OBSERVACION DE CROMOSOMAS MEIOTICOS De la Cruz Roxana1; Luna Connie1; Nuevo Natalie1;Ruiz Roberto1; Briceño Ruben1 1_Facultad de Ciencia Biológicas, Universidad Nacional Mayor de San Macos
Palabras clave: Meiosis, paquiteno, Acheta domesticus. _____________________________________________________________________
INTRODUCCION: La meiosis es un mecanismo celular mediante el cual se reduce a la mitad el número cromosomas, quedando siempre un representante de cada pareja de cromosomas homólogos. Así, durante la reproducción sexual, la fusión de dos gametos de dos individuos para formar un nuevo permite la formación de un zigoto con las dos componentes de cada de cada pareja de cromosomas homólogos, es decir, dará a un organismo diploide. En la meiosis inicialmente hay una replicación del genoma, y posteriormente ocurren dos divisiones celulares (denominadas meiosis I y meiosis II), produciéndose 4 células haploides. Cada una de estas células haploides terminará convirtiéndose en un gameto. Durante la meiosis se da un proceso denominado recombinación. En las células germinales, y en todas las somáticas, la información genética aportada por la madre y por el padre se encuentra en cromosomas diferentes, ambos progenitores aportan una copia para cada cromosoma. Durante la recombinación se intercambian parte de las cromátidas entre cada pareja de cromosomas homólogos obteniendo cromosomas con información única que da lugar a la variabilidad genética. Todo esto ocurre en la Profase I es por ello la importancia de su estudio. La observación de los cromosomas meióticos se realiza para el estudio de su morfología y los cambios que sufren
estos durante este mecanismo. Se extrajeron las gónadas de Acheta domesticus macho para la obtención de espermatocitos en desarrollo que nos permiten observar las fases de la meiosis. Estos fueron tratados con en el laboratorio mediante un protocolo.
OBJETIVOS:
Conocer el protocolo de obtención de láminas meióticas para el estudio de cromosomas paquiténicos. Observar y caracterizar las principales fases de la meiosis en células animales. Evaluar el uso de las gónadas de grillo como muestra para la obtención de láminas meióticas.
MATERIALES:
Para realizar el tratamiento se utilizaron los siguientes materiales: Agua destilada Laminas portaobjeto Laminillas portaobjeto Papel toalla Placas Petri Pipetas Pasteur Gónadas de Acheta domesticus Carnoy HCl 1N Targa Orceina acética
METODOLOGIA: • Para realizar el procedimiento de obtención y diferenciación de cromosomas, se utilizó como muestra biológica las gónadas de Acheta domesticus macho, las cuales fueron extraídas mediante una disección, luego al ser extraídas se le suministro gotas de suero fisiológico, para evitar que la muestra se deteriore. • A continuación las gónadas fueron sumergidas en solución fijadora (CARNOY) la cual deshidrata el tejido el impide el movimiento de los cromosomas. Se mantuvo en esta solución un tiempo aproximado de 15 minutos. • Luego se procedió a lavar, sumergiendo las gónadas en agua destilada un tiempo de 5 minutos. • Siguiendo el procedimiento, se sumergieron las gónadas en solución hidrolizaste (HCl 1N) la cual disuelve pectinas de la lámina media y crea poros en la pared celular, para permitir que las demás soluciones puedan penetrar en la células. Se mantuvo en esta solución un tiempo aproximado de 21 minutos.
membrana gonadal y sola consiste de túbulos liberados, esta fue sumergida en solución ablandadora la cual facilita la disociación de masas celulares y fragiliza la carioteca, para poder apreciar a los cromosomas de mejor manera. Se mantuvo en esta solución un tiempo aproximado de 4 minutos. • Luego se volvió a enjuagar remojando los túbulos en agua destilada por un tiempo de 5 minutos. • Para finalizar se pasaron los túbulos a la lámina portaobjeto, para poder agregarles solución colorante (Orceína 2%) la cual teñirá los cromosomas y otros peculiaridades como cromómeros o Knobs. Los túbulos estuvieron remojados en esta solución un tiempo de 20 minutos. • Por último, pasado el tiempo determinado, se procedió a colocar la laminilla y a realizar el squash, para observar al microscopio.
