Makalah Instrumentasi ELISA

MAKALAH INSTRUMENTASI III “ELISA (Enzyme-Link (Enzyme-Linked ed Immunosorbe Immunosorbent nt Assay! Assay !

Disusun oleh : Kelompok 4: Erin Syahrani AR Ispan Al Irahim !uh" Rama#han Si%%i &ur Kholi'ah Si%%i !asyi%ha Sri !ulia Elni &anin)sih Sri Rahayu Puspi%a Su+i Rahma,a%i -ermi .il#ayan%i /olan# lan#aa Apri Aprili liaa le le eap eap

: P00341017062 : P00341017072 : P003410170$0 : P003410170(2 : P003410170(3 : P003410170(4 P003410170(4 : P003410170(* : P003410170(6 : P003410170($ : P003410170(( P003410170(( : P0034 003410 1017 1710 100 0

KEMENTRIAN KESEHATAN RE"U#LIK IN$%NESIA "%LITEKNIK KESEHATAN KEN$ARI &URUSAN ANALIS KESEHATAN KESEHATAN TIN'KAT II # )*+

KATA "EN'ANTAR  Pui syukur kami pana%kan ke ha#ira% uhan /an) !aha Esa a%as limpahan rahma% #an hi#ayah&ya kami #apa% menyelesaikan makalah %en%an) 5EISA Enymeinke# Immunosoren% Assay  8" !akalah ini #isusun un%uk  memenuhi %u)as ma%a kuliah Ins%rumen%asi III" uuan yan) leih khusus #ari  penulisan makalah ini ialah un%uk menamah pen)e%ahuan9yan) kami saikan  er#asarkan era)ai sumer in'ormasi #an re'erensi" erima kasih kami u+apkan kepa#a Iu SARI MUSRI,AH SST  selaku #osen pemimin) ma%a kuliah Ins%rumen%asi III yan) %elah memimin) #an memerikan ma%eri kuliah #emi lan+arnya penyelesaian makalah ini" Dalam penyusunan makalah ini9 %i#ak se#iki% hama%an yan) kami ha#api"  &amun kami menya#ari ah,a kelan+aran #alam penyusunan makalah ini %i#ak  lain erka% an%uan9 #oron)an9 #an imin)an pihak pihak yan) %elah meman%u #alam pemua%an makalah ini aik se+ara lan)sun) maupun %i#ak lan)sun)" Sehin))a ken#alaken#ala yan) kami ha#api %era%asi" Kami menya#ari #alam menyusun ma%eri yan) %elah #isaikan ini masih  auh #ari sempurna9 #imana anyak kekuran)an #an perlu peraikan" n%uk i%u kami san)a% men)harapkan saran #an kri%ik ya) meman)un #ari pema+a"

Ken#ari9 1* k%oer 201$

Penyusun

1

$A,TAR ISI

KAA PE&;A&AR""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""i DA<AR ISI""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""" ii =A= I PE&DA>A& 1"1 a%ar =elakan)""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""1 1"2 Rumusan !asalah"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""3 1"3 uuan""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""3 =A= II PE!=A>ASA& 2"1 Pen)er%ian EISA""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""" 4 2"2 Prinsip Kera EISA""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""" * 2"3 =a)iana)ian #an komponen EISA""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""7 2"4 Prose#ur pen))unaan ala% EISA"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""10 2"* Kekuran)an #an Keleihan ala% EISA""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""12 2"6 ?ara Kalirasi #an Pera,a%an ala% EISA"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""" 13

=A= III PE&P 3"1 Kesimpulan""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""" 1* 3"2 Saran""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""16 DA<AR PSAKA""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""17

2

#A# I "EN$AHULUAN

** Latar be.akan/

Imunolo)i a#alah ilmu yan) mempelaari sis%em imuni%as %uuh manusia maupun he,an9 merupakan #isiplin ilmu yan) #alam perkeman)annya erakar  #ari pen+e)ahan #an pen)oa%an penyaki% in'eksi" Se#an)kan Serolo)i ialah ilmu yan) mempelaari reaksi an%i)en an%io#y se+ara in@i%ro"Pemeriksaan serolo)ik  serin) #ilakukan sea)ai upaya mene)akkan #ia)nosis" .alaupun saa% ini  pemeriksaan serolo)ik %i#ak %era%as pa#a penyaki% in'eksi9 namun un%uk  menunan) #ia)nosis penyaki% in'eksi meman) hal yan) serin) #ilkukan" memun)kinkan #ilakukannya pen)ama%an se+ara in @i%ro %erha#ap peruahan kompleks an%i)enan%io#i A)A"

