas (Hamdani, 2009).
Ekstraksi cara dingin
Pada metode ini tidak dilakukan pemanasan selama proses ekstraksi berlangsung dengan tujuan agar senyawa yang diinginkan tidak menjadi rusak. Beberapa jenis metode ekstraksi ca ra dingin, yaitu :
Maserasi
Maserasi merupakan metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut diam atau dengan adanya pengadukan beberapa kali pada suhu ruangan. Metode ini dapat dilakukan dengan cara mer endam bahan dengan sekali- kali dilakukan pengadukan. Pada umumnya perendaman dilakukan selama 24 jam, kemudian pelarut diganti dengan pelarut baru. Maserasi juga dapat dilakukan dengan pengadukan
secara
berkesinambungan
(maserasi
kinetik).
Kelebihan dari metode ini yaitu efektif untuk sneyawa yang tidak
tahan panas (terdegradasi karena panas), pelaratan yang digunakan relatif sederhana, murah, dan mudah didapat. Namun metode ini juga memiliki beberapa kelemahan yaitu waktu ekstraksi yang lama, membutuhkan pelarut dalam jumlah yang banyak dan adanya kemungkinan bahwa senyawa tertentu tidak dapat diekstrak karena kelarutannya yang rendah pada suhu ruang (Sarker et al., 2006).
Maserasi Ultrasonik
Sonikasi merupakan salah satu teknik ekstraksi yang menggunakan energi tambahan berupa vibrasi ultrasonik untuk meningkatkan interaksi antara zat yang akan diambil dengan pelarutnya. Penggunaan gelombang ultrasonik dapat meningkatkan rendemen dan kualitas produk yang dihasilkan (Supardan et al., 2011). Penggunaan ultrasonik pada dasarnya menggunakan prinsip dasar yaitu dengan mengamati sifat akustik gelombang ultrasonik yang dirambatkan melalui medium yang dilewati. Pada saat gelombang merambat, medium yang dilewatinya akan
mengalami
pengadukan
yang
getaran.
Getaran
intensif
terhadap
akan
memberikan
proses
ekstraksi.
Pengadukan akan meningkatkan osmosis antara bahan dengan pelarut sehingga akan meningkatkan proses ekstraksi. Cara kerja metode ultrasonik dalam mengekstraksi adalah sebagai berikut: o
Gelombang
ultrasonik
terbentuk
dari
pembangkitan
ultrason secara lokal dari kavitasi mikro pada sekeliling bahan yang akan diekstraksi sehingga akan terjadi pemanasan pada bahan tersebut dan melepaskan senyawa ekstrak. o
Terdapat ekstrak ganda yang dihasilkan yaitu pengacauan dinding sel sehingga membebaskan kandungan senyawa
yang ada didalamnya dan pemanasan lokal pada cairan dan meningkatkan difusi ekstrak. o
Energi kinetik dilewati keseluruhan bagian cairan diikuti dengan munculnya gelembung kavitasi pada dinding atau permukaan sehingga meningkatkan transfer massa anatara permukaan padat- cair.
o
Efek mekanik yang ditimbulkan adalah meningkatkan penetrasi dari cairan menuju dinding membran sel yang mendukung pelepasan komponen sel dalam meningkatkan transfer massa (Kerl, 2007). Liu et al., (2010), menyatakan bahwa kavitasi ultrasonik
menghasilkan daya patah yang akan memecah dinding sel secara mekanis dan meningkatkan transfer material. Kavitasi adalah gejala menguapnya zat cair yang sedang mengalir sehingga membentuk gelembung- gelembung uap yang disebabkan karena berkurangnya tekanan cairan tersebut sampai dibawah titik jenuh uapnya.
Perkolasi
Perkolasi merupakan metode ekstraksi dengan bahan yang disusun dengan menggunakan pelarut yang selalu baru sampai prosesnya sempurna dan umumnya dilakukan pada suhu ruang. Prosedur metode ini yaitu bahan direndam dengan pelarut, kemudian pelarut baru dialirkan secara terus menerus sampai warna pelarut tidak lagi berwarna atau tetap bening yang artinya sudah tidak ada lagi senyawa yang terlarut. Kelebihan dari metode
yaitu
tidak
diperlukan
proses
tambahan
untuk
memisahkan padatan dengan ekstrak, sdangkan kelemahan metode ini adalah jumlah pelarut yang dibutuhkan cukup banyak dan proses juga memerlukan waktu yang cukup lama, serta tidak meratanya kontak antara padatan dan pelarut (Sarker et al., 2006).
Ekstrasksi cara panas
Pada metode ini melibatkan pemanasan selama proses ekstraksi berlangsung. Adanya panas secara otomatis akan mempercepat proses ekstraksi dibandingkan dengan cara dingin. Beberapa jenis metode ekstraksi cara panas, yaitu:
Ekstraksi refluks
Ekstraksi refluks merupakan metode ekstraksi yang dilakukan pada titik didih pelarut tersebut selama waktu dan sejumlah pelarut tertentu dengan adanya pendingin balik (kondesor). Pada umumnya dilakukan tiga sampai lima kali pengulangan proses pada rafinat pertama. Kelebihan metode refluks adalah padatan yang memiliki tekstur kasar dan tahan terhadap pemanasan langsung dapat diekstrak dengan metode ini. Kelemahan metode ini adalah membutuhkan jumlah pelarut yang banyak (Irawan, 2010).
Ekstraksi soxhletasi
Ekstraksi dengan alat soxhlet merupakan ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru, umumnya dilakukan menggunakan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi konstan dengan adanya pendingin balik (kondensor). Pada metode ini, padatan disimpan dalam alat soxhlet dan dipanaskan, sedangkan yang dipanaskan hanyalah pelarutnya. Pelarut terdinginkan dalam kondensor, kemudian mengekstraksi padatan. Kelebihan metode soxhlet adalah proses ekstraksi berlangsung kontinu, memerlukan waktu dnegan metode maserasi atau perkolasi. Kelemahan dari metode ini adalah dapat menyebabkan rusaknya solute atau komponen lainnya yang tidak tahan panas karena pemanasan ekstrak yang dilakukan secara terus menerus (Sarket et al., 2006; Tiwari et al., 2011). Beberapa faktor yang dapat mempengaruhi proses ekstraksi yaitu (KirkOthmer, 1998; Perry, R., et al, 1984):
Perlakuan pendahuluan
Perlakuan
pendahuluan
dapat
berpengaruh
terhadapat
rendeman dan mutu ekstrak yang dihasilkan. Perlakuan pendahuluan meliputi pengecilan ukuran dan pengeringan bahan. Semakin kecil ukuran partikel, maka semakin besar luas kontak antara padatan dengan pelarut, tahanan menjadi semakin berkurang, dan lintasan kapiler dalam padatan menjadi semakin pendek (laju difusi berbanding lurus dengan luas permukaan padatan dan berbanding terbalik dengan ketebalan padatan), sehingga proses ekstraksi menjadi lebih cepat dan optimal. Teknik pengecilan ukuran dapat dilakukan dengan
cara
pemotongan,
penggilingan,
maupun
penghancuran. Pengeringan bahan bertujuan untuk menguapkan sebagian air dalam bahan, sehingga kadar air bahan menurun. Selain itu, kerusakan dinding sel bahan selama pengeringan akan mempermudah pengeluaran solute dalam bahan. Pengeringan juga dapat mempermudah proses pengecilan ukuran dan meningkatkan mutu ekstrak dengan menghindari adanya air dalam
ekstrak
(Somaatmadja,
1985).
Pada
umumnya
pengeringan dilakukan pada suhu kamar atau oven dengan temperatur kuran dari 30 0C. Keuntungan pengeringan dengan menggunakan oven yaitu tidak tergantung cuaca, kapasitas pengeringan dapat disesuaikan, tidak memerlukan tempat yang luas, dan kondisi pengeringan dapat dikontrol. Faktorfaktor yang mempengaruhi pengeringan yaitu udara pengering dan sifat bahan. Faktor yang berhubungan dengan udara pengering yaitu suhu, kecepatan volumetrik aliran udara pengering, dan kelembapan udara sedangkan faktor yang berhubungan dengan sifat bahan yaitu ukuran, kadar air awal, dan tekanan parisal bahan.
Perlakuan pendahuluan
Kelarutan bahan yang diekstraksi dan difusivitas akan meningkat
dengan
meningkatnya
temperatur.
Namun
temperatur yang terlalu tinggi dapat merusak bahan yang diekstrak, sehingga perlu menentukan temperatur optimum.
Faktor pengadukan
Pengadukan dapat mempercepat pelarutan dan meningkatkan laju difusi solute. Pergerakan pelarut di sekitar bahan akibat pengadukan dapat mempercepat kontak bahan dengan pelarut dan memindahkan komponen dari permukaan bahan ke dalam larutan dengan jalan membentuk suspensi serta melarutkan komponen tersebut ke dalam media pelarut (Larian, 1959). Pengadukan dapat dilakukan dengan cara mekanis, pengaliran udara atau dengan kombinasi keduanya. f.
Pemilihan Pelarut
Pemilihan pelarut merupakan salah satu faktor yang penting dalam proses ekstraksi. Jenis pelarut yang digunakan dalam proses ekstraksi mempengaruhi jenis komponen aktif bahan yang terekstrak karena masingmasing pelarut mempunyai selektifitas yang berbeda untuk melarutkan komponen aktif dalam bahan. Menurut Perry (1984), berbagai syarat pelarut yang digunakan dalam proses ekstraksi, yaitu sebagai berikut: a) Memiliki daya larut dan selektivitas terhadap solute yang tinggi. Pelarut harus dapat melarutkan komponen yang diinginkan sebanyak mungkin dan sesedikit mungkin melarutkan bahan pengotor. b) Bersifat inert terhadap bahan baku, sehingga tidak bereaksi dengan komponen yang akan diekstrak. c) Reaktivitas. Pelarut tidak menyebabkan perubahan secara kimia pada komponen bahan ekstraksi. d) Tidak menyebabkan terbentuknya emulsi. e) Tidak korosif. f) Tidak beracun. g) Tidak mudah terbakar. h) Stabil secara kimia dan termal.
i) Tidak berbahaya bagi lingkungan. j) Memiliki viskositas yang rendah, sehingga mudah untuk dialirkan. k) Murah dan mudah didapat, serta tersedia dalam jumlah yang besar. l) Memiliki titik didih yang cukup rendah agar mudah diuapkan. m)Memiliki tegangan permukaan yang cukup rendah. Berbagai jenis pelarut yang sering digunakan dalam proses ekstraksi seperti contoh tabel dibawah ini : Tabel 1.1Beberapa jenis pelarut untuk ekstraksi (Stahl, 1969)
Pelarut
Titik didih (oC, 1atm)
Viskositas (cp, 20oC)
n-heksana
68,7
0,326
Heksana
98,4
0,409
Sikloheksana
81,4
1,020
Benzena
80,1
0,652
Kloroform
61,3
0,580
Dietil eter
34,6
0,233
Etil asetat
77,1
0,455
Aseton
56,5
0,316
Etanol
78,5
1,200
Metanol
64,6
0,597
Air
100
1,005
Setiap komponen pembentuk bahan mempunyai perbedaan kelarutan yang berbeda dalam setiap pelarut, sehingga untuk mendapatkan sebanyak mungkin komponen yang diinginkan, maka ekstraksi dilakukan dengan menggunakan suatu pelarut yang secara selektif dapat melarutkan komponen tersebut. Komponen yang terkandung dalam bahan akan dapat
larut pada pelarut yang relatif sama kepolarannya. Kriteria kepolaran suatu pelarut dapat ditinjau dari konstanta dielektrik dan momen dipol. Pelarut polar memiliki konstanta dielektrik yang besar, sedangkan non-polar memiliki konstanta dielektrik yang kecil. Semakin besar nilai konstanta dielektriknya, maka semakin polar senyawa tersebut. Nilai konstanta dielektrik pada berbagai jenis pelarut disajikan pada Tabel 1.2 berikut: Tabel 1.2 Nilai konstanta dielektrik pelarut organik pada 20 C (Adnan, 1997)
Pelarut
Konstanta dielektrik
Heptan
1,924
n-heksana
1,890
Sikloheksana
2,023
Karbon tetraklorida
2,238
Benzen
2,284
Kloroform
4,806
Etil eter
4,340
Etil asetat
6,020
Piridin
12,30
Aseton
20,70
Etanol
24,30
Metanol
33,62
Asetonitril
38,00
Air
80,37
IV.
Bahan dan Alat a) Bahan
Serbuk rimpang kencur
Etanol 96%
Cab- o-sil
b) Alat
Labu Erlenmeyer
Beaker glass
Batang pengaduk
Corong Buchner
Rotavapor
Kertas saring
Loyang
Sudip
Alumunium foil
Wadah selai
Analytical balance
Toples
Pipet Panjang
Bejana marerasi
V.
Prosedur Kerja a) Metode Maserasi (Metode Perendaman) Ditimbang 500 g serbuk rimpang
Dimasukkan kedalam beaker lass
didiamkan selama 24 jam
Ditutup bagian mulut beaker glass dengan alumunium foil
Di diaduk ada serbuk terbasahi dan homogen
Hasil maserasi disaring dengan
Filtrat ditampung dalam jurigen
Residu dilakukan remaserasi dengan 1500 ml etanol 96%
Hasil remaserasi disaring dengan corong Burchner
didiamkan selama 24 jam
Filtrat ditampung dan dikumpulkan menjadi satu
Dikaliberasi labu pada rotavapor atau jurigen (berisi ekstrak) pada tanda 500 ml
Cab-o-il ditaburkan sedikit demi sedikit secara merata
Kemudian diamkan sampai kering
Filtrat yang terkumpul dilakukan pemekatan dengan rotavapor ad 500
(+) 2000 ml etanol
hasilnya dipindahkan kedalam lo an
ml
Ditambahkan cab- o-sil sebanyak 5% dari volume akhir ekstrak
Ekstrak kering dihomogenkan
Ekstrak diratakan pada loyang
disimpan pada wadah tertutup (botol selai). Diberi label identitas pada wadah
V. HASIL
I. II.
Berat ekstrak yang ditimbang = 500 gram Jumlah hasil ekstraksi: - Bobot toples + ekstrak = 270,71 gram - Bobot toples kosong = 190,43 gram - Bobot ekstrak
= 80,28 gram
490 = 24,5
III.
Jumlah Cab-o-sil =
IV.
Bobot ekstrak yang dihasilkan =
= V.
