METODO ANALITICO HPLC.doc

DETER DETERMI MINA NACIÓ CIÓN N DE INGRED INGREDIEN IENTE TE ACTIVO CTIVO EN PLAGUI PLAGUICID CIDAS AS UTILIZ UTILIZAN ANDO DO LA TECNI TECNICA CA DE CROMATOGRAFIA CROMATOGRAFIA LIQUIDA L IQUIDA DE ALTA EFICIENCIA. (HPLC) OBJETIVO Describir el procedimiento para la determinación cuantitativa de ingredientes activos en plaguicidas, mediante la técnica de Cromatografía Cromatografía Liquida de alta eficiencia (HPLC) (HPLC) en la modalidad de fase reversa

1.

DESCRIPCIÓN !l personal a cargo de la aplicación del método debe estar familiari"ado con conocimientos b#sicos de $uímica $uímica %nalítica %nalítica cualitativ cualitativa a & cuantitat cuantitativa iva en el campo campo de la Cromatogr Cromatografía afía & conocimie conocimientos ntos de instrumental de Cromatografía Liquida de alta eficiencia (HPLC) %sí mismo debe conocer las medidas indicadas indicadas en las fic'as de eguridad, eguridad, tanto de los productos, productos, solventes solventes & otras sustancias sustancias químicas involucradas en el procedimiento & usar los elementos de protección (!PP) indicados La Cromatografía líquida de alta eficacia o High performance liquid chromatography (HPLC) (HPLC) es una técnica utili"ada para separar los componentes de una me"cla bas#ndose en diferentes tipos de interacciones químicas entre las sustancias anali"adas, la columna cromatogr#fica & la fase móvil !n esta técnica el compuesto pasa por la columna cromatogr#fica a través de la fase estacionaria mediante el bombeo de líquido (fase móvil) a alta presión a través de la columna La muestra a anali"ar es in&ectada & sus componentes se separan dependiendo de las interacciones con la fase estacionaria a medida que pasan por la columna & la fase móvil !l grado de retención de los componentes de la muestra depende de la naturale"a del compuesto, de la composición de la fase estacionaria & de la fase móvil Los disolventes m#s utili"ados son el agua grado HPLC, el metanol & el acetonitrilo !n algunas ocasiones se utili"an soluciones buffer que a&udan a la separación de los compuestos La cromatografía en fase reversa consiste en una fase inmóvil apolar & una fase móvil de polaridad moderada !l tiempo de retención es ma&or para las moléculas de naturale"a apolar, mientras que las moléculas de car#cter polar elu&en m#s r#pidamente

4.

MATERIALES+ REACTIVOS , EQUIPOS -.. .ateriales • • • • • • • • •

/alones volumétricos de 01 mL Columnas para HPLC C23 (4P3 ó 5D0) o su 'omologa seg6n el fabricante .icroeringa de 7 8L graduada para in&ección autom#tica en HPLC Pipetas aforadas de , 0, 9, :, 1, ; & 3 mL Probetas graduadas de  L !rlenme&ers de  L .embrana para filtración de agua 7,:1 µm .embrana para filtración de solventes 7,:1 µm
-./. 4eactivos • • • •

.etanol grado cromatogr#fico !st#ndar analítico del ingrediente activo de pure"a conocida & debidamente certificada %gua grado HPLC> %gua desminerali"ada & luego filtrada en el sistema de filtración a través de membrana millipore de 7,:1 µm 'idrofílico %cetonitrilo grado HPLC> filtrado por membrana millipore de 7,:1 µm para solventes org#nicos

-.0. !quipos • • • • •

/alan"a analítica /a?o ultrasónico istema de filtración por membrana (7:1 µm) /omba de vacío Cromatógrafo Líquido de %lta !ficiencia con Detector @<2
solución madre est#ndar en mgEmL (dependiendo del ingrediente activo se toma determinado peso del est#ndar) Llevar a volumen con el solvente & garanti"ar su completa disolución con la a&uda del ba?o ultrasónico Dear temperar la solución madre & tomar : alícuotas (diferentes mL dependiendo del ingrediente activo) llev#ndolas a balones de 01 mL & aforando con el solvente, para tener concentraciones en mgEmL (
1./. Preparación de la muestra Pesar por duplicado & con apro-imación a la décima de miligramo (7777g), la cantidad necesaria de muestra para obtener una solución madre de ingrediente activo en balones volumétricos de 01 mL, llevar a volumen con solvente & garanti"ar su completa disolución con la a&uda del ba?o ultrasónico Dear temperar & tomar una alícuota (dependiendo del ingrediente activo) en un balón de 01 mL & llevar a volumen con solvente

