PRACTICA N° 7
IDENTIFICACIÓN DE CUERPOS CETÓNICOS EN ORINA
OSCAR ALMENTERO KERGUELEN YESSICA MERCADO CAROLINA ORTIZ SALGADO ALEJANDRA SUAREZ BENEDETTI
JAVIER MARTINEZ GUZMAN QUIMICO
UNIVERSIDAD DE CORDOBA FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD TEC. EN REGENCIA DE FARMACIA FARMACIA FUNDAMENTO DE BIOQUIMICA MONTERIA-CORDOBA 20!
INTRODUCCIÓN
Cuando la glucosa no está fácilmente disponible en el organismo a consecuencia de no existir un aporte simultáneo de glucosa por la alimentación, es estos casos el híga hígado do se empo empobr brec ece e en gluc glucóg ógen eno o y la gluc glucog ogen enól ólis isis is es inca incapa paz z de compe compensa nsarr el desga desgast ste e perifé periféric rico o de gluco glucosa sa.. Suced Sucede e lo mismo mismo en el ayun ayuno o prolongado; un mecanismo de adaptación al ayuno es la formación de cuerpos cetónicos cetónicos sintetizados a partir de los ácidos grasos y producidos nicamente en el hígado; estos se utilizan como fuente de energía !n caso de ayuno hay cambios "ue re"uieren de la adaptación del organismo y esto trae como consecuencia consecuencia modificaciones modificaciones en los patrones patrones metabólicos y por lo tanto en las moléculas utilizadas como combustibles. #urante las primeras etapas del ayuno se realizan cambios hormonales, se de$a de liberar insulina y se aumenta la liberación de glucagón, lo "ue ocasiona un aumento en la %lucogenólisis, %lucogenólisis, estimulación estimulación de la &ipólisis, inhibición de la síntesis de triac triacilg ilglic licéri éridos dos,, aumen aumento to de la 'eta 'eta ( oxida oxidació ción n y produ producc cción ión de cuerp cuerpos os cetónicos )Cetogénesis*, si el ayuno es prolongado se presenta un dese"uilibrio entre el metabolismo de carbohidratos y el de lípidos lo "ue ocasiona "ue los ni+eles de cuerpos cetónicos se ele+en en sangre y sean eliminados por orina donde son detectados fácilmente.
OBJETIVOS
O"#$%&'( G$)$*+, •
dentificar cuerpos cetónicos en la orina mediante diferentes pruebas.
O"#$%&'( E$/1&/( •
•
#eterminar la presencia de cuerpos cetónicos en orina, mediante pruebas cualitati+as para cada uno de ellos. -amiliarizarse con algunos protocolos empleados en laboratorios clínicos para el reconocimiento de cuerpos cetónicos
TEORA RELACIONADA
&os &os cuerp cuerpos os cetón cetónico icos s son los ácido ácidos s aceto acetoacé acétic tico, o, la aceton acetona a y el ácido ácido ( hidróxibutirico. !n la cetósis, hallamos un aumento de estas sustancias en la sangre y en la orina. 'a$o buenas condiciones de salud, los cuerpos cetónicos se forman en el hígado y son son comp comple leta tame ment nte e meta metabo boli liza zado dos, s, de tal tal mane manera ra "ue "ue solo solo cant cantid idad ades es insig insignif nifica icante ntes s apare aparece cen n en la orina orina.. /or /or el cont contrar rario, io, en casos casos de diab diabete etes, s, inanic inanición ión,, +ómit +ómitos os con deshi deshidra dratac tación ión y desp después ués de la expo exposic sició ión n al frío frío y0o y0o e$ercic e$ercicio io +igoroso +igoroso,, los cuerpos cuerpos cetónico cetónicos s pueden pueden encontr encontrarse arse en cantidad cantidades es apreciables en la orina, lo cual permite su determinación cualitati+a. &a determinación de acetona )1étodo de mbert*, se fundamenta en la formación de un ferropentacianuro con el deri+ado isonitrado de la acetona, la determinación de acido acido aceto acetoacé acétic tico o )1éto )1étodo do de %erh %erhrd rdt*, t*, se basa basa en la aparic aparició ión n de una una coloración coloración ro$o(+inosa ro$o(+inosa con el cloruro cloruro férrico férrico y en el 1étodo 1étodo de de 2art, 2art, el acido ( hidróx hidróxibu ibutir tiric ico o es trans transfor formad mado o en aceto acetona na,, la cual cual se ident identifi ifica ca median mediante te el reacti+o de mbert.
