IMUNUSEROLOGI
PEMERIKSAAN CRP (C-REAKTIF PROTEIN) LATEKS
OLEH : KELOMPOK 2 1. 2. 3. 4. 5.
Ni Luh Putu Yoga Arsani Made Rina Rastuti Ni Luh Gede Mulan Tirtayanti I Dewa Ayu Sintya Candra Yuni I Nyoman Krisna Wicaksana
(P07134013014) (P07134013016) (P07134013018) (P07134013020) (P07134013022)
KEMENTERIAN KESEHATAN RI POLITEKNIK KESEHATAN DENPASAR JURUSAN ANALIS KESEHATAN 2015
PEMERIKSAAN CRP LATEKS
I.
TUJUAN 1.1.Tujuan Instruksional Umum 1. Mahasiswa mampu memahami prinsip dari pemeriksaan CRP lateks 2. Mahasiswa mengetahui tenik/cara penetapan C-Reactive Protein (CRP) dalam sampel serum dengan metode kualitatif dan semi kuantitatif 1.2.Tujuan Instruksional Khusus
II.
1.
Mampu melakukan pemeriksaan/penetapan C-Reactive Protein dalam sampel serum
2.
dengan metode kualitatif dan semi kuantitatif Mampu mengetahui nilai normal dari pemeriksaan CRP lateks METODE Metode yang digunakan untuk penetapan C-Reactive Protein ( CRP ) adalah metode rapid slide agglutination.
III.
PRINSIP Pengujian ini dilakukan dengan menguji suspensi dari partikel lateks yang telah dilapisi dengan antibody anti-human CRP yang berlawanan dengan serum yang belum diketahui kandungannya. Adanya aglutinasi yang terlihat mengindikasikan kenaikan kadar CRP ke level klinis yang signifikan.
IV.
DASAR TEORI C-Reaktive Protein (CRP) adalah protein yang ditemukan dalam darah yang meningkat sebagai respon terhadap peradangan. Peran fisiologinya adalah untuk mengikat fosfokolin yang di ekspresikan pada permukaan sel-sel mati atau sekarat (dan beberapa jenis bakteri) untuk mengaktifkan sistem pelengkap melalui kompleks C1q. CRP disintesis oleh hati dalam menanggapi faktor yang dilepaskan oleh makrofag dan sel-sel lemak (adipocytes). Pemeriksaan CRP juga telah dikembangkan menjadi highsensitivity CRP sehingga dapat digunakan untuk memprediksi terjadinya penyakit jantung di masa depan. Pada pasien penderita penyakit autoimunitas, CRP juga dapat dihasilkan tubuh dalam jumlah besar, contohnya pada penderita rheumatoid arthritis, lupus, atau vasculitis. Test C-Reaktive Protein (CRP) pertama kali ditemukan sebagai bahan dalam serum pasien dengan peradangan akut yang bereaksi dengan polisakarida C-(kapsuler) dari pneumococcus. Ditemukan oleh Tillet dan Francis Pada tahun 1930. Pada awalnya diperkirakan bahwa CRP adalah sekresi pathogen seperti peningkatan CRP pada orang
dengan berbagai penyakit termasuk kanker. Namun penemuan sintesis hati menunjukan bahwa CRP adalah protein asli. Gen CRP terletak pada kromosom pertama (1q21-Q23). CRP adalah protein 224-residu dengan massa molar dari monomer 25.106 Da. Protein ini merupakan disc pentametric annular dalam bentuk dan anggota dari kecil family pentraxins. CRP diklasifikasikan sebagai reaktan fase akut, yang berarti bahwa tingkat protein akan naik sebagai respon terhadap peradangan. Reaktan umum lainnya adalah fase akut termasuk tingkat sedimentasi eristosit (ESR) dan jumlah trombosit darah. C-Reaktif Protein atau CRP merupakan pertanda adanya inflamasi sistemik yang sangat sensitive. Peningkatan kadar CRP sangat berhubungan kuat dengan adanya penyakit jantung koroner ,MCI, stroke dan kematian mendadak karena jantung Pemeriksaan C-Reactive Protein atau CRP kualitatif yaitu pemeriksaan terhadap keberadaan suatu reaktan fase akut, yakni CRP di dalam serum. Konsentrasi serum CRP akan meningkat setelah proses inisiasi inflamatori. CPR memiliki peran sebagai responfase akut yang berkembang dalam berbagai kondisi inflamasi