Pembuatan Preparat Pollen dengan Metode Asetolisis

Laporan MikroteknikPage 18

LAPORAN RESMI PRAKTIKUM MIKROTEKNIK
Pembuatan Preparat Pollen dengan Metode Asetolisis
Disusun Untuk Memenuhi Ujian Kompetensi Mata Kuliah Mikroteknik
Semester V

Disusun Oleh :
Wike Trajuningtyas Oktaviana
K4312073

PENDIDIKAN BIOLOGI
FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN
UNIVERSITAS SEBELAS MARET
SURAKARTA
201
JUDUL
Pembuatan Preparat Pollen dengan Metode Asetolisis

TUJUAN
Mendapatkan soft skill tentang cara pembuatan preparat pollen dengan metode Asetolisis

ALAT DAN BAHAN
Alat
Botol Vlakon
Pipet tetes
Tabung sentrifuge
Waterbath
Kuas
Gelas ukur
Batang gelas/ spatula
Bunsen
Object glass
De glass
Mikroskop

Bahan

Pollen bunga Hibiscus rosa-sinensis, Hibiscus tiliaceus, Passiflora sp, Acacia sp, Chrysanthemum sp, Jatropha sp, Lilium sp, Bauhinia purpurea, Allamanda sp, Caesalpinia pulcherrima.
Asetat Asetat Glasial (AAG)
Asam sulfat pekat
Safranin 1% dalam aquades
Crystal violet
Aquades
Glyserin Jelly
Cutex

CARA KERJA
Hari 1:
Menyisir anther dengan menggunakan kuas kecil dan memfiksasi dengan menggunakan Asam Asetat Glasial (AAG) 45% selama 24 jam
Hari 2:
Memindah bahan ke dalam tabung sentrifuge dan mensentrifugasi dengan kecepatan 2000 rpm selama ± 10 menit.
Mengganti cairan dengan campuran AAG 45% dengan asam sulfat pekat dengan perbandingan 9:1 (asam sulfat ditambahkan setetes demi setetes ke dalam AAG).
Memanaskan tabung dalam waterbath dengan suhu 65oC selama 3 menit.
Mengambil tabung, mendiamkan sampai dingin kemudian mensentrifugasi selama dengan kecepatan 2000 rpm selama 10 menit.
Membuang cairan lalu mencuci dengan aquades, kemudian mensentrifugasi selama 3 menit dengan kecepatan 3000 rpm. Melakukan pengulangan sebanyak 2 kali.
Memisah bahan menjadi 3 tabung untuk melakukan pewarnaan menggunakan safranin, crystal violet, dan non warna.
Non warna: membuang aquades dan mengganti dengan glyserin jelly kemudian memasukkan ke dalam waterbath dengan suhu 70oC selama 5 menit. Selanjutnya melakukan mounting. Menuang bahan pada object glass, menutup dengan de glass, mengolesi tepi de glass dengan cutex bening. Mengamati di bawah mikroskop dan memberi label.
Pewarnaan safranin/ crystal violet: mengambil safranin/ crystal violet sebanyak 2 tetes dan mengencerkan dengan aquades. Kemudian mensentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit. Melanjutkan langkah kerja seperti pada preparat pollen non warna.

DASAR TEORI
Pollen merupakan gametofit jantan pada tumbuhan Gymnospermae dan Angiospermae, sedangkan spora biasanya dihasilkan tumbuhan non vaskuler seperti alga, jamur, lumut serta tumbuhan vaskuler tingkat rendah yaitu paku-pakuan. Melalui pembelahan meiosis, sel induk mikrospora membelah manjadi empat sel haploid yang disebut mikrospora atau sering disebut sebagai butir pollen (serbuk sari) dan spora (Kapp, 1969).
Walker (1975) menyatakan bahwa serbuk sari merupakan alat penyebaran dan perbanyakan generatif dari tumbuhan berbunga. Secara sitologi, serbuk sari merupakan sel dengan tiga nukleus, yang masing-masing dinamakan inti vegetatif, inti generatif I, dan inti generatif II. Sel dalam serbuk sari dilindungi oleh dua lapisan (disebut intine untuk yang di dalam dan exine yang di bagian luar), untuk mencegahnya mengalami dehidrasi. Perbedaan antara pollen monokotil dan dikotil antara lain:
Butir pollen monokotil umumnya lonjong dibandingkan dikotil.
Pada monokotil butir pollen tetrad tunggal yang biasanya tersusun dalam satu bidang, sedangkan dikotil susunannya biasaanya tetrahedral

Morfologi Umum Pollen (Sewyer, 1981)
Ilmu yang mempelajari tentang pollen dan spora disebut palinologi yang umumnya lebih terfokus pada struktur dinding (Erdtman, 1969). Selain sebagai tempat gametofit jantan dan alat penyerbukan pada tumbuhan berbunga, serbuk sari memiliki fungsi dan penting dalam beberapa bidang meliputi morfologi serbuk sari dan kaitannya dalam taksonomi, filogeni dan palinologi fosil. Beberapa karakter dari morfologi serbuk sari adalah: simetri, ukuran dan bentuk, struktur dinding serbuk sari (pollen wall), stratifikasi exine, ornamentasi exine, kerutan/alur dan lubang. (Agashe dan Caulton, 2009)
Daya tahan pollen sangat tinggi karena memiliki exine yang keras dan secara kimia tidak mudah hancur oleh aktifitas mikroba, tingkat salinitas, kondisi basah, oksigen rendah, dan kekeringan (Moore et al., 1991). Selain ukuran dan bentuk, ciri pollen adalah tipe, jumlah dan posisi apertura serta arsitektur dinding. Ciri morfologi pollen tersebut semakin meningkat penggunaannya dalam taksonomi, terutama untuk mengoreksi kembali hubungan kekerabatan antara satu tumbuhan dengan tumbuhan lainnya dalam kelompok-kelompok takson (Erdtman, 1969).
Berbagai variasi pollen dapat digunakan untuk mengetahui arah evolusi suatu tumbuhan (Moore etal., 1991), sifat pollen yang mudah melekat pada berbagai benda membantu dalam penyelidikan kriminal, sedangkan kandungan protein, karbohidrat dan zat-zat lainnya yang tinggi mempengaruhi kualitas madu (Bhojwani dan Bhatnagar, 1978). Hasil penelitian menunjukkan pula bahwa pollen adalah penyebab utama alergi pernafasan. Oleh karena itu data tentang pollen diperlukan untuk menunjang berbagai disiplin ilmu diantaranya taksonomi, sejarah vegetasi dan evolusi flora (Moore etal., 1991). Selain itu juga dapat menunjang beberapa data antara lain kriminologi, medis dan melittopalinologi yaitu studi kandungan pollen dalam madu (Bhojwani dan Bhatnagar, 1978).
Pollen memiliki dinding yang berfungsi untuk melindungi inti sperma tumbuhan dari proses desikasi dan iradiasi selama perpindahan dari antera menuju ke stigma. Butir pollen yang kecil dilapisi oleh lilin dan protein yang berupa elemen scluptura (Davis, 1999). Menurut Faegri dan Iversen (1989) pollen mempunyai dua lapis dinsing, yaitu lapisan dalam (intine) dan lapisan luar (exine). Exine tersusun dari sporopollenin sebagai komponen utamanya, yaitu berupa substansi keras yang berfungsi memberikan daya tahan yang kuat kepada dinding butir pollen. Sedangkan lapisan intine merupakan dinding pektoselulosa tipis yang mengelilingi butir pollen yang masak (Fahn, 1991).
Sifat pollen yang penting dalam mempelajari pollen yaitu unit pollen, polaritas pollen, simetri pollen, bentuk pollen, tipe dan jenis apertura serta ornamen exine (Erdtman, 1952). Sebagian besar tanaman memiliki bentuk unit pollen monad. Pada beberapa genus ada yang tetrad, dyad, dan polyad.(Faegri dan Iversen, 1989). Apertura adalah suatu penipisan atau modifikasi dinding spora atau pollen yang berfungsi untuk jalan keluar isi spora atau pollen (Davis, 1999).
Bentuk polen
Perbandingan P/E
Peroblate
<4/8
Oblate
4/8 – 6/8
Subspheroidal
6/8 – 8/6
Subspheroidal
6/8 – 7/8
Oblate spheroidal
7/8 – 8/8
Prolate spheriodal
8/8 – 8/7
Subprolate
8/7 – 8/6
Prolate
8/6 – 8/4
Perprolate
>8/4

