Universidad Andrés Bello Facultad de Medicina Departamento de Ciencias biolóicas !aboratorio de Biolo"a celular B#$ 0%5
Trabajo Práctico n º 3: Microscopia
Alumnos: &anessa 'arc"a Camila 'óme( &aleria Ulloa
)ección* 2 Profesores: &erónica +oc,es Daniel Bustamante
12-05-2015
Introducción:
A lo laro del tiempo el ser ,umano se ,a dado cuenta de sus necesidades . lo /ue necesita para avan(ar una de estas es observar células de tan m"nimo tamao imperceptible para el oo ,umano 3s por esto /ue el microscopio ,a sido . es una de las ,erramientas m4s utili(adas en la biolo"a 3l microscopio es un elemento principal en todos los laboratorios de investiación es un instrumento /ue permite observar elementos oranismos sustancias /ue no se ven a simple vista 3l primer microscopio ue inventado por una casualidad en e6perimentos con lentes lo /ue sucedió de manera similar pocos aos después con el telescopio de 7ans !ippers,e. 8190:; 3ntre los aos 15<0 . 1900 el óptico ,olandés =ac,ar"as >anssen 815:0-19%:; inventó un microscopio con una especie de tubo con lentes en sus e6tremos de : cm de laro soportado por tres delines de bronce? pero se obten"an im4enes borrosas a causa de las lentes de mala calidad 3stos primeros microscopios aumentaban la imaen 200 veces 3stos microscopios ópticos no permiten arandar la imaen m4s de 2000 veces [1] 36isten distintos tipos de microscopios por eemplo el óptico contraste de ases luorescencia electrónico entre otros 3n la actualidad ,a. muc,a tecnolo"a dispuesta para descirar distintos principios undamentales /ue reulan la estructura . la actividad de la célula [] pero no tan solo sirven para eso sino para ver todo tipo de estructura no celular /ue se desee ver De esta orma todos podemos acceder a la utili(ación del microscopio para dierentes obetivos los cuales dependen del trabao /ue se dispone a reali(ar 3n este siuiente inorme se ver4 como ue el trabao pr4ctico . teórico de utili(ación de microscopio para la visuali(ación de dierentes muestras como una letra @e un papel milimetrado rotis de sanre ,umana corte de intestino delado catailo de cebolla elodea sp . proto(oos odo lo /ue loramos observar ser4 dispuesto en este inorme trabando de dear en claro el uso del microscopio . las dierentes estructuras /ue se pueden observar con distintos aumentos 7ipótesis* Al .a conocer el uncionamiento . la orma adecuada de usar un microscopio óptico podemos observar con dierentes obetivos ininidades de estructuras en cada una de las muestras utili(adas /ue son imposibles de ver al oo ,umano
!bjeti"os del laboratorio práctico
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Aprender la estructura "sica del microscopio con sus dierentes sistemas /ue lo componen Distinuir los dierentes poderes /ue tiene el microscopio . aprender a utili(arlos en la pr4ctica )aber preparar un material para ser lueo observado en un microscopio C4lculos con respecto a los poderes . l"mites de resolución del microscopio óptico también el di4metro del campo visual . determinación del tamao celular eali(ar de manera correcta una observación en microscopio a través de los oculares adem4s de poder describirla . es/ue mati(arla
Materiales # m$todos
Acti"idad : 3n esta actividad se lora observar una letra @e impresa contenida en el portaobetos lo primero a reali(ar es colocar la muestra sobre la platina del microscopio acomodar bien para /ue /uede en un buen campo visual lueo utili(ar el lente obetivo 106 !o siuiente ue rotar el revolver ,asta llear al otro obetivo 06 . colocar en posición Eor ultimo dibuar lo observado a través de los oculares 3n ambos casos la letra @e se vio de orma invertida Acti"idad 3: 3sta actividad consiste en observar los cuadros de un papel milimetrado .