EISA  Enzyme-linked

immunosorbent

assay

a%au

Bpene%apan

ka#ar 

imunosoren %au%enimB merupakan ui serolo)is yan) umum #i)unakan #i  era)ai laora%orium imunolo)i" i ini memiliki eerapa keun))ulan seper%i %eknik pen)eraan yan) rela%i' se#erhana9 ekonomis9 #an memiliki sensi%i@i%as yan) +ukup %in))i" EISA #iperkenalkan pa#a %ahun 1(71 oleh Pe%er Perlmann #an E@a En)@all un%uk men)analisis a#anya in%eraksi an%i)en#en)an an%io#i #i #alam sua%u sampel #en)an men))unakan enim sea)ai pelapor reporter label "

eknik EISA per%ama kali #iperkenalkan pa#a %ahun 1(71 oleh Pe%er  Perlmann #an E@a En)@all" !ereka men))unakan %eknik EISA ini #alam i#an) imunolo)i EISA kon@ensional un%uk men)analisis in%eraksi an%ara an%i)en #an an%io#i #i #alam sua%u sampel9 #imana in%eraksi %erseu% #i%an#ai #en)an men))unakan sua%u enim yan) er'un)si sea)ai pelaporC repor%erC si)nal" EISA a#alah sua%u %eknik iokimia yan) %eru%ama #i)unakan #alam i#an) imunolo)i un%uk men#e%eksi keha#iran an%io#i a%au an%i)en #alam sua%u sampel" EISA %elah #i)unakan sea)ai ala% #ia)nos%ik #alam i#an) me#is9 pa%olo)i

1

%umuhan9 #an u)a era)ai i#an) in#us%ri" Pen))unaan EISA melia%kan se%i#aknya sa%u an%io#i #en)an spesi'i%as yan) leih %in))i #ian#in)kan me%o#e imun lainnya" =er#asarkan uraian #ia%as maka penulis akan memahas %en%an) EISA

Perkeman)an imunolo)i yan) e)i%u +epa% %i#ak %erlepas #ari #oron)an  perkeman)an +aan) ilmu lain ser%a me%o#e pemeriksaan laora%orium yan) #i%unan) #en)an perala%an yan) semakin +an))ih" Analisis9 aik kuali%a%i'  maupun

kuan%i%a%i'9

%erha#ap

era)ai

)amaran

%an))apan

kekealan

menyeakan semakin er%amahnya pemahaman %erha#ap pa%ho)enesis era)ai  penyaki%"

Dalam i#an) keseha%an9 pemahaman sema+am ini9 #i%amah pen)uasaan  prose#ur laora%orium9 semakin memuka kemun)kinan penerapan imunolo)i upaya #ia)nos%ik era)ai penyaki%" eknik imuno#ia)nos%ik +ukup luas #an  er@ariasi9 semuanya er#asarkan reaksi sis%im kekealan #alam %uuh manusia yan) #iaplikasikan se+ara in @i%ro" Imunoassay merupakan salah sa%u %eknik  imuno#ia)nos%ik palin) anyak #i)unakan" eknik ini er#asarkan reaksi kimia an%ara #ua enis anali% an%i)en #an an%i o#i yan) #apa% rnemeri hasil er@ariasi  er)an%un) in#ika%ornya" Sea)ai in#ika%or iasanya #i)unakan ahan ra#ioak%i'   iasanya yo#ium 12* ra#ioimmunoassayC RIA9 sis%im enimsus%ra% %er%en%u seper%i peroksi#aseklorona'%ol9 'os'a%aseromokloroin#olin'os'a%9 a% )olon)an 'uorokrom a%au 'luoresen #an lainlain"

