RECUENTO TOTAL DE BACTERIAS AERÓBICAS MESÓFILAS VIABLES

PRÁCTICA 1: RECUENTO TOTAL DE BACTERIAS AERÓBICAS MESÓFILAS VIABLES

ESIA-2014

PRÁCTICA 1

RECUENTO TOT TOTAL AL DE BACTERIAS AERÓBICAS MESÓFIL MESÓFILAS AS VIABLES

I. INTRODUCCION Las bacterias aeróbicas mesófilas mesófilas constituyen un grupo de microorganismos capaces capaces de crecer en un rango de temperatura de 3 a 3! "C. La cuanti cuantifi ficac cación ión de micr microor oorgan ganism ismos os por por conta#e conta#e de coloni colonia$ a$ %a sido sido amplia ampliamen mente te utili& utili&ada ada para para determinar determinar poblacio poblaciones nes microbia microbianas nas 'iables 'iables en os alimentos$ alimentos$ este procedimi procedimiento ento est( basado basado en la presunción de )ue cada c*lula microbiana es una muestra formara a simple 'ista$ con colinas separadas cuando son me&cladas con el lagar u otro medio solido permita su crecimiento.

II. O+,-TIO • •

Conocer el m*todo para determinar el n/mero de bacterias aeróbicas mesófilas 'iables. Determinar Determinar la prese presencia ncia y cantida cantidadd de bacterias bacterias aeróbicas aeróbicas mesofila mesofilass 'iable 'iabless en el el material material anali&ado.

III. 0UND12-NTO T-RIC ICO O La aceptabilidad de un proceso es frecuentemente el aspecto m(s dif4cil del an(lisis de alimentos. Los an(lis an(lisis is micro microbio biológ lógico icoss de los alim aliment entos os son una una %erra %erramie mienta nta efic efica& a& en esta esta e'alua e'aluació ción$ n$ pero pero la interpretación de los resultados de laboratorio obtenidos en microbiolog4a es$ frecuentemente$ el m(s dif4cil y comple#o comple#o aspecto aspecto de todo el proceso proceso de e'aluación$ donde entran entran en en #uego #uego el criterio criterio profesional y las circunstancias )ue rodean al %ec%o 5 brote$ control de rutina$ toma de muestra en l4nea de proceso o en punto de 'enta$ producto listo para consumo$ etc.6 -l m*todo de conta#e de colonias colonias pro'ee pro'ee una estimulación el n/mero n/mero de microorganismos 'iables en una una muestra de acuerdo al medio medio empleado y el tiempo y la la temperatura temperatura de incubación.

Las c*lulas microbianas a menudo se encuentras como con#unto o grupos de de c*lulas$ por por tanto$ la muestra muestra y las diluciones %omogenei&adas %omogenei&adas pueden uniformemente distribuir distribuir los con#untos de bacterias$ ya )ue estos grupos no pueden ser disgregados completamente por ellos mismos. -l me&clado y la disolución inicial en un bleder mec(nico puede pro'eer mayo rotura a estos productos. De todos modos$ esto nos asegura asegura )ue los microorganismos microorganismos puedan estar bien distribuidos como c*lulas libres. UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

1


ESIA-2014

Consecuentemente$ cada colina aparece en el 1gar 7late puede aparecer como grupos de c*lulas y deben ser referidos como unidades formadas de colonias 5U0C6.

17LIC1CIN -l m*todo puede ser utili&ado para cual)uier tipo de muestra$ con e8cepción de ciertos productos$ donde inter'enga el proceso de fermentación $ tales como ciertos )uesos y embutidos$ yogurt o de maduración natural$ ya )ue estos dan cifras muy ele'adas de bacterias. Tambi*n se puede utili&ar para medio ambiente$ utensilios$ etc.

