Search
Home
Saved
1.3K views
0
Upload
Sign In
RELATED TITLES
0
Xac Dinh Hoat Do Protease Uploaded by Longdragon King
Top Charts
Books
Audiobooks
Save
Embed
Share
Print
Magazines
News
Documents
Sheet Music
ENZYME VÀ ỨNG DỤNG
1
Download
Join
of 3
protein quatitation.doc
Tyrosine(dich)
Search document
XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ CỦA PROTEINASE THEO PHƯƠNG PHÁP ANSON CẢI TIẾN
1.Nguyên tắc Phư hươn ơngg ph pháp áp này này dự dựaa vào vào sự thủy thủy ph phâân prot protei einn (caz (cazeein ho hemoglobin) bởi enzyme. Sau đó bất hoạt enzym và kết tủa protein chư bị thủy phân bằng acid tricloroacet tricloroacetic. ic. Định lượng sản phẩm được thành trong phản ứng bằng phản ứng màu với thuốc thử Folin, kết qu phân tích tích dựa dựa vào đồ thị chuẩn chuẩn tyrosin. tyrosin. Đơn vị hoạt độ proteinase là lượng enzym trong một phút ở 30 chuyển hóa được một lượng cazein tương đương với 1µmol tyrosi bằng. 2.Tiến hành 2.1. Thực hiện phản ứng thủy phân
Chuẩn bị 2 ống nghiệm sạch, ống thí nghiệm và ống kiểm tra. Trước khi tiến hành phản ứng thủy phân, dung dịch cơ chất và dung dịc enzym đều phải đưa đến 30oC Đối với ống thí nghiệm: nghiệm: 1. Cho vào mỗi ống nghiệm 2ml dung dịch cơ chất (300C) 2. Tiếp tục cho thêm 1 ml dung dịch enzyme (300C) vào ống nghiệm đã có c chất và giữ ở 300C 10 phút để phản ứng thủy phân xảy ra. 3. Kết thúc thúc phản ứng bằng bằng cách cách cho 5ml dung dung dịch dịch tricloac tricloaceti eticc 5% vào (Đ bất hoạt enzym và kết tủa có chất không không được thủy phân), phân), lắc đều, Sign up to vote on this title 4. Để yên yên ở nhiệ nhiệtt độ phòng phòng trong trong 10 phút. phút. Useful Not useful 5. Lọc tách tách kết tủa tủa va thu dung dung dịch dịch trong suốt. suốt. Dung Dung dịch dịch thu được được dùng đ làm phản ứng màu với thuốc thử Folin.
Home
Saved
Top Charts
Books
Audiobooks
Magazines
News
Documents
Sheet Music
Upload
Sign In
Join
Search
Home
Saved
1.3K views
0
Upload
Sign In
RELATED TITLES
0
Xac Dinh Hoat Do Protease Uploaded by Longdragon King
Top Charts
Books
Audiobooks Magazines
News
Documents
Save
Embed
Share
Print
Sheet Music
ENZYME VÀ ỨNG DỤNG
1
Download
Join
of 3
protein quatitation.doc
Tyrosine(dich)
Search document
1. Cho 1ml dịch lọc trong vào ống nghiệm. 2. Tiếp tục cho 4ml Na2CO3 6%, lắc đều. 3. Cho thêm 1ml thuốc thử Folin 0,2N lắc đều. 4. Giữ 30 phút trong nhiệt độ phòng. 5. So màu trên máy quang phổ bước sóng 750nm. 3. Tính kết quả: Lấy số liệu đọc trên máy của mẫu thí nghiệm và mẫu kiểm tra Dựa vào phương trình đường chuẩn tyrosin để tính lượng µmol tyrosin tươn ứng. Tính số đơn vị hoạt động proteolitic của 1ml dung dịch enzyme theo công thức HP/ml =
µmol tyrosin* 8 t
8: Thể tích toàn bộ hỗn hợp phản ứng You're t: Thời gian để enzym tác dụng vớiReading cơ chấta Preview Unlock full access with a free trial. Hóa chất - Dung dịch casein 2% Download With Free Trial
•
•
•
Hòa tan 2g cazein 100ml dung dịch đệm Sorensen pH 7,6. Đun trên bếp điệ cho đến khi hòa tan hoàn toàn.
Dung dịch đệm Sorensen có pH 7,6 được pha như sau (pha 1000 ml): hòa ta Cho 818ml dung dịch Na2HPO4 1/15M (cânSign 23,9 g Na2HPO4.12H2O up to vote on this title trong nước cất và dẫn nước đến vạch của bình định mức 1000ml) và 182m Useful Not useful dung dịch KH2PO4 1/15(cân 9,07g KH2PO4 hòa tan trong nước cất và dẫ nước đến vạch của bình định mức 1000ml) vào trong lọ đựng hóa chất có th tích 1000ml. Sau đó điều chỉnh để được pH 7,6 bằng máy đo pH.
Home
Saved
Top Charts
Books
Audiobooks
Magazines
News
Documents
Sheet Music
Upload
Sign In
Join
Search
Home
Saved
1.3K views
0
Upload
Sign In
RELATED TITLES
0
Xac Dinh Hoat Do Protease Uploaded by Longdragon King
Top Charts
Books
Audiobooks Magazines
News
Documents
Save
Embed
Share
Print
ENZYME VÀ ỨNG DỤNG
1
Download
Join
•
Sheet Music
of 3
protein quatitation.doc
Tyrosine(dich)
Search document
Cho thêm vài giọt Brôm (Thao tác trong tủ hốt để tránh hơi brôm bay và người)
•
Tiếp tục đun sôi để loại bỏ brôm thừa (dung dịch thu được có mày vàng)
•
Làm nguội và thêm nước cất để được 1000ml dung dịch.
Bảo quản kín trong lọ tối màu. Trong thời gian bảo quản, nếu dung dịch ngả sang màu xanh thì cho và dung dịch vài giọt brôm và đun lại để được dung dịch màu vàng. - Dung dịch Na2CO3 6% - Dung dịch acid tricloacetic 5% Dựng đường chuẩn tyrosin Pha dung dịch gốc tyrosin có nồng độ 10-3M (1µmol/ml): cân 18,12 mg tyrosi tinh khiết, hòa tan trong dung dịch HCl 0,2N rồi cho vào bình định mức đến 100m và cho HCl 0,2N cho đến vạch bình định mức Từ dung dịch gốc pha thành dãy nồng độ dung dịch như sau: Dung dịch gốc 0,1 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,5 You're Reading a Preview (ml) Unlock full access HCl 0,2N(ml) 4,9 4,8 4,6 with a free 4,4trial. 4,2 4 3,5 Nồng độ tyrosin 0,02 0,04 0,08 0,12 0,16 0,20 0,30 Download With Free Trial (µmol/ml) •
•
Lấy mỗi dung dịch trên 1ml cho vào 7 ống nghiệm và cho thêm vào mỗi ốn nghiệm 5ml dung dịch Na2CO3 6% và 1ml dung dịch Folin 0,2N (Pha loãng dun up ở to nhiệt vote onđộ thisphòng title 10 phút. dịch 1N đã chuẩn bị ở trên 5 lần), lắc đều, sau đó đểSign yên Useful Not useful Mẫu đối chứng: thay 1ml dung dịch tyrosin bằng 1ml nước cất. Đo trên máy so màu ở bước sóng 750nm.
Home
Saved
Top Charts
Books
Audiobooks
Magazines
News
Documents
Sheet Music
Upload
Sign In
Join
