Makalah Sitohistoteknologi “Teknik “Teknik Pembuatan Preparat Oles dan Rentang”
Disusun Oleh Kelompok 9 : 1 !era !era Saputri Saputri "P#$9 "P#$9%&1 %&11' 1'%1$ %1$(( # Kurnia Kurnia )o )oanda Saputri Saputri "P#$9%&1 "P#$9%&11'% 1'%#1( #1( & M !endra !endra Pri*atn Pri*atnaa "P#$9% "P#$9%&11 &11'%#+( '%#+(
K,M,-TR./- K,S,!/T/- R,P02.K .-DO-,S./ PO2.T,K-.K K,S,!/T/- K,M,-TR./- K,S,!/T/- /-T,30R0S/- D& /!2. T,K-O2O4. 2/OR/TOR.0M M,D.K T/!0- /K/D,M.K #%156#%1$
Teknik Teknik Pembuatan Preparat Oles dan Preparat Rentang
Pemotongan dan Persiapan 3aringan untuk Pemulasan 1. Fiksasi Suatu larutan kimia *ang mengandung bahan 7iksati7 pada p! $8% ditambahkan ke aringan ahan 7iksati7 *ang paling umum digunakan adalah 7ormaldehida dengan konsentrasi + ;ormaldehida berikatan dengan beberapa protein dan membentuk ikatan silang8 kemudian mendenaturasi protein lainn*a8 namun tidak berinteraksi dengan lipid ,7ek keseluruhann*a adalah untuk memperkeras aringan dan menginakti
egah degradasi aringan 2. Dehidrasi 0ntuk membuat potongan?potongan8 maka aringan harus dipendam dalam lilin -amun demikian8 lilin "para77in( tidak terlarut dalam air Oleh sebab itu8 air dalam aringan harus dihilangkan dulu dan digantikan dengan medium dimana lilin dapat larut di dalamn*a !al ini dilakukan pertama?tama dengan mengganti air dengan al>ohol8 menempatkan aringan dalam serangkaian larutan *ang mengandung al>ohol dengan konsentrasi *ang semakin meningkat8 dan berakhir pada konsentrasi 1%% Proses ini dilakukan se>ara bertahap dengan tuuan meminimalkan kerusakan aringan Selanutn*a8 aringan harus diernihkan sebelum dipendam dalam lilin 3. Penjernihan (clearing) Selanutn*a8 potongan ditempatkan dalam pelarut organi> seperti @*lene atau toluene8 *ang menggantikan al>ohol 2ilin tidak larut dalam al>ohol Pelarut tersebut disebut bahan penernih karena aringan sering kali terlihat tampak sangat elas saat dipendam dalam bahan penernih 4. Pemendaman (embedding) 3aringan ditempatkan dalam lilin para77in hangat pada suatu >etakan Pada pendingin selanutn*a8 lilin mengeras8 dan lembaran aringan kini d apat dipotong 5. Pemotongan Potongan "lembaran( dengan ketebalan sekitar 1%?#% mikron dipotong menggunakan mikrotom 6. Perekatan (mounting) Potongan lilin diletakkan pada ka>a obek mikroskop
Pemulasan "staining( 0ntuk melihat se>ara detail8 komponen aringan harus dipulas -amun demikian8 peAarna *ang digunakan semuan*a berbahan dasar air Oleh sebab itu8 lilin harus dilarutkan dan diganti
dengan air "rehidrasi( agar =at Aarna mampu menembus potongan aringan Oleh karena itu8 potongan ditempatkan dalam al>ohol dengan konsentrasi *ang semakin menurun dan berakhir pada al>ohol % "air( Seumlah peAarna berbeda dapat digunakan8 namun *ang paling umum adalah hematoksilin dan eosin
Dehidrasi dan Perekatan Spe>imen *ang diAarnai sekali lagi didehidrasi8 sebelum ditempatkan ke medium perekat *ang dilarutkan dalam @*lene /khirn*a8 lembar penutup ditempatkan di atas sampel untuk melindungin*a8 dan selanutn*a ka>a obek dapat dilihat melalui mikroskop
3enis Pemotongan 2ainn*a Potongan eku
3aringan se>ara >epat dibekukan8 di7iksasi8 dan dibuat potongan dengan menggunakan kriostat sebelum dipulas Potongan !emi"#i$is
3aringan dipendam dalam resin epoksi atau akrilik8 *ang memiliki si7at berdebda dengan lilin8 dan memungkinkan dibuat potongan *ang lebih tipis "kurang dari # mikron meter(
Potongan 2ongitudinal Dan Transara longitudinal tampak berbeda dengan aringan *ang dipotong se>ara transleus pada tepin*a8 tidak ada pola lurik *ang terlihat Potongan uga dapat dibuat oblik8 *ang pada kasus tersebut tampilann*a menadi diantara potongan longitudinal dan potongan melintang