Ornamentasi/ hiasan/ sclupture
Dinding luar polen (eksin), terdiri dari dua lapisan, yakni lapisan luar disebut ekteksin dan lapisan dalam disebut endeksin. Dinding polen (eksin) yang tersimpan menjadi fosil. Di bagian luar lapisan eksin tersebut terdapat hiasan (ornamentation/sclupture) yang penting untuk diskripsi polen. Moore dan Webb (1978), membagi bentuk ornamentasi sbb:
Psilate : bila permukaan polen halus
Verrucate : bila polen atau spora mempunyai tonjolan seperti kutil, biasanya tonjolan lebarnya lebih besar dari tingginya
Echinate : bila ornamentasinya menyerupai duri
Striate : bila ornamentasinya memanjang dengan pola parallel
Reticulate : polen atau spora memiliki pola ornamentasi seperti jarring-jaring
Rugulate : apabila elemen ornamentasinya memanjang ke samping dan tidak teratur
Clavate : tonjolan ornamentasinya melebar dibangian pangkal
Perforate : ornamentasinya berupa lubang-lubang dengan diameter kurang dari satu micrometer
Gemmete : ornamentasinya baik lebar maupun tinggi tonjolannya sama ukurannya dan mengkerut pada bagian dasarnya
Scabrate : memiliki proyeksi elemen dengan diameter lebih dari satu micrometer dan menyerupai granua sehingga disebut juga granulate