cada cuadro e/uivale a 1
cm
2
Erimero se toma el porta obeto con el papel milimetrado
8/ue est4 listo; lueo utili(ar el obetivo 6 enocar con el macrométrico . micrométrico calcular el campo visual contando la ma.or cantidad de cuadros observados Al inal transormar a unidades micrométricas . calcular el campo visual de 106 06 . 1006 Acti"idad %: !os pasos a seuir son para observar rotis de sanre 8,umana; . corte de intestino delado de attus norveicus 8Beren,out; 3n el rotis de sanre ,umana la preparación se coloca en la platina del microscopio . se austa se coloca el obetivo inicialmente en 6 lueo se enoca con el micrométrico . lueo con el micrométrico para tener meor nitide( de este modo lueo se pasa a 106 . se enoca solo con el micrométrico de la misma manera se cambia de obetivo a 06 /ue es el obetivo /ue se ped"a en esta actividad Eara el corte de intestino delado se ,ace de la misma manera se empie(a con el obetivo 6 se enoca con el macrométrico . lueo con el micrométrico as" mismo con 106 . 06 /ue también era al obetivo /ue se /uer"a llear
Acti"idad &: 3sta actividad se llevar4 a cabo de una orma distinta /ue las anteriores .a /ue utili(aremos tinción
a; Catailo de cebolla* 3n un tro(o de cebolla con una ,oa de illete limpia se reali(a un pe/ueo corte transversal al teido se levanta cuidadosamente para obtener un tro(o adecuado de teido mu. ino !ueo se reali(an % preparaciones? a la primera se coloca una ota de aua en el centro de un portaobetos limpio utili(ando un otario . sobre esa ota se ubica el tro(o de catailo de cebolla . se coloca el cubreobetos 3l seundo es con tinción se pone una ota de a(ul de metileno a un lado de la muestra en el portaobetos . se inclina para /ue el colorante bae . atraviese el teido 3l tercero es con tinción con lucol . se reali(a el mismo procedimiento /ue con el a(ul de metileno )e ,ace la observación de cada uno de las % preparaciones con el obetivo 106 se enoca con el micrómetro . lueo con el micrométrico b; 3lodea sp* Erimero se preparara la muestra areando una ota de aua destilada con el otario al portaobeto . sobre él se deposita una ,oa de 3lodea sp se cubre con un cubreobetos lueo se coloca en la platina . se acomoda por Gltimo se observa a través del microscopio comen(ando con un obetivo 6 . se prosiue aumentando ,asta llear al obetivo 06 /ue es el pedido inicialmente !o /ue se lora ver es varias células veetales delimitadas por su correspondiente pared celular c; Eroto(oos* )e comien(a por preparas las dos muestras la primera de Earamacio . la seunda de 3uctena ambas de iual orma !o primero ue arear una ota /ue conten"a a cada especie cada una a un respectivo portaobetos . cubrir por un cubreobetos evitando la ormación de burbuas de aire )e pusieron las muestras en la platina . se acomodaron se comen(ó con el obetivo 6 se enocó con el macrométrico . después con el micrométrico . se ue rotando el revolver para aumentar el obetivo a 106 06 /ue es el obetivo de la actividad
'esultados
Acti"idad 1:
a; Eoder de aumento . apertura numérica de los lentes obetivos Aumento 8H;
Apertura +umérica 8+A;
010
10
025
0
025
100
125
b; Aumento . apertura numérica de los lentes oculares Aumento 8H;
Apertura +umérica 8+A;
10
1:
c; Apertura numérica del condensador Apertura +umérica 8+A; 025
d; esolución m46ima Apertura del lente 1006
125
Apertura numérica del condensador
025
Apertura numérica de la interace de aire
10
Apertura numérica de la interace de aceite
1% - 15
!a apertura numérica eectiva m46ima es el valor m4s bao en nuestro caso es la apertura numérica del condensador 8025; este valor se utili(a para el c4lculo de l"mite de resolución 8distancia m"nima /ue e6iste entre dos puntos para poder dierenciarlos entre s"; . poder de resolución m46imo 8capacidad /ue permite dierenciar dos puntos situados mu. pró6imos entre s";
0.25
Poder Resolución*
0.61∗400 nm
0.61∗400 nm
Limite Resolución*
0.25
=0.0010 nm
=976 nm
Acti"idad :