Potongan Serial Potongan dibuat serial melalui aringan Tampilan sel dan aringan akan tergantung dari manakah potongan dibuat Potongan *ang dibuat melalui pertengahan sel tampak berbeda dari potongan *ang dibuat melalui tepi
3enis?3enis Pulasan !istologi !ematoksilin dan ,osin !ematoksilin berasal dari pohon logAood " Haemotoxylum campechianum(8 dan han*a dapat digunakan sebagai peAarna dalam bentuk teroksidasi "hematein( !ematoksilin adalah peAarna *ang bersi7at basa *ang berikatan pada struktur asam dalam sel dan memulasn*a menadi Aarna biru keunguan Struktur?struktur ini meliputi: • • •
D-/ dalam nu>leus8 dalam heterokromatin dan nu>leolus R-/ dalam sitoplasma pada ribosom dan R, kasar eberapa materi ekstraselular "misarn*a karbohidrat dalam kartilago(
,osin merupakan peAarna *ang bersi7at asam *ang bermuatan negatiakup: Sebagian besar protein dalam sitoplasma eberapa serabut ekstraselular • Sel?sel dalam aringan *ang terpulas dengan !B, menadi Aarna merah muda8 dengan nu>leus berAarna ungu •
3enis Pulasan !istologi 2ainn*a a Pulasan 3aringan .kat %etode %asson #rikrom menggunakan tiga peAarna berbeda "hematoksilin8 a>id 7u>hsin8 dan meth*l blue(8 menghasilkan tiga Aarna dalam potongan *ang dipulas -u>leus terpulas menadi biru • Sitoplasma8 sel darah merah8 dan keratin terpulas menadi merah >erah • Kolagen dalam membrane basal8 aringan ikat8 dan kartilago terpuls menadi hiau • Pulasan *ang uga digunakan untuk meAarna aringan ikat adalah Can &ieson b Pulasan 4iemsa 3enis pulasan ini digunakan untuk sumsum tulang dan apus darah Sel darah merah terpulas menadi merah muda "tidak memiliki nu>leus( • Sel darah putih : sitoplasma terpulas menadi biru pu>at dan nu>leus terpulas • menadi biru tua6ungu > Pulasan Perak "untuk neuron( Pulasan histologis standar tidak dapat digunakan pada neuron8 terutama karena membrane plasman*a ka*a akan lipid 2ebih auh lagi8 nu>leus tidak terdeteksi8 ke>uali ika potongan meliputi bagian s*stem s*ara7 pusat *ang merupakan tempat dari ma *oritas nu>leus
-amun demikian8 pulasan perak dapat digunakan dengan baik Pulasan perak memulas sara7 dan terminal akson menadi Aarna hitam Metode alternati7n*a adalah 4olgi?o@ "merkuri klorida8 kalium kromat8 dan dikromat( d res*l Ciolet Pulasan ini digunakan untuk meAarnai substansi -issl "reti>ulum endoplasma kasar( dalam badan sel neuron e Pulasan Karbohidrat dan Musin Dalam reaksi periodi> a>id S>hi77 "P/S(8 asam periodat mengoksidasi karbohidrat dan molekul *ang ka*a karbohidrat seperti glikosaminoglikan8 dan reagen S>hi77 memulas molekul teroksidasi *ang dihasilkan menadi Aarna ungu gelap kemerahan P/S dikombinasikan dengan peAarna /l>ian blue *ang memulas seumlah musin "protein terglikosilasi( menadi Aarna biru gelap Sel?sel goblet *ang ka*a akan kerbohidrat dan musin8 terpulas menadi ungu kemerahan Kelenar *ang ka*a musin akan terpulas menadi Aarna biru gelap 7 Pulasan untuk 2ipid Pulasan lipid meliputi Oil Red O8 sudan bla>k8 an nile blue8 an memulas selubung m*elin neuron menadi hitam ke>okelatan
#eknik Pembuatan Pre$arat '. %etode oles (smear methods)
Metode oles adalah suatu pembuatan sediaan dengan alan mengoles6 membuat selaput "7ilm( dari substansi *ang berupa >airan atau bukan >airan di atas gelas benda *ang bersih dan bebas lemak8 untuk selanutn*a kemudian di 7iksasi8 diAarnai dan ditutup dengan gelas penutup ahan *ang sering dibuat sediaan oles *aitu darah8 nanah atau aringan?aringan tertentu ara ini sangat baik untuk mempelaari sitolog* darah8 sumsum tulang merah8 eksudat dari berma>am?ma>am aringan *an g meradang ontoh pembuatan sediaan oles : 1 Pembuatan sediaan darah tipis # Pembuatan sediaan oles dari aringan & Pembuatan sediaan darah tebal + Pembuatan sediaan nanah *ang tebal Prosedur pembuatan sediaan oles : 1 4elas benda / dibersihkan dengan menggunakan al>ohol *ang diteteskan pada tissue # Tangan kiri dikibas?kibaskan dengan telapak8 posisi telapak tangan kiri seaar perut selama #% detik & 2alu uung ari tengah tangan kiri di urut selama ' detik kemudian di sterilkan dengan kapas *ang dibasahi al>ohol