akut dan kronis seperti bakteri, infeksi virus, atau jamur, penyakit inflamasi rematik dan lainnya. Keganasan, dan cedera jaringan atau nekrotis. Kondisi ini menyebabkan pelepasan sitokin interleukin-6 dan lainnya yang memicu sintesis CRP dan fibrinogen oleh hati. Selama respon fase akut, tingkat CRP meningkat pesat dalam waktu 2 jam dari tahap akut dan mencapai puncaknya pada 48 jam. Dengan resolusi dari respon fase akut, CRP menurun dengan relatif pendek selama 18 jam. Mengukur tingkat CRP merupakan jendela dalam melihat untuk penyakit menular dan inflamasi. Secara tepat, peningkatan ditandai di CRP terjadi dengan nekrosis peradangan, infeksi, trauma, dan jaringan, keganasan dan gangguan autoimun. Sejumlah besar kondisi berbeda yang dapat meningkatkan produksi CRP, peningkatan tingkat CRP juga tidak dapat mendiagnosa penyakit tertentu. Peningkatan tingkat CRP dapat memberikan dukungan untuk kehadiran penyakit inflamasi seperti rheumatoid arthritis, polimyalgia rheumatica atau raksasa-sel arteritis. Peran fisiologis CRP adalah untuk mengikat fosfokolin yang diekspresikan pada permukaan sel-sel mati atau sekarat (dan beberapa jenis bakteri) untuk mengaktifkan system pelengkap. CRP mengikat fosfokolin pada mikroba dan sel-sel rusak dan meningkatkan fagositosis oleh makrofag. Dengan demikian, CRP berpatisipasi dalam pembersihan sel nekrotik dan apoptosis. CRP merupakan anggota dari kelas fase akut reaktan, sebagai tingkat yang meningkat secara dramatis selama proses inflamasi yang terjadi dalam tubuh. Kenaikan
ini disebabkan oleh kenaikan konsentrasi plasma IL-6, yang diproduksi terutama oleh makrofag serta adipocytes. CRP mengikat fosfokolin pada mikroba yang berguna untuk membantu dalam melengkapi mengikat sel-sel asing dan rusak dan meningkatkan fagositosis oleh makrofag (opsonin fagositosis dimediasi), yang mengekspresikan reseptor untuk PRK. Hal ini juga diyakini memainkan satu peran penting dalam kekebalan bawaan, sebagai sstem pertahanan awal terhadap infeksi. CRP naik sampai 50.000 kali lipat dalam peradangan akut, seperti infeksi. Keadaan ini naik diatas batas normal dalam waktu 6 jam, dan puncaknya pada 48 jam. Sel yang setengah hidup adalah konstan, dank arena itu tingkat terutama ditentukan oleh tingkat produksi (tingkat keparahan penyebab pancetus). Prosedur Tes CRP dapat dilakukan secara manual menggunakan metode aglutinasi atau metode lain yang lebih maju, misalnya sandwich imunometri. Tes aglutinasi dilakukan dengan menambahkan partikel latex yang dilapisi antibodi anti CRP pada serum penderita sehingga akan terjadi aglutinasi. Untuk menentukan titer CRP, serum sampel diencerkan dengan buffer glisin dengan pengenceran bertingkat (1/2, 1/4, 1/8, 1/16 dan seterusnya) lalu direaksikan dengan reagen CRP latex. Titer CRP adalah pengenceran tertinggi yang masih terjadi aglutinasi. Tes sandwich imunometri dilakukan dengan mengukur intensitas warna menggunakan Nycocard Reader. Berturut-turut sampel (serum, plasma, whole blood) dan konjugat diteteskan pada membran tes yang dilapisi antibodi mononklonal spesifik CRP. CRP dalam sampel tangkap oleh antibodi yang terikat pada konjugat gold colloidal particle. Konjugat bebas dicuci dengan larutan pencuci (washing solution). Jika terdapat CRP dalam sampel pada level patologis, maka akan terbentuk warna merah-coklat pada area tes dengan intensitas warna yang proporsional terhadap kadar. Intensitas warna diukur secara kuantitatif menggunakan NycoCard reader II.
