Universidad San Francisco de Quito Laboratorio de Biología Informe No.3
Protocolo casero para extracción de ADN de cebolla Nombres: Alex Gaona acas Profesor: Nelson iranda o!ano Código: ""#$$##% Sección: Grupo #& iercoles #'("")#*("" Fecha: $"+"$+%"#* Nota: 1. Introducción
,l ADN -.cido Desoxirribonucleico/ es un 0cido nucleico& o un 1aterial gen2tico de todos los organis1os celulares ! algunos virus3 ,s el tipo de 1ol2cula 10s co1ple4a 5ue se conoce3 Su secuencia de nucleótidos contiene la in6or1ación necesaria para poder controlar el 1etabolis1o un ser vivo3 -Audersi7& %""8/3 ,l ADN llev llevaa la in6o in6or1 r1ac ació iónn nece necesa saria ria para para diri dirigi girr la sínt síntes esis is de prot proteí eína nass ! la replicación3 ,n casi todos los organis1os celulares el ADN est0 organi9ado en 6or1a de cro1oso1as& situados en el n:cleo de la c2lula3 Se trata de una 1ol2cula larga& de doble (2lice& con dos (ebras 5ue se encuentran unidas por puentes de (idrógeno3 ,st0 con6or1ada por nucleótidos& 5ue a su ve9 se co1ponen de un grupo 6os6ato& una a9:car -desoxirribosa/& ! una base nitrogenada& 5ue puede ser; adenina -A/& guanina -G/& ti1ina ti 1ina -iera& %"#'/ ,n la indust industria ria 6ar1ac 6ar1ac2ut 2utica ica per1i per1ite te el diagnó diagnósti stico co de en6er1 en6er1eda edades des33 ,n aspec aspectos tos ecológicos per1ite desarrollar ! aplicar 12todos co1o la biodegradación ! biorre1ediación para li1piar conta1inaciones& ! esto se potencia con la 1anipulación gen2tica pues se generan 1icrobios especiali9ados3 especiali9ados3 ?tro aspecto :til del ADN es la identi6icación de personas especí6icas& por ello se aplica a la actividad 6orense 6orense ! pruebas de paternidad3 -=a1pbell -=a1pbell ! >eece& %"#"/ %"#"/
Si se reali9a un proceso de (o1ogeni9ación sutil ! lento& se lograr0 5ue el ADN no resulte da@ado ! se pueda visuali9ar 60cil1ente3 ,l ADN 4uega un papel 1u! i1portante en varios ca1pos del desarrollo (u1ano& gracias a la in6or1ación 5ue este lleva en su interior3 Apo!ando a ca1pos co1o la ngeniría Gen2tica& la biología& la bio5uí1ica& la bioin6or10tica& 1edicina 6orense entre otras3 ->uí9& 3 %"##/3 Objetivos
,ntender a la extracción del 1aterial gen2tico ! su aisla1iento co1o la base para reali9ar estudios gen2ticos 1oleculares Aprender un 12todo b0sico para la extracción ! visuali9ación de ADN de 1anera casera
. !ateria"es
# cebolla 6resca # papa!a # 1ortero # papel 6iltro de ca62 # vaso de precipitación # pin9a # probeta Detergente+solución de sal; %" 1l detergente -para lavar ropa/ %" g Na=l #8" 1l agua destilada %" 1L de 4ugo de papa!a cernido con el papel 6iltro Solución salina al C -Na=l/
33 !#todos o Procedimiento
Para dar inicio de la pr0ctica& se revisó 5ue los 1ateriales esten en buen estado para 5ue no in6ieran en los resultados3 ,ntonces se inició con la pr0ctica3 ,n pri1er lugar con la a!uda del 1ortero ! el pistilo se procedió a 1ac(acar la cebolla3 Una ve9 1ac(acada la cebolla& se a@adio la solución del detergente3 Despu2s& en el vaso de presipitación se 6itró la solución con la a!uda de un papel 6iltro para ca623 Se coloco la solución 6iltrada en un tuvo de ensa!o ! se procedió a agitar para 5ue sea una 1e9cla (o1og2nea3 Posterior1ente se colocó en el tuvo de ensa!o& 4ugo papa!a ! se 1e9cló suave1ente3 0s tarde se colocó el etanol al "C a #")#%=E ! se de4o reposar la 1e9cla alrededor de 1inutos& con el 6in de 5ue el ADN se separe del resto de co1puestos3 ,l ADN 6lotó entre la capa de etanol ! la 1e9cla anterior3
Seguida1ente& se recuperó el ADN con a!uda de una pin9a& ! se lo colocó en el portaob4etos3 Final1ente se lo cubrió con el cubreob4etos ! se observo el ADN con un au1ento de '"x $. %esu"tados Imagen 1. &'N e(tra)do de cebo""a
AD
Fuente: Laboratorio de Biología Universidad San Francisco de
Quito
&n*"isis de resu"tados: Al
1e9clar ligera1ente la solucion de etanol con la 1e9cla de 4ugo de papa!a en el cual se encuentra la 1uestra de cebolla & se puede notar 5ue el ADN de la 1is1a e1pie9a a aislarse del resto de co1puestos dando lugar a una sustancia consistecia viscosa ! color a1arillo)anaran4ado 5ue tiene lugar en el 6ondo del tuvo de ensa!o en el 5ue se encuentra contenido3 Imagen . !uestra de &'N observada mediante e" microsco+io