+ lood lan>et steril ditusukkan pada uung ari tengah tangan kiri8 tetes darah pertama dibuang dengan >ara diusapkan pada kapas ' Tetes darah kedua di tempelkan pada sisi kanan arak 1 >m gelas benda / *ang telah bebas lemak 5 Salah satu uung sisi gelas benda ditempelkan disebelah kiri pada tetes darah di gelas benda / dengan sudut +'% $ Ditarik ke sisi kanan sampai tetes darah tersentuh dan melebar ke sisi gelas benda 8 lalu di dorong ke sisi kiri dengan ke>epatan tetap !asiln*a akan terbentuk apusan darah67ilm darah /pusan darah dikeringkan di atas rak peAarnaan selama 1% menit eberapa peAarnaan sediaan oles *aitu peAarnaan 4iemsa8 peAarnaan Ma* 4runAald "larutan eosin meth*lene blue dalam meth*l al>ohol(8 peAarnaan Pappenheim8 peAarnaan Eright Metode Rentang "spread methods( Metode rentang adalah suatu metode pembuatan sediaan dengan >ara merentangkan suatu aringan pada permukaan gelas benda sehingga dapat diamati dengan mikroskop Pada umumn*a aringan?aringan *ang dapat dibuat preparat rentang adalah adalah aringan?aringan *ang tipis8 misaln*a pleura8 mesenterium8 peritoneum8 plara>hnoidea8 peri>ardium8 dll Rudi*atmi "#%%+(8 men*atakan bahAa aringan?aringan tipis seperti peri>ardium dapat langsung diamati di baAah mikroskop tanpa peAarnaan dan uga tanpa 7iksasi lebih dulu Tetapi pembuatan sediaan rentang dengan >ara tersebut tentu saa tidak tahan lama8 karena aringan tidak di7iksasi terlebih dahulu 0ntuk membuat sediaan rentang *ang dapat tahan lama dan dapat diamati seAaktu?Aaktu8 maka sediaan tersebut harus di7iksasi terlebih dahulu sebelum diAarnai !andari "19F&(8 men*atakan bahAa =at Aarna *ang dapat digunakan dalam membuat preparat ini antara lain hemato@ilin8 eosin8 dan meth*lene blue PeAarna hemato@ilin dengan pelarut aGuadest sangat baik untuk meAarnai inti *ang akan berAarna biru PeAarna eosin dengan pelarut al>ohol $% sangat baik untuk meAarnai sitoplasma dengan Aarna merah8 sedangkan meth*lene blue digunakan pada preparat dengan >ara meneteskan langsung ke aringan kemudian diamati di baAah mikroskop *ang mana meth*lene blue akan meAarnai butir?butir pada “mast >ell” Metode rentang uga dapat digunakan untuk tuuan sitolog* dan histologi serta uga dapat digunakan untuk tuuan sitokimiaAi seperti penelitian phosphatase dan h*aluroidase /lat dan bahan *ang digunakan untuk sediaan preparat rentang a /lat 1 ak para7in 1 buah # Seperangkat alat bedah lengkap & aAan petri 5 buah + -ampan 1 buah
' 5 $ F
Obek glass 5 buah 3arum se>ukupn*a Pipet 5 buah Mikroskop
b ahan 1 Subkutis "aringan ikat atau aringan lemak(8 mesenterium8 peri>ardium # Meth*l al>ohol & & /l>ohol "absolute8 958 9%8 F%8 $%( + ,osin ' Toluol 5 @*lol ara pengambilan : 1 Mengambil aringan segar *ang digunakan dengan menggunakan benda taam seperti arum preparat8 s>alpel8 atau pisau run>ing # Merentangkan sa*atan aringan segar pada obek glass kering & Mem7iksasi menggunakan meth*l al>ohol & selama 1?& menit + Dilanutkan dengan al>ohol absolut8 al>ohol 958 al>ohol 9%8 al>ohol F%8 al>ohol $% dengan masing?masing 1?& menit ' Dilanutkan dengan eosin 1?& menit8 al>ohol $%8 al>ohol F%8 al>ohol 9%8 al>ohol 958 al>ohol absolute8 toluol8 dan @*lol masing?masing 1?& menit 5 Menutup preparat menggunakan de>k glass $ 2alu amati di baAah mikroskop
Da7tar Pustaka
http://dokumen.tips/documents/pembatan-preparat.html https://khayasar.wordpress.com/2012/10/06/preparat-rentang/
Pe>kham8 Mi>helle#%1+ At a Glance Histologi3akarta:,rlangga
