UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS
FACULTAD FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS AGROPECUARI AS Y RECURSOS NATURALES NATURALES ESCUELA DE INGENIERÍA EN CIENCIAS AGRÍCOLAS PROGRAMA DE INGENIERÍA AGRONÓMICA
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS UNIDAD ACADÉMICA PROGRAMA DE INGENIERÍA AGRONÓMICA LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA AGRÍCOLA PRACTICA 11 Los nematodos Fitoparásitos UNIDAD TEMÁTICA
PRACTICA PRESENTACIÓN LAB
Nematodos Fitoparásitos INTRODUCCIÓN
Los nematodos pertenecen al reino Animalia. Su apariencia es semejante a gusa gusano nos s pero pero taxo taxonó nómi mica came ment nte e dist distin into tos s a los los gusa gusano nos s verd verdad ader eros os.. Se encuentran prácticamente en todos los hábitats, la mayor parte viven libremente en agua dulce o salada o en el suelo y se alimentan de microorganismos, microorganismos, plantas plantas y animales. Comprenden uno de los grupos más ricos en especies del reino animal y en trmin trminos os de bioma biomasa sa,, const constitu ituye yen n uno de los los grupos grupos más numer numeros osos, os, pues pues pueden encontrarse hasta !" """ """ de individuos por metro cuadrado de suelo. Los Los nema nemato todo dos s tien tienen en gran gran impa impact cto o en la econ econom om#a #a mund mundia ial, l, ya $ue $ue son son parás parásito itos s de culti cultivos vos produ producto ctores res de alime alimento nto como como cerea cereales les,, legumi leguminos nosas as,, plátano , yuca, coco, papa, remolacha, ca%a, %ame además cultivos destinados a la obtención de &ibra, madera, as# como plantas ornamentales, igualmente son consider considerado ados s parásit parásitos os de vertebr vertebrados ados,, de ah# su importan importancia cia en medicina medicina y veterinaria. Los nematodos &itoparásitos presenta un tama%o $ue oscila entre los '"" a (""" microm micrometr etros os,, y algu alguno nos s puede pueden n llegar llegar a ) milime milimetro tros s de longi longitud tud por por (*+'* (*+'* micromet micrometros ros de ancho, ancho, se caracter caracterian ian por ser hialino hialinos, s, no segment segmentado ados, s, su cuerpo cuerpo está está cubiert cubierto o por una cut#cula cut#cula con estr#as algunas algunas veces, veces, poseen poseen un sistemas digestivo constituido por boca, esó&ago, intestino, recto y ano. Algunas especies especies muestran muestran dimor&is dimor&ismo mo sexual sexual muy marcado marcado -machos -machos y hembras hembras con &ormas di&erentes. Las hermbras adultas ad$uieren &orma de pera, redonda o arri%odana. /na de las caracter#sticas $ue identi&ican a un nematodo &itoparásitos es la presencia de un estilete, el cual es una estructura protactil -$ue puede extenderse hacia a&uera y hueca a manera de aguja hipodrmica, $ue le permite al nematodo penetrar la ra#, asi como per&orar las celulas vegetales y extraer nutrientes. Las in&ecciones por nematodos en plantas producen s#ntomas en ra#ces, asi como en parte partes s are areas. as. Las Las ra#ce ra#ces s puede pueden n prese present ntar ar lesion lesiones es,, nudos nudos o agalla agallas, s, rami rami&i &ic cación ión exce xcesiva siva,, cuando las las les lesion iones van acompa mpa%adas por microorganismos microorganismos patógenos -hongos, -hongos, bacterias bacterias el resultado resultado es la pudrición de la ra#. Los s#ntomas en la ra# generalmente generalmente van acompa%ados de s#ntomas en las partes areas re&lejados como menos crecimiento, coloración amarilla del &ollaje, reducción del rendimiento y mala calidad de los productos. Kilómetro 12 Ví P!erto Ló"e#$ Vere% Br&elo'$ Vill(i&e'&io$ Met Colom)i Co'm!t%or Co'm!t%or **1*+,, e-t. 1+/0 Se%e Br&elo' Br&elo' **1*,, Se%e S' A'to'io P34i' 1 %e *
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Algunas especies de nematodos invaden las partes areas de las plantas en lugar de las ra#ces, causando lesiones necróticas, distorsión de hojas y tallos, desarrollo anormal de partes &lorales.
OBETIVOS
Conocer los di&erentes mtodos de aislamiento de nematodos &itoparasitos 0denti&icar gneros nematodos Fitoparásitos asociados a tejido vegetal en&ermo!
COMPETENCIA Conoce las metodolog#as de extracción de nematodos y las principales caracter#sticas $ue permiten di&erenciar los gneros.
