PEMOTONGAN (MOUNTING) Pemo Pemoto tong ngan an
(mou (mount ntin ing) g)
adal adalah ah
pros proses es
pemo pemoto tong ngan an
blok blok
prep prepar arat at
deng dengan an
menggunakan mikrotom. mikrotom. Pada praktikum kemarin digunakan pemotongan dengan ketebalan 5 mikromter Sebelum melakukan pemotongan lakukan persiapan : 1. Persi Persiap apan an pis pisau au mik mikro roto tom m 2. Pers Persia iapa pan n Kaca Kaca Obj Objek ek . Persiapan Persiapan !at !aterbath erbath atau atau "adah "adah berisi air air hangat hangat dengan dengan temperatur temperatur #$%& #$%&&' %. Persi Persiap apan an seng sengke keli litt atau atau kuas kuas
eknik eknik pemotongan parain *ang mengandung preparat adalah sebagai berikut 1. Rekat Rekatkan kan blok parafin parafin yang mengand mengandun ung g prep prepar arat at pada tempat tempat du duduk duknya nya di mikrotom. empat duduk blok parain beserta blok parainn*a kemudian diletakkan
pada pemegangn*a (holder) pada mikrotom dan dikunci dengan kuat. Letak pisau mikrotom mikrotom pada tempatnya tempatnya dan atur sudut kemiringannya kemiringannya yang 2. Letak dibutuhkan. +iasan*a sudut kemiringan berkisar 2&$& derajat.
. Atur ketebalan potongan yang diinginkan , biasan*a dipakai ketebalan antara 5$# mikrometer 4. gerakk gerakkan an blok prepar preparat at ke arah arah pisau pisau sedekat sedekat mungkin mungkin dan potongl potonglah ah blok
+uang g pita pita$pi $pita ta para parain in *ang *ang a"al a"al tanpa tanpa prepara pre paratt secara secara teratur teratur dan ritmis ritmis . +uan jaringan
hingga hingga kita kita menda mendapat patkan kan potong potongan an yang yang mengan mengandu dung ng prep prepara aratt
jaringan
5. Pita parafin yang mengandung jaringan lalu diambil dengan pinset, secara hati$ hati -. Hasil potongan dimsukkan ke dalam air dingin agar jaringan dapat dengan mudah dipisahkan. etela elah h jarin jaringan gan dapat dapat dipisa dipisahka hkan n masuk masukkan kan jaring jaringan an ke air hangat hangat agar agar #. et jaringan dapat dapat memuai.
. etelah jaringan memuai ambil menggunakan objek glass yang telah di beri label
/. Setelah Setelah air kering kering dan pita pita parain telah telah melekat melekat dengan dengan kuat, simpan simpan kaca objek objek berisi jaringan berparain 1&. Periksa keadaan jaringan di ba!ah mikroskop "robek, lipat# dan simpan 0aringan di dalam inkubator sampai saatn*a untuk di"arnai.
PEWARNAAN (STAINING) Pe!arnaan adalah proses pemberian !arna pada jaringan yang telah dipotong sehi sehing ngga ga un unsu surr jari jaring ngan an menj menjad adii kont kontra rass dan dan dapa dapatt dike dikena nali li $ diam diamat atii deng dengan an mikroskop. Proses timbuln*a "arna karena terjadin*a ikatan antara molekul tertentu *ang
terdapat pada daerah dan struktur jaringan *ang tertentu. Pe"arnaan memiliki % cara yaitu pe!arnaan khusus (per"arnan untuk melihat biologis sel seperti, seperti, pe"arnaan pe"arnaan karbohodr karbohodrat, at, pe"arnaan pe"arnaan lemak dan pe"arnaan pe"arnaan imunohisto imunohistokimia) kimia) dan pe!arnaan umum (pe"arnaan untuk melihat melihat struktur, bentuk bentuk dan ukuran ukuran sel) Pe!arnaan Pe!arnaan yang digunakan digunakan dalam dalam praktiku praktikum m kemarin kemarin adalah adalah pe!arnaa pe!arnaan n yang dapat digunakan digunakan untuk me!arnai inti dan sitoplasma sitoplasma yaitu pe!arnaan hematoksilin& hematoksilin& eosin "H'#. Pada pe"arnaan digunakan 2 macam 3at "arna *aitu hematoksilin "basa#
*ang berungsi untuk me!arnai inti sel "asam# dan memberikan !arna biru "basofilik# serta eosin "asam# *ang *ang merupa merupakan kan counte countersta rstaini ining ng hematok hematoksili silin, n, diguna digunakan kan untuk untuk me!arnai sitoplasma sel "basa# dan memberikan !arna merah muda
ahapan *ang dilakukan
4eparainisasi pengeluaran parain dari jadingan dan objek glass
6ehidrasi 6ehidrasi
pemasukan pemasukan kembali kembali air ke dalam jaringan jaringan agar 3at pe"arna pe"arna *ang
digunakan dapat masuk ke dalam jaringan
Pemb Pemberi erian an 3at "arna "arna
dilak dilakuk ukan an pe"a pe"arn rnaa aan n untu untukm kme" e"ar arna naii inti inti sel sel dan dan
sitoplasma
4ehidrasi pengeluaran kembali air dari dalam jaringan
'learing
7oun 7ounti ting ng
taha tahap p pembe pemberia rian n co8e co8ersl rslip ip untu untuk k menu menutu tupi pi prep prepara aratt (dib (diban antu tu
perekat9entelan) Prosedur pe"arnaan adalah sebagai berikut
4eparainisasi dilakukan dengan merendam jaringan dalam larutn *lol ;;;, ;;, ; masing masing $5 menit, disesuaikan dengan siat dan ukuran jaringan.
6ehidrasi dilakukan dengan merendam jaringan dalam alkohol =bs ;;;, ;;, ; kemu kemudi dian an alko alkoho holl /5>, /5>, /&>, /&>, &>, &>, #&> #&> masi masing ng masi masing ng $5 $5 meni menit, t, disesuaikan dengan siat dan ukuran jaringan.
Kemu Kemudi dian an jari jaring ngan an dicu dicuci ci deng dengan an akua akuade dess sela selama ma 1& meni menitt
guna guna
men*empurnakan rehidrasi dan membersihkn jaringan
!arnai !a rnai dengan osin selama 2 menit
6endam dengan air keran selama 1& menit
Kemudian "arnai dengan eosin selama 2 menit
!arnai !a rnai dengan 7eth*len +lue hingga jaringan j aringan be"arna biru muda
Kemudian lakukan dehidrasi dengan alkohol #&>, &>, /&>, /5>, =bs 1, =bs 2, dan =bs .masing masing dilakukan dengan mengocok jaringan di dalam masing masing jaringan ?$5 kocokan.
@akukan clearing dengan *lol ;, ;;, ;;; lakikan selama 1 menit pada setiap larutan.
@alu, tutup dengan co8er glass *ang diberi etelan sebagai perekat,.