&os cuerpos cetónicos desempe3an un papel importante en la homeostasis del organismo. !n estados en los "ue la glucemia es ba$a )como en el ayuno o en dietas pobres en glcidos* o en casos donde la glucosa no puede ser utilizada )como en la diabetes*, la concentración de ácidos grasos y cuerpos cetónicos en el plasma aumenta. 4mbas sustancias sustituyen a la glucosa como combustible fa+orit fa+orito o para para obtener obtener energía por parte parte de la célula. célula. Con+iene Con+iene recordar recordar "ue la gluconeogénesis gluconeogénesis,, en animales, utiliza distintos precursores precursores como aminoácidos, lactato, glicerol o ácido pir+ico para conseguir fabricar glucosa, pero "ue los ácidos grasos no pueden con+ertirse en azcares. 4sí, por e$emplo, células como los eritrocitos eritrocitos o las constituyentes constituyentes del cerebro obtienen su energía mayoritariamente de la glucosa, ya "ue sus mitocondrias tienen poca capacidad para oxidar los ácidos grasos y en situaciones de ayuno o casos de diabetes los cuerpos cetónicos constituyen unos magníficos sustratos energ energéti ético cos s sust sustitu ituti+ ti+os os de la gluco glucosa. sa. /ara /ara deter determin minar ar estos estos cuerp cuerpos os en el organismo se realiza en la orina. !sta prueba se usa para medir el ni+el de cetonas en su orina. 5ormalmente, su cuerpo "uema azcar para obtener energía. energía. Sin embargo, si usted tiene diabetes, es posible "ue no tenga suficiente insulina para "ue el azcar de su torrente
sanguín sanguíneo eo se use como combusti combustible. ble. Cuando Cuando sucede sucede esto, esto, su cuerpo cuerpo "uema "uema gras grasas as en luga lugarr de "uem "uemar ar azca zcarr y prod produc uce e sust sustan anci cias as deno denomi mina nada das s cetonas. &as cetonas terminan en su sangre y su orina. 6ener cantidades pe"ue3as de cetonas en su cuerpo es normal. Sin embargo, tener ni+eles altos de cetonas podría ocasionar enfermedades gra+es o la muerte. &as pruebas de detección de cetonas e+itan "ue esto suceda.
PROCEDIMIENTO
DETERMINACIÓN DE ACETONA3 ACETONA3 4 7 ml de orina, agregamos agregamos 8.7ml de 5itroprusiano 5itroprusiano de sodio disuelto al 79 en acido acético al 789, adicionamos 8.7ml de amoniaco por las paredes del tubo, la aparición de un anillo ro$o +ioláceo en l contacto de los lí"uidos, es indicati+o de la presencia de acetona.
DETERMINACIÓN DE ACIDO ACETOAC4TICO. 4 7 ml de orina le adicionamos adicionamos unas gotas de cloruro férrico, en presencia presencia de acido acetoacético se produce una coloración ro$o(+inosa.
DETERMINACIÓN DE ACIDO 5-6IDROIBUTRICO !n una capsula de porcelana se mezclaron :8ml de agua y :8 ml de orina, se acidifica con unas 7 gotas de acido acético y se caliento en una estufa hasta reducir el +olumen a la mitad. Con este calentamiento se eliminan la acetona y el acido acetoacético, al contenido de la capsula se le agregaron :8ml de agua y se transfiere en partes iguales a dos tubos de ensayo, uno de estos tubos ser+irá como control, al otro se le adiciona :ml de peróxido de hidrogeno al :89 y se calienta en ba3o de 1aría por 7 min, se de$o enfriar y finalmente se practica la prueba de mbert a ambos tubos.