Pa#a pen)eman)an immunoassay anyak pilihan %eknik yan) #apa% #i)unakan sea)ai a+uan un%uk men#apa%kan hasil yan) op%imal9 %e%api %i#ak  se#iki% yan) %eren%ur pa#a %in)ka% sensi%i@i%asnya" =er#asarkan 5ael8 a%au sus%ansi yan) %erkonu)asi ke an%i)en a%au an%io#i un%uk men))amarkan reaksi A)A9 maka %eknik immunoassay #ia)i mena#i EIA Enyme ImmunoAssay9 EISA Enyme inke#Immunosoren% Assay9 RIA Ra#io ImmunoAssay9 I
2

a#alah salah sa%u me%o#e yan) sensi%i' un%uk men#e%eksi an%io#i9 an%i)en9 hormon maupun ahan %oksik" !e%o#e ini merupakan pen)eman)an 1 #ari sis%em #e%eksi #en)an imuno'luores+en+e a%au ra#ioak%i'" Dalam %eknik ini  eerapa enim #apa% #ikonu)asi pa#a an%i)en #an an%io#i" Dalam prak%iknya9 enim yan) #ipilih menunukkan kine%ika se#erhana9 #an #apa% #iui #en)an  prose#ur se#erhana" Per%iman)an

lain

#alam

pen))unaan

%eknik

ini

a#alah

murah9

ke%erse#iaan #an kes%ailan sus%ra%" Pemahasan leih lanu% men)enai %eknik  EISA Enyme inke#Immunosoren% Assay akan #ipaparkan #alam makalah ini"

* Rumusan masa.a0

1" Apa pen)er%ian #ari EISA 2" =a)aimana prinsip kera EISA 3" Apa a)iana)ian #an komponen ala% EISA 4" =a)aimana prose#ur pen))unaan ala% EISA *" Apa Keleihan #an kekuran)an EISA 6" =a)aimana +ara kalirasi #an pera,a%an ala% EISA

*1 Tu2uan

1" !en)e%ahui #an memahami pen)er%ian EISA" 2" !en)e%ahui #an memahami prinsip kera EISA" 3" !en)e%ahui #an memahami a)iana)ian #an komponen EISA" 4" !en)e%ahui #an memahami prose#ur pen))unaan ala% EISA" *" !en)e%ahui #an memahami keleihan #an kekuran)an ala% EISA" 6" !en)e%ahui #an memahami +ara kalirasi #an pera,a%an ala% EISA"

3

#A# II "EM#AHASAN

* "en/ertian ELISA ( Enzyme-Linked Immunosorbent Assay 

 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay EISA a#alah sua%u %eknik iokimia yan) %eru%ama #i)unakan #alam i#an) imunolo)i un%uk men#e%eksi keha#iran an%io#i a%au an%i)en #alam sua%u sampel" EISA %elah #i)unakan sea)ai ala% #ia)nos%ik #alam i#an) me#is9 pa%olo)i %umuhan9 #an u)a era)ai i#an) in#us%ri" Dalam pen)er%ian se#erhana9 seumlah an%i)en yan) %i#ak #ikenal #i%empelkan pa#a sua%u permukaan9 kemu#ian an%io#i spesi'ik #i+u+ikan pa#a  permukaan %erseu%9 sehin))a akan erika%an #en)an an%i)ennya" An%io#i ini %erika% #en)an sua%u enim9 #an pa#a %ahap %erakhir9 #i%amahkan sus%ansi yan) #apa% #iuah oleh enim mena#i sinyal yan) #apa% #i#e%eksi" Dalam EISA 'luoresensi9 saa% +ahaya #en)an panan) )eloman) %er%en%u #isinarkan pa#a sua%u sampel9 kompleks an%i)enCan%io#i akan er'luoresensi sehin))a umlah an%i)en pa#a sampel #apa% #isimpulkan er#asarkan esarnya 'luoresensi"