Has ekstrak kern – obot Cab−o−s
,
x 100% = 11,16%
Perbandingan % rendemen berbagai metode maserasi Kinetika Kelompok % Rendemen
VI.
x 100%
Maserasi
Ultrasonik
1
2
3
4
11,16%
8,64%
12,04%
10,01%
PEMBAHASAN
Ekstraksi adalah pemisahan dari kandungan senyawa yang dibutuhkan di dalam bahan tanaman dengan menggunakan pelarut. Dalam kasus tanaman obat, prosedur ekstraksi terbagi menjadi dua kategori (Paroda, 1993). Pertama adalah dimana hasil ekstraksi cukup untuk mencapai batas yang ditetapkan dalam ekuilibrium konsentrasi antara komponen obat dan solusinya. Misaln ya, tincture, rebusan, teh, dll. Kedua, apabila perlu untuk mengekstrak obat tersebut sampai habis, misal, sampai semua bahan pelarut yang diekstrak dikeluarkan oleh pelarut. Ekstrak adalah sediaan kering, kental atau cair dibuat dengan penyari simplisia menurut cara yang cocok, di luar pengaruh cahaya matahari l angsung. Sebagai cairan penyari digunakan air, eter, etanol, atau campuran etanol dan air. Penyarian simplisia dapat dilakukan dengan cara maserasi, perkolasi atau penyeduhan dengan air mendidih. Penyarian dengan campuran etanol dan air dilakukan dengan cara maserasi atau perkolasi (Acuan Sediaan Herbal, Vol . 5).
Pada praktikum kali ini, kami menggunakan metode maserasi. Metode maserasi sendiri terbagi menjadi 3, yaitu maserasi konvensional yang dilakukan secara sederhana dengan perendaman ekstrak dalam 24 jam, maserasi kinetika yaitu dengan pengadukan, dan maserasi ultrasonik. Kelompok kami mendapatkan kesempatan untuk melakukan metode maserasi mekanik. Metode ini baik untuk bahan uji (ekstrak Kaempferia galanga) yang tidak tahan pemanasan. Ekstrak kencur yang ditimbang untuk diekstraksi adalah sebanyak 500 gram, setelah itu ekstrak dimasukkan ke dalam bejana maserasi ditambahkan etanol 96% sebanyak 2000 ml untuk dilakukan ektraksi, kemudian ekstrak diaduk selama 2 jam dengan kecepatan pengadukan 415 rpm, hingga tercampur dengan baik. Pengadukan dilakukan untuk menjamin keseimbangan konsentrasi bahan ekstraksi lebih cepat di dalam cairan penyari. Di mana dasar dari proses maserasi adalah melarutnya bahan kandungan simplisia dari sel yang rusak, yang terbentuk pada saat penghalusan, ekstraksi (difusi) bahan kandungan dari sel yang masih utuh. Setelah selesai waktu maserasi, artinya keseimbangan antara bahan yang diekstraksi pada bagian dalam sel dengan masuk ke dalam cairan telah tercapai, maka proses difusi akan segera berakhir. Selama maserasi atau proses perendaman dilakukan pengocokan berulang-ulang, agar keseimbangan konsentrasi bahan terjadi lebih cepat. Sedangkan dalam keadaan diam selama maserasi menyebabkan turunnya perpindahan bahan aktif (Voigh, 1994). Kemudian, dilakukan penyaringan dengan corong beker dengan maksud untuk memisahkan antara filtrat dan residunya. Setelah itu, residu ditambah kembali dengan etanol 96% sebanyak 1500 ml dan dilakukan pengadukan kembali seperti sebelumnya serta disaring kemudian. Dilakukan sebanyak 3 kali, dan filtrat dari ketiganya disimpan dalam satu wadah. Dilakukan rotavapor pada ekstrak yang berfungsi membuat hasil menjadi lebih pekat. Pemekatan tersebut dilakukan dengan prinsip volume destilasi sehingga tekanan pelarut akan menguap di bawah titik didihnya. Prinsip ini membuat pelarut perlu pemanasan yang tinggi agar esktrak menjadi pekat karena etanol dipisahkan dari ekstrak kencur tersebut.
Ekstrak cair yang akan diuapkan dimasukkan ke dalam labu alas bulat dan dipanaskan di atas waterbath sesuai suhu pelarut yang digunakan, labu alas bulat tersebut di pasang dengan kuat pada ujung rotavapor yang menghubungkan kondensor. Aliran pendingin dan pompa vakum dijalankan, kemudian rotavapor dinyalakan dengan kecepatan tertentu. Ekstrak pekat yang diperoleh dituangkan pada nampan kemudian ditaburi dengan Cab-o-sil sebanyak 24,5 gram (5% dari jumlah ekstrak), setelah iu didiamkan pada suhu kamar sampai benar-benar kering. Lalu ekstrak digerus hingga halus dan ditimbang beratnya. Karena ekstrak kering harus mudah digerus menjadi serbuk ( Acuan Sediaan Herbal, Vol. 5). Kemudian disimpan pada toples. Berat ekstrak yang didapat adalah 55,78 gram atau 11,16%. Dari hasil presentasi keempat kelompok, seharusnya metode maserasi ultrasonik mempunyai presentasi hasil paling besar, karena ekstraksi ini mendapat bantuan getaran ultrasonik yang akan memberikan efek yaitu dapat meningkatkan permeabilitas dinding sel, sehingga banyak zat yang bisa ditarik oleh pelarut. Kemudian yang kedua adalah metode maseasi kinetika, yang mana dengan adanya kinetika (pengadukan) akan membuat keseimbangan konsentrasi bahan
terjadi
lebih
cepat.
Sedangkan
maserasi
konvensional
hanya
mnegandalkan perendaman saja yang berarti dalam keadaan diam selama proses maserasi yang menyebabkan turunnya perpindahan bahan aktif, sehingga tidak dapat terjadi keseimbangan konsentrasi yang lambat.
LAMPIRAN
Proses Penadukan
Proses penyaringan
Hasil residu penyaringan
menggunakan Viskom Brokfild
menggunakan Corong Buchner
dengan Corong Buchner
dengan kecepatan tertentu
(deilakukan sebanyak 3x)
Filtrat hasil penyaringan
Proses pemekatan ekstrak
Hasil pemekatan ekstrak cair
(Ekstrak cair)
cair dengan Rotavapor
dengan Rotavapor (490 ml)
Penimbangan Cabosil 5%
Ekstrak pekat dituang
dari 490 ml ekstrak pekatl
kedalam bejana lalu ditaburi
(24.5 gram)
Cabosil secara merata
Biarkan ekstrak mendingin pada suhu
Ekstrak telah padat dan kering
kamar ad ekstrak memadat dan kering
Ekstrak yang telah padat dan
Ekstrak yang telah digerus halus lalu di
kering lalu digerus ad halus
timbang, diperoleh bobot akhir ekstrak kering (80,28 gram)
LAPORAN PRAKTIKUM II Penentuan Parameter Mutu Ekstrak Kaempferia galanga L. Disusun Untuk Memenuhi Tugas Praktikum Fitofarmaka
KELOMPOK: 1 KELAS: C
Novelia
(201410410311007)
Aprilia Kartika Putri (201410410311011) Anis Khoirun Sauma (201410410311013) Sukmawansyah
(201410410311016)
Imanda Gita R.
(201410410311120)
Nur Cholidah
(201410410311124)
Qardina Annisa H.
(201410410311127)
Fardhiyanti
(201410410311156)
Aida Rakhiba
(201410410311158)
Langlang Kurniawan (201410410311220) Abelia M Alhamid
(201410410311259)
DOSEN PEMBIMBING: Dra. Herra Studiawan, M.Si, Apt Siti Rofida, S,Si., M.Farm.,Apt
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG 2017
TUGAS 2 Penentuan Parameter Mutu Ekstrak Kaempferia galanga L. I. JUDUL Penentuan Parameter Mutu Ekstrak Kaempferia galanga L. II. Tujuan
Untuk mengetahui dan menerapkan mutu spesifik dan non spesifik ekstrak sesuai standar yang telah ditetapkan. III. TINJAUAN PUSTAKA Klasifikasi Tumbuhan
Kingdom
: Plantae
Sub kingdom : Traecheobionta Super divisi : Spermatophyta Divisi
: Magnoliophyta
Kelas
: Liliopsida
Sub kelas
: Commenlinidae
Ordo
: Zingiberales
Famili
: Zingiberaceae
Genus
: Kaempferia
Spesies
: Kaempferia galangal L. (Fahmi, 2015)
Deskripsi tanaman
Kaempferia merupakan genus herbal yang memiliki anggota lebih dari 50 spesies asli dari Asia Timur Tropis yang masuk dalam family Zingiberaceae. Kaenpferia merupakan rhizome herbal yang berukuran kecil yang biasanya berbentuk akar tuberous aromatic yang tebaldan rizoma yang pendek (Tang et al, 2014). Kencur ( Kaempferia galangal L.) merupakan salah satu dari lima jenis tumbuhan yang dikembangkan sebagai tanaman obat asli Indonesia. Kencur merupakan tanaman obat yang bernilai ekonomis cukup tinggi sehingga banyak dibudidayakan. Bagian rimpangnya digunakan sebagai bahan baku industri obat tradisonal, bumbu dapur, bahan makanan, maupun minuman (Rostiana dkk., 2003).
Kandungan Kimia
Kandungan senyawa yang terdapat secara melimpah yaitu asam propanoate, pentadekana, etil-p-metoksisinamat.
Kandungan lainnya yaitu 1,8-sineol,
undekanon, isopropyl sinamat, disikloheksilpropandinitril, dipenten dioksida, 9hidroksi, 2-nonanon, 2,7-oktadien-1-il asetat, etil sikloheksil asetat, cis-11tetradesenil asetat, alfa pinen, champhene, borneol, luteolin, dan apigenin (Umar et all ., 2011) Standarisasi EKSTRAK
Standardisasi ekstrak adalah penentuan parameter kualitatif dan kuantitatif baik terhadap senyawa aktif maupun senyawa khas lainnya dan sifat kimianya. Mutu ekstrak dipengaruhi oleh bahan asal/simplisia, karenanya sebelum diproses menjadi
ekstrak, simplisia/bahan awal yang
akan diekstraksi harus pula
distandarisasi. Dua faktor yang mempengaruhi mutu simplisi a adalah faktor biologi dan kimia. Faktor biologi meliputi beberapa hal, yaitu:
1. Identitas jenis (spesies), jenis tumbuhan dari sudut keragaman hayati dapat dikonfirmasikan sampai informasi genetika sebagai faktor internal untuk validasi jenis. 2. Lokasi tumbuhan asal. Lokasi merupakan faktor eksternal, yaitu lingkungan dimana tumbuhan bereaksi bisa berupa energi (cuaca, temperatur, cahaya) dan materi (air, senyawa organik dan anorganik) 3. Periode pemanenan hasil tumbuhan. Pemanenan yang dilakukan tidak pada waktunya bisa mempengaruhi kendungan senyawa. 4. Penyimpanan bahan tumbuhan. Ruang atau wadah yang digunakan untuk menyimpan bisa mempengaruhi mutu senyawa tanaman. 5. Umur tanaman dan bagian yang digunakan. Hal ini sangat menentukan keberadaan senyawa kimia seperti klorofil yang terdapat di daun. Faktor kimia meliputi beberapa hal, yaitu:
Faktor internal seperti jenis, komposisi, kualitatif dan kuantitatif serta kadar total rerata senyawa aktif dalam bahan. Faktor eksternal seperti metode ekstraksi,
perbandinga ukuran alat ekstraksi, kekerasan dan kekeringan bahan, pelarut yang digunakan dalam ekstraksi, kandungan logam berat dan kandungan pestisida. Standarisasi adalah serangkaian parameter, prosedur dan cara pengukuran yang hasilnya merupakan unsur-unsur terkait paradigma untuk kefarmasian, mutu dalam artian memenuhi syarat standar (kimia, biologi, dan farmasi). Termasuk jaminan (batas-batas) stabilitas sebagai produk kefarmasian pada umumnya. Persyaratan mutu ekstrak terdiri dari berbagai parameter standar umum dan parameter standar spesifik. Standardisasi secara normatif ditujukan untuk memberikan efikasi yang terukur secara farmakologis dan menjamin keamanan konsumen. Standardisasi obat herbal meliputi dua aspek: 1. Aspek parameter spesifik: berfokus pada senyawa atau golongan senyawa yang bertanggung jawab terhadap aktivitas farmakologis. Analisis kimia yang dilibatkan ditujukan untuk analisa kualitatif dan kuantitatif terhadap senyawa aktif. 2. Aspek parameter non spesifik: berfokus pada aspek kimia, mikrobiologi dan fisis yang akan mempengaruhi keamanan konsumen dan stabilitas misal kadar logam berat, aflatoksin, kadar air dan lain- lain Standardisasi Obat Herbal
Standardisasi obat herbal merupakan rangkaian proses melibatkan berbagai metode analisis kimiawi berdasarkan data farmakologis, melibatkan analisis fisik dan mikrobiologi berdasarkan kriteria umum keamanan (toksikologi) terhadap suatu ekstrak alam atau tumbuhan obat herbal (Saifudin et al ., 2011). Standardisasi dalam kefarmasian tidak lain adalah serangkaian parameter, prosedur dan cara pengukuran yang hasilnya merupakan unsur- unsur terkait pradigma mutu kefarmasian, mutu dalam artian memenuhi syarat standar (kimia, biologi dan farmasi), termasuk jaminan (batas- batas) stabilitas sebagai produk kefarmasian umumnya. Dengan kata lain, pengertian standardisasi juga berarti proses menjamin bahwa produk akhir obat (obat, ekstrak atau produk ekstrak) mempunyai nilai parameter tertentu yang konstan dan ditetapkan terlebih dahulu. Terdapat dua faktor yang mempengaruhi mutu ekstrak yaitu faktor biologi dari bahan asal tumbuhan obat dan faktor kandungan kimia bahan obat tersebut.
