PRÁCTICA Nº 5 DETERMINACION DE PROTEINAS EN UNA MUESTRA DE CARNE POR EL METODO DE BIURET
ESTUDIANTES JOSE FERNANDO BERNAL CASTAÑEDA
Cód. 117003548
CRISTIAN CAMILO BUITRAGO MONTENEGRO Cód. 117003506
PROFESOR MIGUEL ÁNGEL RAMIREZ
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS Y RECURSOS NATURALES INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL VILLAVICENCIO-META 2017
OBJETIVOS
Determinar el contenido de proteínas en una muestra de carne por el método de Biuret. DATOS
4.1 Preparación y digestión de la muestra. Tabla Nº 1 1.0326 g
Muestra de Carne (Salchichas rica)
4.2 Preparación de la curva de calibración. Tabla Nº 2 Absorbancia Curva De Calibración Muestra
Concentración (mg/mL)
Abs1
Abs2
Abs3
1
0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
0.00 0.052 0.091 0.132 0.181 0.229
0.00 0.053 0.097 0.137 0.186 0.235
0.00 0.052 0.097 0.139 0.187 0.236
2 3 4 5 6
4.3 Determinación de proteínas totales en la muestra. Tabla Nº 3 Concentración
1 2 3
Absorbancia Muestra De Carne (Salchicha rica) Abs1 Abs2
0.028 0.047 0.064
0.031 0.049 0.066
Abs3
0.031 0.050 0.068
CALCULOS
4.2 Preparación de la curva de calibración.
Solución de BSA 5.00 mg/mL
1×1 =2×2 CONCENTRACION Tubo N°1 Blanco:
Vsp: 0.00 mL Tubo N°2:
Vsp: 0.20 mL
= 0.20 mL1.x005.00 mg/mL =1.00 mg/mL Tubo N°3:
Vsp: 0.40 mL
= 0.40 mL1.x005.00 mg/mL =2.00 mg/mL Tubo N°4:
Vsp: 0.60 mL
= 0.60 mL1.x005.00 mg/mL =3.00 mg/mL Tubo N°5:
Vsp: 0.80 mL
= 0.80 mL1.x005.00 mg/mL =4.00 mg/mL Tubo N°6:
Vsp: 1.00 mL
= 1.00 mL1.x005.00mg/mL =5.00 mg/mL
Promedio de absorbancias:
TUBO N°2
̅ = 1+2+3 3 ̅ = 0.052+0.0353+0.052 =0.052 TUBO N°3
x = 0.091+0.0397+0.097 =0.095 TUBO N°4
x = 0.132+0.1337+0.139 =0.136 TUBO N°5
x= 0.181+0.1386+0.187 =0.185 TUBO N°6
x= 0.229+0.2335+0.236 =0.233
y = 0.0459x + 0.0022 R² = 0.999
CURVA DE CALIBRACION 0.25
0.2 A I C 0.15 N A B R O S 0.1 B A
0.05
0 0
1
2
3 CONCENTRACION
Con la ecuación dada se calcula la absorbancia
=0.0459+0.0022 Donde: Y: Absorbancia X: Concentración 4.3 Determinación de proteínas totales en la muestra.