DATA PENGAMATAN
No
Nama Preparat
Gambar Preparat

Pollen Jatropha sp (40x) non warna

Butir pollenButir pollen
Butir pollen
Butir pollen

Pollen Acacia sp (20x)
Butir pollen
Butir pollen

Pollen Acacia sp (40x)
Butir pollen
Butir pollen

Pollen Allamanda 1
Butir pollen
Butir pollen

Pollen Allamanda 2
Butir pollen
Butir pollen

Pollen Allamanda 3
Butir pollen
Butir pollen

Pollen Bauhinia purpurea
Butir pollen
Butir pollen

Pollen Caesalpinia pulcherima
Butir pollen
Butir pollen

Pollen Chrysanthemum no colour (40x)
Butir pollen
Butir pollen

Pollen Hibiscus rosa-sinensis Safranin (40x)
Butir pollen
Butir pollen

Pollen Hibiscus rosa-sinensis
Butir pollen
Butir pollen

Pollen Hibiscus tiliaceus (40x) Safranin
Butir pollen
Butir pollen

Pollen Lilium sp (40x)
Butir pollen
Butir pollen

Pollen Lilium sp (40x)
Butir pollen
Butir pollen

Pollen Passiflora sp (40x) Crystal violet
Butir pollen
Butir pollen

Pollen Passiflora sp (40x) non warna
Butir pollen
Butir pollen

PEMBAHASAN

Praktikum dengan judul "Pembuatan Preparat Pollen dengan Metode Asetolisis" ini bertujuan untuk mendapatkan soft skill tentang cara pembuatan preparat pollen dengan metode Asetolisis. Prinsip kerja pada praktikum ini adalah dengan melakukan penyisiran anther dengan menggunakan kuas kecil dan memfiksasi dengan menggunakan Asam Asetat Glasial (AAG) 45% selama 24 jam pada hari pertama. Selanjutnya pada hari kedua memindahkan bahan ke dalam tabung sentrifuge dan mensentrifugasi dengan kecepatan 2000 rpm selama ± 10 menit. Selanjutnya, mengganti cairan dengan campuran AAG 45% dengan asam sulfat pekat dengan perbandingan 9:1 (asam sulfat ditambahkan setetes demi setetes ke dalam AAG). Memanaskan tabung dalam waterbath dengan suhu 65oC selama 3 menit. Kemudian mengambil dan mendiamkan tabung sampai dingin yang dilanjutkan dengan mensentrifugasi selama dengan kecepatan 2000 rpm selama 10 menit. Membuang cairan lalu mencuci dengan aquades dan mensentrifugasi selama 3 menit dengan kecepatan 3000 rpm yang dilakukan dengan 2 kali pengulangan. Memisah bahan menjadi 3 tabung untuk melakukan pewarnaan menggunakan safranin, crystal violet, dan non warna. Pewarnaan non warna dilakukan dengan membuang aquades dan mengganti dengan glyserin jelly kemudian memasukkan ke dalam waterbath dengan suhu 70oC selama 5 menit. Selanjutnya melakukan mounting dengan cara menuang bahan pada object glass, menutup dengan de glass, mengolesi tepi de glass dengan cutex bening. Mengamati di bawah mikroskop dan memberi label. Sedangkan pada pewarnaan safranin/ crystal violet dilakukan dengan mengambil safranin/ crystal violet sebanyak 2 tetes dan mengencerkan dengan aquades. Kemudian mensentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit. Melanjutkan langkah kerja seperti pada preparat pollen non warna.
Metode yang biasa digunakan dalam mengamati preparat pollen ialah dengan metode asetolisis. Asetolisis adalah salah satu metode pembuatan preparat serbuk sari yang menggunakan prinsip melisiskan dinding sel serbuk sari dengan asam asetat glasial serta asam sulfat pekat sebagai bahan kimia fiksatif. Hal ini bertujuan untuk mendapatkan hasil pengamatan morfologi dinding serbuk sari ornamentasi dari serbuk sari tersebut. Serbuk sari yang digunakan dalam pembuatan preparat haruslah merupakan serbuk sari yang matang. Serbuk sari yang matang dapat ditandai dengan sudah tidak ada air dalam serbuk sari tersebut, jika serbuk sari dipatahkan maka hanya akan seperti tepung saja. (Handari, 2011). Langkah-langkah dari proses asetolisis ini antara lain adalah fiksasi, pemanasan, pencucian, pewarnaan (staining), penutupan (mounting), dan labelling. (Suntoro, 1983)
Langkah pertama yaitu fiksasi serbuk sari. Fiksasi adalah suatu usaha untuk mempertahankan elemen-elemen sel atau jaringan, dalam hal ini serbuk sari agar tetap pada tempatnya, dan tidak mengalami perubahan bentuk maupun ukuran dengan media kimia sebagai fiksatif. Fiksasi umumnya memiliki kemampuan untuk mengubah indeks bias bagian-bagian sel, sehingga bagian-bagian dalam sel tersebut mudah terlihat di bawah mikroskop. Tetapi tidaklah berarti banyak, karena tanpa diwarnai bagian-bagian jaringan tidak akan dapat jelas dibedakan satu sama lain, dan untungnya fiksatif mempunyai kemampuan untuk membuat jaringan mudah menerap zat warna. Proses fiksasi ini dilakukan dengan tujuan untuk:
Menghentikan proses metabolisme dengan cepat
Mengawetkan elemen sitologis dan histologis
Mengawetkan bentuk yang sebenarnya
Mengeraskan atau memberi konsistensi material yang lunak biasanya secara koagulasi, dari protoplasma dan material-material yang dibentuk oleh protoplasma (Anonim, 2010)
Ada dua macam fiksatif, yaitu fiksatif sederhana dan fiksatif majemuk atau campuran. Fiksatif sederhana merupakan larutan yang di dalamnya hanya mengandung satu macam zat saja, sedangkan fiksatif majemuk atau campuran adalah larutan yang di dalamnya mengandung lebih adri satu macam zat. Fiksatif yang digunakan serbuk sari dalam pembuatan preparat ini ada satu bahan utama yaitu asam asetat glasial dan satu bahan tambahan, yaitu H2SO4 (asam sulfat) pekat. Kedua fiksatif tersebut termasuk dalam fiksatif sederhana. Asam asetat adalah cairan yang tidak berwarna dengan bau yang tajam. Sedangkan asam asetat glasial adalah asam asetat yang padat dan murni serta dapat mencair pada suhu 117°C. Asam asetat dapat bercampur dengan alkohol dan air. Fiksatif ini dibuat dengan jalan distilasi dari kayu dalam ruang hampa udara. Hasil distilasi ini adalah piroligneous, dimana piroligneous ini adalah campuran yang mengandung asam asetat yang kemudian asam asetat ini kemudian dipisahkan dari campurannya (Anonim, 2010).
Asam asetat dapat mengendapkan nukleoprotein, tetapi melarutkan histon dalam nukleus, tidak melarutkan lemak, juga bukan pengawet karbohidrat. Daya penetrasinya cepat, tetapi dapat membengkakkan jaringan, ini disebabkan oleh bertambahnya diameter serabut-serabut dalam jaringan tersebut. Asam asetat memiliki dua fungsi dalam sitologi, yaitu mencegah pengerasan dan mengeraskan kromosom. Dalam konsentrasi tinggi, asam asetat dapat menghancurkan mitokondria dan apparatus golgi (Anonim, 2010).
Setelah fiksasi minimal 24 jam, selanjutnya yang dilakukan adalah sentrifuge serbuk sari dan fiksatif dengan kecepatan 2000 rpm selama 10 menit. Tujuan dari sentrifuge ini adalah memisahkan serbuk sari dan asam asetat glacial, karena serbuk sari berukuran kecil dan bercampur dengan asam asetat glacial sehingga serbuk sari susah untuk diambil, maka diperlukan sentrifuge. Dari hasil sentrifuge ini akan terbentuk supernatan asam asetat dan endapan serbuk sari. Asam asetat kemudian dibuang, sehingga didapatkan serbuk sari yang mengendap di dasar tabung sentrifuge saja. Pembuangan asam asetat ini perlu kehati-hatian agar serbuk sari yang mengendap di dasar tabung tidak menyebar kembali dalam larutan asam asetat dan akan ikut terbuang (Anonim, 2010).
Larutan campuran antara H2SO4 pekat dan asam asetat glasial dengan perbandingan 1:9 pada tabung sentrifuge yang berisi endapan serbuk sari. Penambahan larutan kemudian diikuti dengan pemanasan campuran larutan tersebut di dalam waterbath (penangas air) di atas lampu spiritus. Pemanasan ini dilakukan hingga air dalam penangas mendidih. Pemanasan larutan ini bertujuan untuk mempercepat terjadinya reaksi yang terjadi pada serbuk sari. Sedangkan penambahan H2SO4 dan asam asetat glasial dengan perbandingan 1:9 ini berfungsi untuk untuk melisiskan selulosa pada dinding serbuk sari (asetolisis), sehingga setelah dibuat preparat, morfologi exine serbuk sari akan terlihat lebih jelas dibandingkan dengan sebelum asetolisis. Selain itu, asetolisis ini juga berfungsi seperti proses fiksasi, yaitu memelihara atau mempertahankan struktur dari serbuk sari (Anonim, 2010).
Setelah pemanasan dalam waterbath selesai, serbuk sari dalam larutan akan berubah warna menjadi agak kecoklatan. Serbuk sari dan larutan yang dipanaskan ini kemudian didinginkan sejenak. Setelah dingin, langkah selanjutnya adalah melakukan sentrifuge untuk mendapatkan serbuk sari yang telah terasetolisis, memisahkannya dari larutan asam asetat glasial dan H2SO4 pekat. Sentrifuge dilakukan selama 10 menit dan dengan kecepatan 2000 rpm. Hasil sentrifuge adalah supernatan di bagian atas tabung sentrifuge, yaitu larutan asam asetat glasial dan asam sulfat pekat serta endapan di dasar tabung, yaitu serbuk sari yang telah terasetolisis. Supernatan kemudian dibuang secara hati-hati agar serbuk sari yang sudah mengendap tidak menyebar kembali kedalam larutan dan ikut terbuang (Anonim, 2010).
Pencucian serbuk sari dengan aquades sebanyak dua kali. Pencucian dilakukan dengan penambahan aquadesh ke dalam tabung sentrifuge yang berisi serbuk sari kemudian melakukan sentrifuge untuk mendapatkan serbuk sari yang sudah bersih. Perlakuan tersebut dilakukan dua kali untuk mendapatkan serbuk sari yang bersih tanpa ada sisa zat kimia seperti fiksatif dalam serbuk sari yang akan dibuat preparat (Anonim, 2010).
Pewarnaan adalah untuk meningkatkan kontras warna serbuk sari dengan sekitarnya sehingga memudahkan dalam pengamatan serbuk sari di bawah mikroskop. Pewarnaan dapat memperjelas bentuk ornamen dinding sel serbuk sari (pollen) serta mempermudah mengetahui ukuran serbuk sari. Safranin adalah suatu klorida dan zat warna basa yang kuat. Zat warna ini tergolong dalam zat warna golongan azine, yaitu zat warna yang mengandung cincin orthoquinonoide yang dihubungkan dengan bentuk cincin lainnya melalui 2 atom N. Sebenarnya, zat warna ini akan mewarnai dengan sangat baik bila jaringan difiksasi dengan larutan fleming. Sedangkan Crystal violet merupakan staining jar berwarna ungu yang mampu mewarnai bagian-bagian tertentu dari sel dan jaringan. Sebenarnya Crystal violet adalah senyawa pewarna untuk kromosom yang bukan merupakan barang ekonomis sehingga penggunaannya pun harus seefisien mungkin. Crystal violet mudah terganggu dengan adanya zat-zat asam kuat lemah atau pun kuat. Dalam pembuatan preparat serbuk sari, pewarnaan serbuk sari menggunakan safranin hasilnya lebih baik. Dalam proses pewarnaan, safranin dilarutkan dalam sedikit aquades, hal ini masih dilakukan dalam tabung sentrifuge. Setelah pewarnaan serbuk sari, kemudian dilakukan sentrifuge kembali yang ditujukan untuk mendapatkan serbuk sari yang terwarnai dengan memisahkannya dengan larutan safranin dan aquades. Sentrifuge dilakukan selama 10 menit dan dengan kecepatan 2000 rpm. Hasil dari sentrifuge adalah supernatan berupa larutan safranin dan aquades yang selanjutnya dibuang dan endapan berupa serbuk sari di dasar tabung yang selanjutnya digunakan untuk pembuatan preparat serbuk sari (Anonim, 2010).
Mounting atau penutupan ini merupakan langkah penting dalam pembuatan preparat, dimana serbuk sari diambil dari dasar tabung sentrifuge kemudian diletakkan pada salah satu sisi object glass. Kemudian, di masing-masing sisi dari serbuk sari yang diletakkan ini disusun empat potongan kecil parafin. Selanjutnya di atas serbuk sari diletakkan potongan lembaran gliserin jelli. Susunan tersebut perlu dipertimbangkan peletakannya agar dapat dihasilkan preparat yang rapi dan proporsional. Setelah penyusunan gliserin jelli, parafin, dan serbuk sari selesai, langkah berikutnya dalam mounting adalah penutupan susunan tersebut dengan cover glass. Pemanasan ditujukan untuk mencairkan parafin dan gliserin jelli agar dapat menutup serbuk sari, sehingga dihasilkanlah preparat serbuk sari yang tahan dalam selang beberapa waktu (Anonim, 2010).
Serbuk sari diambil dari bunga yang sudah mekar lalu dibuat preparat dengan metode asetolisis dan pewarnaan safranin 1%. Data dianalisis secara deskriptif meliputi unit serbuk sari, polaritas, simetri, ukuran, bentuk, apertura, dan bentuk permukaan serbuk sari. Serbuk sari mempunyai kesamaan yaitu unit serbuk sari tipe monad, polaritas tipe isopolar, radial simetri, jumlah apertura 6 dengan tipe colpate yang terletak secara ekuatorial (stephano), dan permukaan serbuk sari berbentuk reticulate. Pengamatan preparat dilakukan dengan mikroskop perbesaran 20x - 40x dan kemudian hasil gambar yang diperoleh difoto menggunakan mikroskop.