I. -9UI7O: ; 21T-RI1L-: <. =. 3. >. A. . !.

Los re)uisitos necesarios para la dilución de las muestras de alimentos 7lacas 7etri 7ipetas bacteriológicas de < y < ml +a?o de agua regulado a >>@>A "C para mantener elagar licuado +a?o de agua regulado a =B@3< "C Contados de colonias 1gar plate count

. 7ROC-DI2I-NTO UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

2


ESIA-2014

<. 7reparar muestra la muestra =. 7ipetear por duplicado a placas de 7etri est*riles al4cuotas de < ml a partir de dilución < @<<@ = @3 @3 @> @A @. < < < < < :e sugiere esta serie de diluciones cuando no se conoce el rango apro8imado del n/mero de bacterias.

3. 1gregar r(pidamente a las placas de 7etri
>. 2e&clar inmediatamente la al4cuota con el agar mediante mo'imientos de 'ai'*n y rotación de las placas 7etri. Una secuencia satisfactoria de paso es la siguiente. a. 2o'er la placa de arriba A 'eces en un dirección b. Rotar A 'eces la placa en sentido de los gua#as del relo#. c. 2o'er la placa A 'eces en la dirección )ue %aga (ngulo recto al usado en el primer tiempo. d. Rotar la placa en sentido in'erso al de las agu#as del relo#. A. Como control de esterilidad$ adicionar a placas 7etri$ agar sin inocular y agar inoculado con el diluyente. . Una 'e& solidificado el agar$ in'ertir las placas e incubarlas a 5=B@3<6 "C durante >EF@ 3 %oras

UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

3


ESIA-2014

!. Computo del recuento est(ndar en placas a. :eleccionar dos placas correspondientes a una dilución )ue contenga entre 3 y 3 colonias utili&ando un contador de colonias. b. :i las placas de diluciones consecuti'as presentan menores )ue 3 y mayores )ue 3$ tomar el promedio de los = recuentos. c. :i el n/mero de colonias de las placas de = diluciones consecuti'as est(n dentro del rango de 3 @3$ computar el recuento para cada una de las de las diluciones y establecer la relación de los = recuentos. :i el cociente es menor )ue =$ reportar el promedio de los = 'alores$ pero$ si el recuento mayor cociente = 'eces o m(s )ue al menor$ en este caso se reportan en recuento del menor. d. 2ultiplicar por el factor por el factor de dilución reciproco de la dilución utili&ada. Reportar el resultado como numero de microorganismos aerobios mesofilos por gramo o mililitro seg/n el caso.


4


ESIA-2014

. Computo del estimado de recuento est(ndar en placas a. :i la placa de las diluciones muestran m(s de 3 colonias$ di'idir cada duplicado de las placas dela dilución m(s alta en secciones radiales con'enientes 5=$>$$6 y contar todas las colonias en una o m(s secciones. 2ultiplicar el total en cada caso por el factor apropiado para obtener el n/mero de colonias por cada placa. 7romediar los estimados de las = placas y multiplicar por dilución correspondiente. Reportar el resultado como estimado del n/mero. b. :i no %ubiese colonias en placas de mayor concentración$ reportar el estimado como menor )ue la in'ersa de la dilución c. -#emploG <@< H  colonias. d. :e reporta como  < ufcFg o ml. :i se %ubiese sembrado$ .< ml en este caso se reporta  <ufcFg o ml. -8presión de resultadosG a. :e deber( reportar /nicamente = d4gitos significati'os$ ellos son el primero y el segundo 5comen&ando por la i&)uierda6 del promedio de los recuentos. Los dem(s d4gitos se reempla&aran por cero. -#emploG A=3$ se reportara A=$H A= 8 <> ufcF g o ml de alimento seg/n el caso. :i el tercer digito de la i&)uierda es A o mayor )ue A$ adicionar una unidad al segundo digito 5redondear6. b. :i el recuento en placa se utili&a para determinar la aceptación o rec%a&o de un lote de alimento$ /nicamente se considera el recuento est(ndar en placa$ nunca el estimado se considera el recuento est(ndar en placa$ nunca el estimado del recuento$ este es /til solamente como una apro8imación primaria en la determinación de la calidad microbiológica de un alimento.