- IA /ué se debe la dierencia observadaJ Debido al /ue microscopio posee lentes conve6as /ue modiican el tamao de las im4enes . también las invierten en comparación a la imaen oriinal - I7a. alGn cambio en la orientación de la letra con obetivo 06J 3n 06 siue estando invertida la imaen oriinal
T(tulo: !etra @e Tipo: Eermanente Tinción: )in tinción !bjeti"o: 10H Aumento total: 100H !bser"aciones: 3n esta muestra se observa la letra @e . con dierentes obetivos al inal nos damos cuenta /ue con los obetivos se invierte la imaen
Acti"idad 3:
- Calculo de cantidad de cuadros a Micrómetros
1mm2 T(tulo: Eapel milimetrado 12mm2 Tipo: Eermanente Tinción: )in tinción
1000 Km 12000 Km - D&C de los lentes obetivos
D&C obetivo !bjeti"o: HH* 812000umLH; N 12000 Km D&C obetivo 10H* 812000umLH; 10 N :00 Km Aumento total: 0H D&C obetivo 0H* 812000umLH; 0 N 1200 Km D&C obetivo 100H* 100N :0 Km !bser"aciones: 3n 812000umLH; esta muestra se contó la cantidad de cuadros observados en el campo visual 3n total eran 12 cuadros enteros
Acti"idad %:
T(tulo: Frotis de sanre ,umana Tipo: Eermanente Tinción: 7emato6ilina-eosina !bjeti"o: 0H Aumento total: 006 !bser"aciones: Eor medio del microscopio óptico observamos e identiicamos diversas estructuras 'lóbulos roos pe/ueas estructuras con orma circular /ue aparecen en abundancia en el preparado? neutróilos estructuras con orma circular /ue e6,iben un citoplasma rosa p4lido . un nGcleo a(ul oscuro? pla/uetas ramentos celulares diminutos . redondeados de color oscuro
T(tulo: #ntestino delado de attus norveicus Tipo: Eermanente Tinción: 7emato6ilina-eosina !bjeti"o: 0H Aumento total: 00H !bser"aciones: 3n la siuiente muestra identiicamos células musculares lisa 3n estas células se pueden apreciar los nGcleos con ormar circular . de color morado . su citoplasma con aspecto ,omoéneo . de color rosado
T(tulo: 7"ado de attus norveicus Tipo: Eermanente Tinción: 7emato6ilina-eosina !bjeti"o: 0H Aumento total: 00H !bser"aciones: 3n la siuiente imaen solo se pudieron identiicar alunas estructuras del preparado tales como* capilares sinusoides . los ,epatocitos
Acti"idad ):
Determinación del tamao celular 8C;* 3ste se puede determinas una ve( determinado el DC& - Frotis de sanre ,umana* T*: 8D&C ob 0H nO células; N 50:
μm
Acti"idad &: T(tulo: Catailo de cebolla Tipo: emporal Tinción: )in tinción !bjeti"o: 10H Aumento total: 100H !bser"aciones: 3n esta muestra identiicamos estructuras tales como* células epidérmicas estructuras con orma alaradas . Earedes celulares estructuras de color nero /ue rodean la célula
T(tulo: Catailo de cebolla Tipo: emporal Tinción: !ucol !bjeti"o: 10H Aumento total: 100H !bser"aciones: 3n la siuiente muestra identiicamos estructuras con orma alaradas de color caé claro llamadas células epidérmicas en el cual se pueden apreciar sus paredes celulares . sus nGcleos 8Ee/ueas estructuras con orma circular de color caé;
T(tulo: Catailo de cebolla Tipo: emporal Tinción: A(ul de metileno !bjeti"o: 10H Aumento total: 100H !bser"aciones: 3n esta muestra identiicamos las células epidérmicas 3structuras con orma alaradas de color a(ul oscuro o claro en el cual se pueden apreciar sus paredes celulares 8estructuras de color nero /ue rodea a las células epidérmica; . nGcleos 8pe/ueas estructuras con orma circular de color a(ul;
T(tulo: 3lodea sp Tipo: emporal Tinción: )in tinción !bjeti"o: 0H Aumento total: 00H !bser"aciones: 3n esta muestra identiicamos las células epidérmicas 3structuras con orma alaradas de color a(ul oscuro o claro en el cual se pueden apreciar sus paredes celulares 8estructuras de color nero /ue rodea a las células epidérmica; . nGcleos 8pe/ueas estructuras con orma circular de color a(ul;
T(tulo: Eroto(oo Earamecio Tipo: emporal Tinción: )in tinción !bjeti"o: 0H Aumento total: 00H !bser"aciones: 3n esta imaen se lora identiicar Eroto(oos con orma ovalada ienen el cuerpo revestido de cilios /ue les permiten despla(arse
T(tulo: Eroto(oo 3ulena Tipo: emporal Tinción: )in tinción !bjeti"o: 0H Aumento total: 00H !bser"aciones: 3n esta muestra identiicamos Eroto(oos con ormas ovaladas . provistas de un laelo /ue permite el despla(amiento.