Pen))unaan EISA melia%kan se%i#aknya sa%u an%io#i #en)an spesi'i%as un%uk an%i)en %er%en%u" Sampel #en)an umlah an%i)en yan) %i#ak #ike%ahui #iimoilisasi pa#a sua%u permukaan soli# iasanya erupa lempen) mikro%i%er   polis%irene9 aik yan) nonspesi'ik melalui penyerapan pa#a permukaan a%au spesi'ik melalui penan)kapan oleh an%io#i lain yan) spesi'ik un%uk an%i)en yan) sama9 #iseu%  sandwich’   EISA" Se%elah an%i)en #iimoilisasi9 an%io#i  pen#e%eksi #i%amahkan9 memen%uk kompleks #en)an an%i)en" An%io#i  pen#e%eksi #apa% erika%an u)a #en)an enim9 a%au #apa% #i#e%eksi se+ara lan)sun) oleh an%io#i sekun#er yan) erika%an #en)an enim melalui  iokonu)asi" Di an%ara %iap %ahap9 plate harus #i+u+i #en)an laru%an #e%eren lemu% un%uk memuan) keleihan pro%ein a%au an%io#i yan) %i#ak %erika%" Se%elah %ahap pen+u+ian %erakhir9 #alam plate #i%amahkan sus%ra% enima%ik  un%uk mempro#uksi sinyal yan) @isiel9 yan) menunukkan kuan%i%as an%i)en

4

#alam sampel" eknik EISA yan) lama men))unakan sus%ra% kromo)enik9 meskipun me%o#eme%o#e %eraru men)eman)kan sus%ra% 'luoro)enik yan)  auh leih sensi%i' " !elakukan EISA melia%kan se%i#aknya sa%u an%io#i #en)an kekhususan un%uk an%i)en %er%en%u"Sampel #en)an umlah yan) %i#ak #ike%ahui #ari an%i)en #iimoilisasi pa#a #ukun)an yan) soli# iasanya pirin) polys%yrene mi+ro%i%er9 meliha% se+ara #e%ail #i a)ian peran)ka% EISA  aik nonspesi'ik melalui a#sorpsi ke permukaan a%au se+ara khusus melalui penan)kapan oleh an%io#i lain spesi'ik %erha#ap an%i)en yan) sama9 #alam Fsan#,i+hF EISA " Se%elah an%i)en #iimoilisasi9 an%io#i #e%eksi #i%amahkan9 memen%uk kompleks #en)an an%i)en" De%eksi an%io#i #apa% ko@alen #ihuun)kan #en)an enim9 a%au sen#iri isa #i#e%eksi #en)an an%io#i sekun#er yan) %erkai% #en)an enim melalui io+onu)a%ion" =a)ian inkuasi an%io#i EISA mirip #en)an yan) #ari ,es%ern lo%" An%ara se%iap lan)kah9 pirin) iasanya #i+u+i #en)an laru%an #e%eren rin)an un%uk men)hilan)kan pro%ein a%au an%io#i yan) %i#ak se+ara khusus %erika%" Se%elah akhir lan)kah men+u+i9 pirin) #ikeman)kan #en)an menamahkan sus%ra% enima%ik un%uk men)hasilkan sinyal %erliha%9 yan) menunukkan kuan%i%as an%i)en #alam sampel"

 "rinsi3 ker2a ELISA

Prinsip #asar #ari %eknik EISA ini se+ara simple #apa% #iaarkan sea)ai  eriku% : Per%ama an%i)en a%au an%io#i yan) hen#ak #iui #i%empelkan pa#a sua%u  permukaan yan) erupa mi+ro%i%er" Penempelan %erseu% #apa% #ilakukan melalui #ua +ara9 yai%u penempelan se+ara non spesi'ik #en)an a#sors ke permukaan mi+ro%i%er9 #an penempelan se+ara spesi'ik #en)an men))unakan an%io#y a%au an%i)en lain yan) ersi'a% spesi'ik #en)an an%i)en a%au an%io#i yan) #iui +ara ini #i)unakan pa#a %eknik EISA san#,i+h" Selanu%nya an%io#i a%au an%i)en

