Laporan Tetap 4 Itp Genap 2016 - Revisi 1

LAPORAN TETAP PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI MIKROBIOLOGI UMUM

OLEH KELOMPOK: IV

PROGRAM STUDI ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN FAKULTAS TEKNOLOGI PANGAN DAN AGROINDUSTRI UNIVERSITAS MATARAM 2017

ii

ii

iii

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa, karena atas berkat dan rahmat-Nya laporan tetap Mikrobiologi Umum ini dapat terselesaikan dengan waktu yang telah ditentukan. Laporan ini disusun sebagai salah sat u syarat mata kuliah Mikrobiologi Umum di Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram. Dalam kesempatan ini tidak lupa penulis haturkan terima kasih kepada dosen, koordinator praktikum dan para Co. Assisten yang telah banyak membantu serta membimbing penulis baik dalam praktikum maupun dalam menyusun laporan. Penulis menyadari sepenuhnya bahwa la poran ini masih banyak kekurangannya

baik

dari

segi

isi,

penampilan

maupun

teknik

pengetikannya. Oleh karena itu penulis mengharapkan kritik dan saran yang sifatnya membangun demi perbaikan dan penyempurnaan laporan ini selanjutnya. Akhir kata penulis harap agar laporan ini dapat menjadi sumbangan ilmu pengetahuan bagi rekan-rekan yang lain dan juga dapat menambah pengetahuan kita.

Mataram, 6 Desember 2016

Penulis

iv

DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR ....................................................................................................... iii DAFTAR ISI ...................................................................................................................... iv DAFTAR TABEL............................................................................................................. vii ACARA 1 PENGENALAN ALAT-ALAT PRAKTIKUM ............................................... 1 PENDAHULUAN .......................................................................................................... 1 TINJAUAN PUSTAKA ................................................................................................. 3 PELAKSANAAN PRAKTIKUM .................................................................................. 5 HASIL PENGAMATAN ................................................................................................ 6 PEMBAHASAN ........................................................................................................... 18 KESIMPULAN............................................................................................................. 21 ACARA II MEDIUM DAN CARA PEMBUATAN MEDIUM ...................................... 22 PENDAHULUAN ........................................................................................................ 22 TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................................... 25 PELAKSAAN PRAKTIKUM ...................................................................................... 27 HASIL PENGAMATAN .............................................................................................. 30 PEMBAHASAN ........................................................................................................... 31 KESIMPULAN............................................................................................................. 34 ACARA III PERHITUNGAN JUMALAH KOLONI MIKROBA .................................. 35 PENDAHULUAN ........................................................................................................ 35 TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................................... 37 PELAKSANAAN PRAKTIKUM ................................................................................ 39 HASIL PENGAMATAN DAN PERHITUNGAN ....................................................... 41 PEMBAHASAN ........................................................................................................... 46 KESIMPULAN............................................................................................................. 49 ACARA IV TEKNIK ISOLASI MIKROBA ................................................................... 50 PENDAHULUAN ........................................................................................................ 50 TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................................... 52 PELAKSANAAN PRAKTIKUM ................................................................................ 54 HASIL PENGAMATAN .............................................................................................. 56 PEMBAHASAN ........................................................................................................... 59 KESIMPULAN............................................................................................................. 64

v

ACARA V MORFOLOGI KOLONI BAKTERI ............................................................. 65 PENDAHULUAN ........................................................................................................ 65 TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................................... 67 PELAKSANAAN PRAKTIKUM ................................................................................ 69 HASIL PENGAMATAN .............................................................................................. 72 PEMBAHASAN ........................................................................................................... 76 KESIMPULAN............................................................................................................. 79 ACARA VI PENGECATAN DAN MORFOLOGI BAKTERI ....................................... 80 PENDAHULUAN ........................................................................................................ 80 TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................................... 82 PELAKSANAAN PRAKTIKUM ................................................................................ 84 HASIL PENGAMATAN .............................................................................................. 87 PEMBAHASAN ........................................................................................................... 88 KESIMPULAN............................................................................................................. 93 ACARA VII MORFOLOGI JAMUR BENANG ............................................................. 94 PENDAHULUAN ........................................................................................................ 94 TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................................... 96 PELAKSANAAN PRAKTIKUM ................................................................................ 98 HASIL PENGAMATAN .............................................................................................. 99 PEMBAHASAN ......................................................................................................... 100 KESIMPULAN........................................................................................................... 104 ACARA VIII MORFOLOGI KHAMIR DAN SPORA KHAMIR ................................ 105 PENDAHULUAN ...................................................................................................... 105 TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................................. 107 PELAKSANAAN PRAKTIKUM .............................................................................. 109 HASIL PENGAMATAN ............................................................................................ 111 PEMBAHASAN ......................................................................................................... 114 KESIMPULAN........................................................................................................... 118 ACARA IX PENGARUH FAKTOR LINGKUNGAN TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI ....................................................................................................................... 119 PENDAHULUAN ...................................................................................................... 119 TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................................. 121 PELAKSANAAN PRAKITIKUM ............................................................................. 123 HASIL PENGAMATAN ............................................................................................ 125 PEMBAHASAN ......................................................................................................... 126

vi

KESIMPULAN........................................................................................................... 129 DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................................... 130

vii

DAFTAR TABEL

Tabel 1.1 Hasil Pengamatan Pengenalan Alat-alat Praktikum................................ 6 Tabel 2.1 Hasil Pengamatan Medium dan Pembuatan Medium ........................... 30 Tabel 3.1 Hasil Pengamatan Jumlah Koloni Mikroba Metode Sebar ................... 41 Tabel 3.2 Hasil Pengamatan Jumlah Koloni Mikroba Metode Tuang .................. 41 Tabel 3.3 Hasil Pengamatan Jumlah Koloni Jamur Roti Metode Sebar .............. 56 Tabel 4.1 Hasil Pengamatan Tenik Isolasi Mikroba Metode Tusuk Media Nutrient Agar (NA) Tegak .................................................................................. 57 Tabel 4.2 Hasil Pengamatan Tenik Isolasi Mikroba Metode Gores ..................... 58 Tabel 4.3 Hasil Pengamatan Tenik Isolasi Mikroba Metode Sebar ...................... 72 Tabel 5.1 Hasil Pengamatan Morfologi Koloni Bakteri ....................................... 87 Tabel 6.1 Hasil Pengamatan Pengecatan dan Morfologi Bakteri Gram ............... 99 Tabel 7.1 Hasil Pengamatan Morfologi Jamur Benang ...................................... 111 Tabel 8.1 Hasil Pengamatan Morfologi Khamir dan Spora Khamir ................... 112 Tabel 9.1 Hasil Pengamatan Pengaruh Suhu terhadap Pertumbuhan Bakteri pada Medium Nutrient Agar (NA) .............................................................. 125 Tabel 9.2 Hasil Pengamatan Pengaruh Penambahan Zat Kimia terhadap Pertumbuhan Bakteri pada Medium Nutrient Broth (NB) ................. 125

ACARA 1 PENGENALAN ALAT-ALAT PRAKTIKUM

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Mikroskop adalah suatu ilmu yang mempelajari kehidupan makhluk yang bersifat mikroskopik yang disebut mikroorganisme atau jasad renik, yaitu makhluk yang mempunyai ukuran sel sangat kecil dimana selnya hanya dapat dilihat dengan bantuan mikroskop. Dalam teknologi pangan, mikrobiologi adalah ilmu yang sangat penting, misalnya hubungannya dengan kerusakan atau kebusukan makanan sehingga dapat diketahui tindakan pencegahan atau pengawetan yang paling tepat untuk menghindari terjadinya kerusakan tersebut. Disamping itu, mikrobiologi juga penting dalam fermentasi makanan, sanitasi, pengawetan mutu pangan, dan sebagainya. Adanya jasad renik di dalam d alam makanan mungkin tidak diinginkan jika jasad renik tersebut dapat menyebabkan kerusakan dan kebusukan makanan. Tetapi dalam fermentasi makanan dan minuman, pertumbuhan jasad j asad renik justru dirangsang untuk mengubah komponen di dalam bahan pangan tersbut. Peranan

pengenalan

alat-alat

laboratorium

ialah

praktikan

dapat

mengetahui berbagai macam alat yang terdapat di laboratorium. Bekerja di laboratorium tidak terlepas dari kemungkinan bahaya yang terjadi dari berbagai alat apabila tidak digunakan sesuai prosedur. Pengenalan alat-alat laboratorium sangat penting untuk menunjang keselamatan saat praktikum. Masing-masing alat memiliki prinsip kerja yang berbeda. Melalui pengenalan alat, praktikan dapat mengetahui dan mampu membedakan prinsip kerja dari masing-masing alat. Setiap alat memiliki spesifikasi yang berbeda satu dengan yang lainnya sehingga praktikan dapat memilih alat-alat yang tepat untuk digunakan saat melakukan praktikum. Pembersih alat gelas dilakukan sebelum dan sesudah kegiatan praktikum, sesuai dengan keadaan apakah sudah bersih atau belum. Alat-alat gelas sebaiknya

1

dikelompokkan menurut jenis dan ukurannya. Selain alat-alat yang terbuat dari gelas, dalam praktikum mikrobiologi membutuhkan banyak peralatan mekanik dan peralatan optik. Oleh karena itu, perlu dilakukan praktikum ini untuk mengetahui Teknik pengenalan, penyiapan, dan penggunaan serta fungsi dari setiap alat laboratorium mikrobiologi.

Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui alat-alat yang digunakan dalam mikrobiologi beserta fungsi dan cara penggunaanya.

2

TINJAUAN PUSTAKA

Mikrobiologi adalah suatu ilmu yang mempelajari kehidupan makhluk yang bersifat mikroskopis yang disebut mikroorganisme atau jasad renik, yaitu makhluk yang memiliki ukuran sel sangat kecil, dimana setiap selnya hanya dapat dilihat dengan mikroskop. Dalam teknologi pangan, mikrobiologi merupakan ilmu yang sangat penting, misalnya hubungannya dengan kerusakan atau kebusukan makanan sehingga dapat diketahui tindakan pencegahan atau pengawetan yang paling tepat untukmenghindari terjadinya kerusakan tersebut. Diamping itu, mikrobiologi juga penting dalam fermentasi makanan, sanitasi, pengawetan mutu pangan dan sebagainya. Adanya jasad renik di dalam makanan mungkin tidak diinginkan jika jasad renik tersebut dapat menyebabkan kerusakan dan kebusukan makanan. Tetapi dalam fermentasi makanan dan minuman, pertumbuhan jasad renik justru dirangsang untuk mengubah komponen-komponen di dalam bahan pangan tersbut menjadi produk-produk produk-produk yang diinginkan (Soetarto, 2012). Pekerjaan mikrobiologi, seringkali praktikan tidak terlepas dari alat-alat yang berada di laboratorium mikrobiologi. Peralatan yang digunakan pada laboratorium mikrobiologi hampir sama dengan peralatan yang umunya digunakan di laboratorium kimia, yaitu berupa alat-alat anatara l ain, tabung reaksi, cawan petri, pipet ukur, pipet volumetric, labu ukur, Erlenmeyer , gelas piala, pH metet, tabung reaksi. Di samping peralatan gelas tersebut, pada laboratorium mikrobiologi masih ada sejumlah alat yang khusus antara lain, autoclave, autoclave, oven, oven, mikroskop, jarum ose (inokulum), jarum preparat, gelas objek, kaca penutup. Keranjang kawat untuk membiakkan mikroorganisme dengan suhu tertentu yang konstan. Spektrofotometer untuk mengukur kepekatan suspense atau larutan. Penangas air untuk mencairkan medium. Magnetic stirer untuk mengaduk, dan tabung durham untuk penelitian fermentasi (Pelczar, 2008). Pengenalan alat-alat laboratorium penting dilakukan untuk keselamatan kerja saat melakukan penelitian. Alat-alat laboratorium biasanya dapat rusak atau bahkan berbahaya ber bahaya jika penggunaannya tidak sesuai dengan prosedur. Pentingnya dilakukan pengenalan alat-alat laboratorium adalah agar dapat diketahui cara

3

pengguanaan alat tersebut dengan baik dan benar. Sehingga kesalahan prosedur pemakaian alat dapat di minimalisasi sedikit mungkin. Hal ini penting supaya saat melakukan penelitian, data yang diperoleh akan benar pula (Andriani, 2016). Pekerjaan mikrobiologi dibutuhkan alat yang khusus untuk melihat mikroorganisme. Salah satu alat yang sering digunakan adalah mikroskop. Mikroskop merupakan alat bantu yang memungkinkan untuk dapat mengamati objek yang berukuran kecil. Mikroskop dalam bahsa Yunani berasal dari kata micron yaitu kecil dan scop yang berarti tujuan. Jadi mikroskop adalah sebuah alat untuk melihat objek yang berukuran sangat kecil. Ilmu yang mempelajari benda kecil menggunakan alat ini disebut mikroskopi, dan kata mikroskopik berarti sangat kecil tidak mudah terlihat oleh mikroskop adalah 100 kali sampai 400.000 kali. Ada dua jenis mikroskop berdasarkan pada kenampakan objek yang diamati, yaitu mikroskop dua dimensi (mikroskop cahaya) dan mikroskop 3 dimensi (mikroskop sterep). Sedangkan berdasarkan sumber cahayanya mikroskop dibedakan menjadi mikroskop cahaya dan mikroskop elektron (Anindya, 2012). Sterilisasi dalam mikrobiologi berarti membebaskan tiap benda atau substansi dari semua kehidupan dalam bentuk apapun. Untuk tujuan mikrobiologi dalam usaha mendapatkan keadaan steril, mikroorganisme dapat dimatikan setempat oleh panas (kalor), gas-gas seperti formaldehid, etil oksida, atau betapriolakton disingkirkan secara mekanik oleh sentrifugasi kecepatan tinggi atau oleh filtrasi. Sterilisasi dengan udara kering, alat yang umum digunakan adalah oven. Alat ini dipakai untuk mensterilkan alat-alat gelas seperti, erlenmeyer, cawan petri, tabung reaksi, dan alat gelas l ainnya (Suharjono, 2006).

4

PELAKSANAAN PRAKTIKUM

Waktu dan Tempat Praktikum Praktikum ini dilaksanakan pada hari Senin, 25 September 2017 di

Laboratorium Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram.

Alat-alat Praktikum Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum antara lain, mikroskop,

shaking incubator , autoclave, digital orbital dan shaker , inkubator, stomacher , hot plate, centrifuge, laminar air flow, colony counter , micro waterbath, vortex, timbangan analitik, jarum preparat, jarum enten, jarum ose, drigalski, rak tabung reaksi, pipet mikro, gelas ukur, gelas kimia, erlenmeyer, labu ukur, lampu bunsen, beaker glass, mortar dan pastle, corong pisah, pH meter, dan cawan petri. Prosedur Kerja

Disiapkan alat-alat praktikum Diamati bentuk & fungsi alat-alat praktikum Digambar alat-alat praktikum serta dituliskan fungsi dan keterangannya

5

HASIL PENGAMATAN

Tabel 1.1 Hasil Pengamatan Pengenalan Alat-alat Praktikum No. Nama Alat dan Gambar Fungsi Keterangan 1 Mikroskop Digunakan untuk Merek : Olympus CX21 memperbesar bayangan Model: CX21 led sebuah benda, terutama Sistem pencahayaan: yang tidak dapat dilihat 0,5 dengan mata telanjang. Fokus tinggi gerakan:   





Bagian-bagian mikroskop: 1.Lensa Okuler Memperbesar bayangan benda yang dibentuk lensa objektif 2.Revolver Berfungsi untuk memutar lensa objektif 3.Tabung pengamatan Untuk mengatur fokus serta menghubungkan lensa okuler dengan lensa objektif 4.Meja benda Tempat meletakkan objek yang diamati 5.Kondensor Untuk mengumpulkan cahaya supaya tertuju ke lensa objektif 6.Lensa objektif Untuk memperbesar bayangan benda yang diamati 7.Pengatur kekuatan

20nm  



Fokus rupa: 2,5 mm Travelling range: 76mm x 30mm Perbesaran okuler: 10x

6

2. Autoclave

lampu Untuk memperbesar dan memperkecil cahaya lampu 8.Tombol on-off Untuk menyalakan dan mematikan mikroskop 9.Cincin pengatur diopter Untuk menyamakan fokus antara mata kanan dan mata kiri 10. Pengatur jarak interpupilar 11. Penjepit spesimen 12. Sumber cahaya 13. Sekrup pengatur horizontal Untuk menggeser ke depan atau ke belakang meja objek 14. Sekrup pengatur vertikal Untuk menggeser ke kiri atau ke kanan meja objek 15. Sekrup fokus kasar Menaik turunkan meja benda secara kasar atau cepat 16. Sekrup fokus halus Menaik turunkan meja benda secara halus atau pelan 17. Sekrup pengencang tabung okuler 18. Sekrup pengatur kondensor Untuk mensterilkan suatu



Merek: Hirayama

7

benda menggunakan uap bersuhu tinggi (121oC) dan tekanan 2 atm. Bagian-bagian autoclave: 1. Plat penutup 2. Pengukur tekanan Untuk mengetahui besar tekanan uap yang ada dalam autoclave pada saat sterilisasi 3. Timer Untuk mengatur waktu sterilisasi 4. Chamber (ruang) Sebagai tempat menaruh benda yang akan disterilkan 5. Corner plate 6. Lid gasket 7. Open/close leaver Untuk membuka atau menutup autoclave 8. Katup uap Untuk tempat keluarnya uap air 9. Klep penahan Penahan dari penutup autoclave 10. Tombol on/off Untuk menghidupkan atau mematikan Autoclave 11. Termometer Untuk mengetahui suhu yang sudah dicapai saat



 

Model: HVA-85 Chamber capacity: 0,098788m3



Electric power: 29 kw



Volatse: 220v 50/60Hz



Kapasitas: 50 Liter



Kapasitas berat: 57Kg

8

3

Inkubator

pensterilan 12. Aquaes 13. Lempeng sumber panas 14. Angsa/batas penambahan air Untuk mengetahui batas penambahan air Untuk menginkubasi atau memeram mikroba pada suhu terkontrol (0 oC 100 oC) dengan suhu maksimum 120 oC 

4. Laminar Air Flow

Bagian-bagian inkubator: 1.Pintu inkubator 2.Tombol fanel Untuk mengatur suhu yang diperlukan 3.Sensor suhu 4.Ventilasi

Untuk mensterilkan suatu ruangan yang akan digunakan untuk percobaan mikrobiologi agar tidak ada kontaminan bakteri yang terdapat diudara. 

Bagian-bagian: 1.Lampu UV Untuk mematikan sumber kontaminan yang ada di udara 2.HEPA ( High Eficiency Particulate Air Filter ) Saringan yang sangat halus untuk

 

Merek: Memmert Temperatur: 0 oC -120 o C



Volume: 32 L



Berat netto: 48Kg



Tekanan: 230v/60Hz



Merek: Isocide





 



Dimensi: 78cmx80cmx120cm Meja kerja: Stainless steel UV Lamp: 1x20 watt Intensitas cahaya: >=700 Lux Air flow velocity: 0,45m/s – 0,70m/s

9

5

Hot Plate

menyaring udara Untuk menghomogenkan suatu larutan dengan menggunakan pengaduk magnetik dan untuk memanaskan atau mencairkan medium. Bagian-bagian: 1.Pelat Tempat meletakkan wadah berisi larutan dan medium 2.Tombol on/off 3.Pengatur suhu 4.Pengatur kecepatan Untuk homogenisasi larutan dan mempercepat proses pendinginan suatu larutan.



Merek: Heidolph



Suhu maks: 300 oC







6

Digital Orbital Dan Shaker

Bagian-bagian: 1.Tombol on/off Untuk menyalakan atau mematikan 2.Set time Untuk mengatur waktu 3.Set speed untuk mengatur kecepatan 4.Rak shaker Tempat meletakkan wadah berisi larutan yang akan dihomogenkan 5.Layar Sebagai layar waktu selama stirer. Untuk menghomogenkan suatu cairan yang ada di tabung reaksi. 

7

Vortex

Kecepatan maks: 1400rpm Dimensi: 510mmx410mmx180m m



Merek: Heidolph



Kecepatan: 30-500 rpm



Orbit: 1 cm



Hertz: 60 Hz



Waktu: 1-99 menit



Tegangan: 115v

 

Merek: Heidolph Kecepatan: 150-2500 rpm

10



1 3 8

3 pH Meter

9

Shaking Incubator

10 Centrifuge

2

Bagian-bagian: 1.Tombol on/off Untuk menyalakan atau mematikan 2.Sekrup kecepatan Untuk mengatur kecepatan 3.Tempat meletakkan bahan yang akan dihomogenkan



Tegangan: 15v



Type: Reax control

Mengukur derajat keasaman atau kebasaan suatu larutan (pH)

Untuk mengocok suatu campuran bahan yang memerlukan temperatur dan kecepatan konstan, biasanya hanya digunakan untuk inkubasi mikroba Untuk mengendapkan atau memekatkan sel mikroorganisme sehingga dapat dipisahkan antara medium dan selnya yang mengendap. 

 



Merek: PrismR Kecepatan maks.: 400rpm Daya tampung: 15-50 mL kultur

Bagian-bagian: 1.Tombol on/off 2.Pengatur kecepatan 3.Pengatur waktu 4.Rem 5.Sistem pendingin 6.Penutup 7.Selubung

11

11 Stomacher

8.Motor listrik 9.Rotor 10. Tabung Untuk homogenisasi suatu larutan 

12 Micro Waterbath

13 Colony Counter

Fungsi utamanya untuk menciptakan suhu yang konstan. Merupakan wadah berisi air yang bisa mempertahankan suhu air pada kondisi terntentu selama selang waktu yang ditentukan

Untuk menghitung koloni bakteri yang berada pada cawan petri 

14 Timbangan Analitik

Bagian-bagiannya meliputi kantong plastik steril dan stomacher suatu alat berbentuk kotak yang bagian dalamnya ada pedal menumpuk

Bagian-bagiannya: 1.Saklar on/off Untuk mematikan atau menghidupkan 2.Kaca Pembesar Untuk mempermudah pembacaan 3.Wolffugel disk Untuk meletakkan cawan petri

Untuk menimbang bahan yang akan digunakan

 



Merek: BagMixer Ukuran: 39cm x 26cm x 29cm Volume maks: 350-400 mL



Berat: 16,5 Kg



Tegangan: 220v



Merek: GFL



Suhu: 30 oC-100 oC



Merek: Funke gerber



Kapasitas: 0-99 gram



Diameter kaca pembesar: 110mm



Daya listrik: 230v



Merek: Kem ABJ



Ketelitian: 0,1mg

12

dengan tingkat ketelitian yang tinggi



Kapasitas maks: 210g

Bagian-bagiannya: 1.Piringan timbangan Untuk menaruh sampel 2.Anak timbangan untuk kalibrasi 3.Water pas mengatur posisi piringan timbangan 4.Tombol pengaturan 5.Tombol mode konversi satuan 6.Tombol on/off Tempat meletakkan tabung reaksi 

15 Rak Tabung Reaksi



16 Pipet Mikro

Untuk mengambil larutan Merek: smart dengan volume tertentu 



17 Yellow Tip

Bagian-bagiannya: 1.Lumbung tabung 2.Dasar rak tabung

Bagian-bagiannya: 1. Automatic pippetor Untuk memompa cairan yang akan dipindahkan 2. Pippete tips Untuk menampung cairan yang dipompa

Untuk mengambil suspense yang akan dipindah ke cawan petri dengan mikropipet 0,1mL

13

18 Blue Tip

Untuk mengambil larutan dengan mikropipet 1mL

19 Jarum Ose

Untuk memindahkan atau mengambil koloni suatu mikroba ke media yang akan digunakan kembali

20 Jarum Preparat

Untuk menipiskan dan melepaskan gumpalangumpalan di atas gelas benda terutama objek yang berupa potongan misselium jamur sebelum ditutup dengan gelas penutup

21 Jarum Enten

Untuk mengangkat biakan jamur berupa hifa

14

22 Drigalski

Untuk meratakan biakan

23 Cawan Petri

Tempat untuk membiakkan mikroba

24 Bunsen

Untuk mensterilkan alat atau sebagai sumber panas untuk memanaskan alat atau bahan yang akan digunakan

25 Gelas Ukur

Untuk mengukur volume larutan

Jenisnya ada dua, ada yang hanya bisa dipakai satu kali yaitu jenis plastik, dan ada yang digunakan berulang kali melalui sterilisasi yaitu jenis kaca.