Faktor-faktor yang dapat mempengaruhi akurasi pemeriksaan CRP antara lain: (Beerink, 2009) a. Aktivitas fisik/latihan yang berlebihan Aktivitas yang berlebihan dapat menimbulkan cedera jaringan. Selain itu latihan atau aktivitas yang berlebihan dapat meningkatkan panas tubuh dimana kemungkinan terburuk adalah terjadinya heat stroke. Suhu tubuh yang tinggi
cenderung menggandakan semua reaksi kimia intraseluler, sehingga pada pemeriksaan CRP kadarnya meningkat. b. Kehamilan Reaksi hormonal yang terjadi pada wanita hamil akan dikenali sebagai reaksi inflamasi, sehingga pada pemeriksaan CRP kadarnya akan meingkat. Range normal kadar CRP wanita hamil <20 mg/L. c. Obesitas Obesitas berhubungan dengan hipertensi dan penyakit jantung. Pemeriksaan CRP sangat sensitive terhadap penyakit jantung. d. Penggunaan obat-obatan anti inflamasi non steroid (NSID), aspirin, atau kortikosteroid. Obat-obatan anti inflamasi akan menekan respon peradangan. e. Penggunaan pravastin, obat-obatan penurun kolesterol Profil lemak dalam darah sangat berhubungan dengan resiko penyakit jantung koroner dan stroke dimana sangat berhubungan dengan reaksi peradangan. Penggunaan obat-obatan penurunn kolesterol menurunkan resiko penyakit jantung koroner dan stroke, sehingga kadar CRP dalam darah juga berkurang. Adapun hal-hal yang harus diperhatikan dalam melakukan pemeriksaan CRP ini adalah : 1. Sebelum dilakukan pemeriksaan CRP, pasien harus berpuasa selama 12 jam. Specimen diambil dari darah vena kurang lebih 5 mL dalam tabung tanpa anti koagulan. Diambil serum pasien untuk diuji. 2. Selalu dilihat tanggal kadaluwarsa dari reagen, dan dilihat apa reagen mengalami kontaminasi atau tidak. 3. Slide test yang digunakan harus bersih, bebas dari kotoran, sehingga tidak mengganggu pengamatan agglutinasi. 4. Sebelum digunakan, reagen dan sampel harus dikondisikan pada suhu ruang dan dihomogenkan. Hal ini penting dilakukan untuk mengoptimalkan reaksi antara antigen pada sampel serum yang diperiksa dan antibodi anti CRP pada reagen lateks. 5. Serum yang digunakan harus jernih sehingga tidak akan mengganggu pengamatan aglutinasi. 6. Penetesan reagen maupun sampel serum dilakukan secara vertikal agar tetesan benar-benar satu tetes penuh dan ujung pipet penetes tidak boleh menyentuh slide test untuk mencegah terjadinya kontaminasi. Pada saat penghomogenan slide test untuk tujuan homogenisasi, diusahakan agar campuran tidak keluar dari garis lingkaran, sehingga tidak tercampur dengan sampel lainnya pada satu slide test.