Preparat pollen yang berhasil diamati diantaranya:
Preparat Pollen Jatropha sp
Perbesaran 40x (non warna)
sitoplasmasitoplasmaIntineIntineExineExine
sitoplasma
sitoplasma
Intine
Intine
Exine
Exine

Bunga jantan dari Jatropha sp memiliki 10 stamen yang masing-masing terdiri dari 4 mikrosporangia. Struktur penyusun dinding anter adalah berupa tipe dikotil, yang tersusun dari lapisan epidermis, endotesium, lapisan tengah, dan kelenjar tapetum. Pembelahan sitokinesis yang terjadi pada proses meiosis merangsang pembentukan tetrad tetrahedral. Butir pollen dewasa terdiri dari dua sel pada bagian antesis dengan bentuk sel generatif yang berupa spindel.
Jatropha sp adalah tumbuhan monoecious atau berumah dua yang memiliki 10 buah tetrasporangia pada tiap-tiap bunga jantannya. Setiap stamen terdiri dari empat mikrosporangia yang tersimpan dalam dua ruang theca. Dinding anter muda terdiri dari epidermis, endotesium, dua sampai tiga lapisan tengah, dan satu lapis sel kelenjar tapetal yang masing-masing memiliki dua sampai empat buah nuklei (inti sel). Sedangkan pada anter dewasa dindingnya tersusun atas lapisan epidermisnya tersusun oleh jaringan yang berserabut dengan endotesium yang lebih tebal. Butir pollen dewasa terdiri dari dua sel di bagian antesis dan sel generatifnya berbentuk seperti spindel. Pada pollen dewasa terlihat bagian exine yang lebih tebal dari bagian intine. Exine tersusun dari sporopollenin sebagai komponen utamanya, yaitu berupa substansi keras yang berfungsi memberikan daya tahan yang kuat kepada dinding butir pollen. Sedangkan lapisan intine merupakan dinding pektoselulosa tipis yang mengelilingi butir pollen yang masak. (Fahn, 1991)
Berdasarkan jurnal Palynological Study Of Soil Sample Collected From An Archaeological Site (Gulabi Bagh) In Lahore, Pakistan disebutkan bahwa Palynomorph dari Jathropa curcas adalah sebagai berikut: Oblong, apertura non-porate, memiliki kemungkinan colpate, colporate, foraminate atau rugate. Terdiri dari 2 sel. Ukuran pollen adalah 31,1μm dan heteropolar.
Selanjutnya berdasarkan jurnal Palynological Studies In Some Jatropha Species, butir pollen pada takson ini adalah oblate, spherical, omniaperturate, dilapisis jaringan tebal dengan struktur clivate, yang membatasi secara reticulate untuk membentuk struktur crotonoid. Exine biasanya dilapisi dengan struktur globular. Ukuran rata-rata dari butir pollen yang berhasil ditemukan adalah 38 μm x 39.26 μm. Ornamental bertipe psilate.

Preparat Pollen Acacia sp
Perbesaran 20x (Safranin)
sitoplasmasitoplasmaexineexineTectumTectumOrnamenOrnamenintineintine
sitoplasma
sitoplasma
exine
exine
Tectum
Tectum
Ornamen
Ornamen
intine
intine

sitoplasmasitoplasmaTectumTectumIntineIntineExineExineOrnamenOrnamen
sitoplasma
sitoplasma
Tectum
Tectum
Intine
Intine
Exine
Exine
Ornamen
Ornamen
Acacia sp termasuk ke dalam famili Mimosaceae yang tersebar luas di wilayah tropis dan sub tropis. (Elias, 1981). Butir pollen dari Acacia telah dipelajarai oleh beberapa peneliti. Boulos L, 1983; Elias (1981) menjelaskan bahwa karakteristik pollen yang terlihat adalah tepat berupa bentuk individual unit, sebagai tetrad, octad, atau polyad, yang kebanyakan terdiri dari 16 dan 32 monad. Guinet (1981) menerangkan bahwa sebagian besar pola struktural dari butir pollen adalah granular dengan lubang apertura yang biasa, meskipun begitu butir pollen dengan colporate dan extraporate apertura dapat terlihat, namun colpate apertura tidak terdapat pada butir pollen Mimosoidae.
Menurut Jumah (1991, 1996) yang berhasil melaporkan bentuk polyad dari 16 butir pollen pada Acacia karroo; A. nilotica var. adansoni, A. nilotica var. tomentosa and Acacia polyacantha sub sp. campylacantha. Guinet (1990) menekankan bahwa struktur pollen simetris ditemukan pada beberapa Mimoseae dan Acacia.
Kordofani dan Ingrouille (1992) yang telah meneliti 14 spesies pada Acacia melaporkan bahwa jumlah butir pollen pada setiap polyad adalah sebanyak 16 buah kecuali pada satu spesies yang memiliki 32 buah butir pollen pada setiap polyad. Spesies dari Acacia memiliki karakteristik berupa butir pollen yang dilengkapi dengan colpi dengan bentuk Y dan H yang terlihat pada bagian sentral dan periferal dari butir pollen yang didukung oleh pori. Karakteristik yang telah dipelajari ini digunakan untuk mengidentifikasi spesies-spesies pada Acacia. (Caccavari and Dome, (2000). Hasil ini sesuai dengan penelitian dari pollen dengan jumlah 16 atau 32 monad yang telah dilakukan. (Elias 1981)
Berdasarkan jurnal Berdasarkan jurnal Palynological Study Of Soil Sample Collected From An Archaeological Site (Gulabi Bagh) In Lahore, Pakistan, diketahui bahwa palynomorph dari Acacia sp adalah sebagai berikut: Polyad dengan jumlah butir pollen sebanyak 16, 8 butir pollen terletak di tepi dan 8 butir yang lain berada di tengah yang terbagi menjadi dua bagian, dimana tiap bagian memiliki 4 butir pollen, ukuran sedang hingga besar. Individual sel berbentuk subglobose. Tipe ornamen verrucate.
Di bagian tepi dan kotak di bagian tengah, butir pollen memiliki tipe 3 porate, prolate menuju subspherical permukaan pada bagian periferal melingkar butir pollen. Prilate memiliki tipe granulate, testat, memiliki ukuran pori yang berbeda, diameter pori 1.8μm, ukuran periferal butir pollen 8.4μm. Heteropolar, dengan tebal exine 2.8μm.

Preparat Pollen Allamanda
Perbesaran 40x (Crystal violet)

OrnamenOrnamenAperturaAperturaSitoplasmaSitoplasmaIntineIntineExineExine
Ornamen
Ornamen
Apertura
Apertura
Sitoplasma
Sitoplasma
Intine
Intine
Exine
Exine
SitoplasmaSitoplasmaAperturaAperturaIntineIntineOrnamenOrnamenExineExine
Sitoplasma
Sitoplasma
Apertura
Apertura
Intine
Intine
Ornamen
Ornamen
Exine
Exine
IntineIntineAperturaAperturaSitoplasmaSitoplasmaExineExineIntineIntine
Intine
Intine
Apertura
Apertura
Sitoplasma
Sitoplasma
Exine
Exine
Intine
Intine

Allamanda sp ermasuk ke dalam famili Apocynaceae. Morfologi butir pollen yang berhasil diidentifikasi adalah prolate, tricolporate, isopolar, radial symmetry dan tectum dengan bentuk granulate prolate, butir pollen sangat jarang berbentuk bulat sempurna. Spesies dengan butir pollen yang panjang dan lebar merupakan salah satu mekanisme adaptasi untuk mengefektifkan persebarannya oleh angin. Semua spesies Allamanda memiliki tipe butir pollen monad dan bebas. Tipe ornamen psilate.
Berdasarkan jurnal Palynology of Cultivated Plant Species at Yala Rajabhat University, Thailand, diketahui hasil dari penelitian palynology dari Allamanda sp adalah sebagai berikut: rasio P/E : 1.61, ukuran garis bujur (Polar) 134.40(138.30)142.20 μm dan diameter garis tengah (Equator) 85.80(85.90)86.00 μm. Morfologi pollen prolate, tricolporate, isopolar, simetri radial dengan tipe tectum granulate.