15

26 Beaker Glass

Tempat menyimpan dan membuat larutan

27 Mortar Dan Pastle

Untuk menghaluskan suatu bahan atau sampel

28 Labu Ukur

Untuk mengencerkan larutan dengan volume tertentu

29 Erlenmeyer

Untuk menampung larutan yang digunakan



Merek: Herma



Volume: 100mL



Bahan: gelas



Merek: Pyrex

16

untuk meracik dan Volume: 100mL menghomogenkan bahan, serta sebagai wadah media pertumbuhan mikroba 

30 Pipet Tetes

Untuk mengambil dan meneteskan larutan dalam jumlah sedikit

31 Tabung Reaksi

Untuk mereaksikan dua atau lebih bahan serta wadah media biakan mikroba

17

PEMBAHASAN

Mikrobiologi adalah bagian tentang makhluk hidup (organisme) berukuran sangat kecil untuk dapat dilihat dengan mata telanjang. Mikroorganisme meliputi protozoa,

algae

(ganggang),

fungi

(jamur),

dan

virus.

Keseluruhan

mikroorganisme tersebut berpengaruh penting pada pertanian, pangan maupun kehidupan. Untuk itu, mikrobiologi penting untuk dipelajari, salah satunya dengan melakukan berbagai penelitian, termasuk penelitian di laboratorium. Laboratorium sendiri merupakan tempat untuk melakukan penelitian, terutama untuk meneliti benda-benda berukuran mikroskopis yang tidak dapa dilihat dengan mata telanjang. Karena mikroorganisme tidak dapat dilihat dengan mata telanjang maka dibutuhkan laboratorium sebagai tempat untuk mengumpulkan alat-alat yang dapat digunakan untuk mengamati kehidupan mikroorganisme. Praktikum kali ini membahas tentang pengenalan alat-alat praktikum yang bertujuan

untuk mengetahui

alat-alat

yang digunakan dalam

praktikum

mikrobiologi beserta fungsi dan cara penggunaannya. Dengan diperkenalkannya alat-alat

praktikum

sebelum

dilakukannya

praktikum,

diharapkan

dapat

menghindari hal-hal yang tidak diinginkan dalam pelaksanaan praktikum. Dalam praktikum mikrobiologi ini, banyak alat-alat yang digunakan di laboratorium seperti mikroskop, autoclave, centrifuge, laminar air flow, tabung reaksi, labu ukur, erlenmeyer, cawan petri dan lainnya, tentunya dengan fungsi dan cara penggunaan masing-masing. Dari hasil pengamatan, alat-alat tersebut memiliki fungsi dan cara penggunaan masing-masing yang pastinya berbeda-beda meskipun ada juga beberapa alat yang mempunyai fungsi dan cara penggunaan yang hampir sama. Pada praktikum mikrobiologi diperlukan suatu kondisi yang benar-benar aseptik, di mana alat penunjang serta nutrient dan substrat harus benar-benar steril. Di mana sterilisasi adalah suatu usaha untuk membebaskan alat-alat bahan dan kemasan dari segala kehidupan terutama mikroorganisme serta kontaminan. Hal ini berarti mikroba kontaminan harus dimatikan. Untuk memperoleh kondisi steril, maka digunakan sterilisasi. Metode sterilisasi yang biasa digunakan di

18

laboratorium mikrobiologi adalah menggunakan panas, dimana metode ini dibagi menjadi dua yaitu sterilisasi kering dan secara sterilisasi basah. Sterilisasi kering digunakan untuk peralatan gelas tahan panas dan Logam dengan menggunakan oven bersuhu 70 oC sampai 80 oC selama 2 jam. Sedangkan sterilisasi basah digunakan untuk peralatan yang tidak tahan panas dengan menggunakan autoklaf atau waterbath bersuhu 121 oC selama 15 menit bertekanan 1 atm. Alat-alat praktikum terdiri dari alat glassware dan alat non-glassware. Adapun fungsi-fungsi dari masing-masing alat tersebut, erlenmeyer terbuat dari kaca yang tahan panas dengan dinding yang tipis untuk memudahkan pemindahan panas dan mengurangi tegangan, erlenmeyer berfungsi untuk menampung larutan, bahan atau cairan yang digunakan untuk membuat dan menghomogenkan bahan bahan komposisi media, menampung aquades, kultivasi mikroba dalam kultur cair dan lainnya. Ada juga cawan petri yang berfungsi membiakkan (kultivasi) mikroorganisme, medium dapat dituang ke cawan bagian bawah dan cawan bagian atas sebagai penutup. Bunsen merupakan salah satu alat yang berfungsi untuk menciptakan kondisi yang steril. Untuk sterilisasi jarum ose atau yang lain, bagian api yang cocok untuk memisahkannya adalah bagian api yang berwarna biru. Gelas ukur berfungsi untuk mengukur volume suatu cairan. Alat lainnya yaitu tabung reaksi, berfungsi sebagai tempat media pertumbuhan mikroba dalam bentuk media tegak atau miring. Sedangkan rak tabung reaksi sebagai tempat untuk meletakkan tabung tabung reaksi. Adapun alat-alat yang tidak termasuk glassware antara lain laminar air flow, timbangan analitik, sentrifius, mikroskop, autoklaf, waterbath, inkubator, vortex, hotplate, shaking incubator dan lainnya. Mikroskop adalah alat yang digunakan untuk melihat benda yang berukuran sangat kecil dengan berbagai perbesaran dan cahaya, cahaya yang digunakan pada mikroskop di laboratorium mikrobiologi pangan yaitu cahaya lampu. Bagian-bagian dari mikroskop adalah lensa okuler, tubus, pemutar kasar, pemutar halus, meja preparat, revolver, lensa objektif, dan penjepit kaca. Oven atau sering juga disebut hot air adalah alat sterilisasi yang menggunakan prinsip panas kering. Oven digunakan untuk mensterilkan alat gelas yang berongga atau material seperti minyak yang tidak

19

dapat disterilkan dengan autoklaf karena tidak permeabel dengan uap air. Laminar air flow adalah alat yang berfungsi untuk melakukan inokulasi mikrobiologi yaitu memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang tinggi. Waterbath merupakan alat pemanas yang digunakan untuk mempertahankan suhu media agar tidak membeku sebelum dituang ke dalam cawan petri. Autoklaf berfungsi sebagai alat sterilisasi dengan uap panas bertekanan tinggi. Alat-alat glassware dan non-glassware harus selalu steril pada saat digunakan dalam praktikum dengan cara perawatan. Perawatan alat-alat glassware dilakukan dengan cara membersihkan alat dengan laba bersih atau tisu dan disterilkan dengan cara mencuci alat-alat tersebut kemudian disterilkan menggunakan cairan aquades. Perawatan alat non glassware dibersihkan hanya dengan lap bersih atau lap yang dibasahi. Kemudian lap dengan lap kering setiap selesai digunakan. Hal ini dilakukan agar alat-alat praktikum yang digunakan tetap steril sehingga tidak terkontaminasi oleh udara luar dan mikroba.

20

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan, maka dapat ditarik beberapa kesimpulan sebagai berikut: 1. Laboratorium adalah suatu tempat dimana mahasiswa atau praktikan, dosen, dan

peneliti

melakukakan

percobaan.

Alat-alat

yang

digunakan

di

laboratorium terdiri dari berbagai alat glassware maupun non-glassware. 2. Adapun alat-alat yang terbuat dari glassware diantaranya, jarum preparat, jarum enten, jarum ose, drigalski, erlenmeyer, cawan petri, labu ukur, corong pisah, pipet ukur, beaker glass, tabung reaksi, lampu bunsen dan pipet tetes. 3. Adapun alat-alat yang terbuat dari non-glassware diantaranya, mortar dan pastle, mikroskop, autoclave, mikropipet, vortex, hotplate, laminar air flow, inkubator, pH meter, waterbath, timbangan analitik, shaker , sentrifug, stomacher , dan oven. 4. Cara perawatan alat-alat glassware yaitu dilap dengan tisu, dan disterilkan dengan cara mencuci kemudian disterilkan dengan cairan aquades. Sedangkan untuk alat non-glassware cukup dibersihkan dengan lap basah lalu dilap lagi dengan lap kering. 5. Bekerja secara aseptis dan steril sangat penting dalam praktikum mikrobiologi umum untuk menghindari dari kontaminan yang dapat menggangu hasil praktikum.

21

ACARA II MEDIUM DAN CARA PEMBUATAN MEDIUM

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Mikroorganisme terdapat di segala macam lingkungan sebagai bagian dari seluruh ekosistem alam. Sebagian dari mikroorganisme itu adalah produsen, sebagian konsumen pertama, dan sebagian lagi konsumen ke dua serta ketiga. Kita dapat menemukan mikroorganisme di darah kutub, di daerah tropik, di dalam air, di dalam tanah, dalam debu di udara. Ada mikroorganisme yang dapat hidup di satostfer bila terangkat oleh arus udara. Ada mikroorganisme yang dapat hidup meskipun tidak ada oksigen, misalnya pada dasar laut dan danau – danau yang sangat dalam. Bahkan ada yang hidup di sumber air panas dengan temperatur yang sedemikian tinggi hingga akan mematikan organisme yang lebih besar. Miroorganisme memegang peranan penting sebagai penghubung jaring – jaring makanan dalam ekosistem darat, laut, danau, sungai dan kolam. Mereka merupakan pengurai utama dari berbagai zat dan senyawa. Semua makhluk hidup membutuhkan nutrisi untuk pertumbuhan dan perkembangbiakan termasuk juga mikroorganisme. Mikroorganisme adalah makhluk hidup sederhana yang terbentuk dari satu atau beberapa sel yang hanya bisa dilihat dengan mikroskop, berupa tumbuhan atau hewan yang biasanya hidup parasit atau saprofit misalnya, kapang, khamir dan mikroba. Mikroba adalah organisme yang sangat kecil ukurannya sehingga untuk mengamatinya secara jelas harus menggunakan alat bantu yaitu mikroskop. Mikroba dapat berkembang biak dengan cara alami pada lingkungannya di alam maupun ditumbuhkan secara sengaja pada suatu medium biakan. Nutrien dapat dikatakan sebagai esensial untuk organisme apabila zat itu tidak bisa disintetis atau diintegrasi oleh organisme, sehingga harus dipenuhi melalui sumber makanan. Diantara beberapa jenis nutrien yang ada, yang digolongkan sebagai nutrien organik antara lain lemak, karbohidrat, asam animo

22

dan protein. Selain itu senyawa kimia yang bersifat anorganik, yaitu air dan oksigen juga sering dianggap sebagai nutrien. Nutrien atau hara adalah unsur atau senyawa kimia yang digunakan untuk metabolisme atau fisiologi organisme. Nutrien biasanya dikategorikan menjadi nutrien yang menyediakan energi dan yang digunakan sebagai komponen untuk tubuh atau struktur sel. Suatu nutrien disebut esensial bagi organisme jika zat tersebut tidak dapat disintesis oleh organisme dan harus dipenuhi dari sumber makanan Medium merupakan hal yang sangat penting pada saat praktikum dalam mengembangbiakan mikroorganisme. Sebelum digunakan, medium tersebut harus dalam keadaan streril. Hal ini dilakukan agar mikroorganisme lain yang diharapkan tidak dapat tumbuh dalam medium tersebut. Ada beberapa syarat dalam pembuatan medium yang diantaranya adalah, dalam medium harus terkandung semua unsur hara yang diperlukan untuk pertumbuhan dan perkembangan mikroba kemudian susunan makanannya, terkanan osmosis, derajat keasaman, temperatur, sterilisasi serta medium tidak mengandung zat-zat yang dapat menghambat pertumbuhan dan perkembangan mikroba. Syarat-syarat tersebut jika salah satunya tidak sesuai, maka akan berpengaruh dalam pertumbuhan dan perkembangan mikroba dan tidak mendapatkan hasil penelitian yang diharapkan. Penelitian di dalam bidang mikroorganisme ini, tentunya menggunakan teknik atau cara-cara khusus untuk meneliti mikroorganisme ini baik sifat dan karakteristiknya.

Tentu

diperlukan

pula

tentang

bagaimana

caranya

menumbuhkan suatu mikroba ke dalam suatu media karena untuk mengetahui bahwa beragam persyaratan untuk menumbuhkan mikroba, maka harus dimengerti jenis-jenis nutrient yang disyaratkan dan macam-macam lingkungan fisik yang menyediakan kondisi yang optimum bagi pertumbuhan mikroba tersebut. Mikroba sangat beragam baik dalam persyaratan nutrient nya maupun fisiknya. Jadi, medium yang digunakan harus mengandung komponen-komponen yang dibutuhkan oleh mikroba itu sendiri. Oleh karena it u, diadakan praktikum ini untuk mengetahui cara-cara pembuatan medium dan jenis-jenis medium untuk mengembangbiakan mikroorganisme.

23

Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui beberapa jenis medium dan cara pembuatan medium serta fungsi dari masing-masing medium pertumbuhan mikroba tersebut.

24

TINJAUAN PUSTAKA

Mikroorganisme dapat berkembangbiak secara alami atau dengan bantuan manusia. Mikroorganisme yang dikembangkan oleh manusia diantaranya, melalui substrat yang disebut media/medium. Untuk melakukan hal ini, haruslah mengerti jenis-jenis nutrient yang disyaratkan oleh bakteri dan juga macam-macam lingkungan fisil yang menyediakan kondisi optimum bagi pertumbuhannya. Dengan adanya medium pertumbuhan, aktifitas mikroba dapat dipelajari dan dengan medium tumbuh dapat dilakukan isolasi mikroba dengan kultur murni, perbanyakan, pengujian sifat fisiologis dan perhitungan jumlah mikroba. Keragaman yang luas dalam tipe nutrisi untuk mikroba yaitu, diimbangi dengan tersedianya berbagai media yang banyak macam untuk kulturasinya. Media-media yang digunakan seperti pepton, ekstrak daging, ekstrak khamir dan agar. Bahan yang paling umum digunakan untuk membuat medium menjadi padat dapat dipakai agar (Sutedjo, 1991). Medium yang digunakan utuk menumbuhkan mikroba bermacam-macam. Untuk mudahnya medium mikroba diklasifikasikan berdasarkan sifat, komposis dan fungsinya. Berdasarkan sifat fisiknya, medium dibagi menjadi tiga, yaitu Solid Medium, Semi Solid Medium dan Broth Medium. Sedangkan berdasarkan komposisi penyusunannya juga dibedakan menjadi medium sintetis, medium semi sintetis dan medium nonsintetis. Berdasarkan fungsinya sendiri, medium terbagi menjadi medium umum, medium selektif, medium diferensial, medium uji dan medium diperkaya (Frobisher, 1974). Saat mengkultur bakteri, kondisi lingkungan dan nutrisi yang tersedia haruslah mendekati pada habitat alami. Oleh karena itu, media buatan yang ditunjukan untuk bakteri akuatik dapat menggunakan sumber nutrisi dari ikan yang mengandung karbon dan nitrogen yang organik. Kesesuaian nutrisi yang dibutuhkan bakteri dalam media buatan dapat dilihat dari jumlah dan ukuran koloni yang tumbuh. Pada kontrol negatif, agar media yang digunakan sudah mengandung sedikit nutrisi untuk bakteri sehingga koloni mampu tumbuh.

25

Adapun kandungan nutrisi dalam media yaitu 6,15 gram karbohidrat, 0,02 gram protein dan 0,037 kalsium (Sefti, 2014). Beberapa

medium

dalam

pertumbuhan

dan

perkembangan

mikroorganisme terdiri dari Potato Dextrose Agar (PDA), Nutrient Agar (NA), Nutrient Cair (NC). Pada Potato Dextrose Agar (PDA) merupakan media mikrobiologi yang direkomendasikan untuk isolasi dan enumerasi kapang dan khamir. Potato Dextrose Agar (PDA) adalah media mikrobiologi yang direkomendasikan oleh American Public Health Association (APHA) dan Food and Drug Administation (FDA) untuk perhitungan kapang dan khamir pada pengujian susu dan produk pengolahan susu lainnya. Media mikrobiologi ini juga digunakan untuk menstimulasi sporulasi, menjaga stok kultur dari beberapa Dermatophytes, membedakan beberapa variasi Dermatophytes dan membedakan beberapa variasi Dermatophytes berdasarkan produksi pigment. Potato infusion dan dextrose pada media mikrobiologi berperan dalam mempromosi pertumbuhan jamur. Pengasaman media sampai pH 3,5 dengan Tartaric Acid berperan dalam menghambat pertumbuhan bakteri (Copernicus, 2014). Kandungan dextrose dan karbohirat yang cukup tinggi pada media PDA (20gr), PCA (20gr), dan SDA (40gr) sangat berperan penting pada proses metabolism jamur uji. Hal ini karena sel dari Cendawa Alternaria Alternata pada saat melakukan proses metabolism , nutrient akan diubah ke dalam bentuk materi sel dan energi. Karbohirat dapat dioksidasi menjadi energy kimia yang tersedia di dalam sel dalam bentuk ATP dan menyediakan hamper semua karbon yang diperlukan untuk asimilasi sel fungi yang mengandung karbohidrat, lipid, protein dan asam nukleat. Sehingga mikroba pada media PDA, PCA dan SDA dapat tumbuh dengan baik (Pinky, 2012).

26

PELAKSAAN PRAKTIKUM

Waktu dan Tempat Praktikum

Praktikum ini diadakan pada hari Senin, 2 Oktober 2017 di Laboratorium Mikrobilogi Pangan, Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri, Universitas Mataram.

Alat dan Bahan Praktikum

a. Alat-alat Praktikum Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum antara lain, Beaker Glass, Hot Plate, Magnet Stearer , Timbangan Analitik, botol UC, Erlenmeyer , Aluminium foil, Gelas ukur, pisau, plastic, talenan dan kain saring. b. Bahan-bahan Praktikum Adapun bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum antara lain, kentang, Aquades, Glukosa, agar, pepton, ekstrak daging, Potato Dextrose Agar Instant (PDA Instant), Nutrient Agar Instant (NA Instant), Alkohol.

Prosedur Kerja

a. Pembuatan Medium Potato Dextrose Agar (PDA)

27

b. Pembuatan Medium Nutrient Agar (NA)

c. Pembuatan Medium Nutrient Cair (NC)

28

d. Pembuatan Medium Potato Dextrose Agar Instant (PDA Instant)

e. Pembuatan Medium Nutrient Agar Instant (NA Instant )

29

HASIL PENGAMATAN

Tabel 2.1 Hasil Pengamatan Medium dan Cara Pembuatan Medium Perubahan Warna Nama No. Perlakuan Biakan Sebelum Sesudah 1

2

3

4

5

Potato Dextrose Agar (PDA)

Nutrient Agar (NA)

Nutrient Cair (NC)

Fungsi medium

+ Glukosa

Kuning

+Agar

Kuning keruh

Untuk membuat medium dasar Kuning Bening jamur dan khamir.

+Ekstrak daging

Bening

Kuning keruh

+Pepton

Kuning keruh

Kuning bening

+Agar

Kuning bening

Kuning lebih bening

+Ekstrak daging

Bening

Kuning bening

+Pepton

Kuning bening

Kuning lebih bening

Potato Dextrose Agar Instant +PDA Instan Bening (PDA Instant ) Nutrient Agar Instant +NA Instan Bening (NA Instant )

Kuning keruh

Untuk membuat medium dasar bakteri.

Untuk membuat medium dasar bakteri.

Untuk membuat Kuning bening medium dasar jamur dan khamir. Untuk membuat Kuning bening medium dasar bakteri.

30

PEMBAHASAN

Medium adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi yang dipakai untuk menumbuhkan mikroba. Selain untuk menumbuhkan, medium juga dapat digunakan untuk memperbanyak isolat, pengujian isolat, pengujian sifatsifat fisiologi dan untuk perhitungan jumlah mikroba. Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi medium berupa molekul-molekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel. Dengan medium pertumbuhan, dapat dilakukan isolat mikroorganisme menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya. Pada pembuatan medium agar mikroba dapat tumbuh dengan baik, maka harus memenuhi syarat-syarat seperti, medium harus mengandung semua nutrisi yang mudah digunakan oleh mikroba, medium harus memiliki tekanan osmosis, tekanan muka dan pH yang sesuai, tidak mengandung zat-zat penghambat, dan medium harus steril serta tidak terkontaminasi. Medium dapat diklsifikasikan berdasarkan atas susunan kimianya, konsistensi

dan

fungsinya.