Standardisasi ekstrak terdiri dari parameter standar spesifik dan parameter standar non spesifik (Depkes RI, 2000). a. Parameter-parameter Standar Ekstrak
Parameter- parameter standar ekstrak terdiri dari parameter spesifik dan parameter non spesifik. 1. Parameter Spesifik Ekstrak
Penentuan parameter spesifik adalah aspek kandungan kimia kualitatif dan aspek kuantitatif kadar senyawa kimia yang bertanggung jawab langsung terhadap aktivitas farmakologis tertentu. Parameter spesifik ekstrak meliputi: a. Identitas
Parameter identitas esktrak meliputi: deskripsi tata nama, nama ekstrak (generik, dagang, paten), nama lain tumbuhan (sistematika botani), bagian tumbuhan yang digunakan (rimpang, daun, dsb) dan nama Indonesia tumbuhan. b. Organoleptis:
Parameter organoleptik ekstrak meliputi penggunaan panca indera mendeskripsikan bentuk, warna, bau, rasa guna pengenalan awal yang sederhana se- objektif mungkin. c. Senyawa terlarut dalam pelarut tertentu
Melarutkan ekstrak dengan pelarut (alkohol/ air) untuk ditentukan jumlah larutan yang identik dengan jumlah senyawa kandungan secara gravimetrik. Dalam hal tertentu dapat diukur senyawa terlarut dalam pelarut lain misalnya heksana, diklorometan, metanol. Tujuannya untuk memberikan gambaran awal jumlah senyawa kandungan. Nilai : - Nilai minimal atau rentang yang ditetapkan terlebih dahulu (BPOM, 2000). - Sari larut air, tidak kurang dari 14,2 % (FHI, 2008) - Sari larut etanol, tidak kurang dari 4,2 % (FHI, 2008) d. Uji kandungan kimia ekstrak
Pola kromatogram
Pola kromatogram dilakukan sebagai analisis kromatografi sehingga memberikan pola kromatogram yang khas. Bertujuan untuk memberikan gambaran
awal
komposisi
kandungan
kimia
berdasarkan
pola
kromatogram (KLT, KCKT) (Depkes RI, 2000). Nilai : - Kesamaan pola dengan data baku yang ditetapkan terlebih dahulu (BPOM, 2000).
Kadar kandungan kimia tertentu
Suatu kandungan kimia yang berupa senyawa identitas atau sen yawa kimia utama ataupun kandungan kimia lainnya, maka secara kromatografi instrumental dapat dilakukan penetapan kadar kandungan kimia tersebut. Instrumen yang dapat digunakan adalah densitometri, kromatografi gas, KCKT atau instrumen yang sesuai. Tujuannya memberikan data kadar kandungan kimia tertentu sebagai senyawa identitas atau senyawa yang diduga bertanggung jawab pada efek farmakologi (Depkes RI, 2000). Nilai : - Minimal atau rentang kadar yang telah ditetapkan (BPOM, 2000).
Kadar Total Golongan Kandungan Kimia Dengan penerapan metode spektrofotometri, titrimetri, volumetri, gravimetri atau lainnya dapat ditetapkan kadar golongan kandungan kimia. Metode harus sudah teruji validitasnya, terutama selektivitas dan batas linieritas. Tujuannya adalah memberikan informasi kadar golongan kandungan kimia sebagai parameter mutu ekstrak dalam kaitannya dengan efek farmakologis. Nilai : - Minimal atau rentang yang telah ditetapkan (BPOM, 2000). - Kadar simplisia minyak atsiri : tidak kurang dari 2,40 % v/b - Kadar simplisia etil p-metoksisinamat : tidak kurang dari 1,80 % v/b - Kadar ektrak minyak atsiri : tidak kurang dari 7,93 % v/b - Kadar ekstrak etil p-metoksisinamat : tidak kurang dari 4,30 % v/b (FHI, 2008).
2. Parameter Non Spesifik Ekstrak
Parameter non spesifik ekstrak meliputi (Depkes RI, 2000): a) Susut Pengeringan
Pengukuran sisa zat setelah pengeringan pada temperatur 105 oC selama 30 menit atau sampai berat konstan yang dinyatakan dalam persen. Tujuannya adalah untuk memberikan batas maksimal (rentang) tentang besarnya senyawa yang hilang pada proses pengeringan (BPOM, 2000). Nilai : - Susut pengeringan simplisia : tidak lebih dari 10 % (FHI, 2008). b) Bobot jenis
Parameter bobot jenis adalah massa per satuan volume yang diukur pada suhu kamar tertentu (25C) yang menggunakan alat khusus piknometer atau alat lainnya. Tujuannya adalah memberikan batasan tentang besarnya massa persatuan volume yang merupakan parameter khusus ekstrak cair sampai ekstrak pekat (kental) yang masih dapat dituang, bobot jenis juga terkait dengan kemurnian dari ekstrak dan kontaminasi. Nilai : Minimal atau rentang yang diperbolehkan terkait dengan kemurnian dan kontaminasi. c) Kadar air
Parameter kadar air adalah pengukuran kandungan air yang berada didalam bahan yang bertujuan untuk memberikan batasan minimal atau rentang tentang besarnya kandungan air dalam bahan (Depkes RI,2000) Persyaratan berdasarkan Farmakope Herbal adalah kadar air dalam ekstrak tidak lebih dari 10% (FHI, 2008) Nilai : - Maksimal atau rentang yang diperbolehkan terkait dengan kemurnian dan kontaminasi (BPOM, 2000). - Kadar air tidak lebih dari 10 % (FHI, 2008) d) Kadar abu
Parameter kadar abu adalah bahan dipanaskan pada temperatur dimana senyawa organik dan turunannya terdestruksi dan menguap. Sehingga tinggal unsur mineral dan anorganik, yang memberikan gambaran kandungan mineral internal dan eksternal yang berasal dari proses awal sampai terbentuknya esktrak. Parameter kadar abu ini terkait dengan kemurnian dan kontaminasi suatu ekstrak.
Nilai : - Maksimal atau rentang yang diperbolehkan terkait dengan kemurnian dan kontaminasi. - Kadar abu total simplisia : tidak lebih dari 8,7 % - Kadar abu tidak larut asam simplisia : tidak lebih dari 2,5 % - Kadar abu total ekstrak : tidak lebih dari 0,5 % - Kadar abu tidak larut asam ekstrak : tidak lebih dari 0,2 % e) Sisa pelarut
Parameter sisa pelarut adalah penentuan kandungan sisa pelarut tertentu yang mungkin terdapat dalam ekstrak. Tujuannya adalah memberikan jaminan bahwa selama proses tidak meninggalkan sisa pelarut yang memang seharusnya tidak boleh ada. Pengujian sisa pelarut berguna dalam penyimpanan ekstrak dan kelayakan ekstrak untuk formulasi (Putri et al ., 2012). Nilai : - Maksimal yang diperbolehkan. Namun dalam hal pelarut berbahaya seperti kloroform nilai harus negatif sesuai deteksi instrumen. Terkait dengan kemurnian dan kontaminasi. f) Cemaran mikroba
Parameter cemaran mikroba adalah penentuan adanya mikroba yang patogen secara analisis mikrobiologis. Tujuannya adalah memberikan jaminan bahwa ekstrak tidak boleh mengandung mikroba patogen dan tidak mengandung mikroba non patogen melebihi batas yang ditetapkan karena berpengaruh pada stabilitas ekstrak dan bahaya (toksik) bagi kesehatan. Nilai : - Pemeriksaan kuman boleh positif tetapi harus mempunyai batas serta tidak boleh mengandung bakteri patogen, misalnya Salmonella
sp,
Escherichia
coli,
Staphylococcus
sp,
Stretococcus sp, vibrio cholera, Bacillus sp, Pseudomonas sp, Shigella sp, Priteus sp. -
ALT
: <106
-
Angka kapang khamir : <106
- E. coli
: -/9
- Salmonella
: -/9
- P. Aeruginosa
: -/9
- S. aureus
: -/9
g) Cemaran aflatoksin
Aflatoksin merupakan metabolit sekunder yang dihasilkan oleh jamur. Aflatoksin sangat berbahaya karena dapat menyebabkan toksigenik
(menimbulkan
keracunan),
mutagenik
(mutagi
gen),
teratogenik (penghambatan dan pertumbuhan janin) dan karsinogenik (menimbulkan kanker pada jaringan) (Rustian, 1993). Tujuannya adalah untuk memberikan jaminan bahwa ekstraksi tidak mengandung cemaran jamur melebihi batas yang telah ditetapkan karena berpengaruh pada stabilitas ekstrak dan aflatoksin berbahaya bagi kesehatan (BPOM, 2008). Jika ekstrak positif mengandung aflatoksin maka pada media pertumbuhan akan menghasilkan koloni berwarna hijau kekuningan sangat cerah (Saifudin et al., 2011). Nilai : - Menjadi persyaratan tapi tidak harus nol - AKK : <10 6 - Aflatoksin : <20 µg/kg h) Cemaran logam berat
Parameter cemaran logam berat adalah penentuan kandungan logam berat dalam suatu ekstrak, sehingga dapat memberikan jaminan bahwa ekstrak tidak mengandung logam berat tertentu (Hg, Pb, Cd, dll) melebihi batas yang telah ditetapkan karena berbahaya bagi kesehatan (Depkes RI, 2000). Nilai : -
Pd
: ≤ 10 mg/kg atau mg/l atau ppm
- Cd
: ≤ 0,3 mg/kg atau mg/l atau ppm
- As
: ≤ 5 mg/kg atau mg/l atau ppm
- Hg
: ≤ 0,5 mg/kg atau mg/l atau ppm
(BPOM, 2014)
IV. ALAT DAN BAHAN
Alat Kertas Labu
saring
destilator
Corong
pisah
Corong Cawan Kurs
petri
silikat
Desikator Kaki
tiga
Bunsen Penjepit
kayu
Analytical Botol
balance
timbang + tutup
Oven
Bahan Ekstrak
kering kencur
Aquadest Kloroform Etanol
95%
V. Prosedur kerja Parameter Spesifik 1. Identitas a. Deskripsi tata nama:
Nama ekstrak (generik, dagang, paten)
Nama latin tumbuhan (sistematika botani)
Bagian yang digunakan (rimpang, daun, dsb) Nama Indonesia tumbuhan
b. Senyawa Identitas, senyawa tertentu yang menjadi petunjuk spesifik
dengan metode tertentu. 2. Organoleptik
Penggunaan pancaindra mendeskripsikan bentuk, warna, bau dan rasa:
Bentuk
: padat, serbuk- kering, kental, cair.
Warna
: kuning, coklat, dll.
Bau
: aromatik, tidak berbau, dll.
Rasa
: pahit, manis, kelat, dll.
3. Senyawa terlarut dalam air
Disaring
Ditimbang ekstrak sebanyak 5,0 g
Hitung kadar dalam % dihitung terhadap ekstrak awal
Dimaserasi selama 18 jam dg air kloroform LP 100 ml, dikocok berkali-kali
Residu dipanaskan pada suhu 105C ad bobot konstan
Filtrat diuapkan ad kering
Catatan :
Air- kloroform LP adalah air suling 99,75 ml dicampur dengan 2,5 ml kloroform.
4. Senyawa terlarut dalam etanol
Disaring Ditimbang ekstrak sebanyak 5,0 g
Hitung kadar dalam % dihitung terhadap ekstrak awal
Dimaserasi selama 18 jam dg etanol 95% dikocok berkali-kali
Residu dipanaskan pada suhu 105C ad bobot konstan
Filtrat diuapkan ad kering
Parameter Non-spesifik 1. Susut Pengeringan
Cawan penguap di panaskan pada suhu
Didinginkan selama 10 menit dalam desikator
105C
Ditimbang cawan kosong
Dipanaskan dalam oven dengan suhu 105C selama 30 menit Dimasukkan ke dalam cawan dan timbang
Ditimbang cawan + ekstrak ad berat konstan Didinginkan dalam desikator
Ditimbang ekstrak kencur 1 g
2. Kadar Abu
Pijar kurs porselen selama
Diamkan selama 10 menit
Masukkan ke dalam desikator
Timbang ad konstan
Masukkan dalam kurs yang telah konstan
Ditimbang kurs + ekstrak
Timbang ekstrak
Timbang ad konstan
Masukkan ke dalam desikator
3. Kadar MC Cara Kerja:
Tekan On pada alat
Wadah dibersihkan
Pijar kurs porselen selama
Diamkan selama 10 menit
Penutup ditutup sampai menunjukkan angka 0,00
Ekstrak dimasukkan
Tutup kembali
Catat angka yang tertera
VI. Hasil Penimbangan (parameter spesifik) 1. Identitas
Nama ekstrak
: Extractum galanga rhizoma
Bagian yang digunakan : Rimpang Nama latin tumbuhan
: Kaempferia galanga
Nama Indonesia
: kencur
2. Organoleptis
Bentuk : serbuk kering Warna
: kuning kecoklatan
Bau
: khas aromatik
Rasa
: agak pedas, hangat
1. Spesifik air Cawan kosong
31,4257 g
Cawan + isi I
31,5153 g
Cawan + isi II
31,5121 g
Cawan + isi III
31,5126 g
Cawan + isi IV
31,5100 g
Cawan + isi V
31,5058 g
Cawan + isi VI
31,5056 g
Cawan + isi VII
31,5041 g
Cawan + isi VIII
31,5066 g
Cawan + isi IX
31,5064 g
Cawan + isi X
31,5063 g
Bobot ekstrak
31,5063 g – 31,4257 g = 0,0806 g
2. Spesifik etanol Cawan kosong
32,1257 g
Cawan + isi I
32,7425 g
Cawan + isi II
32,7090 g
Cawan + isi III
32,6899 g
Cawan + isi IV
32,6232 g
Cawan + isi V
32,5867 g
Cawan + isi VI
32,5830 g
Cawan + isi VII
32,5282 g
Cawan + isi VIII
32,5369 g
Cawan + isi IX
32,5287 g
Cawan + isi X
32,5266 g
Cawan + isi XI
32,7441 g
Cawan + isi XII
32,4739 g
Cawan + isi XIII
32,4738 g
Bobot ekstrak
32,4738 g – 32,1257 g = 0,3481 g
Penimbangan (parameter non-spesifik)
1. Susut pengeringan 1,0000 g ± 5% (1,0500 g – 0,9500 g) Penimbangan ekstrak = 1,0001 g Cawan kosong
37,1359 g
Cawan + isi I
38,1359 g
Cawan + isi II
38,0212 g
Cawan + isi III
37,9778 g
Cawan + isi IV
37,9356 g
Cawan + isi V
37,9320 g
Cawan + isi VI
37,9199 g
Cawan + isi VII
37,9122 g
Cawan + isi VIII
37,9060 g
Cawan + isi IX
37,9060 g
Cawan + isi X
37,9059 g
Bobot ekstrak
37,9059 g – 37,1359 g = 0,7700 g
2. Kadar abu 2,0000 g ± 5% (2,1000 g – 1,9000 g) Bobot botol kosong
35,0860 g
Bobot botol + isi
37,0738 g
Bobot akhir/ekstrak
1,9878 g
Penimbangan I
37,0738 g
Penimbangan II
35,6842 g
Penimbangan III
35,6795 g
Penimbangan IV
35,6795 g
Penimbangan V
35,6795 g
Penimbangan VI
35,6795 g
Bobot abu
35,6795 g – 35,0860 g = 0,5935 g
VII. Perhitungan
1. Penentuan kadar air Alat
Mouisture Analyzer
Bobot ekstrak
2,646 g
Suhu
105 ℃
Time
10 menit
% kadar
11,26%
2. Kadar senyawa larut Aquadest – Kloroform
( ) ( ) × 100 × 20 0,036 × 100 5 × 20
× 100% = 3,6%
× 100%
3. Kadar senyawa larut etanol
( ) ( ) × 100 × 20 0,3481 × 100 5 × 20
× 100%
× 100% = 34,81%
4. Susut pengeringan
ℎ 1,0001 0,7700 1,0001
× 100%
× 100% = 23,01%
5. Kadar abu
× 100% =
0,5935 2,0000
× 100% = 29,68%
VIII.