7. Pembacaan hasil dilakukan tidak kurang dan tidak lebih dari 2 menit. Bila waktu inkubasi kurang, kemungkinan antibodi anti-CRP pada reagen lateks belum berikatan dengan antigen CRP di dalam sampel serum yang diperiksa. Sedangkan jika pembacaan dilakukan lebih dari 2 menit, maka kemungkinan antigen lain di dalam sampel serum yang seharusnya tidak bereaksi dengan antibodi anti CRP di dalam reagen lateks akan bereaksi, sehingga terjadi aglutinasi. Kedua hal ini akan menyebabkan hasil palsu. 8. Pembacaan hasil sebaiknya dilakukan pada pencahayaan terang, sehingga aglutinasi dapat diamati dengan jelas. Penyebab CRP meningkat Pada kondisi terinfeksi aktif, kadar CRP di dalam tubuh dapat meningkat hingga 100x kadar CRP pada orang normal sehingga pengukuran CRP sering digunakan untuk mengetahui apakah pasien dalam kondisi terinfeksi atau mengalami inflamasi tertentu. Pada saat terjadi infeksi bakteri atau inflamasi, leukosit akan teraktivasi kemudian melepaskan sitokin ke aliran darah. Sitokin akan merangsang sel-sel hati (hepatosit) untuk memproduksi CRP. Beberapa keadaan dimana CRP dapat dijumpai meningkat adalah radang sendi (rheumatoid arthritis), demam rematik, kanker payudara, radang usus, penyakit radang panggung (pelvic inflammatory disease, PID), penyakit Hodgkin, SLE, infeksi bakterial. CRP juga meningkat pada kehamilan trimester akhir, pemakaian alat kontrasepsi intrauterus dan pengaruh obat kontrasepsi oral, luka bakar, trauma, peradangan, aktif inflamasi arthritis. Makin tinggi kadar CRP, maka makin luas proses peradangan atau kerusakan jaringan. Penggunaan CRP dalam test diagnostik C-Reaktif Protein atau CRP merupakan pertanda adanya inflamasi sistemik yang sangat sensitive. Peningkatan kadar CRP sangat berhubungan kuat dengan adanya penyakit jantung koroner, MCI, stroke dan kematian mendadak karena jantung. Pemeriksaan C-Reactive Protein atau CRP kualitatif yaitu pemeriksaan terhadap keberadaan suatu reaktan fase akut, yakni CRP di dalam serum. Konsentrasi serum CRP akan meningkat setelah proses inisiasi inflamatori. Pemeriksaan ini memiliki sensitifitas yang baik, namun bukan indikator yang spesifik pada kondisi terjadinya luka akut, infeksi bakteri, atau inflamasi.
Konsentrasi normal dalam serum manusia yang sehat biasanya lebih rendah dari 6 mg/L, sedikit meningkat dengan penuaan. Tingkat yang lebih tinggi ditemukan pada akhir hamil wanita, peradangan dengan ringan dan infeksi virus dengan nilai 10-40 mg/L, pada peradangan aktif, infeksi bakteri memiliki 40-200 mg/L, dan untuk kasus infeksi barat oleh bakteri dan luka bakar mendapatkan nilai >200 mg/L dalam darah. CRP memiliki refleksi lebih sensitive dan akurat dari respon fase akut dibandingkan ESR. Oleh karena itu, kadar CRP terutama ditentukan oleh tingkat produksi (dan karenanya tingkat keparahan penyebab pancetus). Dalam 24 jam pertama, ESR mungkin normal dan CRP meningkat. CRP kembali normal lebih cepat daripada ESR dalam respon terhadap terapi. Manfaat dan Nilai Rujukan Pemeriksaan CRP Manfaat pemeriksaan CRP, untuk Mendeteksi Pelvic Inflammatory Disease (PID), apendidtis akut, dan sepsis (pada pasien kritis), menentukan faktor risiko penyakit vaskular, terutama penyakit jantung koroner (PJK), dan memantau kondisi post-operasi. Nilai normalnya dewasa < 6 mg/l.
V.
ALAT DAN BAHAN a. Alat 1. Tabung serologis 2. Mikropipet (50 ul dan 100 ul) 3. Penghitung waktu 4. Stik pengaduk disposible 5. Yellow tip 6. Slide test berwarna hitam 7. Rak tabung serologis b. Bahan/reagen 1. Serum 2. Aquadest 3. Larutan Buffer Saline 4. Reagen CRP Latex Test Kit 5. Kontrol serum positif dan kontrol serum negatif
VI.