Nt!# N % t!s 2!s &5%st"!s 6 %stán!"%s s% n%%s$t! >!%" s25$*n &!"%+ s% '%s! $"%t!&%nt% %n 2!s n%nt"!$n%s ?5% s% ?5$%"% t!n %2 %stán!" & 2! &5%st"!. En 2! T!;2! N<  ANE@OS s% $n$! %2 $nt%"4!2 % n%nt"!$n%s. 1.0. Condiciones del equipo & corrida cromatogr#fica @na ve" encendido el equipo se establecen las condiciones de la corrida cromatogr#fica en el istema de Datos de Cromatografía !GC'rom !lite oftBare < 9 o, el L olution 'imad"u2 077: en su aplicación de an#lisis de pro&ectos seg6n los datos consignados en la tabla *+  de los ane-os /ao estas condiciones previas a la in&ección, debe permitirse que el sistema cromatogr#fico se estabilice (presión & fluo constantes), lo que origina una línea base constante & estable Posteriormente se debe verificar la conformidad del sistema, se debe observar que la respuesta del blanco (solvente de los est#ndares & de la muestra) no interfiera con la se?al correspondiente al tiempo de retención

7.

FORMAS Consignar los datos correspondientes al proceso en cada uno de los formatos siguientes, esta operación se debe reali"ar en forma simult#nea al proceso> • • • • •

8.

Control de uso de est#ndares de plaguicidas J54.%F5 92070
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS •

.étodo suministrado por el fabricante del producto

•

CAP%C2'andboo= %nal&sis of Fec'nical Jormulated Pesticides

• •

%5%C, t' !dition .anual de Anstrucciones de .aneo de !quipo Lac'rom & del oftBare & el L olution 'imad"u2 077:

9.

ANE@OS

Tabla No.1 Condiciones Para Cromatografía li!ida "#P$C%

INGREDIENTE ACTIVO

COLUMNA

ELU,ENTE

 %n n&

T" (&$n)

SOLVENTE

FLUJO &L&$n

CONC. STD. CURVA &3&L

%bamectina

4P23

%cetonitrilo> %gua 7>97

0:1

99K

.etanol

0

7732799

%cefato

4P23


007

01

!lu&ente

0

7027K

%cetamiprid

4P23

%cetonitrilo> %gua :1>11

01:

0

%cetonitrilo> %gua 97>7

1

7732790

%cetoclor

5D0


0:7

1

!lu&ente



7279

%cido %lfa *aftalen %cético

4P23

03

01

%cetonitrilo> %gua :7>;7

1

77:2;

%cido giberelico

5D0

077

17

!lu&ente

71

7732799

%ldicarb

4P23


077

:

!lu&ente

7

77:27;

%minop&ralid

Gorba- /

%cetonitrilo> /uffer :7>;7 pH 0K1

0:7

99

Asopropanol> H05 (0>)N O5H

71

7732790

%cetonitrilo> /uffer :7>;7 pH 0K1 %cetonitrilo> /uffer :7>;7 pH 0K1

%mitra"

4P23

%cetonitrilo> %gua 37>07

031

01

%cetonitrilo

0

7732790

%"imsulfuron

5D0

%cetonitrilo> %gua 7>97 pH 9

0:7

0K


7

77:2703

/enomil

4P23

%cetonitrilo> /uffer :;>1: pH 01

01:

79

%cetonitrilo N sulfato de sodio an'idroN HCl



7732790

/enta"on

5D0

%cetonitrilo> %gua ;7>:7

0:7

;

!lu&ente

7

77:27;

/ifentrina

4P23

%cetonitrilo> %gua K7>7

091

01

%cetonitrilo

70

7732790

OBSERVACIONES

!n la muestra salen varios picos por posible 'idrólisis r#pida
/ispiribac odio

4P23


0:7

/romacil

4P23

%cetonitrilo> %gua 9;>;:

01:

Captan

4P23 ó 4P23

%cetonitrilo> %gua 17>17 N 77:I H9P5:

07

Carbaril

4P23 & 4P23


Carbenda"im

5D0

Carbofurano

01

!lu&ente



7732790

!lu&ente

0

7732790

11

.etanol

1

77279

033

99

!lu&ente



712709

%cetonitrilo> /uffer 97>7 pH 

0:7

1;

CH9C* N 0ml HCl en solución madre

1

7732790

*ova Pac= C3


07

9

!lu&ente

1

77: 2 7;

Carbosulfan

4P23


037

0

!lu&ente

71

7732790

Ciroma"ina

4P23


097

1


773

7732790

Clet'odim

5D0

%cetonitrilo> %gua > %cido %cético ;3;>97>:

01:

;1

%cetonitrilo



71207

Cloma"one

4P23

%cetonitrilo> %gua 33>0

0:



.etanol

71

71207

Clorfenap&r

4P23


071




70

7732790

Clorflua"uron

4P23

%cetonitrilo> %gua 7>97 N 9ml acido acético

091

0

.etanol

0

7732701

Clorimuron !til

4P2K

%cetonitrilo> %gua :7>;7 pH 9

01:

9

CH9C*>*H :5H (7,7*) 17>17

1

71207

Clorpirifos

4P23


03K

;

!lu&ente



7732790

C&'alofop2p2/ut&l

4P23


091

0;

%cetonitrilo

7

7732790

C&mo-anil

4P23


0:7

9;

!lu&ente



7732790

C&permetrin

4P23


097

0

%cetonitrilo

0

7732790

Damino"ide

4P23


007

91

%gua

73

7;27:3

Deltametrina

4P23


07

9

%cetonitrilo

71

77:273

Diafent'iuron

4P23


0:7

97

%cetonitrilo

7

7732790

Diclorprop

4P23


03

09


1

7121

Difluben"uron

4P23


01:

1

%cetonitrilo

79

7732790

Dimetomorf

4P23

%cetonitrilo> %gua K9>7

0:7

73

%cetonitrilo

70

77:27;

Diuron

5D0


0:7

7


71

7732790

Jamo-adone Jenbucona"ol

4P23 4P23

%cetonitrilo> %gua 1>01 %cetonitrilo> %gua 17>17

097 01:

0 

%cetonitrilo %cetonitrilo

70 01

77:27 7732790

Jentin 'idró-ido

4P23

.etanol> Asooctano> H05: 7* K13>:>70

001

7

.etanol

79

7732790

Jipronil

4P23


01:

1


7

7732790

Jlua"ifop2p2but&l

4P23

%cetonitrilo> %gua ;1>91

07

00

!lu&ente

1

77K279;

Jlua"inam

4P23


01:

7

%cetonitrilo

7

7732790

Jluonicamid

5D0


0;1

0

!lu&ente



77:2707

Jlusila"ol

4P23


007

3

%cetonitrilo

7

7732790

Jurametp&r

5D0


01:

;1

!lu&ente



7732790

Halosulfuron .etil

4P23

%cetonitrilo> %gua 7>97 N 71I %cido %cético

0:7

9K

%cetonitrilo



779279

Halo-ifop  .et'&l

4P23

%cetonitrilo> %gua 17>17 N *a5H 7,9* & llevar a pH 0,K1 con H 9P5:

097

He-&t'ia"o-

4P23

%cetonitrilo> %gua 3K>

0:7

Ama"apic

4P23


Ama"ap&r

4P23

Amidacloprid

Puede ser la misma técnica del acido 0,:D


0

70279

9

%cetonitrilo

7

7201

01:

7

%cetonitrilo

71

7732790

%cetonitrilo> %gua 1>31 (771.) pH 0

01:

1

!lu&ente

1

77279;

4P23

%cetonitrilo> %gua K1>1

0;7

9


77

77:27;