Preparat Pollen Bauhinia purpurea
SitoplasmaSitoplasmaaperturaaperturaOrnamenOrnamenintineintineexineexine
Sitoplasma
Sitoplasma
apertura
apertura
Ornamen
Ornamen
intine
intine
exine
exine
aperturaapertura
apertura
apertura

Tipe Pollen dari Bauhinia adalah mempunyai tectate exine dan biasanya terdapat pada monad. Tectum ini dapat memperlihatkan permukaan micro-reticulate, micro-striate, micro-verrucate, atau micro-rugulate atau kombinasi dari bentuk-bentuk tersebut. Karakter pollen yang berhasil diamati selanjutnya dari genus Bauhinia adalah gemmae dan verrucae yang memiliki beberapa ukuran dan pola distribusi pada tectum, sebagai tambahan untuk mengorganisasi reticulum.
Ferguson dan Banks (1984) mengutip kejadian pada tetrad tetrahedral pada Bauhinia dengan perforate tectum dan verrucae berukuran kecil yang melekat pada dinding dari butir pollen. Pada beberapa penelitian ditemukan keanekaragaman morfologi pada butir pollen genus Bauhinia yang memungkinkan untuk dipisahkan berdasarkan penelitian secara filogenetik dan taksonomi pada tingkat genus. Kebanyakan spesies dari Bauhinia menunjukkan exine yang homogeneous (homogen) dengan kolumela yang tipis. Sedangkan tipe butir pollen colpate adalah yang paling sering ditemukan pada spesies Bauhinia. Pada penelitian baru-baru ini verrucae, gemmae, dan clavae sebagai ornamen exine menjadi sorotan dalam mempelajari morfologi dari butir pollen pada Bauhinia.

Preparat Pollen Caesalpinia pulcherrima
aperturaaperturaPerbesaran 40x
apertura
apertura

sitoplasmasitoplasmaOrnamenOrnamenintineintineexineexine
sitoplasma
sitoplasma
Ornamen
Ornamen
intine
intine
exine
exine
Karakter umum pollen dari famili Caesalpinioideae yaitu memiliki butir pollen yang biasanya simetri radial, isopolar, oblate-spheroidal sampai prolate-spheroidal, namun jarang dengan bentuk sub-prolate, dan tricolporate. Pada lapisan exine, sexine terkadang bisa lebih tebal atau lebih tipis dibandingkan nexine, tetapi jarang ditemukan keduanya memiliki ketebalan yang sama. Bagian tectum tersusun dari bentuk reticulate menuju rugulate atau fossulate-foveolate, dan paling sering adalah bentuk striate. Kunci determinasi untuk tipe pollen Caesalpinia pulcherrima adalah adanya perbedaan tekstur dari apocolpium dan mesocolpium. Tipe pollen ini disebut sebagai tipe pollen 2. Kelas pollen yang termasuk di dalamnya adalah tricolporate, zonoaperturate. Bentuk pollen dari Caesalpinia pulcherrima yang berhasil diamati adalah termasuk prolate-spheroidal. Apertura pollen berupa ectoaperture-colpi medium, para syncolpate. Endoaperture lalongate, atau berbentuk kurang lebih seperti lingkaran. Pada lapisan exine, sexine lebih tebal dibandingkan pada nexine. Ornamen pollen Caesalpinia pulcherrima berupa tectum yang tersebar secara reticulate dengan perbedaan pada batas colpal, dan apocolpium ditemukan dengan bentuk reticulate yang baik. Tipe ornamen psilate.
Berdasarkan penelitian dalam jurnal Pollen Flora of Pakistan - X. Leguminosae (Subfamily:Caesalpinioideae) dilakukan pengukuran pada butir pollen Caesalpinia pulcherrima dengan rincian sebagai berikut:
Panjang potongan membujur (Polar) berkisar 52.11 (58.8 ±
0.13) 59.9 μm
Diameter tengah (Equator) sekitar 51.11 (57.1
± 1.41) 58.27 μm
Panjang Colpus berkisar 39.11 (50.12 ± 1.94)
52.12 μm
Panjang Mesocolpium berkisar 38.11 (49 ± 0.22)
50.21 μm.
Bentuk/tipe pollen syncolpate
Tebal exine kurang lebih 2.11 μm
Pollen tipe 2 seperti yang dimiliki oleh Caesalpinia pulcherrima dicirikan dengan adanya butir pollen parasyncolpate, dengan perbedaan bentuk antara apocolpium dan mesocolpium. Graham dan Baker (1981), menggambarkan palynology dari subfamili Caesalpinioideae memiliki hubungan didalam klasifikasi famili mereka.
Berdasarkan jurnal A Palynological Study Of Some Cultivated Trees From Karachi dijelaskan bahwa tipe apertura butir pollen Caesalpinia pulcherrima adalah prolate, tricolporate, triangular, panjang colpi 39.9 (45.78) 52.5μm dan memiliki lebar 14.7 (20.58) 25.2μm, membran colpal reticulate. Mesocolpium 23.1(29.61) 33.6μm. Apocolpium 54.6 (58.59) 63μm. Tebal exine 2.1(2.31) 3.15μm. Sexine lebih tebal daripada nexine. Tectum bertipe reticulate-rugulate.

Preparat Pollen Chrysanthemum sp
sitoplasmasitoplasmaPerbesaran 40x (non warna)
sitoplasma
sitoplasma

aperturaaperturaOrnamen (spina)Ornamen (spina)exineexineintineintine
apertura
apertura
Ornamen (spina)
Ornamen (spina)
exine
exine
intine
intine
Berdasarkan penelitian yang dipublikasikan pada jurnal Pollen Morphology Of Selected Bee Forage Plants diketahui bahwa butir pollen pada Chrysanthemum sp memiliki bentuk exine reticulate, porate, spheroid, spinolous, dengan bentuk simetri radial. Sedangkan berdasarkan jurnal Palynocontents of Bee-Collected Pollen Loads of Autumn Season in Bhimal, India ukuran butir pollen pada Chrysanthemum adalah sekitar 33 x 34 μm, dengan tipe apertura prolate-spheroidal, memiliki 3-zonocolporate. Endocolpium bertipe lalongate, oval dengan ukuran 7 x 3 μm. Ketebalan exine 9 μm. Dibedakan pada bagian zona akar bawah dan zona kolom distal, permukaan butir pollen berupa spinate dan memiliki spina sepanjang 6 μm. Tipe ornamen echinate.

