LAPORAN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK II PEMERIKSAAN BILIRUBIN TOTAL, DIRECT DAN INDIRECT
Disusun oleh: Ilham Akbar Setyawan 151510113037
D-III ANALIS MEDIS FAKULTAS VOKASI UNIVERSITAS AIRLANGGA 2017 BAB I
PENDAHULUAN 1 Tujuan
:
1. Untuk mengetahui kadar Bilirubin Direct (D) dan Bilirubin Total (T) dalam serum
1.1 Dasar Teori : Bilirubin adalah pigmen kuning yang berasal dari perombakan heme dari hemoglobin dalam proses pemecahan eritrosit oleh sel retikulo endotel. Disamping itu sekitar 20% bilirubin berasal dari perombakan zat-zat lain. Sel retikulo endotel membuat bilirudbin tidak larut dalam air; bilirubin yang disekresikan dalam darah harus diikatkan pada albumin untuk diangkut dalam plasma untuk menuju hati. Di dalam hati, sel hepatosit melepaskan ikatan itu dan mengkonjugasikannya dengan asam glukoronat sehingga bersifat larut air, dimana reaksi ini melibatka enzim glukoroni transferase (Joy ce, 2007). Bilirubin terkonjugasi masuk ke saluran empedu dan dieksresikan ke usus. Selanjutnya flora usus akan mengubahnya menjadi urobilinogen dan dibuang melalui feses serta sebagian kecil dibuang melalui urine. Bilirubin yang terkonjugasi akan dengan cepat bereaksi dengan asam sulfanil yang terdiazotasi membentuk azobilirubin atau bilirubin langsung (direct bilirubin). Bilirubin terkonjugasi yang merupakan bilirubin bebas yang terikat albumin harus terlebih dahulu dicampur dengan alcohol, kafein, atau pelarut lain sebelum dapat bereaksi, dan sering disebut sebagai bilirubin tidak langsung (indirect bilirubin) (Joy ce, 2007)
BAB II METODE KERJA 2. Metode
: Jendrassik / Grof
2.2 Prinsip
:
Bilirubin bereaksi dengan Diazotized Sulphanilic Acid (DSA) membentuk zat warna merah azo. Absorbans zat warna ini pada 546 nm sebanding dengan konsentrasi bilirubin dalam sampel. Glucuronides bilirubin yang larut dalam air bereaksi langsung dengan DSA yang mana albumin yang terkonjugasi dalam bilirubin indirect hanya akan bereaksi dengan DSA, dibantu adanya accelerator (zat pemercepat). Bilirubin total = bilirubin direct + bilirubin indirect. 2.3 Reaksi
: Asam sulfanilic + natrium nitrit
DSA
Bilirubin +DSA
DIRECT azobilirubin
Bilirubin + accelerator
TOTAL azobilirubin
2.4 Bahan
: Serum atau plasma heparin.
Hindari hemolisis. Sampel harus terlindungi dari sinar. Stabilitas : Bilirubin stabil selama 3 hari bila disimpan terlindung dari sinar pada 2-8°C. 2.5 Reagen 1.
2.
:
1 x 100 ml reagen Bilirubin Total (tutup putih) Asam sulfanilic
14 mmol/l
Asam hydroclorit
250 mmol/l
Caffeine (accelerator)
200 mmol/l
Natrium benzoate
420 mmol/l
1 x 9 ml reagen T-Nitrit (tutup putih) untuk pengukuran Bilirubin Total Natrium nitrit
3.
4.
14 mmol/l
1 x 100 ml reagen Bilirubin Direct (tutup merah) Asam sulfanilic
14 mmol/l
Asam hydroclorit
250 mmol/l
1 x 9 ml reagen D-Nitrit (tutup merah) untuk pengukuran Bilirubin Direct Natrium nitrit
2.6 Alat 1.
Micropipet
0.9 mmol/l :
2.
Tip biru dan tip kuning
3.
Tabung reaksi
4.
Fotometer
2.7
Cara Kerja Pemeriksaan Bilirubin Total : Isi masing – masing tabung Pipet ke dalam cuvet Blanko sampel Sampel masukkan tabung sampling darah Reagen, bilirubin total (1) 1000 µl 1000 µl Venoject vena sebanyak 5 Reagen T-Nitrit 40 µl Dicentrifuge Persiapan Sampel ml, didiamkan dengan Campur dengan baik, sampai inkubasimembeku selama 5 menit. kecepatan 3000 rp selama 20 Sampel 100menit µl 100 µl m Selma 15 menit Campur, inkubasi pada suhu kamar selama 10 sampai 30 menit. Ukur absorbans sampel terhadap blanko sampel (∆A546)
Disiapkan 4 Tabung serologi
PEMERIKSAAN BILIRUBIN TOTAL
Kemudian setelah dicentrifuge akan terbentuk 2 lapisan : Lapisan atas = Serum, Lapisn Bawah = SDM
2 Tabung BLanko, Standart, 1 tabung sampel A, 1 tabung sampel B
pipet masingmasing larutan/cairan kedalam Tabung
Inkubasi selama 5 menit, masukan sampel, homogenkan dan inkubasi selama 10 menit
Dibaca hasilnya pada alat Fotometer λ = 546 nm F = 13.00 program CST
2.8
Cara Kerja Pemeriksaan Bilirubin Direck
Persiapan Sampel
Disiapkan 4 Tabung serologi
2 Tabung BLanko, Standart, 1 tabung sampel A , 2 tabung sampel B
sampling darah vena sebanyak 5 ml, didiamkan sampai membeku selama 20 menit
masukkan tabung Venoject Dicentrifuge dengan kecepatan 3000 rpm Selma 15 menit
PEMERIKSAAN BILIRUBIN DIRECK
Kemudian setelah dicentrifuge akan terbentuk 2 lapisan : Lapisan atas = Serum, Lapisn Bawah = SDM
pipet masing-masing larutan/cairan kedalam Tabung
Inkubasi selama 2 menit, masukan sampel, homogenkan dan inkubasi selama 5 menit
Dibaca hasilnya pada alat Fotometer λ = 546 nm F = 13.00 program CST
2.