Pembahasan
Standarisasi ekstrak sangat penting dilakukan untuk mempertahankan konsistensi kandungan senyawa aktif yang terkandung dalam ekstrak. Terpenuhinya standar mutu produk atau bahan ekstrak tidak terlepas dari pengendalian proses artinya bahwa proses yang terstandar dapat menjamin produk tersebut. Dalam standarisasi mutu ekstrak terbagi menjadi dua parameter, yaitu parameter spesifik dan parameter non-spesifik. Penetapan nilai untuk kedua parameter tersebut bertujuan untuk menjamin bahwa ekstrak tersebut mempunyai nilai parameter tertentu yang konstan dan ditetapkan terlebih dahulu. Pada parameter spesifik dengan cara idenstifikasi pada organoleptis, senyawa terlarut dalam pelarut tertentu (air dan etanol). Serta parameter nonspesifik dilakukan dengan cara susut pengeringan, penetapan kadar abu, dan kadar air. Parameter spesifik yang pertama adalah dengan identifikasi organoleptis ekstrak, dilakukan panca indra ekstrak kencur berbentuk serbuk kering, berwarna kuning pucat, bau menyengat seperti jamu, rasa pedas. Selanjutnya diuji senyawa terlarut dalam larutan tertentu (air dan etanol). Kadar senyawa larut air, ekstrak 5g dilakukan maserasi ditambah 150ml dan kloroform berfungsi untuk melarutkan ekstrak, masukan larutan dalam corong pisah, kocok selama 4 jam untuk memisahkan antara air dengan kloroform karena mempunyai densitas yang berbeda. Diamkan selama 24 ja m, dan disaring untuk memisahkan filtrate dengan residu, kemudian filtrate diuapkan sebanyak 20ml hingga kering dalam ovenm pada suhu 105 ℃ untuk mendapatkan ekstrak yang kental, setelah ekstrak kental, diamkan dalam desikator 10 menit untuk menghilangkan kadar air yang mungkin saja masih terkandung dalam ekstrak kemudian ditimbang sehingga mendapat berat yang konstan (replikasi hingga konstan). Lakukan hal yang sama pada senyawa larut etanol, dengan pelarut yang diganti etanol 95%.
Terdapat pula parameter non-spesifik, pertama dilakukan adalah susut pengeringan yang merupakan prosentase senyawa yang hilang selama proses pengeringan. Prosedurnya adalah dengan menara cawan porselin dan dipanaskan dengan oven pada suhu 105 ℃ selama 30 menit, kemudian dimasukan ekstrak 1g kedalam cawan porselin, dioven kembali 105 ℃ selama 30 menit, didesikator 10 menit dan ditimbang. Lakukan replikasi hingga berat konstan, parameter ini juga menggambarkan senyawa yang menguap. Dilakukan parameter berikutnya, yaitu pengukuran kadar air dengan alat mouiture analyzer HB-45-s Halogen, timbang ekstrak 2,646g ditaburkan merata pada lempeng alat, atur suhu 105 ℃ tunggu nilai konstan hingga alat berbunyi (kelompok kami memerlukan waktu 10 menit), hasil Mc yang didapat adalah 11,26% Mc. Nilai tersebut melebihi nilai Mc konstan yaitu tidak lebih dari 8% dan susut pengeringan tidak lebih dari 10%. Pada praktikum ini klompok kami mendapat 23,01% pada susut pengeringan, yang berarti nilai tersebut tidak konstan. Parameter terakhir adalah kadar abu total timbang 2g ekstrak, kemudian dimasukkan ke kurs porselin yang sudah dipijar. Dipijar ekstrak tersebut, dinginkan, didesikator, dan timbang (replikasi hingga berat konstan). Didapat kan persentasi 29,68% sedangkan persyaratan berdasarkan farmakope herbal untuk ekstrak kencur tidak boleh lebih dari 8,7%, hal ini dapat dikata kan belum memenuhi persyaratan ekstrak yang baik.
LAPORAN PRAKTIKUM III Penetapan Kadar Senyawa Marker pada Ekstrak Rimpang Kaempferia galangaa L. Disusun Untuk Memenuhi Tugas Praktikum Fitofarmaka
KELOMPOK: 1 KELAS: C
Novelia
(201410410311007)
Aprilia Kartika Putri (201410410311011) Anis Khoirun Sauma (201410410311013) Sukmawansyah
(201410410311016)
Imanda Gita R.
(201410410311120)
Nur Cholidah
(201410410311124)
Qardina Annisa H.
(201410410311127)
Fardhiyanti
(201410410311156)
Aida Rakhiba
(201410410311158)
Langlang Kurniawan (201410410311220) Abelia M Alhamid
(201410410311259)
DOSEN PEMBIMBING: Dra. Herra Studiawan, M.Si, Apt Siti Rofida, S,Si., M.Farm.,Apt
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG 2017
TUGAS 3 Penetapan Kadar Senyawa Marker pada Ekstrak Rimpang Kaempferia galangaa L. I.
TUJUAN
‒ Untuk mengetahui pembuatan Fingerprint dan penetapan kadar senyawa marker dalam ekstrak.
‒ Untuk mengetahui bagaimana proses pembuatan marker dengan cara KLT. II. TINJAUAN PUSTAKA
Kencur ( Kaempferia galanga L. ) adalah salah satu jenis empon-empon atau tanaman obat yang tergolong dalam suku temu-temuan dengan tata nama atau klasifikasi sebagai berikut : Kingdom
: Plantae
Divisi
: Spermatophyta
Sub Divisi
: Angiospermae
Famili
: Zingiberaceae
Genus
: Kaempferia
Spesies
: Kaempferia galanga L.
Standarisasi simplisia dibutuhkan karena kandungan kimia tanaman obat sangat bervariasi tergantung banyak faktor seperti telah dikemukakan sebelumnya. Standarisasi simplisia diperlukan untuk mendapatkan efek yang dapat diulang. Kandungan kimia yang berkhasiat atau kandungan kimia yang hanya sebagai petanda (marker), atau yang memiliki sidik jari (fingerprint) pada kromatogram. Untuk mendapatkan simplisia dengan mutu standar diperlukan pembudidayaan dalam kondisi standar (Dewoto, 2007). Khusus untuk etil ῥ-metoksisinamat, kadar etil ῥ-metoksisinamat dalam kencur cukup tinggi (tergantung spesiesnya) bisa sampai 10%, karena itu bisa diisolasi dari bagian umbinya menggunakan pelarut petroleum eter/etanol. Struktur etil ῥ-metoksisinamat (C12H14O2) adalah :
Untuk penetapan kadar EPMS dilakukan dengan KLT-Densitometri. Banyak sekali keuntungan penggunaan KLT dan salah satu keuntungannya adalah mampu
memisahkan
beberapa
sampel
secara
bersamaan,
yang
lebih
menguntungkan dibandingkan KCKT. Densitometri merupakan metode analisis instrumental yang didasarkan pada interaksi radias i elektro magnetik dengan analit yang merupakan bercak pada KLT. Densitometri dimaksud untuk analisis kuantitatif analit dengan kadar kecil, yang sebelumnya dilakukan pemisahan dengan KLT. KLT merupakan kromatografi sederhana dengan bentuk kromatografi planar yang memisahkan campuran analit berdasarkan distribusi komponen tersebut diantara 2 fase, yaitu fase diam dan fase gerak. Prinsip kerja KLT adalah dengan menotolkan cuplikan atau sampel pada lempeng KLT, kemudian lempeng dimasukkan kedalam wadah berisi fase gerak, sehingga komponen-komponen dalam sampel tersebut terpisah. Komponen yang mempunyai afinitas besar terhadap fase gerak atau afinitas yang lebih kecil terhadap fase diam akan bergerak lebih cepat dibanding komponen dengan sifat sebaliknya ( Ihsanto, 2009). Pada prinsipnya pemisahan KLT diusahakan dilakukan dalam keadaan netral (Surya, 2011). KLT dapat digunakan untuk tujuan preparatif dan kuantitatif, meskipun KLT kuantitatif kurang teliti bila dibandingkan dengan sistem kromatografi lainnya. Sistem KLT telah banyak digunakan untuk analisis obat dan senyawa bahan alam. Analisis kualitatif pada KLT menggunakan nilai Rf . Dua senyawa dikatakan identik bila mempunyai nilai Rf yang sama dengan dan diukur pada kondisi KLT yang sama. Analisis kuantitatif pada KLT didukung dengan teknik densitometri. Untuk menguji validitas dari metode ini dilakukan pengujian antara lain uji akurasi dengan parameter % perolehan kembali (% recovery), uji presisi dengan parameter simpangan baku (SD) dan koefisien variasi (KV) (Rofita, 2009).
III. ALAT DAN BAHAN
a. Alat
‒ TLC Scanner ‒ Lempeng KLT ‒ Pipet Mikro ‒ Analitical Balance ‒ Labu Ukur ‒ Cawan Timbang ‒ Vial Tertutup ‒ Batang Pengaduk b. Bahan
‒ Ekstrak kering Kaempferia galanga L. ‒ Standart EPMS ‒ N-Heksan ‒ Etil Asetat ‒ Asam Formiat ‒ Etanol 96%
IV.
SKEMA KERJA
Pembuatan Eluen (Fase Gerak)
N-Heksana etil asetat as.format perbandingan (90:10: 1 tetes)
campur dan homogenkan masukkan kedalam Chamber dengan goyang2 homogenkan
dan
-
Pembuatan Larutan Baku Pembuatan Larutan Induk 1
Ditimbang standart BI 1
dimasukkan
+ 20 ml etanol 96%
+etanol 96%
ke labu ukur 50,0 ml
(5000 ppm)
EPMS 50mg -
Pembuatan Larutan Induk 2
BK
1
(200
2
(300
ppm) Dipipet 4.0 ml -
dimasukkan ke labu
+etanol 96% ad 10 ml
Pembuatan baku kerja
a. BK 1 BK ppm) Dipipet 5ml (BK 3)
masukkan kelabu
+ etanol 96% ad 10 ml homogenkan
b. BK 2 BK 2 (300 ppm)
Dipipet 5.0 ml (BK 5) masukkan kelabu
+ etanol 96% ad 10 ml homogenkan
c. BK 3 BK 3 (400 ppm)
Dipipet 5.0 ml (BK 6)
masukkan kelabu + etanol 96% ad 10 ml homogenkan
d. BK 4 BK 4 (500 ppm)
Dipipet 5.0 ml (BI 1)
masukkan kelabu + etanol 96% ad 10 ml homogenkan
e. BK 5 BK 5 (600 ppm)
Dipipet 3.0 ml (Bi 2)
masukkan kelabu + etanol 96% ad 10 ml homogenkan
f. BK 6 BK 6 (800 ppm)
Dipipet 5.0 ml (BI 2)
masukkan ke labu + etanol 96% ad 10 ml homogenkan
Preparasi Sampel
-
Sampel Untuk Penetapan Kadar EPMS dalam ekstrak kering
Sampel ditimbang 20 mg
masukkan ke labu + 2ml etanol 96%, kemudian ultrasonic selama 5 menit
+
etanol ad 5.0 ml. Di ultrasonic selama 10 menit.saring
Sampel Untuk Penetapan Recovery
Sampel ditimbang 20 mg
masukkan ke labu + 2ml etanol 96%, kemudian ultrasonic selama
5
menit
+
standart EPMS 1.0 ml(500 ppm). Ultrasonic 10 menit.saring
Penetapan Sampel dan Standart
+
Larutan sampel
larutan recovery
ditotolkan pada plat KLT
Penentuan Panjang gelombang Maksimum Plat KLT yang sudah di scan pada panjang gelombang 264nm dan 365 nm kemudian di scan panjang gelombang 200-400 nm. disini dapat diketahui pada panjang berapa EPMS memberikan absorban maksimu. Panjang gelombang maksimum tersebut yang akan digunakan untuk pengukuran.
Penentuan Linieritas Linieritas ditentukan dari standart EPM pada lempeng KLT kemudian dianalisis dengan KLT densitometer pada panjang gelombang maksimum yang akan digunakan untuk pengukuran.
Penentuan Presisi
+ Larutan sampel
larutan epms
ditotolkan pada plat KLT
eluasi.
Masukkan ke chamber
Penentuan Akurasi Untuk menentukan persen recovery di totolkan sampel pada masingmasing dan larutan standart EPMS masing-masing 2micoliter pada plat KLT. Plat ini kemudian dielusi dengan fase gerak dan dianalisis menggunakan KLT densitometer pada panjang gelombang maksimum. % Recovery = dimana : Ct Cp
=
+
100%
: Kadar EPMS yang diperoleh : Kadar EPMS sampel
Cst : Kadar standart EPMS yang ditambahkan Hasil yang diperoleh kemudian dihitung standart deviasi (SD) dan Kooefisien Variasinya (KV).