5

spesi'ik yan) %elah #i%au%kan #en)an sua%u enim si)nal #isesuaikan #en)an sampel GH ila sampel erupa an%i)en9 maka #i)unakan an%io#i spesi'ik 9 se#an)kan ila sampel erupa an%io#i9 maka #i)unakan an%i)en spesi'ik #i+ampurkan ke a%as permukaan %erseu%9 sehin))a #apa% %era#i in%eraksi an%ara an%io#i #en)an an%i)en yan) ersesuaian" Kemu#ian ke a%as permukaan %erseu% #i+ampurkan sua%au sus%ra% yan) #apa% ereaksi #en)an enim si)nal" Pa#a saa% sus%ra% %erseu% #i+ampurkan ke permukaan9 enim yan) er%au% #en)an an%io#i a%au an%i)en spesi'ik yan) erin%eraksi #en)an an%io#i a%au an%i)en sampel akan  ereaksi #en)an sus%ra% #an menimulkan sua%u si)nal yan) #apa% #i#e%eksi" Pa#a EISA 'loures+ense misalnya9 enim yan) %er%au% #en)an an%io#i a%au an%i)en spesi'ik akan ereaksi #en)an sus%ra% #an menimulkan si)nal yan)  erupa pen#aran 'loures+ense"

Sea)ian esar me%o#e EISA #ikeman)kan un%uk #e%eksi an%i)en a%au an%io#i %er#iri #ari an%io#i a%au an%i)en yan) +o+ok #en)an yan) #i+ari9 yan) kemu#ian #ien%uk #alam 'ase soli#9 seper%i permukaan plas%ik #ari pla% poli@inil a%au %ue polis%irene9 #i #alamnya sumuran yan) #alam #ari mi+ro#ilu%ion +airan seumlah mikro a%au #i a)ian luar #ari plas%ik s'eris a%au bead   mirip seper%i keleren) ke+il yan) %erua% #ari lo)am" Sis%em %erseu% #inamakan Solid Phase  Immonusrbent Assay"

6

1 &enis dan ba/ian-ba/ian a.at ELISA

1" Pela%
Pirin) (6aik EISA keanyakan pela% yan) #i)unakan #alam EISA a#alah polys%yrene a%au %urunan #ari polis%iren yan) #iperoleh #en)an mo#i'ikasi kimia a%au ra#iasi permukaan" Kon'i)urasi yan) palin) umum a#alah (6 sumur  yan) #isusun mena#i $ aris #an 12 kolom" Se%iap sumur memiliki kirakira 3*0 ul @olume #en)an area in%ernal seki%ar 29* +m 2" =aruaru ini9 3$4 sumur #an 1*36 pela% sumur %elah #ikeman)kan #en)an #imensi keseluruhan yan) sama seper%i pela% (6 pirin) %ra#isional" !ereka #i)unakan #alam penyarin)an %hrou)hpu% yan) %in))i" Selain i%u9 (6 pirin) sumur #en)an sumur se%en)ah @olume sumur %ra#isional %erse#ia" Pen)uian #ilakukan #i sumur se%en)ah @olume i#en%ik #alam kinera #en)an ukuran %ra#isional9 %e%api mampu men)hema%  anyak #alam rea)en" Ino@asi lain aruaru ini a#alah men)kon'i)urasi sumur  sehin))a area #i mana a)ian a,ah er%emu sisi sumur #iula%kan ukan pa#a su#u% (0 #eraa%" Ini %elah #ilaporkan un%uk men#apa%kan pen+u+ian sumur yan) leih aik" &amun al%erna%i' lain a#alah menamahkan sirip ke a)ian #alam sumur un%uk menamahkan leih anyak area permukaan un%uk a#sorpsi" Selain

pirin)

yan)

%i#ak

#ilapisi9

a#a

era)ai

mo#i'ikasi

yan)

menin))alkan )u)us amina a%au reak%i' seper%i kelompok maleimi#e9 hi#rain

7

a%au &oysu++inimi#e pa#a permukaan yan) #apa% #i)unakan un%uk huun)an  pro%ein ko@alen"

2" EISA Pipe%

a) Pipet mulchannel dan pipet single-channel b) Single-channel, fxed-!lume dan !lume-disesuai"an #1$2% &', 1%$1%% &', 2%$2%% &', dll() c) ulchannel, *- dan 12-channel d) +nit pengeluaan !t!mas semi-!t!mas e) Sistem sepenuhna !t!mas ang dapat memp!ses bebeapa lempeng

