PEMERIKSAAN BILIRUBIN DIRECT DAN BILIRUBIN TOTAL.docx

PEMERIKSAAN BILIRUBIN DIRECT DAN BILIRUBIN TOTAL A. Tujuan

: Untuk mengetahui kadar Bilirubin Direct (D) dan Bilirubin Total (T)

B. Metode

: Jendrassik / Grof

C. Prinsip

:

Bilirubin bereaksi dengan Diazotized Sulphanilic Acid (DSA) membentuk zat warna merah azo. Absorbans zat warna ini pada 546 nm sebanding dengan konsentrasi bilirubin dalam sampel. Glucuronides bilirubin yang larut dalam air bereaksi langsung dengan DSA yang mana albumin yang terkonjugasi dalam bilirubin indirect hanya akan bereaksi dengan DSA, dibantu adanya accelerator (zat pemercepat). Bilirubin total = bilirubin direct + bilirubin indirect. D. Reaksi

: Asam sulfanilic + natrium nitrit

DSA

Bilirubin +DSA

DIRECT azobilirubin

Bilirubin + accelerator

TOTAL azobilirubin

E. Bahan

: Serum atau plasma heparin.

Hindari hemolisis. Sampel harus terlindungi dari sinar. Stabilitas : Bilirubin stabil selama 3 hari bila disimpan terlindung dari sinar pada 2-8°C. F. Reagen

:

1. 1 x 100 ml reagen Bilirubin Total (tutup putih) Asam sulfanilic

14 mmol/l

Asam hydroclorit

250 mmol/l

Caffeine (accelerator)

200 mmol/l

Natrium benzoate

420 mmol/l

2. 1 x 9 ml reagen T-Nitrit (tutup putih) untuk pengukuran Bilirubin Total Natrium nitrit

14 mmol/l

3. 1 x 100 ml reagen Bilirubin Direct (tutup merah) Asam sulfanilic

14 mmol/l

Asam hydroclorit

250 mmol/l

4. 1 x 9 ml reagen D-Nitrit (tutup merah) untuk pengukuran Bilirubin Direct Natrium nitrit G. Alat

0.9 mmol/l :

1. Micropipet 2. Tip biru dan tip kuning 3. Tabung reaksi 4. Fotometer H. Cara Kerja a.

:

Persiapan reagen dan stabilitas

1. Kedua reagen dan larutan nitrit siap pakai. 2. Stabil sampai tanggal kadaluarsa bila tidak dibuka dan disimpan pada 15-25°C. b. Pemeriksaan

c.

Panjang gelombang

: 546 nm

Celah optik

: 1 cm

Suhu

: 20-25°C

Pengukuran

: terhadap blanko sampel

Prosedur

1. Bilirubin Total Pipet ke dalam cuvet Reagen, bilirubin total (1) Reagen T-Nitrit

Blanko sampel

Sampel

1000 µl

1000 µl

-

40 µl

Campur dengan baik, inkubasi selama 5 menit. Sampel

100 µl

100 µl

Campur, inkubasi pada suhu kamar selama 10 sampai 30 menit. Ukur absorbans sampel terhadap blanko sampel (∆A546)

2. Bilirubin Direct Pipet ke dalam cuvet Reagen, bilirubin direct (3) Reagen D-Nitrit

Blanko sampel

Sampel

1000 µl

1000 µl

-

40 µl

Campur dengan baik, inkubasi selama 2 menit. Sampel

100 µl

100 µl

Campur, inkubasi pada suhu kamar selama 5 menit tepat. Ukur absorbans sampel terhadap blanko sampel (∆A546)

I.

Interpretasi Hasil : Linearitas : Pemeriksaan linear sampai 25 mg/dl. Untuk konsentrasi bilirubin melebihi 25 mg/dl, encerkan sampel 1 + 4 dengan garam fisiologis (0.9%) dan ulangi pemeriksaan. Kalikan hasil dengan 5.

J.

Perhitungan

:

Hitung konsentrasi bilirubin total dan direct dengan menggunakan faktor 13.0 Konsentrasi bilirubin (mg/dl) = ∆A546 x 13.0 (mg/dl) x 17.1 = (µmol/l) K. Nilai Rujukan

:

Bilirubin total

mg/dl

µmol/l

Pada kelahiran, sampai

5

85.5

5 hari, sampai

12

205.0

1 bulan, sampai

1.5

25.6

Dewasa, sampai

1.1

18.8

0.25

4.3

Bilirubin direct Dewasa, sampai