V. PERHITUNGAN Penimbangan Bahan
A. Penimbangan Baku Induk = 0,0505 g dalam 10 ml B. Penimbangan Standar EPMS = 0,0254 g dalam 50 ml C. Penimbangan Sampel : a) 0,02035 g = 20,35 mg b) 0,02028 g = 20,28 mg c) 0,02023 g = 20,23 mg D. Penimbangan Recovery : a) 0,02023 g = 20,23 mg b) 0,02024 g = 20,24 mg c) 0,0203 g = 20,23 mg Perhitungan Konsentrasi
A. Konsentrasi Baku Induk
= 0,0505 =
BI2
N2 =
50,5 10
1000 ml = 5050 ppm
N1 x V1 = N2 x V2 4 ml x 5050 ppm 10ml
N2 = 2020 ppm B. Konsentrasi Baku Kerja BK 1 :
V1 x N1 BK 3 = V2 x N2 5,0 ml x 404,0 ppm = 10 ml x N 2 N2 = 202 ppm
BK 2 :
V1 x N1 BK 5 = V2 x N2 5,0 ml x 606,0 ppm = 10 ml x N 2 N2 = 303 ppm
BK 3 :
V1 x N1 BK 6 = V2 x N2 5,0 ml x 808,0 ppm = 10 ml x N 2 N2 = 404 ppm
BK 4 :
V1 x N1 BI1 = V2 x N2 1,0 ml x 5050 ppm = 10 ml x N 2 N2 = 505 ppm
BK 5 :
V1 x N1 BI2 = V2 x N2 3,0 ml x 2020 ppm = 10 ml x N 2 N2 = 606 ppm
BK 6 :
V1 x N1 BI2 = V2 x N2 4,0 ml x 2020 ppm = 10 ml x N 2 N2 = 808 ppm
C. Konsentrasi Standar EPMS = 0,0254 g = 25,4 mg ,
1000 = 508 508 ppm =
508 1000
1 = 0,508
Perhitungan Kadar EPMS dalam Sampel
A. % Kadar cab-o-sil dalam Ekstrak = =
obot cab−o−s yan dtabahkan obot ekstrak kern , ,
x100%
x 100% = 30,25 %
B. Bobot Ekstrak dalam Sampel dan Recovery
Sampel 1 = 20,35 mg – (30,52% x 20,35 mg) = 14,14 mg
Sampel 2 = 20,28 mg – (30,52% x 20,28 mg) = 14,09 mg
Sampel 3 = 20,23 mg – (30,52% x 20,23 mg) = 14,06 mg
Recovery 1 = 20,23 mg – (30,52% x 20,23 mg) = 14,06 mg
Recovery 2 = 20,24 mg – (30,52% x 20,24 mg) = 14,06 mg
Recovery 3 = 20,23 mg – (30,52% x 20,23 mg) = 14,06 mg
C. Kandungan EPMS dalam Sampel
BK 1 = 202 ppm =
BK 2 = 303 ppm =
BK 3 = 404 ppm =
BK 4 = 505 ppm =
BK 5 = 606 ppm =
BK 6 = 808 ppm =
x 5 ml = 1,01 mg x 5 ml = 1,51 mg x 5 ml = 2,02 mg x 5 ml = 254 mg x 5 ml = 303 mg x 5 ml = 404 mg
Luas Area λ 254 nm
λ 308 nm
λ 254 nm
λ 308 nm
BK1
3463,8 AU
1590,0 AU
S1
8167,8 AU
26703,9 AU
BK2
4918,0 AU
20383,1 AU
S2
9230,7 AU
29532,0 AU
BK3
6026,4 AU
22520,4 AU
S3
8641,1 AU
28588,6 AU
BK4
7569,4 AU
22468,4 AU
R1
8772,9 AU
28665,2 AU
BK5
3177,2 AU
27579,0 AU
R2
8666,5 AU
28717,4 AU
BK6
7240,2 AU
24896,2 AU
R3
8206,5 AU
27795,4 AU
Persamaan Regresi Kadar Baku Kerja (x) dan Luas Area (y) Baku Kerja
Konsentrasi (ppm)
Luas Area (AU)
BK 1
1,01 mg
15901,0 AU
BK 2
1,51 mg
20383,1 AU
BK 3
2,02 mg
22520,4 AU
BK 4
2,52 mg
22468,4 AU
BK 5
3,53 mg
27579,0 AU
BK 6
4,04 mg
24896,2 AU
Regresi : a = 4148,6 b = 8321,1 r = 0,9539 Regresi Sampel
1. S1 = y = bx + a x=
y−a
=
b
, – , ,
= 2,71 mg
2. S2 = y = bx + a x=
y−a
=
b
, – , ,
= 3,05 mg
3. S3 = y = bx + a x=
y−a
=
b
, – , ,
= 2,94 mg
Konsentrasi Sampel untuk Menetapkan Kadar EPMS dalam Ekstrak Kering
1. S1 = 2,71 mg x 2. S2 = 3,05 mg x 3. S3 = 2,94 mg x
x x x
= 8130 mg = 8,13 mg
= 9150 mg = 9,15 mg
= 8820 mg = 8,82 mg
% Kadar Ekstrak dalam Sampel
1. S1 = 2. S2 = 3. S3 =
π=
, , , , , ,
x 100 % = 57,50 % x 100 % = 64,94 % x 100 % = 62,73 %
, % + , % + , %
= 61,72 %
Regresi Recovery
1. S1 = y = bx + a x=
y−a b
=
, – , ,
= 2,95 mg
2. S2 = y = bx + a x=
y−a b
=
, – , ,
= 2,95 mg
3. S3 = y = bx + a x=
y−a b
=
, – , ,
= 2,84 mg
Kadar EPMS dari Sampel Recovery (Ct)
1. R 1 = 2,95 mg x
2. R 2 = 2,95 mg x
3. R 3 = 2,84 mg x
x x x
= 8850 mg = 8,85 mg = 8850 mg = 8,85 mg = 8520 mg = 8,52 mg
Cp = π sampel x (penimbangan recovery – cab-o-sil)
1. R 1 = 61,72 % x 14,06 mg = 8,6778 2. R 2 = 61,72 % x 14,06 mg = 8,6778 3. R 3 = 61,72 % x 14,06 mg = 8,6778 Cst = Standart EPMS Konsentrasi = 0,508 mg Perhitungan % Recovery Ct
1. R 1 = =
C + Cst
, (, + , ) Ct
2. R 2 = =
x 100 %
C + Cst
x 100 %
, (, + , )
3. R 3 =
Ct C + Cst
x 100 % = 96,34 %
x 100 % = 96,34 %
x 100 %
=% π=
, % + , % + , %
= 95,14 %
SD = 2,07269 KV =
SD π
=
, , %
x 100 % = 2,18 %
VI.
PEMBAHASAN
Pada praktikum ini bertujuan untuk melakukan penentuan kadar senyawa marker dan rimpang Kaempferia galanga L. Tanaman kencur dapat digunakan sebagai sampel karena tanaman kencur diketahui mengandung senyawa marker atau senyawa penanda. Senyawa marker menjadi bagian penting dalam penentuan standar mutu bahan baku dan dibutuhkan sebagai pembanding dalam konfirmasi keberadaan suatu ekstrak tanaman dalam produk obat bahan alam. Pada tanaman kencur diketahui bahwa senyawa marker yang dikandung adalah EPMS (etil ῥ-metoksisinamat ), dan senyawa marker ini yang digunakan dalam praktikum kali ini. Senyawa EPMS ini termasuk golongan ester yang mengandung cincin benzen dan gugus metoksi yang bersifat non polar. Selain itu senyawa EPMS juga mengandung gugus karbonil yang mengikat gugus etil dan ikatan ini bersifat polar. Senyawa marker ini dapat digunakan untuk identifikasi dengan autentik sumber bahan alam, mencapai kualitas yang konsisten mengkuantibasi senyawa farmakologik aktif pada produk akhir serta memastikan efikasi produk. Penentuan kadar senyawa marker dalam praktikum kali ini menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT). KLT yang dimaksud untuk uji kuantitatif salah satunya dengan menggunakan densitometer. Densitometri merupakan metode analisis instrumental yang didasarkan pada interaksi radiasi elektromagnetik dengan analit yang merupakan bercak pada KLT. Pada praktikum kali ini terdapat 3 kali scanning pada panjang gelombang yang berbeda. Hal tersebut dapat dilihat pada hasil pengamatan yaitu sebagai berikut : a. Scanning λ 254 nm Scanning dilakukan untuk melihat apakah proses eluasi berhasil memisahkan senyawa EPMS dari ekstrak. Hasilnya menunjukkan tanda substance 1 yang berarti terdapat 1 senyawa yang terbaca pada noda dan senyawa tersebut adalah senyawa EPMS. Proses eluasi senyawa menggunakan eluen n-heksan : etil asetat : asam formiat (90:10:2 tetes). b. Scanning λ 200-400 nm
Scanning dilakukan untuk menentukan λ maksimum dalam penentuan luas area terbaca yang akan digunakan untuk penentuan kadar senyawa EPMS. Pada analisis diketahui Rf tertinggi didapat pada panjang gelombang 308 nm, panjang gelombang maksimum dalam penentuan kadar EPMS adalah 308 nm. c. Scanning λ maks 308 nm Scanning dilakukan pada λ maksimum (308 nm) dan dilihat kurva baku menggunakan luas area yang didapatkan. Untuk menguji validitas dari metode densitometri dilakukan pengujian antara lain uji akurasi dengan parameter % perolehan kembali (% recovery), uji presisi dengan parameter simpangan baku (SD) dan koefisien variasi (KV). Pada proses praktikum, dilakukan pembuatan larutan baku induk dan baku kerja untuk memperoleh kurva baku. Setelah pembuatan baku kerja selesai, dilakukan preparasi sampel dan recovery yang ditambahkan dengan standar EPMS. Kemudian dilkaukan penotolan dengan plat KLT yang eluennya menggunakan eluen n-heksana : etil asetat : asam formiat (90:10:2 tetes) yang akan menampakkan bercak untuk menetapkan kadar EPMS ekstrak kencur dengan densitometri. Setalah dilakukan uji scanning didapatkan data kurva baku dan terdapat data BK 6 yang di reject. Persamaan kurva baku yang diperoleh adalah r=0,9539, dengan persamaan y=8321,1 x + 4148,6. Dari persamaan regresi data tersebut didaptkan hasil kadar sampel diperoleh S1= 57,50 %; S 2= 64,94 %; dan S 3= 62,73% dengan rata-rata dari % kadar ekstrak dalam sampel adalah 61,72%. Untuk penentuan presisi diperoleh dari data kadar EPMS dalam sampel. Suatu data dikatakan presisi jika nilai koefisien variasi (KV) < 2% (Harmita, 2004). Kriteria penerimaan untuk korelasi (r) adalah > 0,9950 (Badan POM, 2003). Untuk kriteria penerimaan untuk % standart deviasi relatif (KV) adalah < 2% dan untuk bias adalah -2,0% sampai +2,0% (Badan POM, 2003). Menurut Farmakope Indonesia < 5%. Dan hasil dari data praktikum kelompok kami memperoleh hasil SD=2,07% dan KV=2,18%, hasil tersebut, menunjukkan presisi yang
diperoleh memenuhi syarat KV yang tertera pada litelatur dan kriteria korelasi (r) tidak memenuhi syarat karena < dari 0,9950. Untuk mengetahui tingkat akurasi dari praktikum yang dilakukan dapat dilihat melalui penetapan % recovery. Dari hasil pembacaan densito scanner diperoleh R 1= 96,34%; R 2= 96,34%; dan R 3= 92,72% dengan nilai rata-rata adalah 95,14%. Persen recovery yang baik menurut Farmakope Indonesia adalah 95-105%, sedangkan BPOM sebesar 98-102%. Pada hasil perhitungan recovery menunjukkan hasil recovery yang memenuhi persyaratan FI dan BPOM. Hal ini mengindikasi pekerjaan praktikan yang kurang teliti dan kurang kuantitatif karena % recovery jauh dari 100%. Kesalahan dalam praktikum yang terjadi karena teknik praktikan dalam melakukan praktikum secara kuantitatif, baik dalam penimbangan maupun pengenceran, dan penotolan dari pipa kapil er, ataupun pengukuran larutan sehingga didapat hasil praktikum.
LAPORAN PRAKTIKUM IV PEMBUATAN KAPSUL EKSTRAK KENCUR DAN PENETAPAN KADAR SENYAWA MARKER DALAM KAPSUL ( Kaempferia galanga) Disusun Untuk Memenuhi Tugas Praktikum Fitofarmaka
KELOMPOK: 1 KELAS: C
Novelia
(201410410311007)
Aprilia Kartika Putri (201410410311011) Anis Khoirun Sauma (201410410311013) Sukmawansyah
(201410410311016)
Imanda Gita R.
(201410410311120)
Nur Cholidah
(201410410311124)
Qardina Annisa H.
(201410410311127)
Fardhiyanti
(201410410311156)
Aida Rakhiba
(201410410311158)
Langlang Kurniawan (201410410311220) Abelia M Alhamid
(201410410311259)
DOSEN PEMBIMBING: Dra. Herra Studiawan, M.Si, Apt Siti Rofida, S,Si., M.Farm.,Apt
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG 2017
TUGAS 4 PEMBUATAN KAPSUL EKSTRAK KENCUR DAN PENETAPAN KADAR SENYAWA MARKER DALAM KAPSUL (Kaempferia galanga)
I. TUJUAN UMUM
Mahasiswa mampu melakukan pembuatan kapsul ekstrak kencur dengan jumlah senyawa marker yang ditentukan dalam kapsul. II. TINJAUAN PUSTAKA A. Tanaman (Kaempferia galanga)
Klasifikasi Kingdom
: Plantae
Divisi
: Magnoliophyta
Kelas
: Liliopsida
Ordo
: Zingiberales
Famili
: Zingiberaceae
Genus
: Kaempferia
Spesies
: Kaempferia galanga
Pemerian Bau khas aromatik; rasa pedas, hangat, agak pahit akhirnya menimbulkan rasa tebal. Makroskopik Temu kecil yang tumbuh subur di daerah dataran rendah/ pegunungan yang tanahnya gembur dan tidak terlalu banyak air. Jumlah helaian daun kencur tidak lebih dari 2-3 lembar (janrang 5) dengan susunan tumbuh diatas permukaan tanah. Bunga majemuk tersusun setengah duduk dengan kuntum bunga berjumlah antara 4 sampai 12 buah. Bibir bunga berwarna lembayung dengan warna putih lebih dominan. Bentuk rimpang: kepingan; pipih, bentuk hampir bundar sampai jorong/ tidak beraturan; tebal keping 1-4 mm; panjang 1-5 cm, lebar 0,5-3 cm; bagian terpi berombak dan berkeriput, warna coklat sampai coklat kemerahan, bagian tengah berwarna putih
sampai putih kecoklatan. Korteks: sempit, lebar lebih kurang 2mm; warna putih; berkas pembuluh tersebar tampak sebagai bintik-bintik berwarna kelabu/ keunguan. Silinder pusat: lebar, banyak tersebar berkas pembuluh seperti pada korteks. Berkas patahan: rata, berdebu, berwarna putih (Materia Medika halaman 55). Kandungan Senyawa Kencur Secara empiris kencur digunakan sebagai penambah nafsu makan, ekspertoran, oba batuk, disentri, tonikum, infeksi bakteri, masuk angin, sakit perut. Rimpang kencur mengandung minyak atsiri dengan etil pmetoksisinamat (31,77%), metilsinamat (23,23%), karvon
(11,13%),
eukaliptol (9,59%) dan pentadecone (6,41%). Selain itu kandungan lainnya terdapat sineol, borneol, 3-carene, camphene, kampferal, sinamaldehid, etil sinamat, asam p-metoksisinamat. Kandungan utama kencur adalah etil pmetoksisinamat yang didalam tubuh mengalami hidrolisis menjadi senyawa aktif biologis, asam p-metoksisinamat (APMS). Senyawa ini bekerja dengan soklooksigenase sehingga konversi asam arakhidonat menjadi prostaglandin terganggu. Selain itu, EPMS termasuk kelompok fenolik alam dari golongan fenil propanoid yang bermanfaat sebagai tabir surya.