Bilirubin Direct Pipet ke dalam cuvet Blanko sampel 1000 µl Reagen, bilirubin direct (3) Reagen D-Nitrit Campur dengan baik, inkubasi selama 2 menit. Sampel 100 µl
Sampel 1000 µl 40 µl 100 µl
Campur, inkubasi pada suhu kamar selama 5 menit tepat. Ukur absorbans sampel terhadap blanko sampel (∆A546) BAB III HASIL DAN PEMBAHASAN 3. Interpretasi Hasil :
Linearitas : Pemeriksaan linear sampai 25 mg/dl. Untuk konsentrasi bilirubin melebihi 25 mg/dl, encerkan sampel 1 + 4 dengan garam fisiologis (0.9%) dan ulangi pemeriksaan. Kalikan hasil dengan 5. 3.1 Perhitungan
:
Hitung konsentrasi bilirubin total dan direct dengan menggunakan faktor 13.0 Konsentrasi bilirubin (mg/dl) = ∆A546 x 13.0 (mg/dl) x 17.1 = (µmol/l) 3.2 Nilai Rujukan
:
Bilirubin total
mg/dl
µmol/l
Pada kelahiran, sampai 5 hari, sampai 1 bulan, sampai Dewasa, sampai
5 12 1.5 1.1
85.5 205.0 25.6 18.8
Bilirubin direct Dewasa, sampai
0.25
4.3
Hasil Praktikum
:
Bilirubin Direck Sampel A = 1,35mg/dL Sampel B = 0,13 mg/dL Bilirubin total Sampel A = 2,57 mg/dL Sampel B = 0,27 mg/dL Bilirubin indirect Sampel A = 2,57-1,35 = 1,22 mg/dL Sampel B = 0,27-0,13= 0,14 mg/dL 3.3 Pembahasan Praktikum di atas adalah praktikum bilirubin yang berfungsi untuk pemeriksaan faal hati khususnya sebagai fungsi eksresi. Praktikum bilirubin ini menggunakan metode
Jendrasik/Grόf dengan prinsip yaitu bilirubin bereaksi dengan diazo asam sulfanilik untuk membentuk pewarna azo merah. Absorbansi pada pewarna ini pada 546 nm adalah sebanding dengan konsentrasi bilirubin yang ada dalam sampel. Bilirubin yang larut dalam air bereaksi dengan adanya akselerator DSA. Total bilirubin adalah penjumlahan dari kadar bilirubin direk dan indirek. Dua sampel yang diperiksa adalah sampel yang berbeda, yaitu sampel B berasal dari mahasiswa dan sampel nomor A berasal dari laboratorium patologi klinik. Dari hasil praktikum bilirubin total di atas ada yang normal dan ada yang melebihi nilai normal. Dimana serum yang digunakan adalah serum orang dewasa yang batas nilainya adalah 1,1 mg/dl. Sampel B memperoleh hasil 0,27 dan hasil dari sampel A adalah 2,57 mg/dl. Tingginya kadar bilirubin total pada sampel nomor 2 mengindikasikan adanya gangguan dalam faal hati terutama adalah fungsi eksresi. Kadar bilirubin total dalam serum yang mencapai 2,57 mg/dl dapat diindikasikan sebagai hiperbilirubinemia yang dapat menyebabkan ikterik, berarti jaringan tubuh berwarna kekuning-kuningan pada kulit dan jaringan dalam. Penyebab umum ikterus adalah adanya sejumlah
besar dalam cairan
ekstraselular, baik bilirubin terkonjugasi dan takterkonjugasi. 1. Ikterus Fisiologis Secara umum setiap neonatus mengalami peningkatan konsentrasi bilirubin serum,namun kurang12 mg/dl pada hari ketiga hidupnya dipertimbangkan sebagai ikterus fisiologis. Pola ikterus fisiologis pada bayi baru lahir sebagai berikut: Kadar bilirubin serum total biasanya mencapai puncakpada hari ketiga sampai kelima kehidupan dengan kadar 5-6 mg/dL kemudian menurun kembali dalam minggu pertama setelah lahir.Kadang dapat muncul peningkatan kadar billirubin sampai 12 mg/dL dengan billirubin terkonjugasi < 2 mg/dL.