Preparat Pollen Hibiscus rosa-sinensis
Echini/ spina (ornamen)Echini/ spina (ornamen)intineintineexineexine
Echini/ spina (ornamen)
intine
intine
exine
exine

Echini/ spina (ornamen)Echini/ spina (ornamen)intineintineexineexine
intine
intine
exine
exine
Berdasarkan jurnal Palynological Study Of Some Cultivated Species Of Genus Hibiscus From North West Frontier Province (N.W.F.P.) Pakistan diketahui bahwa butir pollen pada Hibiscus rosa-sinensis memiliki bentuk pantoporate, spherical menuju globose, isopolar, menunjukkan bentuk simetri radial pada potongan membujur dan bilateral pada potongan melintang. Pollen berbentuk oval hingga bulat. Dinding serbuk sari terdiri dari dua lapisan, yaitu exine (lapisan luar) tersusun atas sporopolenin, dan intine (lapisan dalam) yang tersusun atas selulosa. Struktur dinding serbuk sari, khususnya bagian exine, merupakan salah satu karakter yang digunakan dalam identifikasi. Struktur halus exine dapat dibedakan menjadi tiga tire, yaitu: tektat, semitektat, dan intektat. Tipe ornamen exine adalah echinate.
Setyowati (2008) melaporkan 9 species dari familia Asteraceae memiliki persamaan pada sifat unit serbuk sari, simetri, apertura, ukuran dan ornamentasinya, dan perbedaannya terletak pada bentuk dan panjang papila serbuk sari. Aprianty dan Kriwiyanti (2007) melaporkan bahwa morfologi serbuk sari Kembang sepatu (Hibiscus rosa-sinensis L.) dengan 10 warna mahkota yang berbeda menunjukkan variasi dari ukuran panjang aksis polar dan diameter bidang ekuatorial kemudian digolongkan menjadi kelas prolat sferoidal (8 tanaman) dan kelas oblat sferoidal (2 tanaman) berdasarkan bentuk serbuk sarinya.
Dari gambar diatas dapat kita lihat bentuk pollen Hibiscus rosa-sinensis yang berwarna merah keunguan. Ukuran butir pollen pada genus Hibiscus umumnya berkisar 80 - 180 μm. Menurut Apriyanty dan Kriswiyanti (2008), Hibiscus rosa-sinensis merah memiliki panjang polar 106,09 ±2,96 μm dan panjang equatorial 106,81 ±2,92 μm, ukuran kelas oblat sferoidal, dan tipe apertura berupa porate dan ornamentasi ekinat. Ukuran panjang pollen Kembang Sepatu dengan sepuluh warna bunga berbeda berkisar antara 4 μm sampai 15 μm dengan diameter antara 89,66 μm sampai 117, 42 μm. Sesuai hasil penelitian Pudjoarinto (1995) yang mendapatkan perbedaan ukuran panjang pollen Hibiscus rosa-sinensis antara 9 μm sampai 15 μm dengan diameter antara 95,10 μm sampai 95,10 μm (warna mahkota tidak disebutkan).
Jadi dapat dikatakan bahwa antara satu jenis tumbuhan dengan jenis tumbuhan yang lain baik yang termasuk pada satu marga yang sama terletak pada ukuran butir pollen. Hasil penelitian dari Bibi, Hussain dan Akhtar (2008), ditemukan bentuk pollen dari Hibiscus rosa-sinensis hasil SEM (scanning electron microscop) yang mirip dengan hasil praktikum kali ini, menggambarkan ukuran pollen sebagai alat untuk memisahkan spesies dan itu terbukti dari temuan yang mengakibatkan diferensiasi kultivar yang berbeda dari Hibiscus rosa-sinensis secara taksonomi.
Pada pengamatan pollen Hibiscus rosa-sinensis terdapat struktur echinate atau duri dengan bulbous atau swollen apex. Tectum menunjukkan bentuk seperti pegunungan and permukaan cukup datar tapi tidak menyerupai granulate atau punctuate. Penelitian Palinologi dari famili Malvaceae ditemukan karakter serbuk sari stenopalynousi yang kurang lebih kurang seragam mengkonfirmasi temuan ini. Culhane et al., (1988). Rincian pollen umumnya radial simetris, apolar, pantoporate atau triporate zonoaperturate. Pada tectum terdapat echinate atau duri yang seragam, terdapat pori halus sederhana atau belang-belang untuk pembutiran dengan scabrae di antara duri. (Perveen 1994).
Temuan ini sesuai dengan pernyataan EI Naggar (2004) bahwa serbuk sari dalam Malvaceae biasanya berbentuk bola atau bulat dalam garis dan colporate atau porate dengan arca echinate. Duri yang sama rata di atas permukaan bijian dan beragam dalam panjang, bentuk, kepadatan dan puncak yang bervariasi dari tajam, bulat tumpul dan bulat hingga bercabang.
Mohammad et al. (1996) menjelaskan bahwa ukuran pollen merupakan alat untuk memisahkan spesies dan taksonomi yang dibuktikan dari penemuan diferensiasi kultivar yang berbeda Hibiscus rosa-sinensis. Tahavi (2000) berpendapat bahwa pollen Hibiscus adalah yang terbesar di antara semua generaKeluarga. Pollen morfologi 4 spesies milik 2 genera dari famili Malvaceae dari Lahore diperiksa olehnya. Tahavi (2000) menjelaskan bahwa morfologi polen dalam famili tersebut relatif seragam. Rincian serbuk sari umumnya radial simetris, apolar atau isopolar, sebagian besar berbentuk bola untuk bola oblate jarang sub oblate, pantoporate atau triporate, zonoaperturate. Berdasarkan hasil pengamatan yang diperoleh, pollen bunga sepatu (Hibiscus rosa-sinensis) berbentuk bulat dan dilengkapi spina (echini) atau duri-duri disekelilingnya. Dinding serbuk sari terdiri dari dua lapisan, yaitu exine (lapisan luar) tersusun atas sporopollenin, dan intin (lapisan dalam) yang tersusun atas selulosa.
1. Intine , melepas enzim serta prekursor enzim pada apertura butir pollen.
2. Exine, merupakan bagian paling luar yang berdiferensiasi menjadi nexine dan sexine.
3. Apertura merupakan tempat pertumbuhan serbuk sari pada masa perkecambahan.
4. Fillus merupakan rambut-ramput halus.
Berdasarkan jurnal Berdasarkan jurnal Palynological Study Of Soil Sample Collected From An Archaeological Site (Gulabi Bagh) In Lahore, Pakistan disebutkan bahwa Palynomorph dari Hibiscus rosa-sinensis adalah sebagai berikut: Pantoporate, spiral agak globular, isopolar, simetri radial pada potongan membujur dan bilateral pada potongan melintang. Memiliki bentuk bulat agak lonjong. Ukuran butir pollen berkisar 143μm, ketebalan exine 3.5μm, memiliki tinggi echini yang mencapai 9μm, lebar bagian dasar echini 5μm, bagian ujung echini terpisah 25.3μm, jarak bagian dasar antar echini adalah 18μm, diameter pori 5μm. Jumlah duri adalah 24 buah sedangkan jumlah pori sebanyak 16 buah.
Pollen echinate dan ukuran echini cukup besar dengan jarak yang lebar, sehingga mudah ketika diamati dan mampu dibedakan dengan jelas setelah pollen diberi warna. Echinate, echini memiliki ukuran yang luas dan jarak yang lebar sehingga mudah untuk dihitung dan dibedakan dengan menggunakan blunt apex. Echini tersusun secara bebas, duri bagian tengah membentuk sebuah lingkaran seperti cincin yang membuat penampakannya berbeda dan mudah diamati. Tectum pollen memiliki pola reticulate yang baik. Echini pada butir pollen Hibiscus rosa-sinensis kuat dan tahan terhadap perlakuan asetolisis, dimorfis dengan apex blunt, dengan bentuk membulat dan bifurcated. Pada beberapa duri pada bagian apikal sama lebarnya dengan duri pada bagian basal. Tectum perforated dan penuh dengan bintik-bintik di sekitar duri. Apertura berukuran besar dan jelas.