+iscusión
Al comien(o de este trabao nos cuestionamos /ue el uncionamiento del microscopio nos permit"a observar diversas ormas estructuras colores etc de una muestra determinada . en eecto resultó ser v4lido 3l microscopio tiene como unción principal aumentar la resolución la cual es posible racias a los lentes converentes conocidos como obetivos /ue se especiican cada ve( m4s .a /ue aprovec,an la lu( de la uente lum"nica 3n la acti"idad 1 loramos entender los c4lculos para obtener la capacidad de ,acer perceptible dos puntos situados mu. pró6imos entre s" se utili(a el poder de resolución P para calcular la distancia m"nima entre esos dos puntos se utili(a el l"mite de resolución [3] 3n la acti"idad .a conocimos la estructura "sica del microscopio . como enocar bien con el micrométrico . el micrométrico 3n esta muestra vimos la letra @e pero de una orma invertida 3sto se e6plica por/ue la imaen /ue da el microscopio es una imaen virtual en relación a la imaen real debido /ue los ra.os de lu( releados o emitido por el obeto /ue se encuentra uera de la distancia ocal de un obetivo al pasar por el obeto son reractados . enocados en un plano /ue se ubica m4s all4 de la cara opuesta de la lente obteniéndose una imaen real /ue es invertida . de ma.or tamao al del obeto inicial [%] >unto con toda esta inormación respondimos las preuntas e6puestas en los resultados )iuiendo con la acti"idad 3 observamos la cantidad de cuadros de un papel milimetrado vistos en un campo visual con un obetivo determinado )abemos /ue las medidas @m4s comunes como el cm m mm etc no se utili(an en la medición con la utili(ación de microscopio as" /ue en este caso utili(amos micrómetros Cada obetivo /ue utili(amos nos daba m4s aumento lo /ue nos permitió visuali(ar ,asta ibras de las l"neas del papel milimetrado Al terminar esta actividad nos pidieron el c4lculo del di4metro del campo visual /ue en simples palabras es calcular las dimensiones /ue poseen las muestras observadas bao el campo visual del microscopio 3n la acti"idad % .a comen(amos a utili(ar la preparación permanente la cual nos permite visuali(ar con meor deinición estructuras componentes limitaciones entre otras cosas de una muestra 3n el rotis de sanre loramos observar lóbulos roos pe/ueas estructuras con orma circular /ue aparecen en abundancia en el preparado? estructuras con orma circular un citoplasma . nGcleos ramentos celulares diminutos . redondeados !a tinción utili(ada ue 7emato6ilina-eosina? ,emato6ilina es un colorante catiónico mientras /ue la eosina es un colorante aniónico perteneciente a los 6antenos )e teir4n de a(ul los nGcleos citoplasmas en rosa mGsculos en tonos roi(os a rosados ucsia lóbulos roos en narana o roo . la ibrina en rosa intenso !os componentes de la célula m4s b4sicos como las prote"nas de los lóbulos blancos o la ,emolobina se tien por su ainación con la eosina [)]
Debido a ello se llea a la conclusión de /ue lo /ue se estaba estudiando eran lóbulos roos 8eritrocitos; /ue no pose"an nGcleo . su citoplasma era de un violeta mu. p4lido . lóbulos blancos 8!eucocitos; /ue ten"an en su interior r4nulos pGrpura intenso 3n el ,"ado de rata se pudieron identiicar alunas estructuras del preparado tales como* capilares sinusoides . los ,epatocitos /uienes estaban ordenados en una estructura celular repetitiva conocida como lobulillo ,ep4tico 3n el intestino delado de rata identiicamos células musculares lisa 3n estas células se pueden apreciar los nGcleos con ormar circular . de color morado . su