3" Sis%em .asher 

a Sis%em pen+u+ian semio%oma%is   Sis%em manual yan) men+u+i sa%u aris a%au kolom sekali)us

*

+ Sis%em semio%oma%is yan) menan)ani sa%u s%rip a%au pela% pa#a sa%u ,ak%u # Sis%em sepenuhnya o%oma%is yan) #apa% memproses eerapa lempen)

4" Pema+a empen) EISA

a   + #

Pema+a lempen) o%oma%is Pema+a manual yan) mema+a sa%u aris a%au sekali)us pa#a sa%u ,ak%u Pema+a semio%oma%is yan) mema+a sa%u pirin) sekali)us Sis%em sepenuhnya o%oma%is yan) #apa% memproses eerapa lempen) se+ara ersamaan

?on%oh a)iana)ian ala% EISA enis !ini -i#a: Ala% mini @i#as a#alah salah sa%u ala% yan) #i)unakan un%uk pemeriksaan imunolo)i" Prinsip ala% ini merupakan mo#i'ikasi #ari prinsip EISA yan)  pema+aannya er#asarkan 'luoresensi"

.

 Komponenkomponen mini @i#as: 1" omol onCo''  2" ray =er'un)si sea)ai %empa% un%uk memasukkan s%rip yan) erisi sampel #an rea)en" 3" Display ayar =er'un)si sea)ai %empa% un%uk menampilkan pro)ram pa#a ala%" 4" Prin%er  *" Inkua%or  6" =er'un)si un%uk proses inkuasi pa#a pemeriksaan9 a)ar reaksi leih sempurna iasanya pa#a suhu 37 0?"

4 "rosedur "en/unaan A.at E.isa

=eriku% ini a#alah +on%oh lan)kah kera eerapa ma+am %eknik EISA9 yai%u: a. Pendeteksian antibody dengan ELISA indirect

1%

1" !elapisi mikro%i%er pla%e #en)an an%i)en yan) su#ah #imurnikan #en)an memiarkan laru%an erisi an%i)en menempel pa#a #in#in)C permukaan selama 3060 meni%" 2" !emilas an%i)en yan) %i#ak %erika% #en)an u''er" 3" !elapisi sisisisi %er%en%uyan) mun)kin %i#ak spesi'ik #ileka%i oleh an%i)en #en)an pro%ein yan) %i#ak erhuun)anC %i#ak spesi'ik seper%i laru%an susu  uuk" 4" !emilas pro%ein yan) %i#ak meleka%" *" !enamahkan sampel serum yan) akan #i#e%eksi an%io#inya #an memiarkan an%io#y spesi'ik un%uk erika%an #en)an an%i)en" 6" !emilas an%io#y yan) %i#ak %erika%" 7" !enamahkan an%iI) yan) akan erika%an pa#a #aerah <+ pa#a an%io#y yan) spesi'ik sea)ai +on%oh9 an%iran%ai )amma manusia yan) erika%an #en)an I); manusia" Daerah <+ pa#a an%iI) akan erika%an se+ara ko@alen #en)an enim" $" !emilas kompleks an%io#yenim yan) %i#ak %erika%" (" !enamahkan sus%ra% +hromo)eni+: sus%ra% yan) %i#ak er,arna yan) %erika% ke enim akan #ikon@ersi mena#i pro#uk" 10" Inkuasi sampai mun+ul ,arna9 #an 11" kur #en)an spe+%rome%er" Jka semakin peka% ,arna yan) #i#e%eksi9 maka makin esar ka#ar an%io#y spesi'ik #alam sampel" b. Pendeteksian antigen dengan ELISA sandwich 1" !elapisi mikro%i%er pla%e #en)an an%io#i yan) su#ah #imurnikan#imurnikan #en)an memiarkan laru%an erisi an%i)en menempel pa#a #in#in)C permukaan selama 3060 meni%" 2" !emilas an%io#i yan) %i#ak %erika% #en)an u''er" 3" !elapisi sisisisi %er%en%uyan) mun)kin %i#ak spesi'ik #ileka%i oleh an%i)en #en)an pro%ein yan) %i#ak erhuun)anC %i#ak spesi'ik seper%i laru%an susu  uuk" 4" !emilas pro%ein yan) %i#ak meleka%"