Berdasarkan

susunan

kimianya,

medium

diklasifikasikan menjadi medium anorganik, medium organik, medium sintetik, dan medium nonsintetik. Berdasarkan konsistensinya dapat diklasifikasikan menjadi tiga macam yaitu, medium cair, medium padat dan medium padat yang dicairkan. Berdasarkan fungsinya dikenal beberapa macam medium diantaranya, medium diperkaya ( Enriched Medium), medium differensial ( Diferential Medium), medium penguji ( Essay Medium), medium untuk menghitung mikroba dan medium khusus. Praktikum ini dilakukan untuk mengetahui beberapa fungsi berbeda serta perbedaan konsistensi medium yaitu, Potato Dextrose Agar (PDA), Nutrient Agar (NA), Nutrient Cair (NC), Potato Dextrose Agar (PDA) instan dan Nutrient Agar (NA) instan. PDA merupakan medium semi alamiah karena tersusun atas bahan alami yaitu kentang dan bahan sintetis yaitu dextrose dan agar. PDA digunakan untuk menumbuhkan jamur/kapang dan khamir. Fungsi bahan-bahan digunakan pada medium PDA yaitu kentang sebagai karbohidrat, vitamin dan energi. Dextrose sebagai sumber gula dan energi, Agar sebagai bahan memadatkan medium PDA dan aquades sebagai pelarut. NA termasuk medium

31

semi alamiah karena tersusun atas bahan alami yaitu daging dan bahan sintetis yaitu pepton dan agar. Medium NA digunakan untuk menumbuhkan bakteri. Fungsi bahan yang digunakan pada medium NA yaitu daging sebagai sumber vitamin B, mengandung nitrogen organic dan senyawa karbon, pepton sebagai sumber nutrisi, agar untuk memadatkan medium NA dan aquades sebagai pelarut. NC termasuk medium sintetik yang digunakan untuk menumbuhkan bakteri. Fungsi bahan yang digunakan pada medium NC yaitu daging dan pepton sebagai bahan dasar karena merupakan sumber protein, nitrogen, vitamin serta karbohidrat yang sangat dibutuhkan oleh mikroorganisme untuk tumbuh. Aquades digunakan sebagai pelarut dan untuk menghomogenkan larutan. PDA Instan merupaka PDA yang telah dicampur dengan dextrose dan agar yang berfungsi sebagai sumber karbon dan karbohidrat. PDA Instan memiliki fungsi yang sama dengan PDA yang dibuat sendiri yaitu sebagai medium penumbuhan jamur/kapang dan khamir. Medium yang terakhir adalah NA Instan yang merupakan medium NA yang telah dicampurkan dengan pepton, ekstrak daging, dan agar dimana pepton dan ekstrak daging merupakan sumber protein, nitrogen, vitamin serta karbohidrat yang sangat dibutuhkan oleh mikroorganisme, NA Instan sama fungsinya dengan NA racikan/buatan yaitu sebagai medium pertumbuhan bakteri. Hasil pengamatan mengenai perubahan warna pada medium Potato Dextrose Agar (PDA) racikan ketika dimasukan glukosa berubah warna menjadi keruh kemudian ditambahkan agar dan kemudian berubah warna menjadi kuning bening. Ketika dipindahkan ke dalam botol UC dan didinginkan, medium menjadi padat. Pada medium Nutrient Agar (NA) yang awalnya bening dimasukan ekstrak daging menjadi kuning keruh, kemudian dimasukan pepton berubah warna menjadi kuning bening dan ditambahkan agar berubah menjadi kuning yang lebih bening. Pada medium Nutrient Cair (NC) yang awalnya bening berubah warna menjadi kuning namun masih bening ketika ditambahkan pepton warnanya menjadi semakin bening. Pada pembuatan medium PDA dari ekstak PDA Instan terjadi juga perubahan warna yaitu yaitu warnanya bening setelah dipanaskan dan dimasukkan ekstrak PDA Instan berubah warna menjadi kuning bening. Pada pembuatan medium NA menggunakan ekstrak NA Instan warna sebelumnya

32

dipanaskan dan penambahan NA Instan berubah warna dari bening menjadi kuning keruh dan akhirnya berubah warna menjadi kuning bening. Faktor-faktor yang mempengaruhi medium yaitu steril atau tidaknya keadaan wadah atau tempat medium, kadar pH, perlakuan saat pembuatan medium, suhu dan tekanan osmosis. Perbandingan penggunaan medium racikan dengan medium instan adalah medium racikan memiliki proses yang lebih lama dibandingkan dengan medium instan namun lebih murah begitu juga sebaliknya, medium instan lebih mahal disbandingkan medium racikan namun lebih cepat dan komposisi nutrisinya lebih tepat serta minimnya kemungkinan kontaminasi dari mikroba kontaminan dibandingkan medium racikan. Jadi, penggunaan medium instan lebih baik dibandingkan dengan mengunakan medium racikan karena komposisi nutrisi yang tepat, minim kontaminan dan proses yang simpek menjadikan medium instan sebagai medium ideal untuk pembiakan mikroba.

33

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan maka dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut: 1. Medium adalah bahan yang terdiri atas campuran nutrisi yang dipakai untuk menumbuhkan mikroorganisme 2. Medium

dapat

diklasifikasikan

berdasarkan

susunan

kimianya,

konsistensinya,dan fungsinya. 3. Masing-masing mikroorganisme memiliki persyaratan nutrisi yang berbeda beda. 4. Medium PDA dan PDA Instan digunakan untuk menumbuhkan jamur/kapang dan khamir, sedangkan NA, NC dan NA instan digunakan untuk menumbuhkan bakteri. 5. Penggunaan medium instan lebih baik dibandingkan dengan medium racikan karena komposisi medium instan lebih tepat dan tingkat kontaminasi yang lebih rendah.

34

ACARA III PERHITUNGAN JUMALAH KOLONI MIKROBA

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Mikroorganisme adalah makhluk hidup yang populasinya besar dan sangat kompleks. Spesiesnya yang berjumlah ratusan berada dimana-mana, seperti di tubuh manusia, tanaman, hewan, air, tanah dan udara. Mikroorganisme juga terdapat pada benda-benda disekitar kita. Mikroorganisme dalam hal ini bakteri merupakan organisme uniseluler yang tumbuh dengan cara pebelahan biner yaitu sel yang membelah secara simetris. Koloni bakteri merupakan sekumpulan dari bakteri sejenis yang berkumpul menjadi satu dan membentuk suatu koloni. Koloni-koloni ini dapat dihitung jumlahnya dengan berbagai teknik (Sutedjo, 1991). Jumlah mikroba dalam suatu bahan dapat ditentukan dengan bermacammacam cara tergantung pada jenis mikroba yang ditentukan. Populasi mikroba terdapat dalam tanah, air, dan udara serta cara pengukuran jumlahnya yang berbeda-beda. Ada berbagai cara untuk mengukur jumlah mikroba antara lain dengan hitungan cawan ( Plate Count ), hitungan mikroskopik langsung ( Direct Microskopic Count ) serta dengan menggunakan ruang hitung (Hemasitometer). Perhitungan jumlah suatu bakteri dapat melalui berbagai macam uji, seperti uji kualitatif koliform yang secara lengkap terdiri dari tiga tahap yaitu uji penduga (uji kuantitatif, bias dengan metode MPN), uji penguat dan uji pelengkap. Waktu, mutu, serta tujuan analisis merupaka beberapa faktor penentu dalam uji kualitatif koliform. Bakteri koliform dapat dihitung dengan menggunakan metode cawan petri (Dwidjoseputro, 1994). Terdapat dua metode perhitungan mikroba yaitu dengan metode hitung secara langsung ( Direct Methode) dan metode perhitungan secara tidak langsung ( Indirect Methode) dengan cawan baik dengan metode sebar maupun metode tuang. Suatu sampel diperkirakan mengandung lebih dari 300 ml sel mikroba per

35

gram atau per cm permukaan. Diperlukan pengenceran sebelum ditumbuhkan pada media agar dalam cawan petri, sehingga setelah inkubasi akan terbentuk koloni pada cawan tersebut dalam jumlah yang tepat dihitung, yaitu jumlah terbaik adalah 25-250 koloni. Beberapa koloni yang bergabung merupakan suatu kumpulan koloni yang besar dimana jumlah koloni dapat dihitung sebagai suatu koloni dan suatu rantai koloni. (Rukmi, 2008). Oleh karena itu, dilakukan praktikum ini untuk mengetahui cara perhitungan jumlah mikroba dalam medium.

Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui cara perhitungan jumlah koloni mikroba.

36

TINJAUAN PUSTAKA

Perhitungan bakteri adalah suatu cara yang digunakan untuk menghitung jumlah koloni bakteri yang tumbuh pada suatu media pembiakan. Secara mendasar ada dua cara perhitungan bakteri yaitu secara langsung dan secara tidak langsung. Ada beberapa cara perhitungan secara langsung antara lain dengan membuat preparat dari suatu bahan (preparat sedehana diwarnai maupun tidak diwarnai) dan penggunaan ruang hitung (Counting Chamber). Sedangkan cara perhitungan secara tidak langsung hanya mengetahui jumlah mikroorganisme pada suatu bahan yang masih hidup saja (Variable Count ). Balam pelaksanaanya ada beberapa cara yaitu perhitungan pada cawan petri (Total Plate Count ), perhitungan melalui pengenceran perhitungan juah terkecil atau terdekat ( MPN Methode) dan cara kekeruhan atau turbidimetri (Wheler, 2007). Metode perhitungan cawan didasarkan pada anggapan bahwa setiap sel yang hidup dapat berkembang menjadi koloni. Jadi jumlah koloni yang muncul pada cawan adalah indeks bagi jumlah mikroorganisme yang terkandung di dalam sampel dan mencawankan sampel tersebut. Setelah inkubsijumlah semua koloni harus diidentifikasi dan diamati untuk memenuhi persyaratan statistik. Cawan yang dipilih untuk menghitung koloni adalah cawan yang mengandung antara 25 sampai 250 koloni bakteri ( Irianto, 2006). Tingkat pengenceran yang diperlukan didasarkan pada pendugaan populasi saat ini. Hasil yang baik adalah jika pada pengenceran yang lebih rendah contoh yang diduga lebih banyak menunjukan hasil uji positi f dan pada pengenceran yang lebih tinggi contoh yang di duga lebih sedikit yang menunjukan hasil uji negatif (tidak ada pertumbuhan bakteri). Oleh karena itu jumlah populasi yang ada di dalam contoh diduga tinggi maka contoh harus diencerkan sampai memperoleh tingkat pengenceran, sehingga nilai maksimum dapat dihitung. Metode penenceran yang paling mudah dengan melakukan pengenceran 10 kali lipat dengan menggunakan 3 atau 5 tabung pengencer sekaligus (Sudarmanto, 2008). Permasalahan yang biasa terdapat dibidang kesehatan adalah tingkat tingginya kontaminasi bakteri pada makanan. Terkontaminasi bakteri akan

37

memberikan dampak negatif bagi kita yang mengkonsumsi pangan yang terkontaminasi. Salah satu bakteri yang dapat menyebabkan kontaminasi adalah bakteri Escherichia coli. Salah satu solusi yang dapat diambil yaitu dengan menyediakan sistem perhitungan bakteri Escherichia coli. Dimana dengan system tersebut dapat mengetahui jumlah bakteri Escherichia coli yang terdapat pada makanan yang diteliti agar diketahui apakah makanan tersebut layak dijual atau tidak (Wibowo, 2016). Pengawasan mutu secara biologis dilakukan pengujian laboratorium untuk mengisolasi dan melakukan jumlah perhitungan bakteri pantogen.tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui perbedaan cara penyebaran suspensi dengan menggunakan batang gelas bengkok, miropipet dan jarum ose terhadap jumlah bakteri yang terhitung pada media Eosin Methylene Blue Agar . Sampel diambil dari air susu kambing yang kemudian dihitung jumlah bakterinya. Data hasil penelitian dianalisis penggunakan sidik ragam, bila hasilnya berbeda nyata maka dilanjutkan dengan uji Duncan. Setelah diuji dengn uji Duncan, rata-rata jumalah bakteri yang terhitung dengan menggunakan mikropipet dan jarum ose lebih tinggi sangat nyata dibandingkan menggunakan mokropipet (Kadri, 2015).

38



Praktikum ini dilaksanakan pada hari Senin, 9 Oktober 2017 di Laboratorium

Mikrobiologi

Pangan,

Fakultas

Tenknologi

Pangan

dan

Agroindustri, Universitas Mataram.


a. Alat-alat Praktikum Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini diantaranya, Blue tip, Cawan petri, Drigalski, Lampu Bunsen, Mikropipet, Pinset, rak tabung reaksi, tabung reaksi, Vortex, Yellow tip, Erlenmeyer . b. Bahan-bahan Praktikum Adapun

bahan-bahan

yang

digunakan

dalam

praktikum

kali

ini

diantaranya, jamur roti ( Rhizopus sp.), larutan buffer, media Nutrient Agar (NA), Plate Count Agar (PCA), Potato Dextrose Agar (PDA), Bacillus cereus, Escherichia coli.

Prosedur Kerja

a. Perhitungan Jumlah Koloni Mikroba Metode Sebar

39

b. Perhitungan Jumlah Koloni Mikroba Metode Tuang

40

HASIL PENGAMATAN DAN PERHITUNGAN

Tabel 3.1 Hasil Pengamatan Jumlah Koloni Mikroba Metose Sebar Pengenceran -1 Kel. Medium Biakan 10 10-2 U1 U2 U1 U2 utrient Agar 1 (NA)

Bacillus cereus

utrient Agar 2 (NA)

Escherichi a coli

3

Plate Count Agar Bacillus (PCA) cereus

17 52 51 1sprea 1sprea 1spreader der der 78

0

0

0

Plate Count Agar Escherichi 4 (PCA) a coli

3

Potato Dextrose Rhizopus gar (PDA) sp.

10

5

10-3 U1

U2

175 107 1sprea 1,42x103 1spreader der

>250

59 58 1sprea 1spreader der 48

CFu/gr

36

17 0 1sprea 1 der 0 0 0 1sprea 1sprea 1spreader der der

7

3

5,95x103

54

>250

4,3x10 3

3

9

<1,00x103

0

1

<1,00x103

Tabel 3.2 Hasil Pengamatan Jumlah Koloni Mikroba Metose Tuang Kel.

Medium

-1

Biakan

10 U1

6

utrient Agar (NA)

Bacillus cereus

utrient Agar Escherichia (NA) coli Plate Count Agar Bacillus 8 (PCA) cereus Plate Count Agar Escherichia 9 (PCA) coli Potato Dextrose 10 Rhizopus sp. gar (PDA) 7

>250

U2

Pengenceran 10-2 U1 U2

>250 >250

10-3

CFU/gr

U1

U2

>250

>250

>250

>1,00x10 3

58

93

64

16

17 1spreader

22

15

11

>250

0

>250

>250

53

72

>250

>250

>250

>250 6,25x10 2

0

0

1

27

15

0

41

7,55x10 2 >1,00x10 3

<1,00x10 3

Hasil Perhitungan

1. Hasil Perhitungan Jumlah Mikroba Metode Sebar a. Medium Nutrient Agar (NA) (Bacillus cereus) 

Kelompok 1 

Peengenceran 10-3

 +     8+  =   − 8 =  × 10

∑ =

= 142 × 10 = 1,42 × 10 ⁄ b. Medium Nutrient Agar (NA) (Escherichia coli) 

Kelompok 2 Peengenceran 10-2 

 +     +  =   −  =  × 10

∑ =

= 59,5 × 10 = 5,95 × 10 ⁄ c. Medium Plate Count Agar (PCA) (Bacillus cereus) 


 +     +  =   −

∑ =

42

=

8  × 10 

= 43 × 10 = 4,3 × 10 ⁄ d. Medium Plate Count Agar (PCA) (Escherichia coli) 


 +     <+<  =   − =  1,00 × 10 ⁄

∑ =

e. Medium Potato Dextrose Agar (PDA) (Rhizopus sp.) 


 +     <+<  =   − =  1,00 × 10 ⁄

∑ =

2. Hasil Perhitungan Jumlah Mikroba Metode Tuang a. Medium Nutrient Agar (NA) (Bacillus cereus) 


 +     >+>  =   − =  1,00 × 10 ⁄

∑ =

43

b. Medium Nutrient Agar (NA) (Escherichia coli) 


 +     8+  =   −  =  × 10

∑ =

= 75,5 × 10 = 7,55 × 10 ⁄

c. Medium Plate Count Agar (PCA) (Bacillus cereus) 


 +     >+>  =   − =  1,00 × 10 ⁄

∑ =

d. Medium Plate Count Agar (PCA) (Escherichia coli) 


 +     +  =   −  =  × 10

∑ =

44

= 62,5 × 10 = 6,25 × 10 ⁄ e. Medium Potato Dextrose Agar (PCA) (Rhizopus sp.) 


 +     <+<  =   − =  1,00 × 10 ⁄

∑ =

45

PEMBAHASAN

Mikroorganisme adalah makhluk hidup yang populasinya besar dan sangat kompleks. Spesieanya yang berjumlah ratusan berada dimana-mana, seperti ditubuh manusia, tanaman, hewan, air, tanah, dan udara. Mikroorganisme juga terdapat pada benda-benda di lingkungan sekitar. Mikroorganisme dalam hal ini bakteri merupakan organisme uniseluler yang tumbuh dengan cara pembelahan biner yaitu sel yang membelah secara simetris. Mikroorganisme merupakan organisme hidup yang sangat kecil yang tidak dapat dilihat dengan mata telanjang (Sutedjo, 1991). Pengenceran adalah melarutkan atau melepaskan mikroba dari substratnya ke dalam air sehingga lebih mudah penanganannya. Tujuan pengenceran yaitu untuk mengurangi kepadatan bakteri yang ditanam. Pengenceran merupakan proses yang dilakukan untuk menurunkan atau memperkecil konsentrasi larutan dengan menambahkan zat pelarut ke dalam larutan sehingga volume larutan menjadi berubah. Sampel yang telah diambil kemudian disuspensikan dalam aquades steril. Teknik dilusi sangat penting dalam analisamikrobiologi karena hampir semua metode penelitian dan perhitungan jumlah sel mikroba. Perhitungan jumlah koloni mikroba adalah suatu cara yang digunakan untuk menghitung jumlah koloni mikroba yang tumbuh pada suatu media pembiakan. Perhitungan jumlah koloni mikroba ini sering sekali menggunakan teknik

pengenceran.

Pengenceran

dapat

membantu

untuk

memperoleh

perhitungan jumlah mikroba dengan kualitas dan jumlah yang besar. Namun pada pengenceran yang terlalu tinggi juga akan memperoleh lempengan agar dimana hasil koloni pada pengenceran ini relatif rendah. Pada perhitungan koloni mikroba ini dilakukan pengenceran sampel dengan tujuan agar jumlah koloni yang ditumbuhkan pada cawan petri tidak terlalu banyak maupun terlalu sedikit yaitu antara 25-250 koloni. Semakin banyak pengenceran maka akan semakin sedikit jumlah koloni yang dihasilkan. Ada dua cara dalam menghitung jumlah mikroba yaitu dengan perhitungan langsung dan tidak langsung. Perhitungan mikroba secara langsung yaitu jumlah

46

mikroba dihitung secara keseluruhan baik yang mati maupun yang hidup. Sedangkan perhitungan jumlah mikroba secara tidak langsung yaitu jumlah mikroba dihitung secara keseluruhan baik yang mati dengan yang hidup atau hanya untuk menentukan jumlah mikroba yang hidup saja. Proses perhitungan ini dilakukan dengan beberapa metode, salah satunya dengan metode perhitungan cawan. Metode ini menganggap bahwa setiap sel yang hidup dapat berkembang menjadi koloni. Jadi, jumlah koloni yang muncul pada cawan adalah indeks bagi jumlah mikroorganisme yang terkandung dalam sampel. Teknik yang harus dikuasi dalam pengenceran ini adalah pengenceran sampel dan mencawankan hasil. Setelah inkubasi, jumlah semua koloni diamati untuk memenuhi persyarat statistik. Cawan yang dipilih untuk menghitung koloni adalah cawan yang mengandung antara 25-250 koloni. Organisme yang terdapat dalam sampel ditentukan dengan mengalikan jumlah koloni yang terbentuk (U 1+U2) dengan faktor pengenceran pada cawan petri kemudian dibagi dua. Teknik yang digunakan dalam praktikum kali ini adalah teknik perhitungan cawan dengan medium Plate Count Agar (PCA), Nutrient Agar (NA), dan Potato Dextrose Agar (PDA). Biakan yang digunakan adalah Bacillus ceresus, Escherichia coli dan Rhizopus sp serta metodek yang digunakan adalah metode tuang dan sebar. Terdapat syarat-syarat yang harus dipenuhi dalam menghitung jumlah koloni mikroba yaitu jumlah koloni tiap cawan berada pada kisaran 25-250 koloni, tidak ada koloni yang menutupi setengah dari luas cawan (spreader). Hasil pengamatan klompok 4, 7, 10 didapatkan data jumlah koloni rata-rata tiga pengenceran terakhir lebih besar dibandingkan pengenceran awal. Hasil perhitungan koloni pada kelompok 4, 7, 10 tidak sesuai dengan prinsip pengenceran oleh Ferdiaz (1993) yaitu, semakin banyak jumlah pengenceran yang lilakukan maka semakin sedikit jumlah koloni mikroba yang tumbuh. Pada kelompok 4, hasil pengamatan mendapatkan data jumlah koloni pada pengenceran 10-1 lebih sedikit dibandingkan pengenceran 10 -2 dan 10 -3. Seharusnya jumlah koloni bakteri yang tumbuh pada pengerceran 10 -1 lebih banyak dibandingkan pengenceran 10-2 dan 10 -3. Data jumlah bakteri yang didapatkan kelompok 4 yang terbaca tidak pada sekitaran 25-250 koloni. Hal ini dikarenakan terjadinya

47

kesalahan saat pemindahan mikroba ke medium pembiakan dan kesalahan saat melakukan teknik sebar tersebut. Percobaan kali ini terdapat spreader baik itu metode tuang maupun metode sebar. Hal ini terjadi karena pengenceran suspensi yang kurang sehingga mikroba yang terikat masih sangat banyak sehingga tidak bisa untuk dihitung (TBUD). Faktor-faktor yang mempengaruhi perhitungan jumlah mikroba antara lain faktor pengenceran dimana semakin tinggi pengenceran maka akan semakin sedikit jumlah koloni mikroba yang terkandung. Selain itu, ada faktor temperatur dan pH, hal ini mempengaruhi kondisi optimum suatu bakteri, faktor kompetisi pada medium juga mempengaruhi dan factor teknis yaitu alat yang digunakan dan tingkat ketelitian praktikan di dalam melakukan praktikum. Selain faktor pengenceran, kualitas dari bahan juga dapat menyebabkan spreader, kualitas bahan yang kurang baik dapat menyebabkan banyaknya mikroba yang ada sehingga, karena faktor pengencerannya kurang, bakteri yang dinakulasikan ke dalam Petridish menjadi bertumpuk sehingga tidak dapat dihitung jumlahnya yang menyebabkan spreader sehingga tidak dapat dihitung jumlahnya karena terlalu banyak. Satuan jumlah sel mikroba adalah CFU/gr. Pengetahuan mengenai satuan dalam menghitung sel mikroba sangat penting. CFU merupakan singkatan dari Colony Forming Unit yang artinya unit-unit atau satuan pembentuk koloni.

48

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan maka dapat disimpilkan sebagai berikut: 1. Mikroorganisme adalah makhluk hidup dengan ukuran yang sangat kecil (berukuran mikro), populasinya yang besar dan sa ngat kompleks. 2. Pengenceran adalah proses yang dilakukan untuk menurunkan atau memperkecil konsentrasi larutan dengan menambahkan zat pelarut ke dalam larutan sehingga volume larutan menjadi berubah. 3. Perhitungan jumlah koloni mikroba ada dua cara yaitu, secara langsung dan secara tidak langsung. 4. Spreader adalah koloni yang menutupi lebih besar dari setengah luas cawan petri. 5. Factor-faktor yang mempengaruhi perhitungan jumlah mikroba antara lain, faktu pengenceran, suhu, pH, kualitas bahan dan factor teknis.