RESULTADO DE APRENDIZAJE Aplica la metodolog#a de extracci1n. 0denti&ica gneros de nematodos con ayuda de claves taxonómicas
MATERIALES Y EQUIPOS
"#todo de $i%&ado' %e(tri)&*a%i+( , F$ota%i+( e( a-.%ar
2amices de 3(", !*", ("4 y '5 6m Licuadora Centri&uga Frasco lavador Cajas de 7etri 2ejido vegetal en&ermo -8a#ces Suelo 7ortaobjetos Capilares 9stereoscopio :icroscopio
"#todo de Em/&do de Baerma(
2ejido vegetal en&ermo -8a#ces Suelo 9mbudo 7apel &iltro ;alde Cajas de petri Kilómetro 12 Ví P!erto Ló"e#$ Vere% Br&elo'$ Vill(i&e'&io$ Met Colom)i Co'm!t%or **1*+,, e-t. 1+/0 Se%e Br&elo' **1*,, Se%e S' A'to'io P34i' 2 %e *
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7ortaobjetos Capilares 9stereoscopio :icroscopio
ACTIVIDADES - PROCEDIMIENTO
E0tra%%i+( De Nematodos Por E$ "#todo De Li%&ado' Ce(tri)&*a%i+( Y F$ota%i+( E( A-.%ar 1! Las ra#ces se lavaran y picaran y posteriormente se pesaran '" g 2! :uestras de Suelo< Las muestras de suelo luego de ser pesadas serán (.
!.
'. ).
pasadas directamente a los tamices. :uestras de 8a#ces< =erter las ra#ces -Cada muestra por separado si trata de di&erentes cultivos o tratamientos $ue se $uieran evaluar en un vaso de licuadora, licuar tres veces por (" s con intervalos de este mismo tiempo entre un licuado y otro. 7asar las muestras de ra#ces y suelo -cada muestra por separado por tamices ubicados en orden< 3(", !*", ("4 y '5 6m, lavando con abundante agua proveniente del gri&o, de manera $ue los nematodos pasaran del tami mayor al de menor tama%o de poro. =erter &inalmente los residuos de lavado $ue $uedaron en el tami de '5 6m a tubos de centri&uga con ayuda de un embudo. Centri&ugar a '.5"" rpm durante * min. /na ve cumplido el tiempo, eliminar el sobrenadante de los tubos.
*. Al precipitado se agregar una solución de a>car al *"? y nuevamente se llevar a centri&ugar en las mismas condiciones anteriores. 4. /na ve cumplido este proceso recuperar el sobrenadante donde $uedaran &lotando los nematodos. =erter el sobrenadante en el tami de '5 6m para realiar el lavado de a>car a los nematodos, los cuales se colectaran en una caja de 7etri 3. 0denti&icar los nematodos tomando al#cuotas de !" 6L a partir de di&erentes puntos de la caja 7etri, colocar sobre un portaobjetos y observar con la ayuda de un microscopio compuesto de lu
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II! E0tra%%i+( De Nematodo Por "#todo De Em/&do De Baerma(( Ra3%es
8ecolectar suelo de un cultivo, aproximadamente '"" gramos. 7reparar un embudo -(!+(* cent#metros de diámetro y unir una manguera en el punto de salida, sellar con una pina colocada en el extremo. Colocar el embudo en un soporte. @entro del embudo colocar un papel &iltro y posteriormente llenarlo con agua. Colocar la muestra de suelo en un vaso de precipitado, seguidamente sellar con un troo de tela, y sujetarla con una liga. 0nvertir el vaso de precipitado sobre el embudo, de manera $ue $uede sumergido en el agua y se deja reposar durante toda la noche o varias horas. Los nematodos vivos se mueven activamente y migran a travs de la tela y papel poroso, llegando hasta la parte &inal de la manguera. :as del "? de los nematodos vivos se recuperan en los primeros *+5 mililitros de agua.
Colocar la muestra en una caja de petri.
Bacer conteo de nematodos con ayuda del estereoscopio.
2omar una gota con ayuda de un capilar, colocar en un porta objeto, observar a travs del microscopio y con ayuda de claves taxonómicas identi&icar los nematodos presentes.
Ra3%es
Cortar el material -ra#ces en troos con ayuda de un cuchillo. Colocar el tejido en el embudo de ;aermann como se describió anteriormente. @ejar reposar durante toda la noche 8ecoger la muestra en una caja de petri estancada en el extremo de la manguera 8ealiar conteo de nematodos con ayuda del estereoscopio 2omar una gota con ayuda de un capilar, colocar en un portaobjeto, observar a travs del microscopio y con ayuda de claves taxonómicas identi&icar los nematodos presentes.
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CRITERIOS PARA LA EVALUACI4N DE ASIGNATURAS DE LABORATORIO la nota de cada practica de laboratorio ,seg>n lo determine el docente el d#a de la práctica, podrá salir de<
Solamente el in&orme< (""? 0n&orme y ui< *" y *"?
0n&orme, más pre+in&orme< 5" y !"? respectivamente
Solamente ui < (""?
(. 7rein&orme yDo $ui< 7ara la revisión de los conceptos previos se evaluará con el pre in&orme o un $ui, este >ltimo se realiará antes de iniciar la práctica o al &inaliar la experiencia. 9l pre in&orme se presenta al iniciar cada experiencia, es un documento escrito a mano $ue se elabora teniendo en cuenta la in&ormación suministrada en el manual de laboratorio. 9n el pre in&orme el e$uipo de trabajo re&leja lo $ue va a ser su actividad en la práctica del d#a. A continuación se presenta el &ormato para la elaboración del pre+in&orme<
Kilómetro 12 Ví P!erto Ló"e#$ Vere% Br&elo'$ Vill(i&e'&io$ Met Colom)i Co'm!t%or **1*+,, e-t. 1+/0 Se%e Br&elo' **1*,, Se%e S' A'to'io P34i' 7 %e *
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