2.
Ikterus pada bayi mendapat ASI(Breast milk jaundice)
Pada sebagian bayi yang mandapat ASI eksklusif,dapat terjadi ikterus yang berkepanjangan.Hal ini dapat terjadi karena adanya faktor tertentu dalam ASI yang diduga meningkatkan absorbsi bilirubin diusus halus.Bila tidak ditemukan faktor resiko lain ASI tidak perlu dihentikan dan frekuensi ditambah.Apabila keadaan umum bayi baik ,aktif,minum kuat,tidak ada tatalaksana khusus meskipun ada peningkatan kadar billirubin.
Percobaan selanjutnya bilirubin direct. Dua sampel yang diperiksa dalam praktikum kali ini berasal dari sampel yang berbeda, yaitu sampel B adalah sampel yang berasal dari mahasiswa dan sampel A berasal dari laboratorium patologi klinik. Hasil pada praktikum kali ini didapatkan hasil yang normal untuk sampel nomor satu yaitu 0,13 mg/dl dan didapatkan pula hasil yang melewati nilai normal pada sampel nomor dua yaitu 1,35 mg/dl. Tingginya kadar bilirubin direk pada serum menandakan adanya gangguan fungsi hati, karena kadar total bilirubin, bilirubin direk, dan bilirubin indirek sangatlah berhubungan Pemeriksaan kadar bilirubin total dan kadar bilirubin direk secara terpisah dapat menghasilkan kadar bilirubin indirek dengan cara kadar bilirubin total dikurangi dengan kadar bilirubin indirek. Nilai normal bilirubin indirek adalah 0,2-0,8 mg/dl. Pada pemeriksaan kali ini bilirubin indirek hanya dapat dihitung dari hasil yang normal, karena sampel yang digunakan berasal dari sampel yang sama. Perhitungan untuk kadar bilirubin indirek hasil yang normal adalah 0,27 mg/dl (bilirubin total) – 0,13 mg/dl (bilirubin direk) = 0,14 mg/dl. Maka diketahui kadar bilirubin indirek adalah normal yaitu sebesar 0,14 mg/dl. Namun, pada sampel yang hasilnya berada di atas nilai normal baik bilirubin total atau bilirubin direk tidak dapat dihitung nilai dari bilirubin indirek karena kedua sampel yang digunakan berasal dari sampel yang berbeda. Hal itu dikarenakan terbatasnya jumlah sampel dan banyaknya kelompok yang melakukan pemeriksaan sehingga kehabisan sampel yang sama. Kadar bilirubin dalam serum diatur oleh metabolime bilirubin yang berasal dari eritrosit. Peningkatan kadar bilirubin dapat terjadi karena : 1. Produksi bilirubin yang berlebihan, disebabkan oleh; Peningkatan sel darah merah, penurunan umur sel darah merah, peningkatan early bilirubin. 2. Penyerapan oleh hati 3. Gangguan konjugasi 4. Penurunan ekskresi hepatoselular 5. Gangguan aliran empedu, baik intra maupun ekstrahepatik. Tiga mekanisme yang pertama dapat menyebabkan hiperbilirubinemia takterkonjugasi, dan dua yang terakhir menyebabkan hiperbilirubinemia yang terutama terkonjugasi (Robbins, 2007 : 668).
BAB IV KESIMPULAN 4.1 Kesimpulan
Hasil dari praktikum bilirubin total adalah 0,27 mg/dl pada sampel B dan 2,57 mg/dl pada sampel A. Nilai normal dari bilirubin total adalah sampai 1,1 atau antara 0,2 – 1
mg/dl. Untuk itu, sampel B dinyatakan hasil yang normal dan sampel A di atas normal
atau ikterik. Hasil dari praktikum bilirubin direk adalah 0,13 mg/dl pada sampel B dan 1,37 mg/dl pada sampel A. Nilai normal dari bilirubin direk adalah 0,25 mg/dl atau 0 – 0,2 mg/dl. Untuk itu, sampel B dinyatakan hasil yang normal dan sampel A di atas normal atau
ikterik. Hasil dari praktikum indirek adalah 0,27 mg/dl yang diperoleh pada sampel B. Nilai normal dari bilirubin indirek adalah 0,2 – 0,8 mg/dl. Untuk itu, sampel nomor satu
dinyatakan normal. Pada sampel 2 tidak bisa dihitung bilirubin indirek karena berasal dari sampel yang
berbeda. Penanganan sampel dan reagen harus diperhatikan karena berpengaruh terhadap hasil pembacaan pada fotometer.
DAFTAR PUSTAKA Joyce LeFever Kee. 2007. Pedoman Pemeriksaan Laboratorium dan Diagnostik. Jakarta : EGC. Rosida, Azma. 2016. Pemeriksaan Laboratorium Penyakit Hati. Berkala Kedokteron. Vol.12, No.1.