49

ACARA IV TEKNIK ISOLASI MIKROBA

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Mikrobiologi merupakan makhluk hidup yang populasinya sangat besar dan kompleks. Spesisesnya yang berjumlah ratusan terdapat dibagian-bagian tubuh manusia, hewan, dan tumbuhan. Suatu mikroba yang hidup di alam terbuka jarang dijumpai tumbuh sebagai biakan murni, tetapi pada umunya dalam populasi campurab dengan mikroba lainnya. Untuk mengidentifikasi mikroba perlu dilakukan isolasi dari habitatnya. Isolasi suatu mikroba merupakan pemindahan mikroba dari lingkungannya di alam dan menumbuhkan sebagai biakan murni dalam medium buatan (Indra, 2010). Isolasi mikroba dapat dilakukan dengan syarat syarat yaitu mengetahui sifat dan jenis mikroba yang akan diisolasi, tempat hidup dan tempat inkubasi, dan cara penanaman mikroba. Tidak semua mikroba dapat diisolasi dan ditumbuhkan dalam medium buatan, seperti mikroba yang bersifat parasit obligat yang hanya dapat hidup dan berkembang dalam inang yang hidup. Tempat hidup mikroba dialam menentukan cara isolasi yang digunakan. Mikroba yang hidup di dalam tanah maupun air menentuan cara isolasi yang berbeda dengan cara mikroba yang hidup pada tanaman. Masing-masing mikroba menentukan medium yang spesifik untuk dapat diisolasi dari habitatnya. Dalam hal ini diperlukan adalah medium selektif sehingga hanya mikroba yang tahan terhadap keadaan medium itu yang tumbuh (Nazzaruddin, 2014). Cara mengisolasi bakteri dan jamur tidaklah sama, karena bakteri dan jamur memiliki sifat masing-masing yang berbedda. Bakteri dapat diisolasi dengan menggunakan cara goresan (steak plate method), cara taburan (pour plate), cara sebaran dan cara tusuk. Jamur atau kapang dapat juga diisolasikan dengan cara goresan dan taburan seperti pada isolasi bakteri, tetapi dengan menggunakan medium yang susunannya berbeda. Namun, cara yang paling umum

50

digunakan pada isolasi jamur adalah cara linier. Penanaman mikroba pada medium cair, terutama bakteri dilakukan untuk menentukan sifat-sifat bakteri tersebut termasuk dalam kelompok bakteri aerob, anaerob, obligat aerob, atau kelompok mikroaerob. Oleh karena itu, maka dilakukannnya praktikum ini untuk dapat mengetaahui tekhnik-tekhnik yang digunakan untuk mengisolasi suatu mikroba.

Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengamati bentuk-bentuk koloni bakteri, sifat-sifat bakteri dan karakteristiknya.

51

TINJAUAN PUSTAKA

Isolasi mikroa pada prinsipnya adalah memisahkan jenis mikroba dengan jenis mikroba lainnya dengan asal mikroba yang terdiri dari berbagai macam spesies. Hal ini dapat dilakukan dengan menumbuhkan biakan pada media padat. Pada medium padat ini, sel-sel akan membentuk suaru koloni sel yang hidup akan berkembang menjadi satu koloni sehingga atau kumpulan sel yang hidup akan berkembang menjadi satu koloni sehingga mudah dipisahkan. Sifat dan jenis mikroba yang akan diisolasi tentu saja berbeda antara yang satu dengan yang lainnya. Sebagai contoh, dalam cara mengisolasi jamur akan berbeda dengan cara untuk mengisolasi bakteri, karena keduanya mempunyai perbedaan sifat yang mendasar. Tempat hidup dan asal mikroba juga sangat menentukan cara isolasi yang digunakan. Pada mikroba yang hidup ditanah maupun air memerlukan cara isolasi berbeda dengan cara isolasi mikroba yang hanya hidup pada tanaman (Gembong, 2008). Isolasi dengan cara tuang yaitu dengan cara pengenceran. Dasar melakukan pengenceran adalah penurunan jumlah mikroorganisme sehingga pada suatu saat hanya ditemukan satu sel dalam tabung. Isolasi cara sebar yaitu setetes inokulum diletakan dalam sebuah medium. Nutrient Agar (Na) dalam cawan petri dan dengan menggunakan batang kaca bengkok dan streril. Inkubasi itu disebarkan dalam medium batang yang semua dapat digunakan menginokulasi pinggan kedua untuk dapat menjamin penyebaran bakteri yang merata dengan baik. Pada beberapa pinggan akan muncul koloni-koloni terpisah (Suharto, 2005). Di alam bebas, tidak ada mikroba yang hidup sendiri atau terlepas dari spesies lain. Sering kali mikroba patogen kedapatan secara bersama-sama dengan mikroba aerob. Secara alami, mikroba ditemukan dalam populasi campuran. Untuk memperoleh biakan murni dapat dilakukan isolasi yang diawali dengan pengenceran bertingkat. Proses isolasi mikroba adalah memisahkan mikroba satu dengan mikroba lain yang berasal dari campuran berbagai mikroba untuk dapat mempelajari sifat biakan, morfologi, dan mikroba lainnya (Puspitasari, 2012).

52

Isolasi bakteri merupakan sebuah teknik untuk mendapatkan koloni tunggal suatu bakteri. Isolasi bakteri asam laktat melalui proses pembusukan untuk mendapatkan bakteri asam laktat dan dengan menggunakan media selektif deMann Rogosa sharpe Agar yang bertujuan mengoptimalkan pertumbuhan dan mendapatkan koloni bakteri asam laktat yang diharapkan. Proses isolasi dilakukan proses planting kultur dari pengenceran 10 -9 diinokulasi pada media MRS Agar dengan metode gores dengan dibagi dalam empat kuadran dan diinkubasi dalam inkubator. Koloni BAL tunggal yang tumbuh dimurnikan kembali dengan cara menginokulasikan kembali koloni ke dalam media MRS agar secara gores dan diinkubasi pada suhu selama 37 0C selama 48 jam dalam suasana anaerob. Identifikasi bakteri bertujuan untuk menentukan karakteristik khusus yang dimiliki oleh isolat yang diperoleh yang mempunyai karakteristik sama dengan bakteri yang diinginkan (Ibrahim, 2015). Proses isolasi mikroba endofit digunakan metode tanam langsung dimana potongan organ tanaman yang telah didisentifikasi permukaan ditempelkan pada media Nutrien Agar (NA) untuk bakteri dan Potato Dextrose Agar (PDA) untuk jamur dengan posisi permukaan belahan sampel menempel pada media. Cara ini dipilih karena lebih praktis dan cepar dalam pengerjaannya. Mikroba yang ditumbuh di isolasi, dimurnikan dan dilakukan fermentasi untuk mengetahui kemampuannya dalam menghasilkan senyawa anti mikroba. Uji aktivitas dari mikroba endofit secara umum penghambatannya lebih besar terhadap bakteri Gram-positif yaitu Staphlycoccus Aureus dibandingkan bakteri Gram- negatif Eshcerichia Coli hal ini disebabkan struktur dinding sel bakteri Gram-negatif yang rumit dan juga lapisan lipopolisakarida eksternal yang terdapat pada bakteri Gram-Negatif. Resistensi ini juga berkaitan dengan permeabillitas dan pori-pori dinding sel (Djaman, 2014).

53


Waktu dan Tempat Praktikum Praktikum ini dilaksanakan pada hari senin, 15 Oktober 2017 di

laboratorium Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram.


a. Alat-alat Praktikum Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum kali imi antara lain yaitu vortex, jarum ose , incubator, tabung reaksi , jarum preparat, lampu bunsen, cawan petri, pipet mikro dan drigalski. b.

Bahan-bahan Praktikum Adapun

bahan-bahan

yang

digunakan

dalam

praktikum

ini

diantaranya, Alkohol, Nutrient Agar (NA) tegak , deMann Rogosa Sharpe Agar (MRSA), Eosin Metylene Blue Agar (EMBA), Nutrien Agar (NA).

Prosedur Kerja

a.

Teknik Isolasi Bakteri Metode Sebar Disiapkan alat dan bahan Dihomogenkan biakan dengan vortex Diambil biakan sebanyak 0,1 ml Dimasukan ke dalam media Deman Rogosa Sharpe Agar, medium Eosine Metylene Blue Agar, medium Nutrient Agar Diratakan menggunakan drigalski Diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37 0C Diamati pertumbuhanya

54

b. Teknik Isolasi Bakteri Metode Tusuk Disiapkan alat dan bahan Disterilkan jarum preparat Dihomogenkan biakan dengan vortex Diambil biakan menggunakan jarum preparat Ditusukan menggunakan jarum preparat pada medium NA Diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37 0C Diamati pertumbuhanya c. Teknik Isolasi Bakteri Metode Gores Disiapkan alat dan bahan Disterilkan jarum Ose Dihomogenkan biakan dengan vortex Diambil biakan menggunakan jarum Ose Digores secara zig-zag pada medium Deman Rogosa Sharpe Agar, medium Eosine Metylene Blue Agar, medium Nutrient Agar Diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37 0C Diamati pertumbuhanya

55

HASIL PENGAMATAN

Tabel 4.1 Hasil Pengamatan Teknik Isolasi Mikroba Metode Gores No . 1

2

3

4

Sampel Bacillus Cereus

Escherichia Coli

Medium deMann Rogosa Sharpe Agar (MRSA) Eosin Metylene Blue Agar (EMBA) Nutrient Agar (NA) deMann Rogosa Sharpe Agar (MRSA) Eosin Metylene Blue Agar (EMBA) Nutrient Agar (NA)

Pseudomonas deMann Rogosa SP. Sharpe Agar (MRSA) Eosin Metylene Blue Agar (EMBA) Nutrient Agar (NA) Lactobacillus

deMann Rogosa Sharpe Agar (MRSA) Eosin Metylene Blue

Warna

Atas

Putih Susu

U1 Titik-titik

U2 Titik-titik

Kecoklatan

Berselaput

Berselaput

Kekuningan

Tak beraturan Titik-titik

Tak beratuan Titik-titik

Putih Susu

Tak beraturan Tak beraturan Titik-titik

-

Pola Pertumbuhan Samping U1 U2 Rata Rata

Tepi U1 Utuh

U2 Utuh

Timbul datar Membukit

Timbul datar Membukit

Berombak

Berombak

Bergerigi

Bergerigi

Timbul

Timbul

Bukit

Bukit

Tak beraturan Tak beraturan Titik-titik

Timbul

Timbul

Bergerigi

Bergerigi

Rata

Rata

Bergerigi

Bergerigi

Timbul

Timbul

Bukit

Bukit

Rizoid

Rizoid

Timbul

Timbul

Bergerigi

Bergerigi

Tak beraturan -

Rata

Rata

Bergerigi

Bergerigi

-

Tak beraturan -

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

Putih Susu Putih Putih Keruh

56

Agar (EMBA) Nutrient Agar (NA)

-

Titik-titik

Tak beraturan

Datar

Rata

Datar

Bergerigi

Tabel 4.2 Hasil Pengamatan Teknik Isolasi Mikroba Metode Sebar No . 1

2

3

4


Medium

Warna

deMann Rogosa Sharpe Agar (MRSA) Eosin Metylene Blue Agar (EMBA) Nutrient Agar (NA)

Putih


U1 Titik-titik

U2 Titik-titik Tak beraturan Tak beraturan Tak beraturan Titik-titik

Timbul datar Timbul datar Utuh


Bukit

Tepi U1 Datar

U2 Datar

Ombak

Ombak

Bergerigi

Bergerigi

Rata

Rata

Kawah

Ombak

Ombak

deMann Rogosa Sharpe Agar (MRSA) Eosin Metylene Blue Agar (EMBA) Nutrient Agar (NA) Pseudomonas deMann Rogosa SP. Sharpe Agar (MRSA) Eosin Metylene Blue Agar (EMBA) Nutrient Agar (NA)

-

Tak beraturan Tak beraturan Tak beraturan Titik-titik

Putih Kuning

Berselaput -

Berselaput -

Kawah -

Kawah -

Bergerigi -

Bukit -

Ungu

Tak beraturan Tak beraturan

Tak beraturan Beraturan

Timbul datar Rata

Bergerigi

Bergerigi

Halus

Bergerigi

Lactobacillus

Kuning

Timbul datar Timbul datar Rata

-

Utuh

Escherichia Coli

deMann Rogosa Sharpe Agar (MRSA)

Putih keruh

Atas

Kuning -

Putih

Titik-titik

57

Agar (EMBA) Nutrient Agar (NA)

-

Titik-titik

Tak beraturan

Datar

Rata

Datar

Bergerigi

Tabel 4.2 Hasil Pengamatan Teknik Isolasi Mikroba Metode Sebar No . 1

2

3

4


Medium

Warna


Putih


U1 Titik-titik

U2 Titik-titik Tak beraturan Tak beraturan Tak beraturan Titik-titik



Bukit

Tepi U1 Datar

U2 Datar

Ombak

Ombak

Bergerigi

Bergerigi

Rata

Rata

Kawah

Ombak

Ombak

deMann Rogosa Sharpe Agar (MRSA) Eosin Metylene Blue Agar (EMBA) Nutrient Agar (NA) Pseudomonas deMann Rogosa SP. Sharpe Agar (MRSA) Eosin Metylene Blue Agar (EMBA) Nutrient Agar (NA)

-


Putih Kuning

Berselaput -

Berselaput -

Kawah -

Kawah -

Bergerigi -

Bukit -

Ungu

Tak beraturan Tak beraturan

Tak beraturan Beraturan

Timbul datar Rata

Bergerigi

Bergerigi

Halus

Bergerigi

Lactobacillus

Kuning

Timbul datar Timbul datar Rata

-

Utuh

Escherichia Coli

deMann Rogosa Sharpe Agar (MRSA)

Putih keruh

Atas

Kuning -

Putih

Titik-titik

57

5

Tanpa Perlakuan

Eosin Metylene Blue Agar (EMBA) Nutrient Agar (NA)

Ungu


Putih

Tak beraturan Tak beraturan -

Ungu

Titik-titik


Putih

Bulat

Bulat

Putih

Timbul datar Rata Timbul datar Timbul datar

Timbul datar Timbul datar Timbul datar Timbul datar Datar

Bergerigi

Bergerigi

Halus

Bergerigi

-

Datar

-

Berombak

Ombak

Bergerigi

Tabel 4.3 Hasil Pengamatan Teknik Isolasi Metode Tusuk No Sampel Medium Warna Pola Pertumbuhan . Atas Samping Tepi 1 Bacillus Cereus Agar Tegak Abu Titik Pedang Bergerigi 2 Escherichia Coli Agar Tegak Putih Rata Bergerigi Berombak 3 Pseudomonas Agar Tegak Kuning Berakar Berakar Berakar 4 Lactobacillus Agar Tegak Kuning Berselaput Berjonjot Berombak 5 Tanpa Perlakuan Agar Tegak Kuning Rata Berakar Berbenang

58

5

Tanpa Perlakuan

Eosin Metylene Blue Agar (EMBA) Nutrient Agar (NA)

Ungu


Putih

Tak beraturan Tak beraturan -

Ungu

Titik-titik


Putih

Bulat

Bulat

Putih

Timbul datar Rata Timbul datar Timbul datar

Timbul datar Timbul datar Timbul datar Timbul datar Datar

Bergerigi

Bergerigi

Halus

Bergerigi

-

Datar

-

Berombak

Ombak

Bergerigi

Tabel 4.3 Hasil Pengamatan Teknik Isolasi Metode Tusuk No Sampel Medium Warna Pola Pertumbuhan . Atas Samping Tepi 1 Bacillus Cereus Agar Tegak Abu Titik Pedang Bergerigi 2 Escherichia Coli Agar Tegak Putih Rata Bergerigi Berombak 3 Pseudomonas Agar Tegak Kuning Berakar Berakar Berakar 4 Lactobacillus Agar Tegak Kuning Berselaput Berjonjot Berombak 5 Tanpa Perlakuan Agar Tegak Kuning Rata Berakar Berbenang

58

PEMBAHASAN

Teknik isolasi mikroba adalah suatu usaha untuk menumbuhkan mikroba diluar dari lingkungan alamiahnya. Isolasi adalah cara untuk memisahkan atau memindahkan mikroba dari lingkungannya didalam dan menumbuhkan sebagai biakan murni dalam medium murni. Koloni sel bakteri merupakan sekelompok sel yang dapat dilihat dengan mara telanjang. Semua sel dalam koloni itu semua dianggap sama dan dianggap merupakan keturunan dan karena itu mewakili sebagai biakan murni. Penampakan koloni bakteri dalam medium lempeng agar menunjukkan bentuk keseluruhan penampakan koloni, tepi dan permukaan koloni dan dapat juga dilihat dari elevasinya (Nazzaruddin, 2014). Metode isolasi adalah suatu cara atau proses pemindahan atau cara menumbuhkan mikroba diluar dari linkungannya. Ada berbagai macam metode isolat yang dapat digunakan. Isolasi tunggal merupakan metode isolasi dengan cara meneteskan bahan yang mengandung mikroorganisme pada suatu kaca

PEMBAHASAN

Teknik isolasi mikroba adalah suatu usaha untuk menumbuhkan mikroba diluar dari lingkungan alamiahnya. Isolasi adalah cara untuk memisahkan atau memindahkan mikroba dari lingkungannya didalam dan menumbuhkan sebagai biakan murni dalam medium murni. Koloni sel bakteri merupakan sekelompok sel yang dapat dilihat dengan mara telanjang. Semua sel dalam koloni itu semua dianggap sama dan dianggap merupakan keturunan dan karena itu mewakili sebagai biakan murni. Penampakan koloni bakteri dalam medium lempeng agar menunjukkan bentuk keseluruhan penampakan koloni, tepi dan permukaan koloni dan dapat juga dilihat dari elevasinya (Nazzaruddin, 2014). Metode isolasi adalah suatu cara atau proses pemindahan atau cara menumbuhkan mikroba diluar dari linkungannya. Ada berbagai macam metode isolat yang dapat digunakan. Isolasi tunggal merupakan metode isolasi dengan cara meneteskan bahan yang mengandung mikroorganisme pada suatu kaca penutup dengan menggunakan mikropipet yang kemudian diteliti dibawah obyektif mikroskop. Isolasi gores merupakan metode dengan cara menggeser atau menggores ujung jarum ose yang telah mengandung mikroorganisme dengan berhati-hati diatas permukaan agar secara zig-zag yang dimulai dari dasar tabung menuju kebagian atas tabung. Isolasi terbar merupakan metode isolasi dengan cara menebarkan bahan yang mengandung mikroorganisme pada permukaan atas tabung. Isolasi tuang merupakan metode isolasi dengan cara mengambil sedikit sampel campuran bakteri yang telah diencerkan dan sampel tersebut kemudian disebabkan didalam suatu medium dari kaldu dan gelatin encer (Kusnadi, 2003). Isolasi mikroba bisa atau dapat dilakukan dengan cara penggoresan atau dengan cara penaburan. Isolasi mikroba dengan cara penggoresan untuk mengahasilkan koloni-koloni bakteri yang terpisah dengan baik dari suspensi sel yang pekat. Isolasi mikroba dengan cara penaburan untuk media agar diinokulasi dalam keadaan tetap cair yaitu pada suhu 45 0C, dan demikan pula koloni koloni akan perkembang di seluruh media, tidak hanya pada permukaan. Isolasi mikroba dengan cara goresan mempunyai beberapa teknik goresan, antara lain goresan R,

59

goresan kuadran dan goresan sinambung. Cara ini menguntungkan bila ditinjau dari sudut ekonomi dan waktu, tapi memerlukan keterampilan yang diperoleh dengan latihan. Biakan yang digunakan merupakan Bacillus Cereus, Escherichia Coli, Pseudomonas Sp dan Lactobacillus. Dari biakan tersebut tentu mempunyai sifat dan pola pertumbuhan masing-masing Bacillus Cereus mempunyai sifat gram positif, aerob fakultif dan dapat membentuk spora. Bacillus Cereus mempunyai pola pertumbuhan yang berbeda pada tiap perlakuan tetapi Bacillus Cereus mempunyai sifat aerob fakultif dimana dapat menggunakan oksigen tetapi dapat juga menghasilkan energi secara anaerob. Secara mempunyai pola pertumbuhan ke atas titik-titik,

umum Bacillus Cereus

samping rata dan tepi utuh.

Escherichia Coli mempunyai sifat hidup sama dengan aerob fakultif di mana bakteri ini hanya bisa tumbuh pada suhu optimal yaitu 37 0C sama dengan bakteri Bacillus Cereus dengan pola pertumbuhan yang berbeda pada tiap perlakuan tetapi secara umum Escherichia Coli hidup mempunyai pola hidup atas titik-titik, samping timbul dan tepi Bukit. Pseudomonas Sp. mempunyai sifat hidup sama dengan bakteri Bacillus cereus dan Escherichia Coli di mana sifat hidupnya aerob fakultif di mana dapat menggunakan oksigen tetapi dapat juga menghasilkan energi secara anaerob dan bakteri ini hanya bisa tumbuh pada suhu optimal yaitu 300C sama dengan bakteri Bacillus cereus dan Escherichia coli. Pseudomonas Sp. mempunyai pola pertumbuhan yang berbeda dari bakteri sebelumnya. Pola pertumbuhan didapatkan bisa berbeda sesuai dengan metode yang kita lakukan. Tetapi secara umum Pseudomonas Sp. mempunyai pola pertumbuhan atas titiktitik, samping timbul dan tepi Bukit. Lactobacillus merupakan salah satu biakan yang dapat digunakan dalam teknik isolasi. Lactobacillus mempunyai sifat sama dari ketiga bakteri sebelumnya Lactobacillus mempunyai sifat aerob fakultif di mana hanya bisa bertahan hidup pada suhu optimal dan apabila dipanaskan bakteri ini akan mati. Lactobacillus tentu juga memiliki pola pertumbuhan, tetapi pola pertumbuhan

berbeda

dari

metode

yang

digunakan.