11

*" !enamahkan sampel yan) akan #i#e%eksi an%i)ennya #an memiarkan an%io#i un%uk erika%an #en)an an%i)en spesi'ik #ari sampel" 6" !emilas an%i)en yan) %i#ak %erika%" 7" !enamahkan an%io#y yan) %elah %erlaeli #en)an enim #an ersi'a% spesi'ik  un%uk epi%ope yan) ere#a pa#a an%i)en sampel9 sehin))a %eren%uk san#,i+h" $" !emilas an%io#yenim yan) %i#ak %erika%" (" !enamahkan sus%ra% +hromo)eni+: sus%ra% yan) %i#ak er,arna yan) %erika% ke enim akan #ikon@ersi mena#i pro#uk" 10" Inkuasi sampai mun+ul ,arna" 11" kur #en)an spek%ro'o%ome%er" Jika semakin peka% ,arna yan) %er#e%eki9 maka makin esar ka#aran%i)en spesi'i #alam sampel"

5 Ke.ebi0an dan Kekuran/an A.at ELISA

eknik EISA ini memiliki eerapa keleihan9 an%ara lain : 1" eknik pen)eraan rela%i' se#erhana 2"

Rela%i' ekonomis karena enis a an%io#i yan) #i)unakan hanya sa%u saa9 sehin))a men)hema% iaya un%uk memeli anyak enis an%io#i

3"

>asil memiliki %in)ka% sensi%i@i%as yan) +ukup %in))i"

4"

Dapa% #i)unakan un%uk men#e%eksi keera#aan an%i)en ,alaupun ka#ar  an%i)en %erseu% san)a% ren#ah hal ini #iseakan si'a% in%eraksi an%ara an%io#i a%au an%i)en yan) ersi'a% san)a% spesi'ik

*"

Dapa% #i)unakan #alam anyak ma+am pen)uian"

Se#an)kan kekuran)an #ari %eknik EISA an%ara lain : 1"

Jenis an%io#i yan) #apa% #i)unakan pa#a ui #en)an %eknik EISA ini hanya  enis an%io#i monoklonal an%io#i yan) hanya men)enali sa%u an%i)en"

2"

>ar)a an%io#i monoklonal rela%i' leih mahal #aripa#a an%io#i poliklonal9 sehin))a pen)uian %eknik EISA ini memu%uhkan iaya yan) rela%i'  mahal"

3"

Pa#a eerapa ma+am %eknik EISA9 #apa% %era#i kesalahan pen)uian akia% kon%rol ne)a%i' yan) menunukkan respons posi%i' yan) #iseakan 12

ine'ek%i@i%as #ari laru%an lo+kin) sehin))a an%io#i sekun#er a%au an%i)en asin) #apa% erin%eraksi #en)an an%io#i er%au% enim si)nal #an menimulkan si)nal" 4"

Reaksi an%ara enim si)nal #an sus%ra% erlan)sun) rela%i' +epa%9 sehin))a  pema+aan harus #ilakukan #en)an +epa% pa#a perkeman)annya9 hal ini #apa% #ia%asi #en)an memerikan laru%an un%uk men)hen%ikan reaksi"

6 Ka.ibrasi dan "era7atan A.at E.isa

a" Kalirasi EISA 1" 2" 3" 4" *"

e%akkan s%rip #an SPR pa#a Se+%ion yan) #ikehen#aki misal : se+%ion A Pilih 5SAS S?REE&8 pa#a menu u%ama" Pilih se+%ion yan) #ikehen#aki misal : se+%ion A" Pilih posisi A1 #en)an menekan an)ka 1 pa#a keypa#" Pilih S #an an)ka 1 pa#a keypa# S1un%uk posisi A19 lalu %ekan en%er" Pilih S #an an)ka 1 pa#a keypa# S1un%uk posisi A29 lalu %ekan en%er" Pilih S #an an)ka 1 pa#a keypa# S1un%uk posisi A39 apaila kalirasi