MATERIALES Y REACTIVOS • • • • • • • • • • • • •
tubos de ensayo : gradilla pipetas : beaC==2 al 789
ANALISIS DE RESULTADO
DETERMINACION DE ACETONA3 ACETONA3 !n primera instancia se procedió a depositar en un tubo de ensayo una muestra de 7 ml de orina la cual fue mezclada con 8,7 ml de nitroprusiato de sodio al 79 en ácido acético al 789; mezcla "ue una +ez finalizada, mostro un cambio en su coloración, esta se tornó en un tono un poco más amarilla "ue en su estado estado inicial, inicial, tampoco se presentó presentó ningn tipo de precipitado ni turbidez en el medio, de igual forma la muest muestra ra se mantu+ mantu+o o todo todo el tiempo tiempo en su estad estado o lí"uido aun después de un tiempo considerable.
Se obser+aron los cambios y se procedió a realizar la siguiente parte de esta prueba.
/ara esta parte; por sobre las paredes del tubo se le agregaron 8,7 ml de amoniaco y se pudo obser+ar "ue la muestra se tornó un poco más transparente perdiendo un poco su tono amarillo presentado en el paso paso ante anteri rior or,, esta esta +ez +ez se pudo pudo obse obser+ r+ar ar "ue "ue la mue muestra se most mostrró con un tono ono un poco más más trans transpar parent ente e en su parte parte super superior ior,, no se obser obser+ó +ó ningn tipo de precipitado ni turbidez en el medio y de igual forma conser+o todo el tiempo su estado lí"uido.
Segn Segn los resulta resultados dos obser+ado obser+ados s en esta prueba, prueba, se puede puede determi determinar nar "ue, "ue, debido a la ausencia del tono ro$o +ioláceo en el medio después de cada mezcla, no hay presencia de acetonas en esta mezcla.
DETERMINACION DE ACIDO ACETOACETICO3
/ara esta prueba hemos disuelto 7 ml de orina, muestra a la cual se le han agreg agregad ado o gotas gotas de cloru cloruro ro férric férrico o en pres presen encia cia de ácido ácido aceto acetoac aceti etico co,, se agito agito le+eme le+emente nte y se pudo pudo obser+ar un cambio de coloración en la muestra, ésta se tornó en un tono blanco, algo espeso, mientras "ue no se obser+ó obser+ó ningn tipo de precipitado ni turbidez en el medio, se conser+ó todo el tiempo en estado lí"uido. Segn los resultados obtenidos, se puede concluir "ue esta prueba es negati+a para la presencia de ácido acetoacetico en el medio, debido a "ue este no se mostró en ningn momento en un tono ro$o(+inoso.
DETERMINACION DE ACIDO 5-6IDROIBUTIRICO3 para la determinación de ácido ( hidroxibutirico hidroxibutirico hemos disuelto :8 ml de agua y :8 ml de orina y se le han adicionado 7 gotas de ácido acético, hasta hasta este este punto punto hemos hemos obse obser+a r+ado do una una color colorac ación ión amarilla en el medio aun después de haberla puesto a calentar en una estufa, no se presentó ningn tipo de precipitado precipitado ni turbidez en el medio y se mantu+o todo el tiempo en estado lí"uido. Paso
1:
esto estos s resu result ltad ados os obte obteni nido dos s hemo hemos s procedido ido a agrega regarrle :8 ml de agua y se ha transferido esta muestra en dos tubos de ensayos en partes iguales, los cuales se han marcado 6?'= 4 y 6?' 6?'= C=56 C=56@= @=&; &; en dond donde e al tubo tubo 4 se le ha agre agrega gado do : ml de peró peróxi xido do de hidr hidrog ogen eno o al :89 :89 mientras "ue el tubo C=56@=& C=56@=& no se le ha agregado nada; ambos se han calentado en ba3o de maría por 7 min min, se de$ar $aron enfria friarr para ara así proc proce eder a realizársele la prueba de mbert. Paso
con 2:con
?na +ez finalizada esta prueba se pudo obser+ar "ue ambos presentaron una coloración amarilla en el fondo del tubo, llegando hasta la parte media de la muestra, ya en la parte superior se mostró un tono un poco más transparente, el
medio se mantu+o todo el tiempo en estado lí"uido y no se presentó ningn tipo de precipitado ni turbidez en la muestra.