Preparat Pollen Hibiscus tiliaceus

Echini (ornamen)Echini (ornamen)aperturaaperturaIntineIntineExineExine
Echini (ornamen)
Echini (ornamen)
apertura
apertura
Intine
Intine
Exine
Exine
Secara morfologi pollen Hibiscus tiliaceus hampir sama dengan pollen bunga kembang sepatu Hibiscus rosasinensis yaitu berbentuk bulat dan dilengkapi spina atau duri-duri disekelilingnya. Dinding serbuk sari terdiri dari dua lapisan, yaitu eksin (lapisan luar) tersusun atas sporopolenin, dan intin (lapisan dalam) yang tersusun atas selulosa. Pollen terdiri atas ; Intin Eksin, Apertura, Fillus. Perbedaannya pada bentuk Fillus Hibiscus tiliaceus lebih panjang dan rapat (Culhane et al., 1988).
Malvaceae merupakan famili yang cukup pesat perkembangannya karena memiliki microrelief berupa echinate atau duri dan karakterbutir pollen pantoporate (Perveen, 1993). Jumlah, ketinggian, dan posisi duri ini beragam dalam keluarga tanaman yang berbeda di mana itu terjadi, dan merupakan karakter yang paling penting untuk tujuan identifikasi atau taksonomi (Pope, 1925). Spesies Hibiscus memiliki bentuk butir pollen apolar dan pantoporate. Tipe ornamen exine adalah echinate.

tectumtectumPreparat Pollen Lilium sp
tectum
tectum
Perbesaran 40x
IntineIntineExineExine
Intine
Intine
Exine
Exine
IntineIntineexineexine
Intine
Intine
exine
exine
Berdasarkan jurnal Contributions to the pollen morphology and taxonomy of the Liliaceae rincian pollen pada Lilium sp adalah monosulcate, berbentuk perahu, heteropolar, dan memiliki bentuk elips pada potongan membujur, 1-3-porate, hampir bulat dengan panjang diameter khatulistiwa melebihi 100 mm). Sulcus sering lebih sempit di tengah-tengah, luas dan mendalam dengan ujung bulat, atau jarang sempit. Terdapat pori dengan dengan batas yang berbeda. Exine pada Lilium sp ini tectate-columellate atau semitectate. Permukaan exine berupa macroreticulate. Tipe ornamen psilate.
Berdasarkan angka, bentuk dan susunan jenis-jenis columellae dibedakan 3 bentuk muri dengan morfologi yang berbeda. (Baranova 1985):
Jenis Martagon (Muri dibentuk oleh columellae persegi panjang)
Jenis Callose (Muri dibentuk oleh columellae bulat)
Jenis Concolor (Muri dibentuk oleh terpisah bulat dan columellae poligon). Bagian bawah lumen dengan butiran. Apertura membran granular, granul terdiri dari elemen ectexinous.
Data hasil penelitian palinologi pada Lilium sp menunjukkan karakter heterogen berdasarkan tipe apertura dan ornamen exine. Liliaceae merupakan famili dari Lilium sp yang termasuk tanaman monokotiledon. Ukuran butir pollen pada Lilium sp adalah cukup besar. Ornamen pada exine tanaman Lilium adalah berupa reticulate atau macroreticulate. Berdasarkan penelitian yang dilakukan diperoleh hasil bahwa Lilium memiliki single butir pollen, heteropolar, simetris bilateral, distal-monosulcate, flattened-spheroidal, berbentuk seperti perahu (boat-shaped), pada permukaan luarnya memiliki tonjolan yang bulat melonjong, dengan bagian kutub yang sedikit pepat. Memiliki sulcus yang panjang (hampir sama degan diameter tengah pollen). Dengan bantuan teknologi TEM diketahui bahwaspesies ini berbeda dengan spesies yang lain karena memiliki bentuk yang berbeda, struktur khas berupa ketebalan tectum, bentuk, dan diameter caput, lebar dan luas columella, ketebalan lapisan bawah, serta muncul atau tidaknya endexine, ketebalan Intine yang berada di dalam wilayah sulcus dan berada di bawah exine di wilayah yang tidak memiliki sulcus, dan berbagai posisi pada beberapa lapisan yang berbeda dari Intine dengan ketebalan yang berbeda pula. Microrelief dari elemen lapisan sculptural pada Lilium sp berbeda-beda, beberapa spesies memiliki microrelief yang cukup kasar dan memiliki struktur tuberculate, sedangkan pada spesies yang lainnya ditemukan pula struktur microrelief yang halus.
Preparat Pollen Passiflora sp
Perbesaran 40x (Crystal violet)

sitoplasmasitoplasmaOrnamenOrnamenAperturaAperturaintineintineexineexine
sitoplasma
sitoplasma
Ornamen
Ornamen
Apertura
Apertura
intine
intine
exine
exine
Perbesaran 40x (non warna)
sitoplasmasitoplasmaexineexineAperturaAperturaOrnamenOrnamenintineintine
sitoplasma
sitoplasma
exine
exine
Apertura
Apertura
Ornamen
Ornamen
intine
intine

Berdasarkan pengamatan terhadap dua jenis preparat tersebut dapat diketahui bahwa preparat pollen dengan pewarnaan Crystal violet lebih mudah diamatai di bawah mikroskop karena memiliki bagian-bagian yang lebih jelas dengan adanya warna ungu pada bagian-bagian butir pollen tersebut. Berdasarkan jurnal Histological analysis of pollen-pistil interactions in sour passion fruit plants (Passiflora edulis Sims) diketahui bahwa tampilan luar dari butir pollen Passiflora memiliki bentuk spherical, 6-colpate, furrowlike apertura, dan dinding exine heteroreticulate. Tipe ornamen clavate.
Pada hasil pengamatan preparat pollen Passiflora sp dengan metode asetolisis dengan perbesaran 40x trlihat berbentuk 3 bulatan yang diikat tali segitiga dengan sayap seperti cangkang kerang. Terdapat bentuk seperti sebuah cincin bercabang tiga di sekitar pseudo-operkulum.
Apertura adalah area tipis pada eksin yang secara langsung berhubungan dengan pertunasan. Apertura pada polen Passiflora edulis berjumlah 3 dan butir serbuk sarinya dilengkapi dengan kolpi, sehingga termasuk dalam tipe trikolpat. Berdasarkan letak atau tipe apertura pada eksin serbuk sari polen Passiflora edulis memiliki tipe antokolpat, yaitu suatu tipe dimana tipe aperturanya terletak menyebar dan tidak beraturan. Sedangkan pada Passiflora foetida tipe aperturanya adalah tetrad. Apertura ini memiliki empat bagian. Jika dipandang dari bagian atas maka akan tampaktiga bagian atau lobus. Satu bagian lainnya terletak di bagian belakang sehinnga tidak terlihat oleh mata ketika pengamatan.
Menurut Erdtman (1952), ornamentasi merupakan suatu bentuk hiasan pada permukaan eksin polen Passiflora edulis adalah retikulat, yaitu ornamen berbentuk seperti jala. Sedangkan ornamentasi pada Passiflora foetida berbentuk retikulat. Pada permukaan yang berlubang yang ukurannya relative sama antar satu dan yang lainnya dan saling berkaitan antar satu dan yang lain. Atau dengan kata lain ornamentasinya bentuk jala.

KESIMPULAN
Metode yang biasa digunakan dalam mengamati preparat pollen ialah dengan metode asetolisis. Asetolisis adalah salah satu metode pembuatan preparat serbuk sari yang menggunakan prinsip melisiskan dinding sel serbuk sari dengan asam asetat glasial serta asam sulfat pekat sebagai bahan kimia fiksatif.
Morfologi serbuk sari dapat digunakan untuk mengidentifikasi takson di tingkat familia, genus, species, dan di bawah species, penempatan taksa yang diragukan, penyusunan kembali, penggabungan dan pemisahan, serta sebagai penguat bukti yang lain (Davis and Heywood, 1973). Variasi yang diperlihatkan serbuk sari antara lain jumlah, letak alur, dan lubang (apertura) di permukaannya, begitu pula bentuk maupun ukuran serta bentuk dan ukuran exine-nya, sekarang dapat menjadi sumber bukti taksonomi yang penting.
Palynomorph yang berhasil diamati dalam percobaan pembuatan preparat pollen dengan metode Asetolisis adalah sebagai berikut:
No.
Nama Preparat
Morfologi Pollen
1.
Jatropha sp
Oblate, spherical, omniaperturate, dilapisi jaringan tebal dengan struktur clivate, yang membatasi secara reticulate untuk membentuk struktur crotonoid. Exine biasanya dilapisi dengan struktur globular. Ukuran rata-rata butir pollen 38 μm x 39.26 μm.

2.
Acacia sp
Polyad dengan jumlah butir pollen sebanyak 16, 8 butir pollen terletak di tepi dan 8 butir yang lain berada di tengah yang terbagi menjadi dua bagian, dimana tiap bagian memiliki 4 butir pollen, ukuran sedang hingga besar. Individual sel berbentuk subglobose.