Volumen después del centrifugado: 17.0 mL Muestra N°1 Volumen de 0.20 mL Volumen de agua destilada: 0.80 Promedio de Absorbancia
̅ = 0.028+0.0331+0.031 =0.030
4
5
6
Si despejamos de la ecuación a X podremos conocer el valor de la concentración
= 0.0.04590022 ′= .−. . =0.606
mg/mL
Concentración absorbancia N°1
×= ×′ 0. 6 06 = 0.20×1.00 =3.03 / ×=× 3. 0 3 x 50. 0 mL = 10.0 =15.15 mg/mL 15.15 ×17.0 =257.55 í 257.55 × 10001.00 =0.258 í Muestra N°2
Volumen de 0.40 mL Volumen de agua destilada: 0.60 mL Promedio de Absorbancia
̅ = 0.047+0.0349+0.050 =0.049 ′= .−. . =1.02 mg/mL
Concentración absorbancia
×= ×′ 1. 0 2 = 0.40×1.00 =2.55 / ×=× 2. 5 5 x 50. 0 mL = 10.0 =12.75 mg/mL 12.75 ×17.0 =216.75 í 216.75 × 10001.00 =0.217 í Muestra N°3
Volumen de 0.60 mL Volumen de agua destilada: 0.40 mL Promedio de Absorbancia
̅ = 0.064+0.0366+0.068 =0.066 ′= .−. . =1.39 ×= ×′ 1. 3 9 = 0.40×1.00 =3.48 / ×=× 3. 4 8 x 50. 0 mL = 10.0 =17.4 mg/mL mg/mL
Concentración absorbancia
17.4 ×17.0 =295.8 í 295.8 × 10001.00 =0.296 í
Promedio de proteínas totales:
̅ = 0.258 +0.2317+0.296 =. Desviación estándar:
= √ (0.258 . ) +(0.217.2 ) +(0.296 .) =. Coeficiente de varianza:
% CV = x 100 =
.,
x 100 = 15,6%
Porcentaje peso/peso: %p/p =
0.257 1.0326 g
x 100 =24.9%
Error absoluto:
: ̅ : 0. 257 0.1033 : 0.1537g
Error relativo:
aX
= x 100
εr
εr= .−. .
x 100 = 1.5%
RESULTADOS
3.2 DETERMINACION DE PROTEINAS EN LA MUESTRA.
Tabla Nº 4 Promedio de proteínas Desviación Estándar Coeficiente de Variación Error Absoluto Error Relativo
0.0.25704g 1.5%
15,6% 0.1537g
DISCUSION DE RESULTADOS
Fig. 1. Tabla nutricional de salchichas enlatadas Rica
En la práctica se determinó la cantidad de proteínas contenidas en una muestra de carne (Salchichas rica), la cantidad de muestra que se tomo fue de 1.0326 g y la prueba para la cuantificación o determinación de dichas proteínas fue con el método de Biuret, el cual se caracteriza por una coloración azul celeste cuando los iones cúpricos son acomplejados por los enlaces peptídicos a pH alcalino, la intensidad de color es directamente proporcional a la cantidad de proteínas, es decir que entre más intenso sea el azul más proteínas contiene la muestra. Teóricamente las proteínas de la salchicha rica se encuentran en un 10% del peso al que se va analizar, en este caso el peso inicial es de 1,033 g el cual tendría 0,1033 g de proteína (Teóricamente). En las Tablas Nº 4 se anexan todos los datos realizados en los cálculos donde se encontró una cantidad de proteínas de 0,257 g este valor se dio Promediando la cantidad de proteínas en cada absorbancia, en cuanto a la desviación estándar fue de es decir que los valores dados son muy cercanos o similares, en cuanto al coeficiente de variación fue de 15,6% es decir cuánto se aleja cada dato del promedio siendo este un porcentaje grande.
0.04
CONCLUSIONES
El método de Biuret fue efectivo para determinar el contenido de proteínas en una muestra de Salchichas rica. Hubo la necesidad de modificar el valor del patrón de albumina sérica para los cálculos, a consecuencia de que no correspondía a 10 mg/mL dicha en el laboratorio. Se trabajó con una concentración de 5 mg/mL, además que la práctica no se podía repetir por el tiempo. En cuanto al error relativo y absoluto dieron valores pequeños en comparación a los reales por motivo de buen manejo y practica de los métodos. Las salchichas enlatas rica tiene una cantidad significativa de proteína, alta podría decirse ,con 5g de proteína por 50g que es el peso total las salchichas.
BIBLIOGRAFIA
Contenido de Proteinas en los alimentos http://www.redvegetarianos.com/magazine/read/porcentaje-de-protenas-en-losalimentos-_11.html
Manual de experimentos de laboratorio para bioquímica, Silvia Quesada Mora, Pag. 31 Determinación de Proteínas por el método de Biuret.
LABORATORIO DE ALIMENTOS I. Fundamentos y técnicas de análisis de alimentos. México, Departamento de alimentos y biotecnología, Facultad de química, UNAM, 2007-2008.
Química de los alimentos. Hans-Dieter Belitz, Werner Grosch, Peter Schieberle – 2011.
Química de Alimentos: Manual de laboratorio - Página 111. Nuria Bolaños V., Giselle Lutz C., Carlos H. Herrera R. – 2003.