Pertumbuhan

dari

Lactobacillus yaitu secara umum titik-titik atas, samping rata dan tepi datar. Lactobacillus akan mati pada medium tertentu dan dia hanya ada pada medium

60

yang ada. Secara umumnya bakteri mempunyai sifat hidup aerob fakultif yang di mana hanya bisa bertahan hidup pada suhu 37 0C dan bakteri-bakteri yang ada mempunyai pola pertumbuhan yang berbeda-beda. Hasil pengamatan teknik isolasi mikroba metode gores didapat hasil seperti berikut. Sampel A medium MRSA didapat hasil berwarna putih susu dengan pola pertumbuhan titik titik (atas), rata (samping) dan Utuh (tepi). Lalu medium EMBA didapat hasil berwarna kecoklatan dengan pola pertumbuhan berselaput (atas), timbul datar (samping) dan berombak (tepi). Pada sampel B medium MRSA didapat hasil berwarna putih susu dengan pola pertumbuhan tak beraturan (atas), timbul (samping) dan bergerigi (tepi). Medium EMBA diperoleh hasil berwarna kecoklatan dengan pola pertumbuhan tak beraturan (atas), timbul (samping) dan bergerigi (tepi). Lalu Medium NA diperoleh hasil putih keruh dengan pola pertumbuhan tak beraturan (atas), rata (samping) dan berdiri (tepi). Pada sampel C media MRSA diperoleh hasil putih susu dengan pola pertumbuhan titik titik (atas), timbul (samping) dan Bukit (tepi). Lalu medium EMBA diperoleh hasil kecoklatan dengan pola pertumbuhan rizoid (atas), timbul datar (samping) bergerigi (tepi). Media NA diperoleh hasil berwarna putih susu dengan pola pertumbuhan tak beraturan (atas), rata (samping) dan bergerigi (tepi). Sampel D merupakan pengamatan terakhir dengan medium MRSA diperoleh hasil tidak berwarna dan tidak ada pola pertumbuhan begitu pula media media EMBA. Pada media NA diperoleh hasil berwarna putih susu dengan pola pertumbuhan titik (atas), datar (samping) dan bergerigi tepi. Hasil pengamatan teknik isolasi metode sebar dengan sampel A pada media MRSA diperoleh hasil berwarna putih dengan pola pertumbuhan titik (atas), rata (samping) dan datar (tepi). Medium EMBA diperoleh warna ungu dengan pola pertumbuhan tidak beraturan (atas), timbul datar (samping) dan ombak (tepi). Media NA diperoleh hasil putih susu dengan pola pertumbuhan tidak beraturan (atas), timbul datar (samping) dan bergerigi (tepi). Pada sampel B medium MRSA diperoleh hasil berwarna kuning dengan pola pertumbuhan tidak beraturan (atas), putus (samping)dan

kawah (tepi). Medium EMBA diperoleh

hasil berwarna ungu dengan pola pertumbuhan titik (atas), bukit (samping) dan

61

ombak (tepi). Media NA diperoleh hasil berwarna putih dengan pola pertumbuhan berselaput (atas), bawah (samping) dan bergerigi (tepi). Pada sampel C media MRSA diperoleh hasil berwarna kuning dan tidak ada pola pertumbuhan. Medium EMBA diperoleh hasil berwarna ungu dengan pola pertumbuhan tidak beraturan (atas), timbul datar (samping) dan bergerigi (tepi). Media NA diperoleh hasil berwarna putih dengan pola pertumbuhan tidak beraturan (atas),samping dan halus (tepi). Pada sampel D medium MRSA diperoleh hasil berwarna kuning dengan pola pertumbuhan titik (atas), rata (samping) dan utuh (tepi). EMBA diperoleh hasil berwarna ungu dengan pola pertumbuhan tidak beraturan (atas), Timbul datar (samping) dan bergerigi (tepi). Media Na diperoleh hasil berwarna putih dengan pola pertumbuhan tidak beraturan (atas), pertumbuhan (samping) dan halus (tepi). Pada sampel E media MRSA diperoleh hasil berwarna putih dengan pola pertumbuhan tidak beraturan (atas), timbul (samping) dan datar (tepi). Medium EMBA diperoleh hasil berwarna ungu dengan pola pertumbuhan titik titik (atas), timbul (samping) dan berombak (tepi). Medium Na

dengan

warna putih dan pola pertumbuhan bulat (atas), Timbul datar (samping) dan ombak (tepi). Hasil pengamatan teknik isolasi metode tusuk dengan medium agar tegak pada sampel A diperoleh hasil berwarna abu dengan pola pertumbuhan titik (atas) pedang (samping) dan bergerigi (tepi). Pada sampel B diperoleh hasil berwarna putih dengan pola pertumbuhan rata (atas), bergerigi (samping) dan berombak (tepi). Pada sampel C diperoleh hasil berwarna kuning dengan pola pertumbuhan berakar (atas), samping dan tepi. Pada sampel D diperoleh hasil berwarna kuning dengan pola pertumbuhan berselaput (atas), berjonjot (samping) dan berombak (tepi),dan yang terakhir sampel E diperoleh hasil berwarna kuning dengan pola pertumbuhan rata (atas), berakar (samping) dan berbenang (tepi). Menurut Dwijosoeputro (1984), menyatakan bahwa pada teknik metode gores pada sampel Bacillus Cereus mempunyai pola pertumbuhan tak beraturan (atas), membukit (samping) dan utuh tepi pada medium NA. Sedangkan pada praktikum yang di lakukan diperoleh hasil tak beraturan (atas) samping membukit dan bergerigi (tepi). Hal tersebut berbeda bisa terjadi akibat beberapa faktor. Pada

62

bakteri yang lain tentu bisa terjadi hal yang sama. Maka dari itu perlu dilakukan praktikum secara benar. Pertumbuhan mikroba tidak akan berjalan baik apabila faktor-faktor yang mempengaruhi

pertumbuhan

nya

tidak

optimal.

Adapun

faktor-faktor

pertumbuhan tersebut antara lain suplai zat gizi, beberapa unsur-unsur dasar seperti karbon, nitrogen, hydrogen, oksigen, fosfor, magnesium dan zat besi. Sumber energi dari mikroba adalah jenis gula karbohidrat sederhana seperti glukosa kemudian suhu apabila naik maka kecepatan metabolisme naik dan pertumbuhan dipercepat dan sebaiknya apabila suhu naik atau turun tingkat pertumbuhan mikroba mungkin terhenti. Aktivitas air yang terdapat pada media membutuhkan nilai aw yang berbeda.

63

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan maka dapat diatrik kesimpulan sebagai berikut : 1. Teknik isolasi mikroba adalah suatu usaha untuk menumbuhkan mikroba diluar dari lingkungan alamiahnya. 2. Metode isolai yang biasa digunakan yaitu isolasi tunggal, isolasi gores, isolasi sebar dan isolasi tuang. 3. Cara isolasi mikroba bisa menggunakan cara penggoresan dan penaburan. 4. Sifat dari bakteri yaitu aerob fakultif, dimana hanya bisa bertahan hidup pada suhu optimal 5. Adapun faktor-faktor pertumbuhan mikroba antara lain suplai zat gizi, suhu, pH, tekanan osmosis, aktivitas

air dan ketersediaan

oksigen untuk

pertumbuhannya.

64

ACARA V MORFOLOGI KOLONI BAKTERI

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Menurut bentuk dan strukturnya selnya mahluk hidup dibedakan menajdi dua yaitu makhluk hidup bersel banyak dan makhluk hidup bersel tunggal, makhluk ini tidak dapat terlihat dengan mata, karena panca indra manusia memiliki kemampuan daya pisah atau daya lihat yang sangat terbatas. Banyak masalah mengenal benda atau daya lihat yang sangat terbatas. Banyak masalah mengenal benda atau organisme yang akan diamati dan pengamatan hanya bisa dilakukan dengan alat bantu. Salah satuna alat bantu yang sering digunakan adalah mikroskop. Mikroskop adalah sering digunakan untuk meningkatkan kemampuan daya pisah atau lihat seseorang sehingga meningkatkann dapat mengamati objek yang sangat halus dan tidak dapat terlihat oleh mata terbuka. Mikroskop sangat penting dalam melakukan sebuah penelitian atau semacamnya, karena membantu dalam meneliti sesuatu (Dwidjoseoputro, 1984). Morfologi suatu mikroba dapat diperiksa dalam keadaan hidup maupun mati. Pemeriksaan morfologi ini penting untuk mengenal nama bakteri, pengenalan sifat fisiologisnya yang kebanyakan merupakan faktor penentu dalam mengenal nama spesies. Bagian-bagian sel dapat dilihat dengan terlebih dahulu memberi warna dimana warna bisa bersifat asam, netral maupun basa. Populasi bakteri tumbuh sangat cepat ketika mereka disertakan dengan gizi dan kondisi lingkungan yang memungkinkan mereka untuk berkembang. Beberapa koloni mungkin akan berwarna, ada yang berbentuk lingkaran, sementara yang lain tidak terlarut, karakteristik koloni yang diistilahkan sebagai “koloni morfologi” khas bagi tiap jenis bakteri (Waluyo, 2004). Mikroorganisme yang ada di alam ini mempunyai morfologi, struktur, dan sifat-sifat yang khas, begitu penting untuk mengenal nama bakteri. Bakteri yang hidup hampir tidak berwarna dan kontras dengan air, dimana sel-sel bakteri

65

tersebut disuspensikan. Salah satu cara untuk mengamati bentuk sel bakteri sehingga mudah untuk diidntifikasi ialah dengan percobaan pengamatan morfologi. Hal tersebut juga berfungsi untuk mengetahui sifat fisiologinya yaitu mengetahui reaksi dinding sel bakteri. Oleh karena itu, perlu dilakukannya praktikum morfologi koloni bakteri agar dapat dibedakan jenis, bentuk maupun struktur bakteri yang satu dengan yang lainnya. Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengamati pertumbuhan bakteri, mengamati bentuk-bentuk koloni bakteri dan sifat karakteristiknya jika ditumbuhkan pada media Nutrient Broth (NB), Nutrien Agar (NA) tegak, dan media agar miring.

66

TINJAUAN PUSTAKA

Koloni mikroorganisme merupakan kumpulan mikroorganisme sejenis hasil reproduksi yang mengumpul pada suatu tempat medium kultur atau kumpulan bakteri pada medium kultur yang berasal dari hasil pertumbuhan atau keturunan dari sel mikroorganisme. Beberapa kelompok mikroorganisme menunjukkan ciri-ciri koloni yang saling berbeda, baik dilihat dari bentuknya, elevasinya, maupun bentuk tepi dari koloni. Bentuk-bentuk koloni yaitu tidak beraturan, akar, seperti batang, berkarat, benang. Bentuk tepi koloni yaitu rata, tidak beraturan, seperti rumbai, berombak, berlekok, filamen atau seperti benang benang. Struktur dalam koloni yaitu transparan, tembus cahaya, tidak tembus cahaya, berombak, seperti pohon, seperti benang. Bentuk elevasi koloni yang dilihat dari samping yaitu datar, tipis, merata, sedikit cembung, lembung, menonjol, seperti tumbuh kuncup ,seperti bantal, tepi dan menonjol (Purnomo, 2012). Karakteristik morfologi koloni dilakukan dengan menginokulasi masingmasing kultur murni isolat bakteri pada media isola agar miring, Nutrien Agar miring, dan media Nutrient Broth serta agar tegak. Populasi bakteri tumbuh sangat cepat

ketika mereka disertakan dengan gizi dan kondisi lingkungan yang

memungkinkan mereka untuk berkembang. Melalui pertumbuhan ini, berbagai jenis bakteri kadang-kadang akan menghasilkan koloni yang khas dalam penampilan. Beberapa koloni mungkin akan berwarna Ada yang berbentuk lingkaran sementara yang lain tidak teratur. Karakteristik koloni yang diistilahkan sebagai koloni morfologi khas bagi setiap jenis bakteri (Waluyo, 2004). Koloni bakteri mempunyai bermacam-macam bentuk diantaranya ada yang berbentuk bundar tak beraturan dan menyebar berbentuk dialog dan kompleks. Tepian koloni ada yang licin berombak bertekuk bert ekuk tak beraturan sikat bercabang dan seperti benang. Sedangkan elevasinya ada yang datar timbul cembung berbukit bukit dan tumbuh dalam medium. Karakteristik dari bakteri dapat diketahui dengan melakukan pengamatan morfologi koloni bakteri di mana dengan mengetahui ciri-ciri morfologi tersebut maka dapat mempermudah dalam

67

melakukan identifikasi jenis bakteri. Bakteri tersusun atas dinding sel dan dinding sel (Fitri, 2011). 29 isolat bakteri yang tahan terhadap suhu 50 0C kemudian diidentifikasi secara makroskopis dan mikroskopis, warna koloni, bentuk koloni dan reaksi gram. Hasil identifikasi 29 isolat bakteri menunjukkan karakteristik empat genus bakteri yaitu Bacillus

tujuh isolat, bakteri Pseudomonas lima isolat. Menurut

yunizar, ciri-ciri morfologi bakteri yang mendekati karakter genus Bacillus memiliki gram positif, bentuk sel batang, mampu bergerak, bentuk koloni bundar, tepian koloni berombak dan warna koloni kuning atau krem. Bakteri genus Escherichia memiliki jenis morfologi berbentuk sel batang, gram negatif, bentuk koloni bundar dan warna merah muda. Ciri morfologi genus Micrococcus adalah gram positif bentuk dan non motil, warna koloni krem dan tepian koloni licin. Genus Pseudomonas memiliki ciri morfologi bentuk sel berupa batang lurus, koloni bakteri berwarna kuning, gram negatif dan motil (Syazwan, 2012). Mengetahui

kemampuan

isolat

dalam

menfermentasi

karbohidrat

dilakukan uji TSIA. Uji TSIA merupakan uji biokimiawi untuk mengetahui kemampuan mikroba dalam memfermentasi glukosa, sukrosa dan laktosa. Berdasarkan uji TSIA yang dilakukan terhadap 12 isolat, ASC 1-ASC12 merupakan jenis bakteri yang dapat memfermentasikan glukosa. Hal tersebut ditandai dengan bagian bawah media beruah warna menjadi kuning yang berarti menghasilkan asam dan pada bagian lainnya berwarna merah beraarti bersifat basa. Uji metyh red digunakan untuk menentukan adanya produk asam campuran dari fermentasi glukosa melalui jamur fermentasi asam campuran berupa asam laktat, asam format dan asam suksinat. Hasil positif yang ditandai dengan terjadinya perubahan warna menjadi merah setelah ditambahkan metly-red dan reaksi positif bila tidak terjadi perubahan warna atau permukaan media berwarna kuning (Suardana, 2014).

68


Waktu dan Tempat Praktikum Praktikum ini dilaksanakan pada hari senin, 15 Oktober 2017 di

Laboratorium Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram.

Alat dan Bahan Praktikum a. Alat-alat Praktikum

Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum kali imi antara lain yaitu vortex, jarum ose , incubator, tabung reaksi , jarum preparat, lampu bunsen, cawan petri, pipet mikro, drigalski, vortex, yellow tip, blue tip, rak tabung reaksi,label dan korek. b. Bahan-bahan Praktikum Adapun

bahan-bahan

yang

digunakan

dalam

praktikum

ini

diantaranya, Alkohol, Nutrient Agar (NA) tegak , deMann Rogosa Sharpe Agar (MRSA), Eosin Metylene Blue Agar (EMBA), Nutrien Agar (NA) , Potato Dextrose Agar (PDA), Escherichia Coli, Bacillus Cereus, Rhizopus Sp.

Prosedur Kerja

a. Metode Sebar Disiapkan alat dan bahan

Dihomogenkan biakan dengan vortex

Diambil biakan sebanyak 0,1

69

Dimasukan ke dalam media Deman Rogosa Sharpe Agar, medium Eosine Metylene Blue Agar, medium Nutrient

Diratakan menggunakan

Diinkubasi selama 48 jam ada suhu 37 0C

Diamati morfologi dan koloni bakteri b. Metode Tusuk Disiapkan alat dan bahan

Disterilkan jarum preparat


Diambil biakan menggunakan jarum preparat

Ditusukan menggunakan jarum preparat pada medium

70

Diinkubasi selama 48 jam pada suhu 370C

Diamati morfologi dan koloni bakteri

c. Metode Gores Disiapkan alat dan bahan

Disterilkan jarum Ose

Diambil biakan menggunakan jrum Ose

Digores secara zig-zag pada medium Deman Rogosa Sharpe Agar, medium Eosine Metylene Blue Agar, medium Nutrient Agar

Diinkubasi selama 48 jam ada suhu 37 0C

Diamati morfologi dan koloni bakteri

71

HASIL PENGAMATAN

Tabel 5.1 Hasil Pengamatan Morfologi Koloni Bakteri No . 1

2

Nama Bakteri

Agar tegak

Nutrien Agar (NA)

deMann Rogosa Sharpe Agar (MRSA) U1 U2 U1 U2 Bacillus Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Cereus utuh diatas diatas diatas diatas Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: pedang menyebar menyebar bulat bulat Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: licin licin licin licin licin Bentuk tepi: titik Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk Struktur: bukit bukit datar datar kasar Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: kasar kasar halus halus Escheric Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: hia Coli Bentuk Koloni: diatas diatas diatas diatas batang Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Permukaan: bundar bundar tak beraturan tak beraturan Bentuk tepi: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Bentuk Struktur: licin licin licin licin Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: bukit bukit menyebar menyebar

Eosin Metylene Blue Agar (EMBA) U1 U2 Pertumbuhan Pertumbuhan diatas diatas Bentuk Bentuk Koloni: nyebar Koloni: nyebar Permukaan: Permukaan: licin licin Bentuk tepi: Bentuk tepi: ombak ombak Bentuk Bentuk Struktur: halus Struktur: halus Pertumbuhan: Pertumbuhan: diatas diatas Bentuk Koloni Bentuk Koloni : bentuk L : bentuk L Permukaan: Permukaan: Licin Licin Bentuk tepi: Bentuk tepi: Berombak Berombak

72

3

4

5

Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Bentuk kasar kasar halus halus Struktur: Halus Struktur: Halus Pseudom Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: onas Sp. tengah diatas diatas diatas diatas Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Bentuk Koloni Bentuk Koloni akar bundar bundar : tak beraturan : tak beraturan Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: licin licin licin Tidak rata Tidak rata Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: akar bergerigi bergerigi bergerigi bergerigi Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Bentuk Halus halus halus Struktur: halus Struktur: halus Bakteri Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Asam atas dibawah dibawah diatas diatas Laktat Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Bentuk (BAL) berduri bukit bukit Koloni: Koloni: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: licin licin licin licin licin Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: berombak utuh utuh Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Bentuk Kasar halus halus Struktur: Struktur: Tempe Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Kontami ditengah ditengah ditengah ditepi ditepi ditepi ditepi nasi Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni Bentuk Koloni akar bundar bundar bundar bundar :bundar :bundar Permukaan Permukaan: Permukaan: Permukaan Permukaan Permukaan: Permukaan: licin licin licin licin licin licin licin

73

3

4

5

Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Bentuk kasar kasar halus halus Struktur: Halus Struktur: Halus Pseudom Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: onas Sp. tengah diatas diatas diatas diatas Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Bentuk Koloni Bentuk Koloni akar bundar bundar : tak beraturan : tak beraturan Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: licin licin licin Tidak rata Tidak rata Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: akar bergerigi bergerigi bergerigi bergerigi Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Bentuk Halus halus halus Struktur: halus Struktur: halus Bakteri Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Asam atas dibawah dibawah diatas diatas Laktat Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Bentuk Koloni: Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Bentuk (BAL) berduri bukit bukit Koloni: Koloni: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: licin licin licin licin licin Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: berombak utuh utuh Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Bentuk Kasar halus halus Struktur: Struktur: Tempe Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Kontami ditengah ditengah ditengah ditepi ditepi ditepi ditepi nasi Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni Bentuk Koloni akar bundar bundar bundar bundar :bundar :bundar Permukaan Permukaan: Permukaan: Permukaan Permukaan Permukaan: Permukaan: licin licin licin licin licin licin licin

73

6

7

8

Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: berombak berombak datar datar berombak berombak Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Bentuk halus halus halus halus Struktur: halus Struktur: halus Bacillus Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Cereus didalam diatas diatas diatas diatas diatas diatas Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni Bentuk Koloni berduri tepian tepian tepian tepian :tak beraturan :tak beraturan Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: licin licin licin licin licin licin licin Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: bergerigi bergerigi bergerigi bergerigi bergerigi berombak berombak Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Bentuk Halus halus halus halus halus Struktur: halus Struktur: halus Escheric Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: hia Coli ditengah Diatas Diatas Diatas Diatas Diatas Diatas Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni Bentuk Koloni akar Tak beraturan Tak beraturan Tak beraturan Tak beraturan : menyebar : menyebar Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: kasar kasar licin licin licin licin Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: berombak utuh utuh utuh utuh Bentuk Struktur: Bentuk Struktur Bentuk Struktur Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Bentuk Halus halus halus halus halus Struktur: halus Struktur: halus Pseudom Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: onas Sp. ditengah diatas diatas diatas diatas diatas diatas Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni Bentuk Koloni akar menyebar menyebar bundar bundar :menyebar :menyebar

74

6

7

8

Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: berombak berombak datar datar berombak berombak Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Bentuk halus halus halus halus Struktur: halus Struktur: halus Bacillus Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Cereus didalam diatas diatas diatas diatas diatas diatas Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni Bentuk Koloni berduri tepian tepian tepian tepian :tak beraturan :tak beraturan Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: licin licin licin licin licin licin licin Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: bergerigi bergerigi bergerigi bergerigi bergerigi berombak berombak Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Bentuk Halus halus halus halus halus Struktur: halus Struktur: halus Escheric Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: hia Coli ditengah Diatas Diatas Diatas Diatas Diatas Diatas Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni Bentuk Koloni akar Tak beraturan Tak beraturan Tak beraturan Tak beraturan : menyebar : menyebar Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: kasar kasar licin licin licin licin Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: berombak utuh utuh utuh utuh Bentuk Struktur: Bentuk Struktur Bentuk Struktur Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Bentuk Halus halus halus halus halus Struktur: halus Struktur: halus Pseudom Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: onas Sp. ditengah diatas diatas diatas diatas diatas diatas Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni Bentuk Koloni akar menyebar menyebar bundar bundar :menyebar :menyebar

74

9

Bakteri Asam Laktat (BAL)

Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: licin bergerigi bergerigi kasar kasar Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: halus licin licin Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: berakar halus halus halus halus Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: ditengah diatas diatas diatas diatas Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : akar bundar bundar bukit bukit Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: licin licin licin licin licin Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: berombak datar datar bergerigi bergerigi Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Kasar halus halus halus halus

Permukaan: kasar Bentuk tepi: kasar Bentuk Struktur: Pertumbuhan: Bentuk Koloni: Permukaan: Bentuk tepi: Bentuk Struktur: -


75

9

Bakteri Asam Laktat (BAL)

Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: licin bergerigi bergerigi kasar kasar Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: halus licin licin Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: berakar halus halus halus halus Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: Pertumbuhan: ditengah diatas diatas diatas diatas Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : Bentuk Koloni : akar bundar bundar bukit bukit Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: Permukaan: licin licin licin licin licin Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: Bentuk tepi: berombak datar datar bergerigi bergerigi Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Bentuk Struktur: Kasar halus halus halus halus



75

PEMBAHASAN

Morfologi koloni merupakan karakteristik bentuk ukuran warna dan lainlain yang khas bagi setiap jenis mikroba.

Pertumbuhan koloni sel bakteri

merupakan sekelompok sel yang dapat dilihat dengan mata telanjang. Semua sel dalam koloni itu dianggap sama dan merupakan keturunan dan karena itu mewakili sebagai biakan murni. Penampakan koloni bakteri dalam medium lempeng agar menunjukkan bentuk dan ukuran yang khas ini dapat dilihat dari bentuk keseluruhan penampakan koloni, tepi permukaan koloni dan dapat juga dilihat dari elevasinya. Pertumbuhan tiap jenis mikroba berbeda-beda dan selalu bergantung pada lingkungan sekitarnya. Cara pertumbuhan sesuai dengan tempat biakannya dan sesuai dengan suhu yang ada. Metode yang dilakukan adalah tiga yaitu metode tusuk, metode gores dan sebar dengan tempat biak nutrient agar deMann Rogosa sharpe agar, eosin methylene blue agar. Dengan bakteri escherichia coli, pseudomonas Sp, bacillus cereus dan bakteri asam laktat.