B. Senyawa Marker
Berdasarkan Natural Health Product Directorate (NHPD), senyawa marker merupakana constituent that occurs naturally in the material and that is selected for special attention (e.g. for identification and standardization purposes) by a researcher or manufacturer. Marker mempunyai 2 tujuan utama yaitu sebagai penanda farmakologis dan analisis. Misal: germacron adalah senyawa marker yang terdapat dalam purwoceng namun zat aktif yang terkandung dalam tanaman tersebut adalah stigmasterol. Stigmasterol juga ditemukan pada tanaman cabe jawa. Oleh karena itu sering ditemukan adanya pemalsuan purwoceng yang dicampur dengan cabe jawa, karena harga purwoceng jauh lebih mahal. Marker dapat digunakan untuk identifikasi dengan benar dan autentik sumber bahan alam, mencapai kualitas yang konsisten, mengkuantifikasi
senyawa farmakologik aktif pada produk akhir, atau memastikan efikasi produk. Marker
sangat
penting dalam
evaluasi
jaminan kualitas
produk. Senyawa marker tidak harus memiliki aktivitas farmakologi. Senyawa marker dapat digolongkan menjadi 4 kategori berdasarkan bioaktivitasnya. a. Zat aktif Merupakan senyawa kimia dengan aktivitas klinik yang diketahui. Contoh: epedrin pada Epedra sinensis dan sylimarin pada Sylibum marianum. b. Marker aktif Merupakan zat kimia yang mempunyai efek farmakologi, tapi belum tentu mempunyai efikasi klinik. Contoh: alliin pada Allium sativum, hiperisin dan hiperforyn pada St. John Wort (Hypericum perforatum). c. Marker analisis Merupakan zat kimia yang dipilih untuk determinasi kuantitatif tetapi belum tentu mempunyai aktivitas biologi dan efikasi klinis. Selain itu, marker ini juga berguna untuk identifikasi positif bahan baku dan ekstrak untuk standardisasi. Contoh: alkilamid yang berbeda ditemukan pada akar Echinaceae angustifolia dan E. purpurea tetapi tidak ada pada E. pallida. d. Marker negatif Senyawa aktif dengan zat aktif toksik atau allergenik. Contoh: Asam ginkolat pada Gynko biloba. Kencur (Kaemferia galanga L.) merupakan tanaman tropis yang mengandung senyawa etil-p-metoksisinamat sebagai komponen utamadan terkandung
pula
senyawa
lainnya
seperti
etil
sinamat
dan
p-
metoksistiren.Kadar etil-p-metoksisinamat dalam kencur cukup tinggi (tergantung spesiesnya) dengan bias sampai 10%.
C. Etil Para Metoksi Sinamat / EPMS
Etil p-metoksisinamat (EPMS) adalah satu senyawa hasil isolasi rimpang kencur ( Kaempferia galanga L). EPMS termasuk dalam golongan
senyawa ester yang mengandung cincin benzena dan gugus metoksi yang bersifat nonpolar dan juga gugus karbonil yang mengikat etil yang bersifat sedikit polar sehingga dalam ekstraksinya dapat menggunakan pelarut pelarut yang mempunyai variasi kepolaran yaitu etanol, etil asetat, metanol, air dan heksana. Spesifikasi EPMS : -
Berat molekul
= 206,237 g/mol
-
Bentuk
= kristal
-
Warna
= putih
-
Bau/ aorma
= harum seperti aromatik khas
-
Titik leleh
= 40-500C
D. Kapsul
Kapsul dapat didefinisikan sebagai bentuk kesediaan padat, dimana satu bahan macam obat atau lebih dan atau bahan inert lainnya yang dimasukan kedalam cangkang atau wadah kecil umumnya dibuat dari gelatin yang sesuai. Tergantung pada formulasinya, kapsul dari gelatin bisa merupakan kapsul lunak dan bisa merupakan kapsul keras. Kebanyakan kapsul-kapsul yang sudah diedarkan dipasaran adalah kapsul yang semuanya dapat ditelan oleh pasien, untuk keuntungan dalam pengobatan. Proses pengolahan kapsul dimulai dari penimbangan bahan baku yang diluluskan oleh bagian Quality assurance. Ada dua metode pengolahan kapsul, yaitu pencampuran langsung serbuk menggunakan mixer atau melalui proses granulasi basah. Pada metode granulasi basah, dilakukan proses granulasi seperti pada pembuatan tablet, kemudian granul yang dihasilkan dicampur dengan bahan lainnya. Setelah itu dilakukan proses pengisian dengan menggunakan Filling Capsule Machine. Setelah proses pengisian, tahap selanjutnya adalah polishing kapsul yang berguna untuk menghilangkan serbuk yang lengket pada permukaan cangkang kapsul sehingga kapsul tampak lebih bersih dan mengkilap.
E. Penetapan Kadar dalam Kapsul
Penetapan kadar dilakukan untuk memastikan bahwa kandungan zat berkhasiat yang terdapat dalam kapsul telah memenuhi syarat dan sesuai dengan yang tertera pada etiket. Metode penetapan kadar yang digunakan sesuai dengan zat aktif yang terkandung dalam sediaan kapsul. Caranya ditimbang 10-20 kapsul, isinya di gerus dan bahan aktif yang larut diekstraksi menggunakan pelarut yang sesuai menurut prosedur yang sudah ditetapkan. Secara umum rentang kadar bahan aktif yang ditentukan berada diantara 90-110% dari pernyataan pada label (Agoes, 2008).
F. Keseragaman Bobot
Tetapkan kadar 10 kapsul, satu per satu sebagaimana dicantumkan dalam monografi masing-masing bahan. Persyaratan untuk keseragaman dosis terletak antara 85 sampai 115% dari yang disyaratakan dalam monografi atau yang ditentukan dalam label. Bila suatu atau lebih unit dosis berada diluar batas tersebut, maka unit tambahan harus ditetapkan kadarnya dan selanjutnya diperoleh persyaratan sebagaimana ditetapkan dalam USP. KAPSUL KERAS – Timbang satu per satu secara seksama 10 buah kapsul. Isi dari tiap kapsul dikeluarkan dengan cara yang sesuai, isi dari kapsul disatukan. Timbang secara seksama kapsul kosong satu per satu dan hitung untuk tiap kapsul berat bersih dari isinya dengan cara mengurangkan berat cangkang kapsul dari masing-masing berat kotor. Dari hasil penentuan kadar didapat sebagaimana diperintahkan dalam monografi masing-masing, hitung kandungan zat aktif merata. KAPSUL LUNAK – Timbang dengan seksama 10 kapsul yang dimaksud satu per satu untuk mendapatkan berta kotornya. Kemudian kapsul dibuka dengan cara menggunakan alat pemotong yang kering seperti gunting atau pisau terbuka yang tajam dan mengeluarkan isinya dengan pencucian menggunakan pelarut yang tepat. Biarkan pelarut menguap dari cangkang pada temperatur kamar setelah jangka waktu sekitar 30 menit, lakukan tindakan pencegahan untuk menjaga jangan s ampai kehilangan uap air. Timbang masing-masing cangkang dan hitung isi netto. Dari hasil
penentuan kadar yang diperoleh sebagaimana diperintahkan dalam masingmasig monografi, hitung kandungan zat aktif dalam tiap kapsul, dengan anggapan distribusi zat aktif merata. Uji keseragaman bobot dilakukan dengan penimbangan 20 kapsul sekaligus dan ditimbang lagi satu persatu isi tiap kapsul. Kemudian timbang seluruh cangkang kosong dari 20 kapsul tersebut. Lalu dihitung bobot isi kapsul dan bobot rata-rata tiap isi kapsul. Perbedaan bobot isi tiap kapsul terhadap bobot rata-rata tiap isi kapsul,tidak boleh melebihi dari yang ditetapkan pada kolom A dan untuk setiap 2 kapsul tidak lebih dari yang ditetapkan pada kolom B. Bobot rata- rata
A
B
120 mg
10 %
20 %
120 mg atau lebih
7,5 %
15 %
G. Bahan Tambahan 1. Cab – O sil Sinonim
: Aerosil; Cab-O-Sil; Cab-O-Sil M-5P; colloidal silica;
fumed silica; fumed silicon dioxide; hochdisperses silicum dioxid; SAS; silica colloidalis anhydrica; silica sol; silicic anhydride; silicon dioxide colloidal; silicon dioxide fumed; synthetic amorphous silica. Pemerian : Cab-O-Sil adalah sebuah fumed silica submicroscopic
dengan ukuran partikel 15 nm. Cab-O-Sil berwarna putih kebiru-biruan, terang, tidak berbau, tidak berasa, serbuk amorf tidak berpasir. Rumus Kimia Fungsi
: SiO2 (BM = 60.08)
: Adsorbent; anticaking agent; emulsion stabilizer; glidant;
suspending agent; tablet disintegrant; thermal stabilizer; viscosityincreasing agent. Cab-O-Sil digunakan secara luas dalam farmasi, kosmetik dan produk makanan. Cab-O-Sil memiliki ukuran partikel kecil dan luas area permukaan spesifiknya besar sehingga memberikan karakter aliran yang
diinginkan yang dieskplorasi untuk memperbaiki aliran serbuk kering pada proses pembuatan tablet. Penggunaan Cab-O-Sil sebagai :
Aerosol
= 0,5 – 2,0 %
Emulsion
= 1,0 – 5,0 %
Glidant
= 0,1 – 1,0 %
Suspending dan thickening agent
pH
= 2,0 – 10,0 %
: 3,5-4,0 (4 % w/v aqueous dispersion)
Distribusi partikel : 7-16 nm Kelarutan
: praktis tidak larut dalam pelarut organik, air, dan
larutan asam, kecuali hydrofluoric acid. Larut dalam larutan alkali hidroksida panas. Membentuk dispersi koloidal dalam air. Cab-O-Sil higroskopis tetapi mengadsorbsi sejumlah besar air tanpa mencair. Ketika digunakan dalam sistem aqueous pada pH 0-7.5, CabO-Sil dapat meningkatkan viskositas dari sistem. Tapi pada pH lebih dari 7.5 peningkatan viskositas Cab-O-Sil akan berkurang dan pada pH lebih dari 10.7 kemampuan Cab-O-Sil menghilang karena Cab-O-Sil terlarut membentuk silikat.
2. Avicel Sinonim
: Avicel PH; Cellets; Celex; cellulose gel; hellulosum
microcristallinum; Celphere; Ceolus KG; crystalline cellulose; E460; Emcocel; Ethispheres; Fibrocel; MCC Sanaq; Pharmacel; Tabulose; Vivapur. Rumus Kimia Fungsi
: (C6H10O5)
: Adsorbent; suspending agent; capsule diluent; tablet
disintegrant. Avicel digunakan secara luas dalam farmasi, umumnya sebagai binder/diluent pada tablet oral dan formula kapsul dimana ini digunakan baik dalam granulasi basah dan proses kempa langsung. Pada penambahannya sebagai binder/diluent, avicel juga memiliki fungsi sebagai lubrikan dan disintegran yang berguna dalam tabletasi. pH
: 5,0-7,5
Densitas
: 1,512-1,668 g/cm3
Titik lebur : 260-270 oC Distribusi partikel : 20-200 μm Kelarutan : mudah larut dalam 5% w/v larutan NaOH, praktis tidak larut dalam air, asam terlarut, dan sebagian besar pelarut organik. Kompatibilitas
: avicel inkompatibel dengan agen oksidator kuat.
III. BAHAN DAN ALAT
Sampel ekstrak kencur
Timbangan analitik
dalam etanol 96%
Mortir dan stamper
Cangkang kapsul
Labu ukur 10.0mL
Avicel
Pipet volume
Cab-O sil
Ultrasonik
Etanol 96%
Densitometer
IV.
BAGAN ALIR A. Pembuatan kapsul
Ekstrak kencur ditimbang, lalu dimasukkan ke dalam mortir, digerus ad halus
Ditimbang avicel, lalu dimasukkan ke dalam mortir sedikit demi s edikit, digerus ad homogen
Ditimbang cab-o-sil, lalu dimasukkan ke dalam mortir sedikit demi sedikit, digerus ad homogen
Setelah tercampur homogen, lalu ditimbang campuran kemudian dibagi 2 sama banyak, tiap bagian dibagi menjadi 10 bagian secara visual
Dimasukkan ke dalam kapsul/ cangkang kapsul satu per satu
Kemudian tutup cangkang dan bersihkan cangkang kapsul
B. Keseragaman bobot
Dibuka kapsul yang telah berisi campuran ekstrak kencur + cab-o-sil + avicel, satu per satu ( sebanyak 20 kapsul )
Campuran ditimbang satu per satu , dicatat bobotnya
Kemudian dimasukkan campuran (yang ditimbang tadi) ke dalam cangkang, lalu diberikan
Kapsul dimasukkan ke dalam botol obat, diberi etiket dan label
IV. PENIMBANGAN
Rancangan Formulasi :
- Kadar rata-rata EPMS = 61,72% 100 x 15 mg
= 24,30 mg
61,72 - Ekstrak ditimbang per kapsul % kadar Ca-bosil 30,52% 24,30 mg + (30,52% x 24,30 mg)= 31,72 mg - Bahan pengisi = 200mg – 31,72 mg = 168,28 mg - Avicel : cab-o-sil ( 3 : 1)
Avicel = 3 x 168,28 mg = 126,21 mg
4 Untuk 20 kapsul = 126,21 mg x 20 kapsul = 2524,2 mg
Cab-o-sil = 1 x 168,28 mg = 42,07 mg 4 Untuk 20 kapsul = 42,07 mg x 20 kapsul = 841,4 mg
Total serbuk teoritis
= 4,0 g
Total serbuk yang ditimbang = 4,0 g
% kesalahan
= Bobot teoritis – Bobot yang ditimbang x 100% Bobot teoritis
= 4,0667 g – 3,9575 g x 100% = 2,68 % 4,0667 g Keseragaman bobot kapsul : BOBOT NO.