citoplasma con aspecto ,omoéneo . de color rosado .a /ue también utili(amos la tinción 7emato6ilinaeosina A continuación en la acti"idad ) va un poco en relación a la actividad % por/ue permitió observar apro6imadamente el tamao de un lóbulo roo 85 0: micrómetros dentro de la lonitud normal; !a acti"idad & nos da a conocer como la tinción inlu.e en la observación de distintos componentes .a sean alunos m4s espec"icos /ue otros !o primero ue con el Catailo de cebolla sin tinción? en el /ue las células /uedan delimitadas en un teido pero no se pod"an observar m4s estructuras !ueo el catailo de cebolla con tinción luol se tie en verde amarillento el citoplasma . un color m4s oscuro la pared puesto /ue ambos contienen . est4n ormados por alGn componente respectivamente 3l Gltimo de Catailo de cebolla con tinción a(ul de metileno se lora ver las paredes celulares de los catailos !ueo una muestra de ,oa de elodea sp /ue es una planta acu4tica lara . delada /ue permanece completamente sumerida aun/ue no ten"a tinción se loró ver la pared celular . cloroplastos mu. deinidos !as células de esta planta no presentaban movimiento lo cual pod"a ocurrirse por la alta de lu( de esta o por su muerte 3l Gltimo preparado en estudio ue de proto(oos dos distintos uno de Earamecio 8oranismo comGn unicelular /ue ,abita en auas dulces donde se ,allan abundantes sustancias oranicas en descomposición; [&] . 3ulena /ue son muestras rescas de oranismos vivientes Del Earamecio se loró distinuir membrana nGcleo vacuolas . cilios /ue le permiten un meor movimiento 3n la 3ulena /ue es un proto(oo otosintético a pesar de no ser una planta se visuali(ó estructuras con ormas ovaladas . provistas de un laelo /ue permite el despla(amiento. A modo de s"ntesis loramos ver estructuras /ue no se pueden ver a simple vista o a vista del oo ,umano . para esto utili(amos el microscopio Eudimos distinuir muc,as estructuras con dierentes tinciones /ue dierenciaban los diversos componentes /ue tiene cada una de estas muestras .a sea catailo de cebolla proto(oos una letra una planta etc odo esto arroo una cantidad de inormación considerable /ue nos a.uda para seuir adelante con nuestra incónita /ue es nuestra ,ipótesis de un comien(o
*onclusión
Eara inali(ar revisando todo los datos obtenidos . conceptos aprendidos en nuestro inorme podemos airmar /ue el microscopio s" nos permite ver im4enes con un alto poder de deinición esto /uiere decir /ue las im4enes observadas por los obetivos del microscopio permiten apreciar estructuras con bordes deinidos Eor otro lado e6iste un aumento en el tamao de la imaen lo /ue permite ver componentes mu. diminutos dentro de una muestra odas las actividades cumplieron con su propio obetivo . con el nuestro d4ndonos as" el conocimiento para poder interpretar todos los resultados en una misma conclusión? el microscopio es una ,erramienta /ue nos acilita la investiación de diversos microoranismos obetos etc /ue utili(amos para satisacer necesidades cient"icas
,iblio-raf(a
[1] ,ttp*QQQeducarorinventoselmicroscopioasp .ec/a in-reso: 09052015
[2] Bruce Alberts, Introducción a la biología celular, 2006, editorial Paramericana, pág !".
[#] $ni%ersidad Andr&s Bello, 20'!, (aboratorio de biología celular bio) 0#!, *uía +# -icroscopía. pág '0"
[] $ni%ersidad Andr&s Bello, 20'!, (aboratorio de biología celular bio) 0#!, *uía +# -icroscopía. pág "
[)] ,ttps*QQQuamesdepartamentosmedicinapatoloia,emato6ilina,tm .ec/a in-reso: 11052015 [&] ,ttp*QQQecuredcuinde6p,pparamecio .ec/a in-reso: 11052015