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
. Q89 (%*( (%*( %&( :$ 8%+)/& 8%+)/&+ + 8$:$) 8$:$) :$%$*;& :$%$*;&)+* )+*$ $ $) ,+ (*&)+ (*&)+ (* 8) ;$%+"(,&;( +)(*;+, :$ ,&:(. Cristales, albumina, acetona, pigmentos y sales • • • • • • • • • •
4cido 7(hidrox 7(hidroxindoloace indoloacetico tico %lucosa !lectrolitos urinarios ?rea -enilacetona :A( corticosteroides =xalato 4cido acetoacético acetoacético 4cido '( '( hidróxibutirico hidróxibutirico 5itroprusiano de sodio.
2. Q89 $ ,+ ,+ /$%<& /$%<& = ,+ C$%()8 C$%()8*&+ *&+.. estado do del del orga organi nism smo o "ue "ue se prod produc uce e cuan cuando do este este no tien tiene e C$%(&B es un esta suficientes hidratos de carbono para obtener energía y comienza a utilizar las grasas para obtener energía. !l proceso fue descubierto por el doctor Stephen 1oody en :D. !n estado de cetosis, cetosis, el cuerpo "uema la grasa y, y, al con+ertirla en energía para funciona funcionar, r, el hígado hígado y los ri3ones ri3ones generan generan unas unas sustanc sustancias ias llamada llamadascuerp scuerpos os cetónicos. !stos cuerpos cetónicos son expulsados en la orina y el aliento. !l resultado suele ser una pérdida de peso al consumir el cuerpo las reser+as de grasa más rápidamente. 4lgunos síntomas de la cetosis cetosis pueden pueden serB /resencia de cetonas en la orina, aumentando el olor de esta. 2alitosis, al eliminar los cuerpos cetónicos por el aliento. #olor de cabeza y0o mareo, debido a la escasez de glucosa para "ue el cerebro la utilice. #eshidratación
&a cetosis se puede producir al padecer enfermedades como la diabetes mellitus tipo tipo :, cons consumo umo exces excesi+o i+o de alcoh alcohol ol o dietas dietas ba$as ba$as en hidrat hidratos os de carbo carbono no.. 4un"ue pueda tener el beneficio beneficio de la pérdida de grasa en personas personas con sobrepeso este proceso puede ser peligroso y causar problemas de salud si se prolonga en el tiempo. !n cual"uier caso es altamente recomendable consultar con un médico si cree "ue puede entrar en este estado.
C$%()8*&+3 está generalmente asociada a la cetoacidosis diabética o al ayuno prolongado. 5= es igual a la cetoacidosis )"ue es una cantidad de cetonas tan grande "ue +uel+e la sangre acídica*. @efle$a una alteración en el metabolismo de los hidratos de carbono )C2=* como fuentes de energía y una mo+ilización de los depósitos lipídicos )ácidos grasos libres* "ue el hígado transforma en cuerpos cetónicos para su posterior posterior utilización como fuente alternati+a de energía. Cuando las células corporales no pueden disp dispon oner er de gluc glucos osa a como como fuen fuente te de ener energí gía, a, empl emplea ean n las las gras grasas as.. Como Como consecuencia de la combustión de estas, se obtienen los cuerpos cetónicos. !n el mercado existen tiras reacti+as "ue son tiles para monitorear los ni+eles de cuerpos cetónicos en la orina a tra+és la lectura +isual de colores. 4yudan al paciente paciente diabético a controlar controlar me$or su condición y a obtener información información sobre el metabolismo de los hidratos de carbono y de los lípidos, educándose al respecto. Causas de cetonuriaB •
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1etabólicas #iabetes mellitus mal controlada )es decir, la hiperglucemia diabética mal mane$ada* )generalmente #1:* %lucosuria renal )ocasional* !nfermedades por almacenamiento del glucógeno -actores dietéticos 4yuno prolongado y la desnutrición #ietas con excesi+o contenido en grasas 4umento de los re"uerimientos re"uerimientos metabólicos metabólicos 2ipertiroidismo 2ipertiroidismo -iebre !mbarazo y lactancia
CONCLUSIÓN
BIBLIOGRAFA >%%3??$.,&:$>+*$.)$%?&)@*&:#(>+)+&$**+;$#&+?*+/%&/+-/8$*(/$%)&/(-
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