KAPSUL + ISI (g)
BOBOT ISI KAPSUL (g)
ISI KAPSUL (mg)
% PENYIMPANGAN
1.
0,312
0,122
0,190
2,5141
2.
0,314
0,126
0,188
3,5403
3.
0,329
0,125
0,204
4,6691
4.
0,326
0,130
0,196
0,5644
5.
0,318
0,125
0,193
0,9749
6.
0,294
0,119
0,175
10,2104
7.
0,311
0,130
0,181
7,1315
8.
0,334
0,126
0,208
6,7214
9.
0,336
0,130
0,206
5,6952
10.
0,314
0,127
0,187
4,0534
11.
0,336
0,122
0,214
9,7999
12.
0,328
0,128
0,200
2,6167
13.
0,322
0,123
0,199
2,1036
14.
0,309
0,127
0,182
6,6188
15.
0,323
0,125
0,198
1,5906
16.
0,335
0,128
0,207
6,2083
17.
0,313
0,128
0,185
5,0795
18.
0,325
0,126
0,199
2,1036
19.
0,304
0,124
0,180
7,6449
20.
0,333
0,128
0,205
5,1821
Bobot total
= 3,898g
Bobot rata-rata
= 3,898 g = 0,1949 g 20
% Kesalahan setelah dimasukkan kapsul =
Bobot sebelum dimasukkan kapsul – bobot setelah dimasukkan kapsul
x 100%
Bobot sebelum dimasukkan kapsul 200 mg – 194,9 mg x100%
= 2,55%
194,9 mg V. PEMBAHASAN
Pada praktikum ini dilakukan pembuatan kapsul ekstrak kencur dan penetapan kadar senyawa marker EPMS dalam kapsul yang bertujuan untuk membuat kapsul ekstrak kencur sesuai dengan persyaratan kapsul dan kadar senyawa marker EPMS dalam kapsul memenuhi standar sehingga dapat menghasilkan efek terapi saat penggunaanya. Kapul ialah sediaan padat yang terdiri dari obat dalam cangkang kapsul keras atau l unak yang dapat larut. Pembuatan sediaan kapsul dengan mempersiapkan bahan-bahan yang akan digunakan seperti ekstrak kering kencur, avicel dan cab-o-sil. Bahan-bahn ditimbang kemudian dicampur sampai homogen. Kemudian seluruh serbuk ditiimbang dengan timbangan miligram diperoleh bobot 3,898g, lalu dibagi menjadi 2 sama banyak dan tiap bagian dibagi menjadi 10 bagian secara visual. Dan diperoleh 20 bagian kemudian dimasukkan ke dalam cangkang kapsul. Kapsul yang telah berisi serbuk dilakukan pengujian keseragaman bobot, bertujuan untuk mengetahui bobot tiap kapsul dan rata-ratanya isis kapsul agar kadar yang didapat sama rata. Keseragman bobot dilakukan dengan menimbang satu per satu kapsul dan isinya, kemudian menimbang cangkang kapsul kosong yang telah dikeluarkan isinya. Dicatat dan dihitung % keseragman bobot yang didapat tiap-tiap kapsul. Hasil total isi kapsul yaitu sebanyak 3,898g, jika dibandingkan dengan bobot penimbangan sebelum dimasukkan kapsul yaitu sebesar 3,9575 g, dimana % kesalahan setelah dimasukkan ke dalam cangkang kapsul sebesar 2,55% sehingga isi berkurang sekitar 1 ka0psul / ± 200 mg bobot campuran bahan yang hilang. Hasil yang baik yaitu % kesalahan mendekati 0%, dimana semakin kecil hasil maka semakin kecil bobot yang hilang. Bobot campuran/ isi kapsul yang hilang dapat disebabkan oleh beberapa hal yaitu pada saat pencampuran bahan masih ada bahan yang tertinggal di dalam mortir dan stamper, pada saat mengkosongkan kapsul tidak sepenuhnya isi kapsul dikeluarkan/ serbuk menempel pada kapsul.
Hasil dari keseragman bobot jika dibandingkan dengan persyaratan bobot rata-rata isi kapsul menurut farmakope indonesia, diketahui bahwa terdapat 3 kapsul yang menyimpang dari kolom B yang jauh dari persyaratan. Hal ini dikarenakan kurang homogennya/ tidak ratanya bobot tiap kapsul, j ika banyak bobot yang hilang/ kurang maka saat pengujian penetapan kadar dapat berpengaruh dimana kadar yang diperoleh dapat lebih rendah dari kadar yang ditetapkan.
VI. KESIMPULAN
Dari hasil praktikum ini dapat disimpulkan bahwa :
% rata-rata EPMS ekstrak kencur pada serbuk
= 61,72%
Rata-rata bobot isi kapsul
= 0,1949 g/ kapsul
% kesalahan setelah dimasukkan kapsul
= 2,55% >0% karena
kemungkinan pada saat proses pengisian bahan ke cangkang kapsul banyak bahan yang terjatuh sehingga ada bobot yang hilang.
Persentase penyimpangan pada kapsul yang dibuat menunjukkann adanya 3 kapsul yang persen penyimpangannya melebihi batas kolom B. Hal ini mungkin dikarenakan akibat kurangnya tingkat ketelitian praktikum saat melakukan pembagian secara visual.
VII. LAMPIRAN
VIII.
3. Masukkan cab-o-sil ke dalam mortir dan gerus hingga halus, tambahkan avicel, gerus ad homogen dan tambahkan ekstrak kencur, gerus ad homogen
1. Timbang ekstrak kencur
2. Timbang bahan tambahan
untuk 20 kapsul
yaitu Cab-o-sil dan Avicel dengan perbandingan 1:3
5. Bagi campuran ke dalam 4 bagian secara visual. Dan siapkan 20 lembar perkamen
6. Bagi 1 bagian campuran ke dalam 5 lembar permaken hingga campuran habis
7. Masukkan campuran ke dalam masing-masing kapsul
4. Timbang campuran dan didapatkan berat apakah sesuai dengan berat teoritis
8. Hitung % kesalahan dan % penyimpangan dengan menimbang masing-masing kapsul (cangkang + isi) dan didapatkan bobotnya
9. Keluarkan isi dari cangkangnya
10. Masukkan kembali isi ke
dan timbang bobot cangkang
dalam cangkangnya dan taruh
kosong. Sehingga di dapatkan
kapsul di dalam wadah dan beri
bobot isi kapsul
etiket setelah didapat hasil %kesalahan dan penyimpangan
LAPORAN PRAKTIKUM V Penetapan Kadar Senyawa Marker pada Sediaan Kapsul
Disusun Untuk Memenuhi Tugas Praktikum Fitofarmaka
KELOMPOK: 1 KELAS: C
Novelia
(201410410311007)
Aprilia Kartika Putri (201410410311011) Anis Khoirun Sauma (201410410311013) Sukmawansyah
(201410410311016)
Imanda Gita R.
(201410410311120)
Nur Cholidah
(201410410311124)
Qardina Annisa H.
(201410410311127)
Fardhiyanti
(201410410311156)
Aida Rakhiba
(201410410311158)
Langlang Kurniawan (201410410311220) Abelia M Alhamid
(201410410311259)
DOSEN PEMBIMBING: Dra. Herra Studiawan, M.Si, Apt Siti Rofida, S,Si., M.Farm.,Apt
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG 2017
TUGAS 5 Penetapan Kadar Senyawa Marker pada Sediaan Kapsul I. TUJUAN
Mahasiswa mampu melakukan penetapan kadar senyawa marker EPMS dalam sediaan kapsul yang berisi ekstrak kering Kaempferia galanga L. II. TINJAUAN PUSTAKA
Kencur ( Kaempferia galanga L. ) adalah salah satu jenis empon-empon atau tanaman obat yang tergolong dalam suku temu-temuan dengan tata nama atau klasifikasi sebagai berikut : Kingdom
: Plantae
Divisi
: Spermatophyta
Sub Divisi
: Angiospermae
Famili
: Zingiberaceae
Genus
: Kaempferia
Spesies
: Kaempferia galanga L.
Ekstrak kering rimpang kencur adalah ekstrak yang dibuat dari rimpang kencur. Tumbuhan Kaempferia galanga L. mengandung minyak atsiri tidak kurang dari 37,9% dan etil ῥ-metoksisinamat tidak kurang dari 4,3%. Kandungan kimia ekstral yaitu minyak atsiri dengan komponen utama etil ῥmetoksisinamat dan etil sinamat . Standarisasi simplisia dibutuhkan karena kandungan kimia tanaman obat sangat bervariasi tergantung banyak faktor seperti telah dikemukakan sebelumnya. Standarisasi simplisia diperlukan untuk mendapatkan efek yang dapat diulang. Kandungan kimia yang berkhasiat atau kandungan kimia yang hanya sebagai petanda (marker), atau yang memiliki sidik jari (fingerprint) pada kromatogram. Untuk mendapatkan simplisia dengan mutu standar diperlukan pembudidayaan dalam kondisi standar. Jenis-jenis senyawa marker : 1. Zat aktif
: senyawa kimia dengan aktivitas klinik yang diketahui.
2. Marker aktif
: zat kimia yang mempunyai efek farmakologi, tapi belum
tentu mempunyai efikasi klinik 3. Marker analisis : zat kimia yang dipilih untuk determinasi kuantitatif tapi belum tentu mempunyai aktivitas biologi dan efikasi klinik 4. Marker negative
: senyawa aktif dengan zat aktif yang toxic.
Khusus untuk etil ῥ-metoksisinamat, kadar etil ῥ-metoksisinamat dalam kencur cukup tinggi (tergantung spesiesnya) bisa sampai 10%, karena itu bisa diisolasi dari bagian umbinya menggunakan pelarut petroleum eter/etanol. Struktur etil ῥ-metoksisinamat (C12H14O2) adalah :
Penetapan kadar dilakukan untuk memastikan bahwa kandungan zat berkhasiat yang terdapat dalam kapsul telah memenuhi persyaratan dan sesuai dengan yang tertera pada etiket. Metode penetapan kadar yang digunakan sesuai dengan zat aktif yang terkandung dalam sediaan kapsul. Caranya ditimbang 1020 kapsul, isinya digerus dan bahan aktif yang larut diekstraksi menggunakan pelarut yang sesuai dengan prosedur yang telah ditetapkan. Secara umum, rentang kadar bahan aktif yang diberikan berada diantara 90-110% dari pernyataan pada label.
Untuk penetapan kadar EPMS dilakukan dengan
KLT-Densitometri. Banyak sekali keuntungan penggunaan KLT dan salah satu keuntungannya adalah mampu memisahkan beberapa sampel secara bersamaan, yang lebih menguntungkan dibandingkan KCKT. Densitometri merupakan metode analisis instrumental yang didasarkan pada interaksi radiasi elektro magnetik dengan analit yang merupakan bercak pada KLT. Densitometri dimaksud untuk analisis kuantitatif analit dengan kadar kecil, yang sebelumnya dilakukan pemisahan dengan KLT. KLT merupakan kromatografi sederhana dengan bentuk kromatografi planar yang memisahkan campuran analit berdasarkan distribusi komponen tersebut diantara 2 fase, yaitu fase diam dan fase gerak. Prinsip kerja KLT adalah dengan menotolkan cuplikan atau sampel pada lempeng KLT, kemudian lempeng dimasukkan
kedalam wadah berisi fase gerak, sehingga komponen-komponen dalam sampel tersebut terpisah. Komponen yang mempunyai afinitas besar terhadap fase gerak atau afinitas yang lebih kecil terhadap fase diam akan bergerak lebih cepat dibanding komponen dengan sifat sebaliknya (Ihsanto, 2009). Pada prinsipnya pemisahan KLT diusahakan dilakukan dalam keadaan netral (Surya, 2011). KLT dapat digunakan untuk tujuan preparatif dan kuantitatif, meskipun KLT kuantitatif kurang teliti bila dibandingkan dengan sistem kromatografi lainnya. Sistem KLT telah banyak digunakan untuk analisis obat dan senyawa bahan alam. Analisis kualitatif pada KLT menggunakan nilai Rf . Dua senyawa dikatakan identik bila mempunyai nilai Rf yang sama dengan dan diukur pada kondisi KLT yang sama. Analisis kuantitatif pada KLT didukung dengan teknik densitometri. Untuk menguji validitas dari metode ini dilakukan pengujian antara lain uji akurasi dengan parameter % perolehan kembali (% recovery), uji presisi dengan parameter simpangan baku (SD) dan koefisien variasi (KV). III. ALAT DAN BAHAN
a. Alat
‒ TLC Scanner ‒ Lempeng KLT ‒ Chamber ‒ Pipet Mikro ‒ Analitical Balance ‒ Labu Ukur ‒ Cawan Timbang ‒ Gelas ukur ‒ Vial Tertutup ‒ Batang Pengaduk ‒ Kertas saring ‒ Aluminium Foil b. Bahan
‒ Kapsul ekstrak Kaempferia galanga L. ‒ Standart EPMS ‒ N-Heksan
‒ Etil Asetat ‒ Asam Formiat ‒ Etanol 96% IV. PROSEDUR KERJA
A. Pembuatan Eluen 1. N-heksan + etil asetat + asam formiat (90:10:1)
2. Masukkan ke chamber, homogenkan
B. Pembuatan Larutan Baku Induk 1. Timbang standar EPMS 12,5 mg
2. Tambahkan etanol 10 ml, diultrasonik 5 menit. Tambahkan etanol 96% ad 50 ml (LI1)
3. Dipipet 4,0 ml LI1, dimasukkan labu ukur 10 ml, tambahkan etanol 96% ad tanda (LI2)
C. Pembuatan Larutan Baku Kerja Dipipet: BK6 = 4,0 ml BI2, BK5 = 3,0 ml BI2, BK4 = 1,0 ml BI1, BK3 = 5,0 ml BK6, BK2 = 5,0 ml BK5, BK1 = 5,0 ml BK3
Masukkan labu ukur 10,0 ml. Tambahkan etanol 96% ad
D. Preparasi Sampel Sediaan Kapsul dan Recovery
3. Masukkan ke labu ukur 10 ml + etanol 96% ad tanda, ultrasonik 15 menit (Sampel 1, 2, 3)
1. Ambil 6 kapsul secara acak (3 Sampel, 3 Recovery) dengan persyaratan % penyimpangan tidak > 7,5%. Ditimbang isi sebanyak 60 mg pada timbangan kasar.