RESULTADOS: PROFASE I: Paquiteno:
• Pasado este tiempo se procedió a romper la membrana que sostiene dentro los túbulos de las gónadas, para poder liberarlos y que estos puedan estar en contacto directo con la soluciones. • Se volvió a enjuagar la muestra, la cual aún conservaba la membrana gonadal con los túbulos parcialmente liberados, remojándola en agua destilada por un tiempo de 5 minutos. • Pasado este tiempo se procedió a separar totalmente los túbulos, agrupándolos en pares si fuera posible, para que así las siguientes sustancias difundan las células de los túbulos. • A continuación se procedió a sumergir a la muestra, la cual ya no conserva la
Lamina: PA Foto: DSC_2327 Aumento: 1000X Coordenadas: 132.4/30.8
Zoom:2X
Lamina: PA Foto: DSC_2334 Aumento: 1000X Coordenadas: 131.9/30.6 Se observan los bivalentes, cromosomas homólogos apareados, los cromómeros, knobs y el cromosoma X (más pigmentado y de mayor tamaño). METAFASE I:
Aumento: 1000X Se observan las tétradas alineadas en el ecuador de la célula.
PROFASE II En esta fase se observa la presencia de cromosomas compactos (reordenados) en número haploide y por el rompimiento de la membrana nuclear, mientras aparecen nuevamente las fibras del huso. Aumento: 1000X Zoom: 2X
METAFASE II: Se observó una forma particular de la metafase pero en general se debe observar los cromosomas en el plano ecuatorial con las cromátides parcialmente separadas.
difícil obtención con un solo ensayo debido a la corta duración que presenta esta fase. Además de su difícil separación de los cromosomas sin dañar la muestra. Solo se obtuvo una célula en fase de Paquiteno que se encontraba con los cromosomas bien separados (Foto: DSC_2327) por lo que no se pudo elaborar el cariotipo. Tampoco pudimos encontrar la fase de Diacinesis debido a una mala separación de los túbulos seminíferos lo que nos impidió una buena observación, por la acumulación y yuxtaposición de las células, además a la baja tinción por el uso de orceína muy diluida.
Aumento: 1000X Zoom: 2X
CONCLUSIONES
El protocolo realizado fue eficaz para la obtención de láminas meióticas y las observaciones sus fases.
La especie utilizada permitió y puede permitir la observación de las diferentes fases de la Meiosis, desarrollando el protocolo adecuamente.
Se pudo caracterizar la mayoría de fases meióticas.
RECOMENDACIONES: DISCUSIÓN DE RESULTADOS: El protocolo realizado es efectivo para la preparación de láminas meióticas, ya que nos permitió observar varias fases de la meiosis. Sin embargo es necesario llevarlo a cabo con mucho cuidado debido a la fragilidad de las células animales y al pequeño tamaño de los túbulos seminíferos de la especie utilizada. La cantidad de cromosomas en la fase de paquiteno fueron abundantes pero de
Tener cuidado al supervisar el tiempo empleado para cada reactivo. Se recomienda también separar la membrana gonadal y los túbulos seminíferos con mucho cuidado. Es recomendable realizar el protocolo varias veces para obtener suficientes células en fase de Paquiteno y Diacinesis. Por último se recomienda realizar un squash uniforme y con fuerza sobre la
muestra, para evitar espacios de aire entre la muestra.
BIBLIOGRAFIA:
Pérez G. , PRÁCTICAS PRINCIPIOS DE GENÉTICA Y MEJORA VEGETAL, Departamento Producción Agraria Universidad Pública de Navarra, 3º I.A. 08/09. http://www.biologia.edu.ar/cel_eu ca/meiosis.htm http://www.oocities.org/geneticaf ca/MEIOSIS.pdf ACTIVIDAD PRACTICA No. 9 BIOLOGIA CELULAR MITOSIS Y MEIOSIS. CARIOTIPO, Universidad Centroccidental “Lisandro Alvarado” Decanato de Ciencias de la Salud, Noviembre 2009. Megías M. , Molist P. , Pombal M. , ATLAS de HISTOLOGÍA VEGETAL y ANIMAL, Departamento de Biología Funcional y Ciencias de la Salud. Facultad de Biología. Universidad de Vigo. (Versión: Marzo 2015)