PEMBAHASAN

Morfologi koloni merupakan karakteristik bentuk ukuran warna dan lainlain yang khas bagi setiap jenis mikroba.

Pertumbuhan koloni sel bakteri

merupakan sekelompok sel yang dapat dilihat dengan mata telanjang. Semua sel dalam koloni itu dianggap sama dan merupakan keturunan dan karena itu mewakili sebagai biakan murni. Penampakan koloni bakteri dalam medium lempeng agar menunjukkan bentuk dan ukuran yang khas ini dapat dilihat dari bentuk keseluruhan penampakan koloni, tepi permukaan koloni dan dapat juga dilihat dari elevasinya. Pertumbuhan tiap jenis mikroba berbeda-beda dan selalu bergantung pada lingkungan sekitarnya. Cara pertumbuhan sesuai dengan tempat biakannya dan sesuai dengan suhu yang ada. Metode yang dilakukan adalah tiga yaitu metode tusuk, metode gores dan sebar dengan tempat biak nutrient agar deMann Rogosa sharpe agar, eosin methylene blue agar. Dengan bakteri escherichia coli, pseudomonas Sp, bacillus cereus dan bakteri asam laktat. Adapun medium yang digunakan dalam mengamati morfologi koloni bakteri antara lain medium Nutrient Agar tegak (NA), deMann Rogosa Sharpe agar (MRSA), Eosin Methylene Blue Agar (EMBA), Nutrient Agar (NA). Sedangkan untuk bakterinya antara lain menggunakan Escherichia Coli, Bacillus Cereus, Pseudomonas Sp dan Lactobacillus. Pada hasil pengamatan morfologi koloni bakteri pada sampel A agar

tegak dilihat dari pengamatan dengan

pertumbuhan di dalam, bentuk koloni pedang, permukaan licin, bentuk tepi titik dan berbentuk struktural kasar. Pada medium Nutrient Agar (NA), pertumbuhan diatas, bentuk koloni menyebar, permukaan licin, bentuk tepi Bukit, bentuk struktural kasar. Pada medium deMann Rogosa Sharpe Agar (MRSA), dengan pertumbuhan diatas, bentuk koloni bulat, permukaan licin, bentuk tepi datar, bentuk struktural halus. Pada medium Eosin Metilen Blue Agar (EMBA), pertumbuhan diatas, bentuk koloni menyebar, permukaan licin, bentuk tepi ombak, bentuk struktural dalam di halus. Pada sampel B medium agar tegak tidak pertumbuhannya bentuk koloni dan sebagainya terjadi. Untuk medium Nutrient Agar (NA) pertumbuhan diatas, bentuk koloni bundar, permukaan licin, bentuk

76

tepi bergerigi, bentuk struktur dalam halus. Pada medium deMann Rogosa Sharpe (MRSA), pertumbuhan diatas, bentuk koloni tak beraturan, permukaan licin, Agar (MRSA), bentuk tepi menyebar, bentuk struktur dalam halus. Pada medium Eosin Methylene Blue Agar (EMBA), (EMBA), pertumbuhan diatas, bentuk koloni bentuk L, permukaan licin, bentuk tepi berombak, bentuk struktur dalam halus. Pada sampel C agar tegak pertumbuhan pertumbuhan tengah, bentuk koloni akar, akar, permukaan licin, bentuk koloni akar, bentuk struktur dalam halus. Pada medium Nutrient Agar (NA) pertumbuhan diatas, bentuk koloni bundar, permukaan licin, bentuk tepi bergerigi, bentuk struktur dalam halus. Pada medium deMann Rogosa Sharpe

Agar

(MRSA), tidak ada pertumbuhan pertumbuhan dan sebagainya. Pada medium medium Eosin Methylene Blue Agar (EMBA), pertumbuhan diatas, bentuk koloni tidak beraturan, permukaan tidak rata, bentuk tepi bergerigi, bentuk struktur dalam kasar. Pada sampel D medium agar tegak pertumbuhannya di atas, bentuk koloni berduri, permukaan licin, bentuk tepi berombak, bentuk struktur dalam kasar. Pada medium Nutrient Agar (NA) pertumbuhan dibawah, bentuk bentuk koloni koloni tidak ada, permukaan licin, bentuk tepi dan bentuk struktur dalam tidak ada. Pada medium deMann Rogosa Sharpe Agar (MRSA) Agar (MRSA) pertumbuhan pertumbuhan di atas, bentuk koloni koloni bukit, permukaan licin, bentuk tepi utuh, bentuk struktur dalam halus. Pada medium Eosin Methylene Blue Agar (EMBA) pertumbuhannya tidak ada. Lalu pada sampel E, di mana pada media agar tegak pertumbuhannya di tengah, bentuk koloni berakar, permukaan licin, sedangkan bentuk tepi dan strukturnya tidak ada. Untuk medium Nutrient Agar (NA), pertumbuhannya di tengah, bentuk koloni bundar, permukaan licin, bentuk tepi berombak, bentuk struktur halus. Pada deMann Rogosa Sharpe Agar (MRSA), pertumbuhan di tepi, bentuk koloni bundar, permukaan licin, l icin, bentuk topi t opi datar dan bentuk struktur str uktur halus. Lalu pada Eosin Methylene Blue Agar (EMBA), (EMBA), pertumbuhan di tepi, bentuk koloni bundar, permukaan licin dan bentuk tepi berombak. berombak. Berdasarkan pada hasil pengamatan yang telah dilakukan, secara keseluruhan hasil morfologi bakteri yang tumbuh telah sesuai dengan literatur. Hal ini berdasarkan literatur Waluyo (2010) yang menyebutkan bahwa Escherichia Coli. Coli. Pada medium agar biasanya berwarna putih, kadang-kadang

77

putih-kuning hingga kuning. Koloni bakteri ini tampak basah, halus, bentuk tepinya utuh, sampel bergelombang tidak keruh sehingga dapat ditembus oleh cahaya. Bacillus Cereus Cereus mempunyai bentuk koloni yang kasar, sehingga tidak dapat ditembus oleh cahaya pertumbuhan bakteri tidak merata dengan warna putih hingga ke Kuningan. Faktor yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri antara lain suhu, pH, tekanan osmosis, osmosis, tekanan permukaan dan nutrien dari media pertumbuhan. Jika faktor tersebut berbeda Salah satunya maka isolat yang akan dihasilkan juga berbeda atau yang tumbuh bukan biakan murni melainkan kontaminan nya. Sedangkan media pertumbuhan yang cocok untuk bakteri dari empat media yang digunakan dalam praktikum adalah medium Nutrient Agar (NA) karena pembuatan medium ini memanfaatkan ekstrak daging segar yang berfungsi pertumbuhan bakteri. Ekstrak daging merupakan sumber vitamin B yang mengandung nitrogen organik dan senyawa karbon. Pepton adalah hidrolisis protein hewani atau nabati seperti susu, kasein, laktabumin, gelatin dan kedelai yang berfungsi sebagai sumber protein dan karbohidrat dari penghasil nitrogen.

78

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan maka dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut : 1. Morfologi koloni merupaka karakteristik yang khas bagi tiap jenis mikroba. 2. Pertumbuhan mikrob pada medium secara umum tergantung pada kondisi bahan makanan dan juga lingkungan. lingkungan. 3. Metode yang digunakan ialah Metode tusuk, gores dan sebar. 4. Morfologi koloni masing-masing bakteri tergantung pada tempat dan keadaan lingkungan. 5. Adapun faktor-faktor pertumbuhan mikroba antara lain keberadaan nutrien

dan kondisi lingkungan suhu, pH, dan kelemnapan .

79

ACARA VI PENGECATAN DAN MORFOLOGI BAKTERI

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Bakteri merupakan mikroorganisme yang berukuran mikroskopik yang hanya bisa dilihat menggunakan mikroskip. Selain mikroskopik, bakteri juga hampir tidak berwarna atau transparan dan kontras dengan air. Hal tersebut mengakibatkan sulit untuk melihat dan mengamati bakteri dalam keadaan hidup . Cara yang digunakan untuk mengatasi masalah tersebut yaitu dengan suatu teknik pewarnaan dari sel bakteri. Cara tersebut merupakan salah satu cara yang paling utama dalam penelitian-penelitian mikrobiologi. Mengidentifikasi suatu biakan murni bakteri hasil isolasi mula-mula diamati morfologi sel secara mikroskopik melalui pengecetan atau pewarnaan. Salah satunya adalah dengan pewarnaan gram. Pewarnaan gram merupakan salah satu prosedur yang paling banyak digunakan untuk mencirikan banyak bakteri. Setelah dilakukan pewarnaan gram dapat diketahui morfologi sel antara lain sifat gram, bentuk sel dan penataan sel. Pewarnaan gram atau metode gram adalah metode empiris untuk membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok besar yaitu gram positif dan gram negatif. Berdasarkan sifat kimia dan fisika kimia dindingnya, metode ini diberi nama berdasarkan penemuan ilmuwan Denmark Hans Christian Gram pada tahun 1884 (Prescot,2009). Pewarnaan

gram

mampu

membedakan

bakteri,

sehingga

dapat

digolongkan menjadi dua yaitu gram negatif dan gram positif. Selain dengan pewarnaan atau pengecetan, identifikasi bakteri dapat berupa melihat morfologi koloni dan uji biokimia bakteri. Morfologi koloni bakteri meliputi bentuk, ukuran, tekstur, warna koloni, dan lain-lain. Sementara uji kimia dilakukan untuk memastikan jenis atau spesies bakterinya. Oleh karena itu, perlu dilakukan praktikum ini untuk mengetahui teknik pewarnaan gram dan morfologi bakteri sehingga dapat mempermudah untuk identifikasi bakteri.

80

Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untk mempelajari cara pengecatan gram dan mengamati bentuk dan sifat bakteri terhadap pengecatan gram.

81

TINJAUAN PUSTAKA

Bakteri merupakan organisme prokariot atau tidak memiliki inti sejati. Umumnya ukuran bakteri sangat kecil, bentuk tubuh bakteri baru dapat dilihat dengan menggunakan mikroskop dengan pembesaran 1.000 X atau lebih). Sel bakteri memiliki panjang yang beragam, sel beberapa spesies dapat berukur an 100 kali lebih panjang daripada sel spesies yang lain. Bakteri merupakan makhluk hidup dengan ukuran antara 0,1 sampai 0,3 μm. Bentuk bakteri bermacam – macam yaitu elips, bulat, batang dan spiral. Bakteri lebih sering diamati dalam olesan terwarnai dengan suatu zat pewarna kimia agar mudah diamati atau dilihat dengan jelas dalam hal ukuran, bentuk, susunan dan keadaan struktur internal dan butiran (Pelczar, 2007). Prinsip dasar dari pewarnaan adalah adanya ikatan ion antara komponen selular dari bakteri dengan senyawa aktif dari pewarna yang disebut kromogen. Ikatan ion dapat terjadi karena adanya muatan listrik baik pada komponen seluler maupun pada pewarna. Terdapat tiga mcam metode pewarnaan yaitu pewarnaan sederhana, pewarnaan diferensial dan pewarnaan Gram. Pewarnaan sederhana menggunakan pewarna tunggal, pewarnaan diferensial memakai serangkaian larutan pewarna atau reagen. Pewarnaan gram merupakan metode pewarnaan yang paling umum digunakan untuk mewarnai sel bakteri (Umsl, 2008). Bakteri Gram positif adalah bakteri yang mempertahankan zat warna metil ungu sewaktu proses pewarnaan Gram. Bakteri jenis ini akan berwarna biru atau ungu di bawah mikroskop, sedangkan bakteri Gram negative akan berwarna merah muda. Bakteri Gram negatif adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat warna metil ungu pada metode pewarnaan Gram. Bakteri Gram positif akan mempertahankan warna ungu gelap setelah dicuci dengan alcohol, sementara bakteri Gram negatif tidak. Perbedaan klasifikasi antara kedua jenis bakteri ini terutama didasarkan pada perbedaan struktur dinding sel bakteri (Aditya, 2010). Pemeriksaan morfologi bakteri perlu,untuk mengenal nama bakteri. Disamping itu juga perlu pengenalan sifat sifat fisiologisnya bahkan sifat fisiologis ini kebanyakan merupakan faktor tertentu dalam mengenal spesies suatu

82

bakteri. Kebanyakan bakteri mudah bereaksi dengan pewarna pewarna sederhana karena sitoplasmanya bersifat basofilik (suka akan basa) sedangkan zat zat warna yang digunakan untuk pewarna sederhana biasanya bersifat alkalin (komponen kromofilnya bermuatan positif).Teknik pewarnaan pada bakteri dapat dibedakan menjadi empat macam,yaitu pengecatan sederhana pengecatan negatif pengecatan diferensial dan pengecatan struktural. Pemberian warna pada bakteri atau jasad jasad renik lain dengan menggunakan larutan tunggal suatu pewarna pada lapisan tipis ,olesan,yang sudah di fiksasi dinamakan pewarnaan sederhana (Juwinatrum, 2016). Pewarnaan

gram

bertujuan

untuk

mengamati

morfologi

sel

dan

mengetahui kemurnian sel bakteri. Pengecatan gram merupakan salah satu pewarnaan yang paling sering digunakan,yang dikembangkan oleh Cristian Gram. Preparat apus bakteri dibuat dengan cara mencampurkan suatu usa biak bakteru dari PAD dengan fisiologis yang telah diteteskan pada gelas objek, kemudian dibuat setipis mungkin, dikeringkan, dan difiksasi di atas lampu spiritus. Setelah itu dilunturkan denagn alkohol 95% selama satu menit. Bakteri dikelompokkan sebagai gram positif apabila selnya terwarnai keunguan dan gram negatif apabila selnya terwarnai merah (Dewi, 2013).

83


Waktu dan Pelaksanaan Praktikum

Praktikum ini dilaksanakan pada hari Senin, 23 Oktober 2017 di Laboraturium Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram.


a. Alat-alat Praktikum Adapun alat-alat yang digunakan pada praktikum ini antara lain vortex, lampu bunsen, gelas preparat, gelas penutup, jarum ose, mikroskop,pipet tetes, rak tabung reaksi dan stopwatch. b. Bahan-bahan Praktikum Adapun bahan-bahan praktikum yang digunaka antara lain bakteri Bacillus cereus, bakteri Escherichia coli, aquades, larutan kristal violet, larutan mordan, alkohol 95%, larutan safranin. Prosedur Kerja

Disiapkan alat dan bahan


Diambil biakan menggunakan jarum ose dan dioleskan diatas gelas benda

Difiksasi

Ditambah larutan kristal violet (larutan gram a)

Difiksasi selama 3 menit

84

Dibilas dengan aquades

Difiksasi

Ditambahkan larutan mordan (larutan gram b)



Difiksasi

Ditambah alkohol 96% (larutan gram c)

Difiksasi selama 5 detik


Difiksasi

Ditambahkan larutan safranim (larutan gram d)


Dibilas denga aquades

Ditutup dengan gelas penutup

Diamati dengan mikroskop

85

Digambar betuk morfologi bakteri

86

HASIL PENGAMATAN

Tabel 6.1. Hasil Pengamatan Pengecatan dan Morfologi Bakteri No Nama Biakan Gambar Literatur 1

Eschericia Coli

Keterangan -warna : merah -bentuk : batang

.Perbesaran : 100x Perbesaran : 40x /0.65

2

-bakteri gram negatif

.Sumber : www.hindawi.com

Bacillus Cereus

-warna : violet -bentuk : batang

.Perbesaran : 100x

Perbesaran : 40x /0.65

3

-bakteri gram positif


Gram C ( Eschericia Coli + Bacillus Cereus)

-warna : merah dan violet -bentuk : batang .Perbesaran : 100x

Perbesaran : 40x /0.65


-bakteri gram positif dan negatif.

87

PEMBAHASAN

Pewarnaan gram adaalah pewarnaan differensial yang sangat berguna dan paling banyak digunakan dalam laboratorium mikrobiologi, karena merupakan tahapan penting dalam langkah awal identifikasi. Pewarnaaan ini didasarkan pada tebal atau tipisnya peptidoglikan di dinding sel dan banyak sedikitnya lapisan lemak pada membran sel bakteri. Jenis bakteri berdasarkan pewarnaan gram dibagi menjadi dua yaitu, gram positif dan gram negatif. Bakteri gram positif memiliki dinding sel yang tebal dan membran sel selapis. Sedangkan bakteri gram negatif mempunyai dinding sel tipis yang berada diantara dua lapis membran sel. Bakteri gram positif ditandai dengan warna ungu yang menunjukkan bahwa bakteri tersebut mampu mengikat warna kristal violet. Sedangkan bakteri gram negatif ditandai dengan warna merah muda yang menunjukkan bahwa bakteri tersebut tidak mampu mengikat warna kristal violet dan hanya terwarnai oleh safranin (gram D). Pewarnaan bakteri pada umumnya bertujuan untuk mempermudah dalam pengamatan morfologi bakteri dengan bantuan mikroskop. Bakteri umumnya tidak berwarna dan transparan. Pewarnaan sangat dibutuhkan untuk melihat bakteri dengan jelas, baik untuk pengamatan intraseluler maupun morfologi. Pengecatan gram digunakan untuk membedakan bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Pewarnaan sangat dibutuhkan untuk melihat bakteri dengan jelas, baik untuk pengamatan intraseluler maupun morfologi. Pengecatan gram digunakan untuk membedakan bakteri gram positif dan bakteri gram negatif berdasarkan sifat fisik dan kimia dinding sel bakteri. Bakteri gram negatif adalah bakteri yang tidak mampu mempertahankan zat warna metal ungu pada metode pengecatan gram. Sedangkan bakteri

gram positif adalah bakteri yang

mempertahankan zat warna metal ungu sewaktu pengecatan gram. Proses sterilisasi sangat penting karena sebelum memulai maupun mengakhiri sebuah pekerjaan di laboratorium harus menggunakan teknik aseptik. Hal tersebut berfungsi untuk membunuh mikroorganisme yang tidak diinginkan agar mendapatkan pengukuran yang akurat. Pada proses pewarnaan gram

88

dilakukan pembersihan pada gelas benda dengan menggunakan alkohol. Setelah itu, diberi satu tetes aquades pada permukaan gelas benda dan dibersihkan dengan menggunakan tisu. Kultur bakteri murni diambil dan diratakan di atas gelas benda. Pengambilan kultur bakteri tidak diambil terlalu banyak kareana jika terlalu banyak akan sulit untuk diratakan dan apabila kultur bakteri tidak dapat diratakan secara tipis maka kultur bakteri akan tertimbun. Hal ini akan mengakibatkan bentuk dari bakteri yang akan diamati tidak jelas saat dilihat melalui mikroskop. Proses selanjutnya dilakukan fiksasi agar bakteri melekat pada gelas benda sehingga olesan bakteri tidak akan terhapus apabila dilakukan pencucian. Yang perlu diperhatikan dalam proses fiksasi adalah bidang yang mengandung bakteri dijaga agar tidak terkena nyala api. Setelah dilakukan fiksasi, kemudian ditetesi dengan larutan gram A ( larutan cat kristal violet) yang berfungsi sebagai penguat agar cat nampak jelas dan kontras. Larutan gram A ditetesi sebanyak 1-2 tetes dan dibiarkan selama 1 menit. Setelah itu dicuci menggunakan aquades, pemberian aquades bertujuan untuk mengurangi kelebihan zat warna dari cat Kristal violet. Kemudian ditambahkan larutan gram B (larutan mordan) yang merupakan iodium. Gram B merupakan larutan yang berfungi untuk meningkatkan afinitas zat warna oleh bakteri agar lebih kuat, memperjelas warna dan mempersulit pelunturan zat warna. Pada pewarnaan gram, penambahan larutan mordan menyebabkan terbentuknya persenyawaan kompleks. Setelah diberi larutan mordan kemudian didiamkan selama 1 menit dan dibilas lagi menggunkan aquades. Larutan alkohol 95% diteteskan pada biakan bakteri untuk melakukan penetrasi ke dalam dinding sel dan melunturkan warna ungu dari Kristal violet dan iodium pada gram negatif, karena mengandung lipid sedangkan pada gram positif

akan

tetap

mempertahankan

warna

ungu

karena

mengandung

peptidoglikan. Larutan ini juga berfungsi untuk melarutkan lipida pada membran bakteri gram negarif yang akan menyebabkan pori-pori sel membesar sehingga meningkatnya daya larut. Perlakuan ini dilakukan tidak membutuhkan waktu lama, hanya memerlukan beberapa detik dan setelah itu dilanjutkan dengan pembilasan menggunakan aquades. Pewarnaan selanjutnya dengan menggunakan gram D (safranin) sebanyak 2 tetes dan didiamkan selama 30 detik. Safranin pada

89

gram D tidak akan menyebabkan perubahan warna pada gram gram positif. Pada gram negatif penambahan safranin akan menyebabkan warna bakteri berubah menjadi merah karena ungu yang dihasilkan kristal violet telah luntur dengan lisisnya membran sel sehingga safranin dapat terikat. Oleh sebab itu, gram D berfungsi sebagai pembeda terhadap zat warna kristal violet. Setelah itu dicuci dengan menggunakan aquades dan dikeringkan. Kemudian dilakukan pengamatan dengan menggunakan mikroskop sesuai dengan perbesaran yang dapat terli hat. Proses fiksasi dilakukan dengan cara mendekatkan gelas benda yang berisi sampel kemudian dipanaskan di atas lampu bunsen. Hal ini bertujuan untuk menguapkan air sehingga hanya akan didapatkan bakteri saja tanpa adanya gelumbung air. Selain itu, proses fiksasi juga bertujuan agar bakteri benar-benar melekat pada gelas benda sehingga olesan bakteri berupa tetesan sampel tidak akan terhapus apabila dilakukan pencucian. Yang perlu diperhatikan dalam proses fiksasi adalah bidang yang mengandung bakteri dijaga agar tidak terkena api dari lampu Bunsen. Bakteri

Escherichia

coli

mempunyai

sifat

fakultatif

anaerob,

kemoorganotropik, mempunyai tipe metabolisme fermentasi dan respirasi tumbuh dengan baik pada suhu optimum 37°C. Escherichia coli bersal adri filum Protobacteria, kelas Gamma Protobacteria, ordo Enterobacteriaceae, genus Escherichia, dan spesies Escherichia coli. Secara morfologi Escherichia coli berbentuk batang pendek, gemuk, berukuran 2,4

 x 0,4 , merupakan gram

negative, tidak bersimpal, bergerak aktif dan tidak berspora. Selain itu, pada pengamatan juga menggunakan bakteri Bacillus cereus yang merupakan bakteri patogen yang bersifat gram positif. Ciri-ciri morfologinya yaitu, berbentuk batang (basil) besar, anaerobik, membentuk rantai, bergerak, membentuk spora yang terletak di tengah basil yang tidak bergerak dan tahan terhadap panas. Diameter selnya yaitu 0,7 berdiameter 0,6

 - 0,8  dengan panjang 2  - 3  dan sporanya

 - 0,9  dengan panjang 1  - 1,5  dapat pula bersifat

kemoorganotropik. Baketri Escherichia coli dan Bacillus cereus merupakan bakteri yang bersifat pathogen karena dapat menyebabkan penyakit.