2. Ditimbang lagi pada timbangan gram balance
4. Masukkan ke labu ukur 10 ml + standar EPMS + etanol 96% ad tanda, ultrasonik 15 menit (Recovery 1, 2, 3) 7. Dilakukan analisis KLT densitometer untuk penentuan linieritas, presisi dan akurasinya.
6. Dilakukan analisis pada sinar UV 254 dan 365 untuk V. HASIL penentuan panjang A. Penimbangan baku induk = 0,05025 g dalam 10 ml 5. Saring pada vial
B. Penimbangan standar EPMS = 0,01248 g dalam 40 ml C. Penimbangan isi kapsul 60mg ±5% (0,0570-0,0630 g) Nomor Kapsul
Bobot
+
isi
Bobot Kosong
Bobot isi
kapsul S1
5 (193 mg)
20,1620 mg
20,1012 mg
0,0608 mg
S2
8 (208 mg)
20,1575 mg
20,0958 mg
0,0617 mg
S3
9 (206 mg)
20,1590 mg
20,0964 mg
0,0626 mg
R1
12 (200 mg)
20,1586 mg
20,0956 mg
0,0630 mg
R2
15 (198 mg)
20,1567 mg
20,0958 mg
0,0609 mg
R3
16 (207 mg)
20,1569 mg
20,0952 mg
0,0617 mg
Perhitungan konsentrasi D. Konsentrasi baku induk
Bi1 = 0,05026 =
50,26 10
1000 ml = 5026 Ppm
dipipet dari Bi1 sebanyak 4 ml ad 10 ml Bi2
2 =
1 1 = 2 2 4ml x 5028Ppm 10ml
2 = 2010,4 E. Konsentrasi Baku Kerja Bk1 _
V1 x N1 Bk3 = V2 x N2 5,0 ml x 401,6 Ppm = 10 ml x N2 N2 = 201,04 Ppm
Bk2 _
V1 x N1 Bk5 = V2 x N2 5,0 ml x 602,4 Ppm = 10 ml x N2 N2 = 301,56 Ppm
Bk3 _
V1 x N1 Bk6 = V2 x N2 5,0 ml x 803,2 Ppm = 10 ml x N2
N2 = 402,08 Ppm
Bk4 _
V1 x N1 Bk3 = V2 x N2 1,0 ml x 5028 Ppm = 10 ml x N2 N2 = 50,28 Ppm
Bk5 _
V1 x N1 Bk3 = V2 x N2 5,0 ml x 2010, 4 Ppm = 10 ml x N2 N2 = 603,12 Ppm
Bk6 _
V1 x N1 Bk3 = V2 x N2 4,0 ml x 2010,4 Ppm = 10 ml x N2 N2 = 80416 Ppm
F. Konsentrasi Standar EPMS = 0,01248 g = 12,48 mg
12,48 50
1000 = 249,6 249,6 Ppm =
249,6 1000
10 = 0,2496
G. Perhitungan eluen yang digunakan N-heksan : etil asetat ; asam formiat (90:10:1)
N-heksan
Etil asetat
75 = 67,5 ml 75 = 7,5
H. Penimbangan sampel untuk menentukan kadar EPMS dalam kapsul Penimbangan 60 mg ± 5% (57 mg – 63 mg)
Sampel 1 kapsul 5 = 0,0608 g = 60,8 mg
Sampel 2 kapsul 8 = 0,0617 g = 61,7 mg
Sampel 3 kapsul 9 = 0,0626 g = 62,8 mg
I. Penimbangan recovery untuk menentukan kadar EPMS dalam kapsul
Recovery 1 kapsul 12 = 0,0630 g = 63,0 mg
Recovery 2 kapsul 15 = 0,0608 g = 60,8 mg
Recovery 3 kapsul 16 = 0,0617 g = 61,7 mg
Persamaan regresi kadar Baku kerja (x) dan Luas area (y) Baku Kerja
Konsentrasi (Ppm)
Luas Area (Au)
Bk 1
201,04 Ppm
15626,3 Au
Bk 2
301,56 Ppm
18324,2 Au
Bk 3
402,08 Ppm
20602,2 Au
Bk 4
502,60 Ppm
21561,3 Au
Bk 5
603,12 Ppm
22026,6 Au
Bk 6
804,16 Ppm
23940,7 Au
Regresi : a.
= 14264,29
b.
= 12,9667
r.
= 0,9529
y
= b (x) + a = 12,9667 (x) + 14264,29
x
=
−, ,
Perhitungan konsentrasi EPMS dalam sampel dan recovery (1 kapiler = 5µl)
S1 _ x =
S2 _ x =
S3 _ x =
R1 _ x =
R2 _ x =
R3 _ x =
, − ,
= 327,9331 Ppm
, , − , ,
= 440,7297 Ppm
, − , ,
= 458,1436 Ppm
, − , ,
= 548,3207 Ppm
, − , ,
= 775, 2096 Ppm
, − , ,
= 805, 0398 Ppm
Perhitungan kadar (mg) EPMS dalam larutan (10 ml untuk 60 mg ± 5%)
S1 _ 327,9331 Ppm =
S2 _ 440,7297 Ppm =
S3 _ 458,3207 Ppm =
R1 _ 548,3207 Ppm =
R2 _ 775,2096 Ppm =
R3 _ 805,0398 Ppm =
Larutan
, , , , , ,
Luas area
x10 ml = 3,2793 mg x10 ml = 4,4073 mg x10 ml = 4,5814 mg x10 ml = 5,4832 mg x10 ml = 7,7521 mg x10 ml = 8,0504 mg
Konsentrasi dalam
Kadar dalam 10
5µl
ml
S1
18516,5 Au
327,9331 Ppm
3,2793 mg
S2
19979,1 Au
440,7297 Ppm
4,4073 mg
S3
20204,9 Au
458,1436 Ppm
4,5814 mg
R1
21374,2 Au
548,3207 Ppm
5,4832 mg
R2
24316,2 Au
775, 2096 Ppm
7,7521 mg
R3
24703,0 Au
805, 0398 Ppm
8,0504 mg
Perhitungan kadar EPMS dalam kapsul (diinginkan 15 mg setiap kapsulnya)
S1 _
S2 _
S3 _
, , , , , ,
= = =
» x= » x= » x=
, ,
, ,
, +, +,
SD
= 2,6350
KV
= =
,
= 13,45 mg
x 100%
, ,
x 100% = 19,59 %
= 14,86 mg
,
Rata-rata kadar EPMS setiap kapsul
= 10,41 mg
= 15,08 mg
% kesalahan sampel
− ,
x 100 % = 10,33 %
Perhitungan recovery
R1 _
R2 _
R3 _
, , , , , ,
= = =
» x= » x= » x=
,
= 17,40 mg
, , ,
= 25,20 mg
, ,
= 27,01 mg
Perhitungan % recovery Ct = kadar EPMS dalam Recovery Cp = kandungan yang diinginkan (15 mg) Cst = kadar standar EPMS (0,2496 mg)
R1 _
R2 _
R3 _
x 100 % =
+
x 100 % =
+
x 100 % =
+
, + , , + , , + ,
Rata-rata persen recovery
, % + , %+, %
SD
= 33,4882 = 33,49 %
KV
= =
= 152,16 %
x 100%
, % , %
x 100% = 22,01 %
x 100 % s= 114,10 % x 100 % s= 165,25 % x 100 % s= 177,12 %
VI. PEMBAHASAN
Pada praktikum ini bertujuan untuk melakukan penentuan kadar senyawa marker EPMS dalam sediaan kapsul Kaempferia galanga L. Pada tanaman kencur diketahui bahwa senyawa marker yang dikandung adalah EPMS (etil ( etil ῥmetoksisinamat ), ), dan senyawa marker ini yang digunakan dalam praktikum kali ini. Senyawa EPMS ini termasuk t ermasuk golongan ester yang mengandung cincin benzen dan gugus metoksi yang bersifat non-polar. Selain Sela in itu senyawa EPMS juga mengandung gugus karbonil yang mengikat gugus etil dan ikatan ini bersifat polar. Senyawa marker ini dapat digunakan untuk identifikasi dengan autentik sumber bahan alam, mencapai kualitas yang konsisten mengkuantibasi senyawa farmakologik aktif pada produk akhir serta memastikan efikasi produk. Penentuan kadar senyawa marker dalam praktikum kali ini menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT). KLT yang dimaksud untuk uji kuantitatif salah satunya dengan menggunakan densitometer. Densitometri merupakan metode analisis instrumental yang didasarkan pada interaksi radiasi elektromagnetik dengan analit yang merupakan bercak pada KLT. Pada praktikum kali ini dilakukan dilakukan 2 kali scanning scanning yaitu λ 200-400 200-400 nm dan λ 310 nm Untuk menguji validitas dari metode densitometri dilakukan pengujian antara lain uji akurasi dengan parameter persen perolehan kembali (% recovery), uji presisi dengan parameter simpangan baku (SD) dan koefisien koefisien variasi (KV). Pada proses praktikum, dilakukan pembuatan larutan baku induk dan baku kerja untuk memperoleh kurva baku. Setelah pembuatan baku kerja selesai, dilakukan preparasi sampel dan recovery yang ditambahkan dengan standar EPMS. Kemudian dilkaukan penotolan dengan plat KLT yang eluennya menggunakan eluen n-heksana : etil asetat : asam formiat yang akan menampakkan bercak untuk menetapkan kadar EPMS pada kapsul ekstrak kencur dengan densitometri. Setalah dilakukan uji scanning didapatkan data kurva baku. Persamaan kurva baku yang diperoleh adalah r=0,9539, dengan persamaan y=2,9667 x + 14264,29. 14264,29. Nilai akurasi suatu senyawa dalam matriks dengan dengan konsentrasi >0,1% diterima jika berada pada pada rentang 95-105% 95-105% dari kadar yang sebenarnya (Hamita, 2009).
Menurut BPOM pada rentang 98-102% dan dari Farmakope yaitu 95-105%. Dan hasil persen recovery kelompok 1 yaitu 152,16%. Jadi persen recovery yang didapatkan tidak memenuhi persyaratan yang ada. Hal ini mungkin disebabkan karena kesalahan praktikan pada saat praktikum berlangsung. Sedangkan, presisi adalah ukuran yang menunjukkan didapat kedekatan antara hasil uji individual, diukur melalui penyebaran hasil individual dan rata-rata jika prosedur diterapkan secara berulang pada sampel-sampel yang diambil dari campuran yang homogen. Presisi diukur sebagai simpangan baku (SD) / simpangan baku relative ( KV). Suatu data dikatakan presisi jika nilai koefisien variasi (KV) <2% (Hamita, 2004) dan menurut (BPOM, 2000) yaitu <2% dan menurut Farmakope Herbal <5%. Dan hasil KV yang didapat kelompok 1 yaitu KV sampel 19,59% dan KV recovery 22,01% yang berarti tidak memenuhi persyaratan. Menurut (BPOM, 2003) hasilkorelasi (r) yaitu 0,9950, tapi r yang diperoleh kelompok 1 yaitu 0,9529 sehingga tidak memenuhi pers yaratan. Nilai SD yang memenuhi persyaratan Farmakope Herbal yaitu 2,6350 karena <5% dan SD recovery 33,49% sehingga tidak memeuhi persyaratan. Dan persentase kesalahan pada sampel yaitu 10,33% dan rata-rata kadar EPMS perkapsul 13,45mg, mendekati kadar EPMS yang dikehendaki yaitu 15mg/kapsul. Kesalahan dalam praktikum yang terjadi karena teknik praktikan dalam melakukan praktikum secara kuantitatif, baik dalam penimbangan maupun pengenceran, dan penotolan dari pipa kapiler, ataupun pengukuran larutan sehingga didapat hasil praktikum yang tidak memenuhi persyaratan.
VII.KESIMPULAN VII. KESIMPULAN
‒ Persamaan regresi y=2,9667 x + 14264,29. ‒ KV sampel 19,59% dan KV recovery 22,01% ‒ Persentase kesalahan 10,33% ‒ Rata-rata kadar EPMS perkapsul 13,45mg ‒ LAMPIRAN ‒ A. Pembuatan Eluen ‒ 1. N-heksan + etil asetat + ‒asam formiat (90:10:1)
2. Masukkan ke chamber, homogenkan
‒ B. Pembuatan Larutan Baku Induk ‒ 1. Timbang standar 2. Tambahkan etanol 10 ml, diultrasonik 5 3. Dipipet 4,0 ml LI1, dimasukkan ‒ EPMS 12,5 mg menit. Tambahkan etanol 96% ad 50 ml labu ukur 10 ml, tambahkan etano ‒ C. Pembuatan Larutan Baku Kerja LI1 96% ad tanda LI2 ‒ Dipipet: Masukkan labu ukur 10,0 ml. ‒ BK6 = 4,0 ml BI2, BK5 = 3,0 ml BI2, Tambahkan etanol 96% ad tanda BK4 = 1,0 ml BI1, BK3 = 5,0 ml BK6, BK2 = 5 0 ml BK5 BK1 = 5 0 ml BK3
‒ D. Preparasi Sampel Sediaan Kapsul dan Recovery ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ 1. Ambil 6 kapsul secara acak (3 ‒ Sampel, 3 Recovery) dengan ‒ persyaratan % penyimpangan tidak ‒ > 7,5%. Ditimbang isi sebanyak 60 ‒ mg pada timbangan kasar. ‒
3. Masukkan ke labu ukur 10 ml + etanol 96% ad tanda, ultrasonik 15 menit (Sampel 1, 2, 3)
4. Masukkan ke labu ukur 10 ml + standar EPMS + etanol 96% ad tanda, ultrasonik 15 menit (Recovery 1, 2, 3)
2. Ditimbang lagi pada timbangan gram balance
6. Dilakukan analisis pada sinar UV 254 dan 365 untuk penentuan panjang gelombang maksimum
5. Disaring, filtrat di tampung ke vial. Kemudian ditotolkan pada plat KLT sebanyak 5mikroliter
7. Dilakukan analisis KLT densitometer untuk penentuan linieritas, presisi dan akurasinya.