PROSEDUR KERJA Metode Kualitatif 1. Dibiarkan setiap komponen mencapai suhu ruangan setelah dikeluarkan dari kulkas. 2. Dikocok perlahan reagen lateks hingga homogen. 3. Ditetesi 1 tetes reagen lateks menggunakan mikropipet yang disediakan (40 uI) pada masing-masing lingkaran slide uji.
4. Ditetesi setetes kontrol positif,kontrol negative dengan pipet pengaduk yang telah tersedia pada lingkaran slide uji namun yang berbeda. Sedangkan serum dipipet sebanyak 50 µl. 5. Reagen dan serum diratakan pada seluruh area lingkaran dengan pengaduk lidi (digunakan pengaduk yang berbeda-beda pada setiap sampel). 6. Digoyangkan perlahan slide test kedepan dan kebelakang kira-kira sekali setiap 2 detik selama 2 menit. 7. Interpretasi hasil dibaca setelah 2 menit. 8. Pada akhir pengujian, test slide uji dibilas dengan aquadest, dikeringkan dan disimpan pada kantong tertutup.
Metode Semi-kuantitatif Uji semi kuantitatif dapat dilakukan dengan cara yang sama seperti pada uji kualitatif dengan menggunakan urutan pengenceran dari serum dalam larutan saline, buffer fosfat atau larutan glisin seperti dibawah ini : Pengenceran Sampel serum Saline
1/2 100 µl 100 µl
1/4 100 µl 100 µl
1/8 100 µl
1/16 100 µl
100 µl 100 µl Volume sampel 6 x Titer Mg/ml
50 µl 6x2 12
50 µl 6x4 24
50 µl 6x8 48
50 µl 6 x 16 96
Dalam uji semi kualitatif titter sebagai penanda perbandingan dari pengenceran tertinggi yang menunjukan aglutinasi makroskopis : misalnya jika hal ini terjadi pada pengenceran 3 titternya adalah 8 seperti pada konsentrasi 48 mg/L.
VII.
INTERPRETASI HASIL Nilai normal : - Dewasa : < 6 mg/l Metode Kualitatif Adanya aglutinasi menunjukkan tingkat CRP dalam sampel sama atau > 6 mg/l. Kurangnya aglutinasi menunjukkan tingkat CRP < 6 mg/l dalam sampel.
Ketinggian kadar CRP di atas normal mengindikasikan kerusakan jaringan, peradangan, atau keduanya dengan skala yang besar. CRP lateks telah dibakukan untuk mendeteksi kadar CRP serum pada atau di atas
6mg/ml, yang dianggap sebagai konsentrasi terendah dari signifikansi klinis. Metode Semi-Kualitatif Disesuaikan dengan tabel pengenceran. Misalnya pemeriksaan ini dilakukan hingga pada pengenceran ¼ maka kadar CRP adalah 24 mg/L. Dan jika dilakukan hingga pengenceran 1/8 maka kadar CRP adalah 48 mg/L. DAFTAR PUSTAKA
Ridwan.
2012.
Imunologi
dan
Serologi.
Online.
http://ridwananalis.
wordpress.com/2012/08/13/imunologi-dan-serologi/. Diakses pada 24 Maret 2015. Anonim.
Pemeriksaan
Darah
Led
CRP.
Online.
https://angkylosaurus.wordpress.
com/pemeriksaan-darah-led-crp/. Diakses 24 Maret 2015. Putu. Ariawan.
2013. Makalah
pemeriksaan
CRP. Online.
http://ariawanputu2.
blogspot.com/2013/12/makalah-pemeriksaan-crp.html. Diakses 24 Maret 2015. Ogi.Tau.
2012.
Test
C-Reactive
Protein.
Online.
http://my-zona-kesehatan.
blogspot.com/2012/09/test-c-reactive-protein-crp.html. Diakses 24 Maret 2015. Riswanto.
2009.
Protein
C-Reaktif.
Online.
http://labkesehatan.blogspot.
com/2009/11/protein-c-reaktif.html. Diakses 24 Maret 2015.