90

Bakteri gram positif akan berwarna ungu karena bakteri ini akan mengikat kuat zat warna Kristal violet sewaktu pewarnaan gram yang diamati menggunakan mikroskop. Sedangkan bakteri gram negatif adalah bakteri yang tidak mempertahankan warna ungu Kristal violet sewaktu pewarnaaan gram sehingga akan berwarna merah apabila diamati pada mikroskop. Hasil gram positif dan gram negatif ini disebabkan oleh perbedaan kandungan dinding sel bakteri yaitu pada bakteri gram positif memiliki dinding sel pada lapisan peptidoglikan lebih tebal dibandingkan bakteri gram negatif. Bakteri gram positif lebih peka terhadap iodium sedangkan bakteri gram negatif kurang peka terhadap iodium. Metabolisme gram positif adalah kemoorganoheterotrof sedangkan bakteri gram negatif fototrof, kemolitouatotrof atau kemoorganoheterotrof. Praktikum kali ini adalah pengacatan dan morfologi bakteri. Adapun biakan yang digunakan anatara lain, Bacillus cereus dan Escherichia coli. Berdasarkan hasil pengamatan, diperoleh warna ungu pada akhir pengecatan untuk bakteri Bacillus cereus, berbentuk batang dan merupakan bakteri gram positif karena memiliki warna ungu. Perbesaran yang digunakan pada kelompok 11, 12 dan 13 yaitu dengan perbesaran 40 x 0,65 sehingga didapatkan bakteri Bacillus cereus yang merupakan bakteri gram positif, berbentuk batang, dan berwarna ungu. Hal ini sesuai dengan pendapat Jimmo (2012) yang menyatakan bahwa Bacillus cereus merupakan bakteri patogen yang bersifat gram positif dengan cirri-ciri berbentuk batang, anaerobik, dan membentuk rantai. Pada pengamatan Escherichia coli yang dilakukan oleh kelompok 14 dan 15 dengan perbesaran 10x dan 100x didapatkan hasil yang sama yaitu merupakan bakteri gram negatif, berbentuk batang, dan berwarna merah. Hasil ini sesuia dengan pendapat Soetedjo (2001) bahwa bakteri Escherichia coli merupakan bakteri gram negatif yang bersifat paotgen dengan cirri-ciri berbentuk batang bersifat fakultatif, kemoorganotropik, pendek gemuk dan tidak berspora. Sehingga tidak terdapat perbedaan antara hasil praktikum dan literatur yang didapatkan baik bakteri Bacillus cereus maupun Escherichia coli. Faktor-faktor yang mempengaruhi pengecatan bakteri antara lain, fiksasi, pelunturan cat warna, substrat, intensifikasi pewarnaan dan penggunaan zat

91

penutup. Fiksasi berguna untuk melekatkan sel bakteri pada gelas benda, membunuh bakteri, melepaskan granula protein, mencegah otolisis sel, mengubah afinitas cat. Pelunturan zat warna digunakan untuk menghasilkan kontras yang lebih baik pada bayangan mikroskop. Substrat merupakan zat warna asam atau basa yang dapat bereaksi dengan senyawa-senyawa tertentu. Intensifikasi warna dengan penambahan larutan mordan yaitu, zat kimia yang dapat menyebabkan selsel bakteri dapat diwarnai lebih intensif karena zat warna terikat lebih kuat pada jaringan sel. Zat warna penutup barguna untuk memberikan warna pada sel-sel yang berbeda warnanya dengan zat warna mula-mula. Zat warna ini diberikan pada akhir pewarnaan bertujuan untuk memberikan kontras pada sel-sel yang tidak dapat menyerap zat warna utama.

92

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan maka dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut : 1.

Pengecatan gram adalah pengecatan yang dilakukan dengan tujuan untuk membedakan spesies bakteri menjadi gam positif atau negatif

2.

Bacillus cereus termasuk golongan bakteri Gram positif karena tampak warna biru atau ungu dibawah mikroskop.

3.

Escherichia coli termasuk dalam golongan bakteri Gram negatif karena warna merah dibawah mikroskop.

4.

Perbedaan dari gram positif dan negatif terletak pada dinding sel diantara keduanya dimana dinding sel bakteri Gram negatif pada umumnya lebih tipis daripada yang dimiliki oleh bakteri Gram positif

5.

Faktor-faktor yang mempengaruhi pengecatan adalah fiksasi, intensifikasi pengecatan, peluntur cat, dan cat penutup.

93

ACARA VII MORFOLOGI JAMUR BENANG

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Jamur merupakan kelompok organisme eukariotik yang membentuk dunia jamur atau regnum fungi. Jamur pada umumnya multiseluler (bersel banyak). Ciri-ciri jamur berbeda dengan organisme lainnya dalam hal cara makan, struktur tubuh, pertumbuhan, dan reproduksinya. Tubuh jamur tersusun dari komponen dasar

yang

disebut

hifa.Hifa

membentuk

jaringan

yang

disebut

miselium.Miselium menyusun jalinan-jalinan semu menjadi tubuh buah.Hifa adalah struktur menyerupai benang yang tersusun dari dinding berbentuk pipa (Bambang, 2006). Kebanyakan hifa dibatasi oleh dinding melintang atau septa. Septa mempunyai pori besar yang cukup untuk dilewati ribosom, mitokondria, dan kadangkala inti sel yang mengalir dari sel ke sel. Terdapat pula hifa yang tidak bersepta atauhifasenositik. Struktur hifa senositik dihasilkan oleh pembelahan inti sel berkali-kali yang tidak diikuti dengan pembelahan sitoplasma.Hifa pada jamur yang bersifat parasit biasanya mengalami modifikasi menjadi haustoria yang merupakan organ penyerap makanan dari substrat; haustoria dapat menembus jaringan substrat. Semua jenis jamur bersifat heterotroph(Winda, 2009) Jamur benang merupakan jamur yang dapat membentuk miselium dan berbagai bentuk spora.Jamur benang adalah golongan fungi yang membentuk jaringan miselium dan spora yang tampak tetapi tidak dapat membentuk badan buah yang mikroskopis. Jamur dapat berkembang biak dengan dua cara yaitu seksual dan aseksual. Berdasarkan spora seksualnya sebagai contoh yaitu Ascomycetes yang membentuk spora dalam struktur tertentu yang disebut askus.Sedangkan berdasarkan spora aseksualnya adalah Basidiomycetes yang membentuk seksua dalam basidium.Morfologi dan penataan spora aseksual berperan dalam identifikasi jamur.Oleh karena itu, praktikum ini penting

94

dilakukan untuk mengetahui morfologi jenis jamur benang satu dengan yang lainnya.

Tujuan praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui morfologi beberapa jamur benang secara mikroskopis dan membedakan jenis jamur benang satu dengan lainnya.

95

TINJAUAN PUSTAKA

Jamur adalah sekompok mikroorganisme yang tergabung dalam takson kingdom fungi, berdasarkan system whittaker Kingdom fungi memiliki cirri yang khas yaitu bersifat heterotrop yang mengabsorbsi nutrient dan memiliki kitin pada dinding selnya. Jamur dapat bersifat saprotrof dengan mendapatkan nutrisi dari organisme

hidup

atau

dengan

bersimbiosis

mutualisme

dengan

satu

organisme.Produksi kitin, sejenis polisakarida adalah Synapormorphy (sifat yang serupa) antara fungi, hewan dan chearaflagellata.Hal ini menjadi bukti bahwa secara evolusioner, fungi lebih dakat ke hewan dibandingkan tumbuhan.Kingdom fungi

dapat

dibagi

menjadi

empat

yaitu

Chyhydiomycota, Zygomycota,

Ascomycota dan Basidiomycota. Masing-masing memiliki anggota baik uniseluler maupun multiseluler (Waluyo, 2007) Jamur tersusun dari benang-benang sel yang panjang dihubungkan bersama dari ujung ke ujung.Benang-benang tersebut disebut sebagai hifa.Banyak jamur mempunyai dinding penyekat atau septadalam hifa, sehingga terdapat banyak sel yang memiliki nukleus masing-masing.Susunan semacam ini disebut sebagai hifa bersepta.Beberapa kelas fungi mempunyai hifa tidak bersepta yang terlihat sebagai satu sel panjang yang mengandung banyak nukleus. Hifa semacam ini disebut hifa senosit (Sumanti, 2008). Secara alamiah jamur dapat berkembangbiak dengan dua cara yaitu seksual dan aseksual. Perkembangbiakan jamur secara seksual dilakukan dengan peleburan inti sel (nukleus). Secara aseksual dilakukan dengan pembelahan yaitu dengan cara membagi diri untuk membentuk dua sel anak yang serupa, penguncupan yaitu dengan cara sel anak yang tumbuh dari penonjolan kecil pada sel inang atau pembentukan spora. Spora aseksual ini berfungsi untuk menyebarkan spesiesnya dalam jumlah yang besar dengan melalui perantara angin atau

air.Spora

aseksual

dibagi

menjadi

koniospora

dan

sporangiospora.Konidiospora adalah konidium yang terbentuk diujung atau disisi hifa.Konidium yang berukuran kecil dan bersel satu disebut mikrokonidium, sebaliknya konidium yang berukuran besar dan bersel banyak disebut

96

makrokonidium. Sporangiospora merupakan spora bersel satu yang terbentuk dalam kantung yang disebut sporangium pada ujung hifa (Subandi, 2009). Fungi berperan penting dalam kehidupan manusia seperti dibidang pertanian dan dibidang farmasi. Dibidang farmasi jamur endofit yang umum digunakan dalam menghasilkan antibiotik pensilin yaitu jenis jamur penicillium. Dibidang pertanian jamur endofit gibberela fujikurol yang berasosiasi dengan tanaman padi sebagai penghasil giberelin menyebabakan ukuran tumbuhan padi menjadi lebih tinggi dari tumbuhan normal. Zat pengatur tumbuh giberelin oleh jamur endofit dapat di perbanyak secara massal. Jamur endofit merupakan jamur yang hidupnya berada dalam jaringan tumbuhan hidup dan biasannya tidak merugikan inangnya (Hafsari, 2013). Jamur merupakan mikroorganisme utama yang berperan penting dalam proses pembuatan roti. Beberapa jenis jamur yang sering ditemukan pada proses pembusukan roti adalah Rhizopus Stlonifer,penicillium sp.,Mucor sp. dan lainnya. Aspergillusmerupakan organisme eukariot, saat ini diakui sebagai salah satu diantara beberapa mahluk hidup yang memiliki daerah penyebaran paling luas serta berlimpah di alam, selain itu jenis kapang ini juga merupakan kotaminan umum pada berbagai substarat di daerah tropis maupun subtropis oleh karena itu, kemungkinan besar banyak jenis Aspergillus juga dapat hidup pada roti tawar (Mizana, 2016).

.

97


Waktu dan Plaksanaan Praktikum

Praktikum ini dilaksanakan pada hari Senin, 13 November 2017 di laboratorium Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram. Alat dan Bahan Praktikum

a. Alat-alat praktikum Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum antara lain gelas benda, kaca penutup, mikroskop cahaya, lampu Bunsen, cawan petri, botol semprot, pipet tetes, jarum preparat dan tissu. b. Bahan-bahan praktikum Adapun bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum antara lain roti, aquades,

alkohol,jamur

roti

warna

orange( Penicillium

sp.),

jamur

tempe(Rhizopus sp.), jamur warna hitam( Aspergillus sp.), jamur roti warna putih( Mucor sp.)

Prosedur Kerja

Jamur

Jarum enten

Diletakkan pada gelas benda

Pipet tetes

Diteteskan


Mikroskop

Diamati morfologi jamur benang

98

HASIL PENGAMATAN

Tabel 7.1. Hasil Pengamatan Morfologi Jamur Benang No. Biakan Gambar 1

Warna : putih Nama Biakan : Mucor sp.

1.sporangfor 2.sporangiospora 3.sporangium

1.sporangium 2.sporangiospora 3.sporangiofor

Perbesaran:40x sumber:www.studydroi d.com

Warna : oranye Nama Biakan : Neurospora sp.

1.sporangiofor 2.sporangiosfora 3.sporangium

Perbesaran:40x /0,65

5


Warna : hijau Nama Biakan : Rhizopus Stolonifer Perbesaran:40x /0,65

4


Warna : hitam Nama Biakan : Aspergillus sp.

Perbesaran:40x /0,65

3

Keterangan 1.sporangium 2.sporangiospora 3.sporangiofor

Perbesaran:40x /0,65 2

Literatur

Warna : putih Nama Biakan : Rhizopus Oligospora Perbesaran:40x /0,65


Perbesaran:100x sumber:www. studydroi d.com

1.sporangium 2.sporangiospora 3.kolumela 4.stolon 5.rhizoid

99

PEMBAHASAN

Jamur adalah organisme yang sel-selnya berinti sejati atau eukariotik, berbentuk

benang,

bercabang-cabang,

tidak

berklorofil,

dinding

selnya

mengandung kitin atau selulosa atau keduanya, heterotrof, absortif dan sebagian besar tubuhnya terdiri dari bagian vegetatif berupa hifa dan generatif yaitu spora. Tubuh jamur tersusun dari komponen dasar yang disebut hifa.Hifa membentuk jaringan yang disebut miselium.Miselium menyusun jalinan-jalinan semu menjadi tubuh buah.Hifa adalah struktur menyerupai benang yang tersusun dari dinding berbentuk pipa.Dinding ini menyelubungi membran plasma dan sitoplasma hifa.Sitoplasmanya mengandung organel eukariotik.Banyak jamur mempunyai dinding penyekat (septa) dalam hifa menjadi banyak sel dengan nukleus masingmasing.Susunan macam ini disebut sebagai hifa bersepta.Dalam beberapa kelas fungi hifa tidak mempunyai septa jadi kelihatan sebagai satu sel panjang yang mengandung banyak nukleus. Badan vegetatif jamur yang tersusun dari filament-filamen disebut thallus.Berdasarkan fungsinya dibedakan dua macam hifa, yaitu hifa fertil dan hifa vegetatif.Hifa fertil adalah hifa yang dapat membentuk sel-sel reproduksi atau spora-spora.Apabila hifa tersebut arah pertumbuhannya keluar dari media disebut hifa udara.Hifa vegetatif adalah hifa yang berfungsi untuk menyerap makanan dari substrat. Secara ilmiah, jamur dapat berkembang biak dengan dua cara, yaitu secara aseksual dan seksual. Perkembangbiakan jamur secara seksual dilakukan dengan peleburan inti sel/nukleus. Secara aseksual dilakukan dengan pembelahan, yaitu dengan cara sel membagi diri untuk membentuk dua sel anak yang serupa, penguncupan, yaitu dengan cara sel anak yang tumbuh dari penonjolan kecil pada sel inangnya atau pembentukan spora. Spora aseksual ini berfungsi untuk menyebarkan spesiesnya dalam jumlah yang besar dengan melalui perantara angin atau air. Pengamatan morfologi jamur benang sangat penting untuk keperluan identifikasi dan determinasi. Tahap awal pengamatan morfologi lebih penting daripada pengamatan fisiologi. Pengamatan fisiologi perlu dilakukan untuk

100

membantu identifikasi dan determinasi jamur benang sampai dengan spesies atau strain. Pengamatan morfologi jamur dilakukan dengan melihat di bawah mikroskop, jamur yang diambil dari biakan murni. Biakan murni adalah biakan yang mengandung hanya satu jenis jamur, tanpa kontaminan. Dalam pengamatan morfologi jamur, hal-hal yang perlu diperhatikan yaitu hifa, bersepta atau tidak, transparan atau keruh, berwarna atau tidak, jika berwarna ditentukan warnanya. Spora seksual, oospora, askospora, basidiospora atau bentuk lain. Spora aseksual, sporangiospora, artrospora, konidiospora atau bentuk yang lain, ditenytukan pula bentuk, warna, ukuran dan sebagainya. Badan buah, sporangium atau bentuk yang lain, untuk sporangium ditentukan oleh bentuk, ukuran dan letaknya, untuk menghasilkan konidia ditentukan oleh tipe, asal, ukuran dan letak sterigmata, konidia tunggal, berantai dan sebagainya. Dasar badan buah, berupa kolumela, vesikula, ditentukan pula bentuk, warna, ukuran dan sebagainya. Tangkai (mendukung badan buah), sporangiofor, konidiofor tunggal atau dalam bentuk berkas, bercabang. Adanya bentuk-bentuk khusus seperti stolon, rhizoid, sel kaki, apofisa, klamidospora, sclerosis dan sebagainya. Jamur roti masuk ke dalam devisi Ascomycota, memiliki cirri-ciri tubuhnya multiseluler dan terdiri atas hifa tidak bersekat, berwarna keabu-abuan. Jamur roti masuk ke dalam kelas Eurotimycetes. Sampel yang digunakan dalam praktikum ini terdiri dari lima jenis diantaranya adalah jamur roti warna hitam, putih , hijau, orange dan jamur tempe. Jamur roti yang berwarna putih tersebut adalah Mucor Sp., warna hitam adalah Aspergillus Sp., warna hijau adalah Rhizopus Stolonifer , warna orange adalah Penicillium S p. dan jamur tempe adalah Rhizopus Sp.. Aspergillus adalah suatu jenis jamur yang termasuk dalam kelas Ascomycetes yang dapat ditemukan dimana-mana di alam. Ia tumbuh sebagai saprofit pada tumbuh-tumbuhan yang membusuk dan terdapat pula pada tanah, debu organik, makanan dan merupakan kontaminan yang lazim di temukan di rumah sakit maupun laboratorium. Aspergillus adalah jamur yang membentu filamen-filamen panjang bercabang dan dalam media biakan membentuk miselia dan konidiospora. Aspergillus berkembang biak dengan pembentukan hifa atau

101

tunas dan menghasilkan konidiofora pembentuk spora. Cirri-ciri Aspergillus yaitu mempunyai hifa bersepta dan miselium bercabang, sedangkan hifa yang muncul di atas permukaan merupakan hifa fertil, koloninya berkelompok, konidiofora berseptat atau nonseptat yang muncul dari sel kaki, pada ujung hifa muncul sebuah gelembung, keluar dari gelembung ini muncul sterigma, pada sterigma muncul konidium-konidium yang tersusun berurutan mirip bentuk untaian mutiara, koidium-konidium ini berwarna (hitam, coklat, kuning tua, hijau) yang memberi warna tertentu pada jamur. Rhizopus adalah genus jamur benang yang termasuk filum Zygomicotza, ordo Mucorales. Rhizopus sp mempunyai cirri khas yaitu memiliki hifa yang membentuk rhizoid untuk menempel ke substrat. Cirri lainnya adalah memiliki hifa soenositik, sehingga tidak bersepta atau bersekat. Fusarium adalah salah satu genus cendawan berfilamen yang banyak ditemukan pada tanaman dan tanah. Golongan Fusarium dicirikan dengan struktur tubuh berupa miselium bercabang, hialin, dan bersekat (septa) engan diameter 2-4 μm. reproduksi jamur ini menggunakan mikrokonidia yang terletak pada konidiospora yang tidak bercabang dan makrokonidia yang terletak pada konidiospora bercabang dan tak bercabang. Makrokonidia dibentuk dari fialid, memiliki struktur halus serta bentuk silindris, dan terdiri atas dua atau lebih sel yang memiliki dinding sel tebal. Sedangkan mikrokonidia yang dihasilkan umumnya terdiri dari 1-3 sel, berbentu bulat atau silinder, dan tersusun menjadi rantai atau gumpalan. Berdasarkan pada hasil pengamatan jamur roti berwarna hijau yang merupakan

jamur Rhizopus

stolonifer ,

tampak

bagian

sporangium

dan

sporangiospora yang tampak berwarna kecoklatan. Hal tersebut sesuia dengan literature menurut Subandi (2009), Rhyzopus stolonifer memiliki koloni berwarna putih namun lama kelamaan akan menjadi keabuan atau coklat, membentuk koloni seperti kapas dan memproduksi sporangia dalam jumlah besar, dan hifa panjang serta tidak bersekat. Hasil pengamatan jamur roti berwarna hitam yaitu Aspergillus sp. Menunjukkan pertumbuhan jamur yang tampak berwarna hitam serta tampak bagian konidia.

102

Berdasarkan hasil pengamatan jamur roti berwarna putih yaitu jamur Mucor sp. Tampak bagian konidia dan mikrokonidia yang berwarna putih kebiruan.Hasil pengamatan jamur roti berwarna orange yaitu jamur Penicellium sp. Tampak bagian konidia dan konidiofor. Kemudian hasil pengamatan jamur tempe yaitu Rhizopus oryzae tampak bagian yaitu sporangium, sporangiospora, dan sprangiofor. Hasil pengamatan telah sesuai dengan lietratur menurut Nazaruddin (2016) jamur Mucor sp. Berwarna putih sampai kuning, hifa tidak bersepta, dan stolon tidak menghasilkan rhizoid seperti akar dengan bagian-bagian seperti sporangium, sporangiospora, kolumela, sporangiofor dan stolon.Hasil pengamatan morfologi jamur benang yang tumbuh pada roti mempunyai bentuk yang berbeda-beda karena jamur yang tumbuh pada roti tidak hanya satu jenis, ada beberapa jenis jamur diantaranya Aspergillus sp, penicillium dan rhizopus. Faktor yang mempengaruhi pertumbuhan jamur pada umumnya berupa faktor substrat, kelembaban, suhu, derajat keasaman substrat (pH) dan senyawasenyawa kimia dilingkungannya.Substrat merupakan sumber nutrien utama bagi jamur.Nutrien-nutrien baru dapat dimanfaatkan sesudah jamur mengekskresi enzim-enzim ekstraseluler yang dapat mengurai senyawa-senyawa kompleks dari substrat tersebut menjadi senyawa-senyawa yang lebih sederhana.Kelembaban sangat penting untuk pertumbuhan jamur. Pada umumnya jamur seperti Rhizopus atau Mucor memerlukan lingkungan dengan kelembaban nisbi 90%, sedangkan Aspergillus, Penicillium, Fusarium, banyak Hyphomycetes lainnya dapat hidup pada kelembaban nisbi yang lebih rendah, yaitu 80%. Suhu yang baik untuk pertumbuhan jamur dapat dikelompokkan menjadi tiga yaitu, psikrofil, mesofil dan termofil.Secara umum pertumbuhan untuk kebanyakan fungi adalah sekitar 25-30°C. Derajat keasaman (pH), umumnya jamur menyenangi pH dibawah 7,0. Namun beberapa jenis jamur tertentu bahkan dapat tumbuh pada pH yang cukup rendah, yaitu pH 4,5-5,5. Senyawa kimia, selama pertumbuhannya jamur menghasilkan senyawa-senyawa yang tidak diperlukannya lagi dan dikeluarkan ke lingkungan. Senyawa-senyawa tersebut merupakan suatu pengamanan bagi dirinya terhadap serangan oleh organisme lain termasuk terhadap sesama mikroorganisme.

103

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengamatan dari pembahasan maka dapat ditarik beberapa kesimpulan sebagai berikut : 1.