3.
Allamanda sp
Rasio P/E : 1.61, ukuran garis bujur (Polar) 134.40(138.30)142.20 μm dan diameter garis tengah (Equator) 85.80(85.90)86.00 μm. Morfologi pollen prolate, tricolporate, isopolar, simetri radial dengan tipe tectum granulate
4.
Bauhinia purpurea
Tipe Pollen dari Bauhinia adalah mempunyai tectate exine dan biasanya terdapat pada monad. Tectum ini dapat memperlihatkan permukaan micro-reticulate, micro-striate, micro-verrucate, atau micro-rugulate atau kombinasi dari bentuk-bentuk tersebut. Karakter pollen yang berhasil diamati selanjutnya dari genus Bauhinia adalah gemmae dan verrucae yang memiliki beberapa ukuran dan pola distribusi pada tectum, sebagai tambahan untuk mengorganisasi reticulum.

5.
Caesalpinia pulcherrima
Prolate, tricolporate, triangular, panjang colpi 39.9 (45.78) 52.5μm dan memiliki lebar 14.7 (20.58) 25.2μm, membran colpal reticulate. Mesocolpium 23.1(29.61) 33.6μm. Apocolpium 54.6 (58.59) 63μm. Tebal exine 2.1(2.31) 3.15μm. Sexine lebih tebal daripada nexine. Tectum bertipe reticulate-rugulate
6.
Chrysanthemum sp
Ukuran butir pollen pada Chrysanthemum adalah sekitar 33 x 34 μm, dengan tipe apertura prolate-spheroidal, memiliki 3-zonocolporate. Endocolpium bertipe lalongate, oval dengan ukuran 7 x 3 μm. Ketebalan exine 9 μm. Memiliki spina sepanjang 6 μm.

7.
Hibiscus rosa-sinensis
Radial simetris, apolar, pantoporate atau triporate zonoaperturate. Pada tectum terdapat echinate atau duri yang seragam, terdapat pori halus sederhana atau belang-belang untuk pembutiran dengan scabrae di antara duri.
8.
Hibiscus tiliaceus
Spesies Hibiscus memiliki bentuk butir pollen apolar dan pantoporate.
9.
Lilium sp
Single butir pollen, heteropolar, simetris bilateral, distal-monosulcate, flattened-spheroidal, berbentuk seperti perahu (boat-shaped), pada permukaan luarnya memiliki tonjolan yang bulat melonjong, dengan bagian kutub yang sedikit pepat. Memiliki sulcus yang panjang (hampir sama degan diameter tengah pollen).
10.
Passiflora sp
Butir pollen Passiflora memiliki bentuk spherical, 6-colpate, furrowlike apertura, dan dinding exine heteroreticulate.

DAFTAR PUSTAKA

Aftab, Rukhshinda And Anjum Perveen. 2006. A Palynological Study Of Some Cultivated Trees From Karachi. Pak. J. Bot., 38(1): 15-28
Chelong, Isma-ae. 2011. Palynology of Cultivated Plant Species at Yala Rajabhat University, Thailand. KKU J. Sci. 39(3), pp.433-446
Agashe, S. N. and E. Caulton. 2009. Pollen And Spores: Applications With Special Emphasis On Aerobiology And Allergy. United States of America: Science Publishers.
Aprianty, M. D., dan E. Kriswiyanti. 2007. Studi Variasi Ukuran Serbuk Sari Kembang Sepatu (Hibiscus Rosa- Sinensis L.) dengan Warna Bunga Berbeda. Jurnal Biologi. 1 (XII). Hlm.14-18.
Bhatnagar, A. K. And R. N. Kapil. 1979. Ontogeny and taxonomic significance of anther in Bischofia javanica. Phytomorphology 29: 298–306.
Bibi, N.,Hussain, M. and Aktar, N. (2008). Palynological study of some cultivated species of genus Hibiscus from North West Frontier Province (N.W.F.P.) Pakistan. Pak. J. Bot. 40(4): 1561-1569.
Davis, G. L. 1999. Systematic embryology of the angiosperms. John Wiley and Sons Inc., New York, NY. 528 p.
Elias TS (1981). Mimosoideae. In: Polhill RM, Raven PH (Editors), Advances in Legume Systematics, part 1. R. Gard., Kew, pp.143-151.
Faegri, K. and Iverson., J. (1964). Text Book of Pollen Analysis. 3rd revised edition by Faegri, K. Munksgaard, Copenhagen, and Denmark. pp. 1-295.
Fahn, A. 1991. Anatomi Tumbuhan Edisi 3. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.
Ferguson, I.K. & Pearce, K.J. Observations on the pollen morphology of the genus Bauhinia L. (Leguminosae: Caesalpinioideae) in the neotropics. In: Blackmore, S. & Ferfuson, I.K. (eds.) Pollen and Spores: From and function. Academic Press, London, Pp. 283-296, 1984.
Ferguson, K.I and H. Banks. 1984 "Tetrad Pollen in the Sub-family Caesalpinioideae (Leguminosae) and Its Significance," Review of Palaeobotany and Palynology, Vol. 83, No. 1, 1984, pp. 31-42.
Graham, A. & Baker, G. Palynology and tribal classification in the Caesalpinioideae. In: Polhill, R.M. and Raven, P.H (Eds.), Advances in Legumes Systematics, Pp. 804-232. Royal Botanic Gardens, Kew England. 1981.
Guinet P (1981). Mimosoideae: The Characters of their Pollen Grains. In: R.M. Polhill and P.H. Raven (Editors). Advances in Legume Systematics, part 2. Kew: Royal Botanic Gardens, pp.835-855.
Jackson, J. K., & Peake, F. G. G. (1955). Forestry research in the Sudan: 1950-1954, (No. 7). Agricultural Committee in Khartoum.
Jumah, A (1991-1996). Studies on the morphology of pollen grains of the Leguminosae – Mimosoideae. Ghana J. Sci. 36, 1(96):31-36, p. 29-35.
Khola, G. and U. Hanif. 2012. Palynological Study Of Soil Sample Collected From An Archaeological Site (Gulabi Bagh) In Lahore, Pakistan. The Journal of Animal & Plant Sciences, 22(4), Pp: 1113-1117. ISSN: 1018-7081
Moore, P.D., Wedd, J.A. and Collinson, M.E. (1991). An Illustrated Guide to Pollen Analysis 2nd Edn, Hodder and Stoughton. pp. 1-133.
N. Venu and Munirajappa. (2004-2012). Palynological Studies In Some Jatropha Species. International Journal of Advanced Biological Research.Vol. 2(2) 2012: 370-372. ISSN: 2250 - 3579
Perveen, N. and Qaiser, M. (1997). Palynologicalsurvey of flora of Pakistan. In: Proceeding of Int. Symp. On Plat Life of S. West Asia and Central Asia. (Eds.): Ozturk, M. Secunen,O. and Gork, G. pp. 795-835.
Setyowati, D. 2008. Tinjauan Taksonomi Famili Asteraceae Berdasarkan Sifat dan Ciri Morfologi Serbuk Sari. Skripsi. Yogyakarta: Universitas Ahmad Dahlan.
Suntoro, Handari. 1983. Metode Pewarnaan (Histologi dan Histokimia). Yogyakarta : UGM Press
Walker, J.W. and Doyle, J.A. (1975). The basis of Angiosperm phylogeny: Palynology. Ann. Mo. Bot.Gard. 62: 666- 732.
Yagi, Sakina., Palmina Khristova, and Sami Ahmed Khalid. 2012. Chemotaxonomical and Palynological Studies on Nine Acacia Species Occurring in Sudan. Journal of Plant Studies. Vol. 1(2) ISSN 1927-0461

LAMPIRAN
1 lembar Dokumentasi

Mengetahui, Surakarta, 25 November 2014

Asisten Praktikan,

Wike Trajuningtyas O.
K4312073

Pembuatan Preparat Pollen dengan Metode Asetolisis

Recommend Documents