I.

CJLCULO: ; -K7R-:IN D- R-:ULT1DO: UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

5


-

ESIA-2014

7ara el computo de colonias contadas$ se debe multiplicar el n/mero total de colonias por placas por la reciproca de la dilución utili&ada. 7ara e'itar imprecisiones cuando se computan las colonias contadas$ se tienen en cuenta /nicamente los dos primeros d4gitos. -l aumento del segundo d4gito$ en un n/mero m(s alto$ sucede cuando el tercer digito de la i&)uierda es A$$!$ o B. Usar ceros para cada digito sucesi'o para la derec%a del segundo digito.

Cuando una placa contiene 25 a 250 colonias: -

:eleccionar cada placa conteniendo entre =A a =A colonias$ e8cluyendo a)uellas con colonias in'asi'as o )ue tu'ieron alg/n accidente dentro del laboratorio. Contar todas las colonias$ incluyendo a)uellas de tama?o pe)ue?o$ y recordar la dilución usada y el n/mero total de colonias contadas. Ejemplo: Placas en duplicado:

Contar las placas conteniendo entre =A y =A colonias y promediar el conta#e obtenido para tener el n/mero de colonias contadas. Ejemplo:

:i solo una placa del par$ proporciona =A a =A colonias $ contar ambas placas$ como e8cepción e8cluir las placas )ue presenten colonias in'asi'as$ y promediar el conta#e. Ejemplos: Placas con diluciones conteniendo entre 25 y 250

-n caso de )ue dos placas con decimales consecuti'as$ una entre =A y =A colonias$ gramo para cada dilución y el promedio aritm*tico de ambas. UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

consecutivas colonias

diluciones presenten cada el conta#e por reporte es el

6


ESIA-2014

:e utili&a para ello$ la siguiente formulaG Donde NG n/mero de colonias por gramo o ml. De producto. ∑ C G :uma de todas las colonias en todas las placas contadas. n

n

1

G N/mero de placas en la primera dilución contada.

2

G N/mero de placas en la segunda dilución contada.

d

G Dilución del cual fue obtenido e l primer conta#e.

Ejemplo:

Placas que contienen entre 25 y 250 colonias: -

Reportar el conta#e como M-stimado M 5-st.6

Ejemplo: -

:i las placas contienen entre =A a =A colonias y una o m(s de las placas tiene m(s de =A colonias$ seleccionar la5s6 placa5s6$ )ue presenta cerca de =A colonias y contar como placas )ue presentan m(s de =A colonias.


7


ESIA-2014

Cuando todas las placas contienen menos de 25 colonias

:i las placas con todas las diluciones$ presentan menos de =A colonias$ registrar el n/mero de colonias en la dilución m(s ba#a5a e8cepción$ de las colonias in'asi'as6$ y registrar el conta#e como M-stimado. 5-st.6. Ejemplo:

Placas que no presentan colonias

:i las placas de todas las diluciones no presentan colonias y no se detectan sustancias in%ibidoras$ el conta#e estimado reportar como “menor que(<) 25 x !d"# Ejemplo: UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

8


ESIA-2014

Placas que presentan m$s de 250 colonias -

:i el n/mero de colonias por placas e8cede de =A colonias$ contar en porciones de la placa )ue presentan una distribución respecti'a de colonias aerobias y reportar como M-stimado. :i estas son menores )ue < colonias por cm = contar las colonias en <= cm=$ seleccionando seis cuadrados consecuti'os %ori&ontales y a la derec%a seis cuadrados consecuti'os 'erticales. Tener cuidado en no contar un cuadrado mas de una 'e&. 7ara el c(lculo$ se puede utili&ar la siguiente formula. %umero o&tenido de los 2 cuadrados contados x '5 d!2

DóndeG AH (rea de la placa de 7etri de 'idrio de B cm de di(metro 5 para placas de pl(stico el (rea ser( de A cm6. DH dilución a la cual se obtu'o el conta#e. <=H por los <= cuadrados representati'os contados. Cuando est(n m(s de < colonias por cm=$ contar las colonias en cuatro cuadrados representati'os. %umero o&tenido de los  cuadrados contados x '5 d!