Ao-inil 5ctanato

Gorba- /


0:7

K3


7

7121

Aprodione

4P23


091

00

%cetonitrilo> %guaE 7>97

773

7732790

Oasugamicin

Q'atman Partisil % 7

%cetonitrilo> /uffer :>K; pH K

091

:1

%gua

71

7732790

@sa Jactor de conversión

Lambda C&'alotrina

4P23


097

97

%cetonitrilo

7

7732790

Lufenuron

5D0

.etanol> %gua 3>00

0K1



.etanol

1

71207

.andipropamid

4P23


097

7K

%cetonitrilo

71

7732790

.etamidofos

5D0

%cetonitrilo> %gua ;>K:

0:

:01

%gua

0

129

.etil parat'ion

@ltra C23 4estec=


01

:

!lu&ente

7

71207

4P23

%cetonitrilo> metanol> %gua 01>01>17

0;K

;K

.etanol



7;27K

4P23


097

7

!lu&ente

7;

7702773

4P23


0:7

0

%cetonitrilo

7

7732790

.etomil

.eto-ifeno"ide .etrafenona

.etribu"in .etsulfuron metil .ilbemectin .onocrotofos

*icosulfuron 5rt'osulfamuron 5-icarbo-in 5-amil Permetrina Picloram

Piripro-ifen

4P23


037

;

%cetonitrilo

71

7732790

4P23

%cetonitrilo> %gua :0>13

01:

0;

!lu&ente



7732790

4P23


01:

70:

%cetonitrilo>(Hidró-ido de amonio 7,7*) 17>17

09

71207

4P23


017

37 & 79

%cetonitrilo

77

7732790

5D0

%cetonitrilo> %gua 97>7

097

9;K

!lu&ente



7732790

097

73

%cetonitrilo



70273

0;1

93

%cetonitrilo> /uffer (*aHC5 9 7799.) 7>97

1

7732790

4P23 5D0R0

%cetonitrilo> %gua 97>7 pH 0 %cetonitrilo> /uffer (OH0P5: 777:.)E 7>97

5D0


01:

10

%cetonitrilo



77:27;

4P23


0:7

0:1

.etanol



7732707

4P23


03

:K0

.etanol



70027:;

Gorba" /


01:

:9


71

7732799

5D0


01:

K10

!lu&ente



7732790

0K7

:K9

.etanol

0

71207

071

7;

CH95H>H05E 37>07

70

71207

%cetonitrilo> %gua ;7>:7 CH9C55*a 7,. *H:5H>H05>CH95H 7,3>K,0>37

Proclora"

4P23

Propamocarb

4P23

Propanil

4P23


031

7K

.etanol

0

71207

Propicona"ol

4P23


097

03

%cetonitrilo

7

7732790

P&ra"osulfuron etil

4P23


01:

7:

%cetonitrilo

7091

7732790

P&rimet'anil

4P23


0;3

33

!lu&ente

1

7702773

P&rimidifen

4P23


$uinclorac

4P23

%cetonitrilo> %gua :7>;7 N H05: 7,1. (Para  Litro se agregan 1ml de acido)

pinosad

5ds0

Fetracona"ol

0::

;

%cetonitrilo

70

7732790

0:

99

%cetonitrilo> %gua :7>;7 N H05: 7,1. (e agrega ,01ml de acido solo a la solución madre en un balón de 01ml)

1

77:27;

%cetonitrilo> .etanol> *H:2 C55HE :1>:1>7

017

19

.etanol> %gua 17>17

1

73279

4P23


007

73

%cetonitrilo

70

7732790

Fetradifon

4P23


011

11

%cetonitrilo



77:27;

F'iflu"amide

4P23

%cetonitrilo> %gua ;1>91

0;1

:0

!lu&ente

1

77:27;

F'iodicarb

4P23


0:7

93




732790

Fiabenda"ol

4P23

%cetonitrilo> *H:5H ;7>:7

0K7

;31

.etanol



77927:

Fiameto-an

4P23


097

K


7

7732790

Friclop&r

4P23


03

09


1

7121

Friflumuron

4P23

%cetonitrilo> %gua K9>

0:7

73

%cetonitrilo

70

7732790

Friflumi"ol

4P23

%cetonitrilo> /uffer OH0P5: pH>: 13>:0

03K

37

%cetonitrilo

1

71207

METODO ANALITICO HPLC.doc

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