%riplo9 lalu %ekan en%er"  pilih ? #an an)ka 1 pa#a keypa# ?1 un%uk posisi A49 lalu %ekan en%er"  pilih ? #an an)ka 2 pa#a keypa# ?2 un%uk posisi A*9 lalu %ekan en%er" 6" Pilih sampel ID pasien un%uk posisi A6 7" !asukkan sampel ID pasien %erseu% ma 12 huru' C an)ka lalu %ekan en%er" $" Se%elah selesai %ekan s%ar%" (" Ala% %erseu% akan men)kalirasi sen#iri"  " Pera,a%an EISA 1" Pemeliharaan >arian: a !a%ikan ala% se%elah selesai #i)unakan   =ersihkan %ray #ari ko%oran" a%au #eu #en)anmen))unakan spon#a#u a%au #en)an %issue 2" Pemeliharaan 6 ulan : akukan kalirasi pa#a ala% se+ara keseluruhan seper%i : ampu9proses  pema+aannya"

13

#A# III "ENUTU" 1* Kesim3u.an

=er#asarkan %uuan yan) a#a maka #apa% #isimpulkan ah,a : 1" Imunolo)i a#alah sua%u +aan) yan) luas #ari ilmu iome#is yan) men+akup kaian men)enai semua aspek sis%em imun kekealan pa#a semua or)anisme"

14

2"  Enzyme-Linked Immunosorbent Assay EISA a#alah sua%u %eknik   iokimia yan) %eru%ama #i)unakan #alam i#an) imunolo)i un%uk  men#e%eksi keha#iran an%io#i a%au an%i)en #alam sua%u sampel" 3" Per%ama an%i)en a%au an%io#i yan) hen#ak #iui #i%empelkan pa#a sua%u  permukaan yan) erupa mi+ro%i%er" Penempelan %erseu% #apa% #ilakukan melalui #ua +ara9 yai%u penempelan se+ara non spesi'ik #en)an a#sors ke  permukaan

mi+ro%i%er9

#an

penempelan

se+ara

spesi'ik

#en)an

men))unakan an%io#y a%au an%i)en lain yan) ersi'a% spesi'ik #en)an an%i)en a%au an%io#i yan) #iui +ara ini #i)unakan pa#a %eknik EISA san#,i+h" Selanu%nya an%io#i a%au an%i)en spesi'ik yan) %elah #i%au%kan #en)an sua%u enim si)nal #isesuaikan #en)an sampel GH ila sampel  erupa an%i)en9 maka #i)unakan an%io#i spesi'ik 9 se#an)kan ila sampel  erupa an%io#i9 maka #i)unakan an%i)en spesi'ik #i+ampurkan ke a%as  permukaan %erseu%9 sehin))a #apa% %era#i in%eraksi an%ara an%io#i #en)an an%i)en yan) ersesuaian" Kemu#ian ke a%as permukaan %erseu% #i+ampurkan sua%au sus%ra% yan) #apa% ereaksi #en)an enim si)nal" Pa#a saa% sus%ra% %erseu% #i+ampurkan ke permukaan9 enim yan) er%au% #en)an an%io#i a%au an%i)en spesi'ik yan) erin%eraksi #en)an an%io#i a%au an%i)en sampel akan ereaksi #en)an sus%ra% #an menimulkan sua%u si)nal yan) #apa% #i#e%eksi" 4" ehnik EISA memiliki keleihan #an kekuran)an #alam proses  pemeriksaannya" *" EISA memerlukan kalirasi #an pera,a%an seelum #an sesu#ah #i)unakan" 1 saran Semo)a #en)an a#anya makalah ini #apa% menamah ,a,asan %eru%ama a)i  pema+a #an penyusun"

15

DA<AR PSAKA

=rahmana K" 1($1" Immunologi! Serologi dan "ata #er$a Laboratorium" !e#an"

Pu%riani9 anry" 201*"  ELISA %Enzyme-Linked Immunosorbent Assay&  nline !elalui: h%%p:CCyahi#ahar"lo)spo%"+omC201*C0(Celisaenymelinke# immunosoren%assay"h%ml

16