DóndeG AH (rea de la placa de 7etri de 'idrio de B cm de di(metro 5para placas de pl(stico el (rea ser( de A cm6. DH dilución a la cual se obtu'o el conta#e. >H por los cuatro cuadrados representati'os contados. -n ambas instancias$ se reportan como M-stimati'o 5-st6. Ejemplo:

Usando un conta#e promedio de

9


ESIA-2014

*+E,-.C/%E+: los

datos y resultados obtenidos en este presente informe fueron sacados de libros y datos mencionados por la profesora en clase$ ya )ue la pr(ctica fue teórico y NO :R-1LI -N -L L1+OR1TORIO.

II. CONCLU:ION-: -

-

-

Recuentos altos en 1LI2-NTO: -:T1+L-: a menudo indican materias primas contaminadas o tratamientos no satisfactorios desde el punto de 'ista sanitarioP -n los 7RODUCTO: 7-R-C-D-RO: pueden indicar tambi*n condiciones inadecuadas de tiempoFtemperatura durante su almacenamiento. La presencia de un n/mero ele'ado de bacterias aerobias mesófilas )ue crecen bien a temperatura corporal o pró8ima a ella$ significa )ue pueden %aberse dado condiciones fa'orables a la multiplicación de los microorganismos patógenos de origen %umano o animal. P Todas las +1CT-RI1: 71TOQ-N1: conocidas 'e%iculadas por los alimentos son mesófilas y en algunos casos contribuyen con su presencia a los recuentos en placa encontrados. -n determinados tipos de alimentos con una fermentación o maduración 5embutidos fermentados$ col (cida$ )ueso y otros deri'ados l(cteos6 es natural y deseable una gran multiplicación bacteriana. Los microorganismos impropios no pueden diferenciarse de la microflora propia o normal. -n los alimentos tratados por el calor$ la población de microorganismos 'iables suele ser muy ba#a$ aun)ue un e8amen microscópico de estos productos puede a 'eces poner de manifiesto la presencia de microorganismos muertos$ cuyo n/mero indica )ue la materia prima estaba muy contaminada.

III. +I+LIOQR101 

%ttpGFFocS.um.esFcc.@de@la@saludF%igiene@inspeccion@y@control@alimentarioFpracticas@
1














ESIA-2014

%ttpGFFboos.google.com.peFboosV idHWcsO1911I11,XpgH71=XlpgH71=Xd)HrecuentoYdeYbacteriasYmes ZC3Z+3filasYaerobiasXsourceHblXotsHuAs%f:WbXsigHTlc=3Dp-ab'AdNdrCee+fcm)9X%lHesX saHKXeiHDdRdUfoOIgs1T2uID1+9Xs)iH=X'edHCC91-S19['HonepageX)HrecuentoZ=de Z=bacteriasZ=mesZC3Z+3filasZ=aerobiasXfHfalse %ttpGFFclubensayos.comFTemas@ariadosF7ractica@>@D-T-R2IN1CIZC3ZB3N@D-@ 1-RO+IO:F<3A<.%tml %ttpGFFcybertesis.unmsm.edu.peFbitstreamFcybertesisF!AF3Xidre'istaH> %ttpGFFSSS.um.esFnutbroFdocsF%icaF2icroorganismosmarcadores.pdf %ttpGFFboos.google.com.peFboosVidHOy@ Q>Cl+UCXpgH71!AXlpgH71!AXd)HrecuentoYdeYbacteriasYmesofilasYaerobiasYenYalimentosXsour ceHblXotsH#TyI&\2#oXsigHAp+2NNaAg:T

11

RECUENTO TOTAL DE BACTERIAS AERÓBICAS MESÓFILAS VIABLES

Recommend Documents