Fuente :Laboratorio de Biología Universidad San Francisco de Quito
Debido a 5ue no se contaba con la ca1ara especiali9ada para poder reali9ar una buena 6otogra6ia no se puede explicar de 1anera gra6ica lo 5ue se observo en el 1icroscopio& pero (a la vista de los observadores 6ue 1u! clara la observacion en la cual se visuali9o una pe5ue@a 1uestra de ADN extraido con un au1ento de '"x& por ende se tiene co1o resultado la visuali9acion del 1is1o a1pli6icada '"" veces3 ,n la i1agen se puede apreciar la 6or1a retorcidad 5ue es caracteristico de esta 1olecula& asi1is1o& se observa las (ebras 5ue con6ir1an el 1is1o3 De igual 1anera& se puede apreciar una aglo1eracion en la parte superior derec(a de la i1agen debido a 5ue el ADN 5ue se observa se encuentra desnaturali9ado o roto& debido a la 1anipulacion 6or9osa 5ue tuvo al 1o1ento de ser extraido para ser visuali9ado3 &n*"isis de resu"tados:
,. 'iscusión
,n base a los resultados 5ue se pudieron observar en la presente pr0ctiva& se obervo 5ue uno de los principales incconvinientes 5ue este esta presento 6ue sacar un poco de la 1uestra& del 6ondo del tuvo de ensa!o& puesto 5ue al (acerlo con las pin9as este se ro1pia con 1uc(a 6acilidad& es por ello 5ue se pude decir 5ue (ubo una visuali9acion parcial de ADN puesto 5ue este no se encontraba en su 6or1a nartural& sin e1bargo& seg:n un in6or1e acerca de la extraccion de ADN& se dice 5ue incluso la 1uestra 5ue se (a obtenido no era pura debido a la presencia de pe5ue@os 6rag1entos de A>N 5ue se (a entre1e9clado& no obstante& es posible la extraccion pura de ADN 1ediante 1etodos cienti6icos de 1a!or co1ple4idad3-Salas& s+6/ Uno de los pri1eros pasos de la pr0ctica & 6ue poner poner el detergente en soluión de sal sobre la cebolla& esto debido 5ue este ele1ento a!udar0 a 5ue las paredes celulares ! las 1e1branas& plas10ticas ! nucleares de la cebolla co1iencen a ro1perse3 -Pi1entel& 3 %"#'/3 ,ntonces al 1o1ento en 5ue se ro1pieron las paredes celulares de la cebolla& se espero unos 1inutos para colocar el 4ugo de papa!a 5ue le a!udaría a esta 1e9cla a eli1inar cierto tipos de proteínas 5ue pueden conta1inar la 6or1ación del ADN3 ,sto debido a 5ue la papa!a contiene una en9i1a deno1inada papa!ina& 5ue reali9a esta 6unción especí6ica3 -Pi1entel& 3 %"#'/3 Por :lti1o& con las paredes celulares rotas ! li1pias de i1pure9as& se colocó en la 1e9cla la solucíón del cloruro de sodio& el cual contribu!ó a separar el ADN& esto co1o consecuencia de 5ue el ADN va a tener 10s a6inidad con esta solución co1parada con el agua& por ende va a precipitarse en una inter6ase 6or1ada por el alco(ol ! el agua3 -Pi1entel& 3 %"#'/3 -. Conc"usiones
,n conclusion& para lograr una extraccion e6icar de la 1olecula de ADN& es necesario ro1per la 1e1brana celular ! nuclear de la celula& ade1as en el caso de las celulas vegetales& debido a 5ue estas poseen pared celular & esta se debe ro1per ta1bien para poder liberar al ADN& dic(o proceso se llevo a cabo con la solucion de detergente ! sal3 Por otro lado & se concluto 5ue el 4udo de papa!a utili9ado en la practica tuvo la 6inalidad de eli1inar las proteinas 5ue puedan conta1inar o da@ar la 1uestra de ADN ! por ulti1o ue la 1olecula en presencia del alco(ol se desenrrolla ! precipita& por ello se utili9o etanol para separa la 1uestra3
Al ter1inar con la pr0tica se cponclu!e 5ue se (a cu1plido con cada uno de los ob4etivos previa1ente planteados3 Se conocieron los principios b0sicos 5ue son 1u! necesaios a la (ora de extraer el ADN de una 1anera caser3
Burriel& 3 -s+6/3 Estructura y propiedades de los ácidos nucleicos. ,xtraído el #' de 1ar9o de %"# de (ttp;++HHH3uv3es+tunon+pd6Idoc+AcidosNucleicosIveronica3pd63 =a1pbell& N3 ! >eece& 3 -%"#"/3 Biología3 adrid3 ,ditorial 2dica Pana1ericana3
Guadalupe& 3 >iera P3 -%"#'/& Manual del Laboratorio de Biología para Ingenierías 3 Universidad San Francisco de Quito3
Quito;
>ui9& 3 -%"##/3 Aplicaciones del ADN en di6erentes ca1pos3 >ecuperado el $ de 1ar9o del %"# de; (ttp;++procesosdeladn3blogspot3co1+%"##+"'+aplicaciones)del)adn)en di6erentes3(t1l