Jamur benang adalah jamur-jamur berbentuk benang, multiseluler, tidak berklorofil, selnya tidak mengalami differensiasi dalam jaingan dan hampir semuanya hidup sebagai sebagai parasit

2.

Tubuh jamur terdiri dari komponen dasar yang disebut hifa membentuk jaringan miselium yang akan menyusun jalinin-jalinan semu menjadi tubuh buah.

3.

Bentuk spora jamur benang dibedakan berdasarkan reproduksi seksual dan reproduksi aseksualnya

4.

Morfologi jamur benang penting dilakukan untuk dapat mengidentifikasi dan mendeterminasi bentuk-bentuk dan bagian yang mencakupnya

5.

Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan jamur adalah faktor substrat, kelembaban, suhu, pH substrat, dan senyawa-senyawa kimia di lingkungannya.

104

ACARA VIII MORFOLOGI KHAMIR DAN SPORA KHAMIR

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Khamir merupakan fungi uniseluler (bersel tunggal) yang mikroskopis dan tidak membentuk percabangan permanen. Sebagian besar khamir termasuk dalam kelas Ascomycetes sebagian kecil termasuk dalam kelas Basidiomycetes dan fungi imperfeksi. Berdasarkan kemampuannya membentu spora, khamir dibagi menjadi dua kelompok, yaitu khamir yang mampu membentuk spora, dan disebut sporogenous yeast dan khamir yang tidak membentuk spora disebut asporogenous yeast. Khamir sporogenous termasuk daalam famii Endomycetaceae sedangkan untuk khamir asporogenous termasuk fungi imperfeksi. Bentuk dan ukuran selnya bervariasi tergantung pada jenisnya. Pada umumnya sel khamir berbentuk oval, silinder, bulat dan batang. Khamir tidak dapat bergerak aktif karena tidak mempunyai flagela (Nazaruddin, 2016). Morfologi khamir dan spora khamir sangat penting untuk dipelajari, hal ini karena setiap spesies khamir memiliki ciri morfologinya sendiri dan setiap bentuk khamir juga menentukan jenis khamir tersebut. Adapun morfologi-morfologi yang biasanya diperhatikan pada khamir adalah bentuk dan ukuran sel khamirnya, pengamatan morfologi juga dilakukan terhadap spora khamirnya. Pengamatan morfologi pada sel khamir meliputi ukuran dan bentuk spora khamir, jumlah spora khamir, bagaimana perbesarannya dan sebagainya. Masing-masing morfologi atau sifat fisik yang terdapat pada khamir menentukan klasifikasi khamir ters ebut. Khamir dapat lebih bertahan dalam keadaan alam sekitar yang tidak menguntungkan dibandingkan dengan jasad renik lainnya. Khamir dapat tumbuh dalam suatu substrat atau medium berisikan kosentrasi gula yang dapat menghambat pertumbuhan kebanyakan bakteri. Khamir bersifat fakultatif, artinya mereka dapat hidup dalam keadaan aerobik maupun anaerobik. Khamir dapat berkembang biak secara aseksual dan seksual. Khamir sering tidak terlihat karena

105

tidak kontras dengan medium dimana mereka hidup. Oleh karena itu, dilakukannya praktikum ini untuk mengenal bermacam-macam sel khamir dan membedakan sel yang mati dan yang hidup dan menghitung persentase kematian khamir.

Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dari praktikum kali ini adalah untuk mengenal bermacammacam sel khamir dan membedakan sel yang mati dan yang hidup dan menghitung persentase kematian khamir.

106

TINJAUAN PUSTAKA

Khamir adaah salah satu mikroorganisme yang termasuk dalam golongan fungsi yang dibedakan bentuknya dari mould (kapang) karena berbentuk uniseluler. Reproduksi vegetatif pada khamir terutama dengan cara pertunasan. Sebagai sel tunggal khamir tumbuh dan berkembang biak lebih cepat dibanding dengan mould yang tumbuh dengan pembentukan filamen. Khamir sangat mudah dibedakan dengan mikroorganisme yang lain misalnya dengan bakteri, khamir mempunyai ukuran sel yang lebih besar dan morfologi yang berbeda, sedangkan dengan protozoa, khamir mempunyai dinding sel yang lebih kuat serta tidak melakukan fotosintesis bila dibandingkan dengan ganggang atau algae. Dibandingkan dengan kapang dalam pemecahan bahan komponen kimia khamir lebih efektif memecahnya dan lebih luas permukaan serta volume hasilnya lebih banyak (Hasanah, 2009). Khamir tersebut dapat dibedakan atas dua kelompok berdasarkan sifat metabolismenya yaitu bersifat fermentatif dan oksidatif. Jenis fermentatif dapat melakukan fermentasi alkohol yaitu memecah gula (glukosa) menjadi alkohol dan gas contohnya pada produk roti. Sedangkan oksidatif (respirasi) maka akan menghasilkan CO2 dan H2O. Keduanya bagi yeast adalah dipergunakan untuk energi walaupun energi yang dihasilkan melalui respirasi lebih tinggi dari yang melalui fermentasi. Dibandingkan dengan bakteri, yeast dapat tumbuh dalam larutan yang pekat misalnya larutan gula atau garam lebih juga menyukai suasana asam dan lebih bersifat menyukai adanya oksigen. Yeast juga tidak mati oleh adanya antibiotik dan beberapa yeast mempunyai sif at antimikroba sehingga dapat menghambat pertumbuhan bakteri dan mould. Adanya sifat-sifat yang tahan pada lingkungan yang stress (garam, asam dan gula) maka dalam persaingannya denganmikroba lain yeast lebih bisa hidup normal (Natsir, 2007). Isolasi khamir yang mampu menggunakan sumber karbon non karbohidrat seperti alkana, alkana bercabang, senyawa aromatik dan alkana siklik adalah hal penting karena senyawa-senyawa tersebut banyak menjadi kontaminan di lingkungan. Khamir dapat ditemukan diberbagai tempat di dunia. Saat ini lebih

107

dari 700 spesies telah diklasifikasikan dalam 100 genus. Namun demikian,itu hanya sebagian kecil dari biodiversitas. Diduga ada sekitar 62.000 genus dan 669.000 spesies khamir. Khamir tidak mampu berpindah tempat dan tergantung dari vektor-vektor seperti angin, serangga ataupun manusia (Hidayat, 2007). Saccharomycess cerevisiae merupakan khamir sejati tergolong Eukariot yang secara morfologi hanya membentuk blastospora berbentuk bulat lonjong, silindris, oval atau bulat telur yang dipengaruhi oleh strainnya. Dapat berkembang biak dengan membelah diri melalui budding cell. Reproduksinya dapat dipengaruhi oleh keadaan lingkungan serta jumlah nutrisi yang tersedia bagi pertumbuhan sel.Penampilan makroskopik mempunyai koloni berbentuk bulat, warna kuning muda, permukaan berkilau, licin, tekstur lunak dan memiliki sel bulat dengan askospora 1-8 buah (Ahmad, 2013). Pengamatan sel khamir dapat dilakukan dengan cara pengecatan sederhana, yaitu pemberian warna pada khamir dengan menggunakan larutan tunggal suatu warna suatu warna pada lapisan tipis atau olesan yang sudah difiksasi. Pewarnaan sederhana, yaitu pewarnaan menggunakan satu macam zat warna dengan tujuan hanya untuk melihat bentuk sel khamir dan untuk mengetahui morfologi dan susunan selnya serta membedakan sel yang mati dan sel yang hidup (Balley, 2007).

108



Praktikum ini dilaksanakan pada hari Senin, 20 november 2017 di Laboratorium Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram.


a. Alat-alat Praktikum Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah cawan petri, pipet tetes, mikroskop cahaya, lampu bunsen, tissue, jarum ose, gelas benda dan gelas penutup. b. Bahan-bahan Praktikum Adapun bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah aquades, Lactose broth, alkohol, dan biakan Saccharomyces cerevisiceae berumur 24 jam dan larutan methylene blue. Prosedur Kerja

Alkohol

Disiapkan alat dan bahan

Dibersihkan gelas benda

1 tetes Methylene Blue

jarum ose

Diatas gelas benda

Diambil biakan murni

109

Diletakkan di gelas benda


Diamati dibawah mikroskop

110

HASIL PENGAMATAN

Tabel 8.1 Hasil Pengamatan Morfologi Khamir Pada Medium Air Mineral Kel. Media Gambar Literatur Keterangan 1

Air mineral

1. Sel khamir mati 2. Sel khamir hidup Ʃ mati = 52 Ʃ hidup = 5 % kematian Perbesaran: 40x/0.65nm

2

= 91,2 % 1. Sel khamir mati 2. Sel khamir hidup Ʃmati = 157 Ʃhidup = 6 % kematian

Air mineral

Perbesaran: 40x/0.65nm

3

ℎ 100 ℎℎ  ℎ  =  100%  =96,3 % 1. Sel khamir mati 2. Sel khamir hidup Sumber: Ʃmati = 10 www.mikrobio.net Ʃhidup = 32 Perbesaran: % kematian 40x/0.65nm

Air mineral

Perbesaran: 40x/0.65nm 4

jumlah mati x100% jumlah hidup  jumlah mati  =  100% 

ℎ  100 ℎℎ  ℎ  =  100%  =96,3 % 1. Sel khamir mati 2. Sel khamir hidup Ʃmati = 123 Ʃhidup = 0 % kematian

Air mineral


ℎ 100 ℎℎ  ℎ  =  100%  =100%

111

5

Air mineral

1. Sel khamir mati 2. Sel khamir hidup Ʃmati = 527 Ʃhidup = 3 % kematian

ℎ 100 ℎℎ  ℎ  =  100% 


=99,4 % Tabel 8.2 Hasil Pengamatan Morfologi Khamir Pada Media Lactose Browth Kel. Media Gambar Literatur Keterangan 11 Lactose 1. Sel khamir mati broth 2. Sel khamir hidup Ʃmati = 35 Ʃhidup = 98 % kematian

ℎ 100 ℎℎ  ℎ  =  100% 


=26,31 % 1. Sel khamir mati 2. Sel khamir hidup Ʃmati = 46 Ʃhidup = 14 % kematian

12 Lactose broth


13 Lactose broth

Sumber: www.generasi biologi.com Perbesaran: 40x/0.65nm

ℎ 100 ℎℎ  ℎ  =  100%  =76,67 % 1. Sel khamir mati 2. Sel khamir hidup Ʃmati = 95 Ʃhidup = 37 % kematian


ℎ 100 ℎℎ  ℎ  =  100%  =28,24 %

112

14 Lactose broth

1. Sel khamir mati 2. Sel khamir hidup Ʃmati = 105 Ʃhidup = 34 % kematian Perbesaran: 40x/0.65nm

ℎ 100 ℎℎ ℎℎ  ℎ ℎ  =  100% 

=75,34 % 15 Lactose broth

1. Sel khamir mati 2. Sel khamir hidup Ʃmati = 347 Ʃhidup = 144 % kematian Perbesaran: 40x/0.65nm

ℎ 100 ℎℎ ℎℎ  ℎ ℎ  =  100% 

=70,67 %

113

PEMBAHASAN

Khamir merupakan salah satu mikroorganisme yang termasuk ke dalam fungi mikroskopis. Khamir terdapat sebagai sel bebas yang sederhana. Khamir yang ditemukan memiliki berbagai bentuk sepeti bulat, lonjong, tingular dan sebagainya. Khamir tidak bergerak karena tidak memiliki flagela. Khamir dapat tumbuh dalam medim cair dan padat dengan cara seperti bakteri, yaitu prmbrlahan sel. Jenis khamir yang paling sering digunakan oleh manusia adalah Saccharomycess cerevisiae (Natsir, cerevisiae (Natsir, 2003). Khamir hidup tersebar secara luas di alam, terutama pada bahan-bahan yang mengandung gula, tanah, kebun buah, dalam tubuh serangga, dan juga terdapat dalam getah pohon. Bentuk dan ukuran selnya bervariasi tergantung pada jenisnya. Perkembangan khamir terjadi dengan dua cara, yaitu secara seksual dan aseksual. Perkembangan secara aseksual berlangsung melalui pembentukan spora aseksual, tunas atau membelah diri. Bentuk dan ukuran spora aseksual sangat spesifik untuk masing-masing jenis khamir, sehingga dalam identifikasi khamir, bentuk dan jumlah spora merupakan salah satu penentu jenis khamir. Untuk keperluan identifikasi dan determinasi khamir, perlu diketahui sifat-sifat morfologi dan fisiologinya. Sifat-sifat morfologi yang penting diketahui meliputi bentuk-bentuk dan ukuran sel, bentuk ukuran dan jumlah spora, cara-cara perkembangbiakan, pembentukan pseudomselium, ordia, klamidospora, blastospora, giant colony, colony, dan sebagainya (Nazaruddin, 2016). Pengamatan

morfologi

khamir

menggunakan

jenis

khamir

Saccharomyces cerevisiceae, Saccharomyces cerevisiceae adalah mikroorganisme eukariotik dengan diameter 5-10 µm. Khamir jenis ini merupakan spesies dari ragi sel Saccharomyces cereviceae berbentuk bulat teratur dan memiliki satu inti sel tiap selnya (uniseluler). Khamir ini merupakan genus khamir/ragi yang memiliki kemampuan mengubah glukosa menjadi alkohol dan CO2.Pengamataan sel khamir dapat dilakukan dengan cara pengecatan sederhana, yaitu pemberian warna pada khamir dengan menggunakan larutan

114

tunggal satu warna pada lapisan tipis atau olesan yang sudah difiksasi. Pewarnaan sederhana, yaitu pewarnaaan menggunakan satu macam zat warna dengan tujuan hanya untuk melihat bentuk sel khamir untuk mengetahui morfologi dan susunan selnya serta membedakan sel yang mati dan sel yang hidup. Cat warna yang digunakan dalah methylene blue, blue, hasil pengamatan menunjukkan sel khamir yang mati tersebut sudah tidak berfungsi lagi sehingga sel khamir yang mati menyerap warna biru dari larutan methylene blue. blue. Sedangkan warna sel khamir hidup tidak berwarna atau transparan disebabkan karena sel membrannya masih memiliki sifat semi permiabel membran sehingga zat methylene blue tidak blue tidak dapat masuk. Saccharomyces cerevisiceae dapat tumbuh dalam media cair dan padat. Pembelahan sel terjadi secara aseksual dengan pembentukan tunas, suatu bahan proses yang merupakan sifat khas dari khamir. Mula-mula timbul suatu gelembung kecil dari permukaan sel induk. Gelembung ini secara bertahap membesar dan setelah mencapai ukuran yang sama dengan induknya terjadi pengerutan yang melepaskan tunas dari induknya. Sel yang baru terbentuk selanjutnya akan memasuki tahap pertunasan kembali. Tunas pada khamir ini dapat berkembang dari setiap bagian permukaan sel induk (pertunasan multipolar). Berdasarkan hasil pengamatan dari biakan yang berumur 24 jam dengan medium air mineral dan Lactose broth, broth, khamir yang terlihat memiliki bentuk bulat telur (elips). elips). Setelah khamir di cat dan diamati terdapat khamir yang mati dan hidup baik dengan menggunakan medium air mineral maupun Lactose broth. broth. Pada praktikum ini kelompok 1 sampai dengan 5 menggunakan medium air mineral. pada pengamatan yang pertama didapatkan jumlah sel hidupnya sebanyak 5, sedangkan sel mati sebanyak 52 sehingga didapatkan persentase kematiannya sebesar 91,2%. Pada pengamatan kedua didperoleh jumlah sel hidup 6, sedangkan sel mati sebanyak 57 sehingga didapatkan persantase kematiannya sebesar 96,3%. Pada pengamatan ketiga diperoleh jumlah sel hidup 22 sedangkan sel mati sebanyak 10 didapatkan persentase kematiannya sebesar 31,2%. Pengamatan yang keempat tidak ada satupun sel khamir yang

115

hidup

sedangkan sel mati sebanyak 123 sehingga didapatkan persentase

kematiannya sebesar 100%. Pada pengamatan terakhir menggunakan medium air mineral diperoleh jumlah sel hidup sebanyak 3 sedangkan jumlah sel mati sebanyak 527 sehingga didapatkan persentase kematiannya sebesar 99,4%. Unutk medium Lactose broth pada pengamatan pertama diperoleh sel hidup sebanyak 98 sedangkan sel mati sebanyak 35 sehingga didapatkan persentase kematiannya sebesar 26,31%. pada pengamatan kedua diperoleh sel hidup sebanyak 14 sedangkan sel mati sebanyak 46 sehingga didapatkan persentase kematiannya sebesar 76,67%. pada pengamatan ketiga diperoleh sel hidup sebanyak 37 sedangkan sel mati sebanyak 95 sehingga didapatkan persentase kematiannya sebesar 28,24%. pada pengamatan keempat diperoleh sel hidup sebanyak 34sedangkan sel mati sebanyak 105 sehingga didapatkan persentase kematiannya sebesar 75,54%. pada pengamatan terakhir diperoleh sel hidup sebanyak 144sedangkan sel mati sebanyak 347 sehingga didapatkan persentase kematiannya sebesar 70,67%. Data atau hasil pengamatan, diperoleh bahwa semakin lama sel di dalam methylene blue maka semakin banyak jumlah sel yang mati, selain itu mediumna juga mempengaruhi jumlah persentase kematian sel dimana sesuai hasil pengamatan diperoleh jumlah kematian yang lebih banyak pada medium air mineral daripada medium Lactose broth karena kandungan nutrisi air mineral lebih sedikit daripada kandungan nutrisi Lactose broth. dengan demikian maka persentase kematian semakin meningkat apabila ketersediaan nutrisinya sedikit. sesuai dengan literatur yang menurut (Waluyo, 2007) khamir yang hidup pada medium yang kaya akan nutrisi maka akan lebih lama hidup dibandingkan dengan khamir yang ditumbuhkan pada medium yang sedikit kandungan nutrisinya. semakin lama sel di dalam methylene blue maka semakin banyak jumlah sel yang mati. Berdasarkan kurva pertumbuhan mikroorganisme ada beberapa fase yang dilewati khamir diantaranya khamir yang tumbuh pada fase lag pertumbuhan khamir, grafik fase ini umumnya mendatar karena belum adanya sumber nutrien untuk makanan mikroba, pada fase pertumbuhan awal mikroba sudah melakukan logaritmik khamir yang

116

diinkubasi selama 24, 48 dan 72 jam mengalami penyesuaian diri dengan lingkungan baru, kemudian pada fase stasioner jumlah mikroba yang hidup dan mati sama, karena mikroba telah terkena racun dan nutrisi berkurang. Secara umum, pengamatan khamir biasanya menggunakan Methylene blue pada gelas benda untuk lebih memberikan kontras perbedaan antara sel yang hidup serta mati, selain untuk meningkatkan kontras khamir dalam gelas benda. Sel khamir dapat menyerap methylene blue karena sifat semi permiabel sudah tidak selektif lagi sehingga sel khamir menjadi warna biru yang menandakan sel khamir tersebut mati sedangkan sel khamir yang tidak menyerap methylene blue disebabkan karena semi permiabelnya masih bersifat selektif sehingga sel khamir tersebut berwarna transparan yang menandakan bahwa sel khamir tersebut masih hidup. Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan khamir adalah dengan nutrisi, pH, suhu lingkungan, oksigen, serta komponen penghambat. Nutrisi pada substrat harus lengkap dan mencakupi untuk pertumbuhan khamir. Saccharomyces cerevisiceae terutama suka terhadap gula, suhu yang optimum bagi khamir ini adalah 25-30 °C, sama seperti jamur benang, dan suhu maksimumnya 35-47 °C. Khamir dapat hidup pada lingkungan anaerob (tanpa oksigen) tetapi pertumbuhannya lambat. Pertumbuhan khamir dapat terjadi lebih cepat di lingkungan aerob (tersedia oksigen). Dan yang terakhir, khamir dapat tumbuh lebih baik apabila tidak ada komponen penghambat seperti mikroorganisme lain yang berebut nutrisi atau makanan yang sama.

117

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan, maka dapat disimpulkan sebagai berikut : 1.

Khamir merupakan fungi uniseluler, setiap sel memiliki satu inti sel.

2.

Saccharomyces cerevisiceae merupakan khamir yang dapat merubah glukosa menjadi alkohol dan CO 2.

3.

Sel khamir yang mati akan tampak berwarna biru dibawah mikroskop, sedangkan sel khamir yang masih hidup tidak berwarna (transparan).

4.

Khamir yang menggunakan medium air mineral memiliki jumlah kematian yang lebih tinggi dibandingkan dengan medium Lactose broth, hal ini disebabkan karena kandungan nutrisi pada Lactose broth lebih tinggi daripada air mineral.

5.

Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan khamir adalah kandungan nutrisi, pH, suhu lingkungan, oksigen serta komponen penghambat.

118

ACARA IX PENGARUH FAKTOR LINGKUNGAN TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Pertumbuhan merupakan proses bertambahnya ukuran atau substansi atau massa zat suatu organisme. Misalnya saat makhluk makro jika dikatakan tumbuh ketika bertambah tinggi, besar atau berat. Pada organisme bersel satu pertumbuhan lebih diartikan sebagai pertumbuhan kolon, yaitu pertambahan jumlah dan ukuran koloni yang semakin besar atau substansi atau massa mikroba tersebut semakin banyak. Pertumbuhan pada mikroba diartikan sebagai pertambahan jumlah sel mikroba itu sendiri (Hafsah, 2009). Pertumbuhan bakteri pada umumnya akan dipengaruhi oleh faktor lingkungan.

Pengaruh

faktor

ini

akan

memberikan

gambaran

yang

memperlihatkan peningkatan jumlah sel yang berbeda dan pada akhirnya memberikan gambaran pula terhadap kurva pertumbuhannya. Beberapa faktor lingkungan yaitu faktor abiotik yang dapat mempengaruhi pertumbuhan bakteri seperti suhu, kelembaban, pH, tekanan osmosa dan sinar gelombang pendek. Faktor biotik yang mencakup adanya asosiasi atau kehidupan bersama antara mikroba. Apabila faktor-faktor tersebut memenuhi syarat, sehingga optimum untuk pertumbuhan bakteri, maka bakteri dapat tumbuh dan berkembang biak. Faktor lingkungan sangat berpengaruh terhadap pertumbuhan mikroba dan aktivitasnya. Faktor lingkungan ini dapat mengakibatkan perubahan sifat morfologi dan fisiologi mikroba. Faktor lingkungan menjadi penting karena sebagai suatu usaha pengendalian aktivitas mikroba. Salah satu faktor yang mempengaruhi adalah suhu, kenaikan suhu sampai pada nilai batas tertentu dapat mempercepat

proses

metabolisme.

Tetapi

suhu

batas

maksimum

akan

menyebabkan denaturasi protein dan enzim. Oleh karena itu, perlu dilakukan

119

praktikum ini untuk dapat mengetahui pengaruh suhu terhadap pertumbuhan bakteri atau mikroba.

Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui pengaruh faktor suhu terhadap pertumbuhan mikroorganisme.

120

TINJAUAN PUSTAKA

Pertumbuhan adalah penambahan secara teratur semua komponen sel atau jasad. Pembelahan sel adalah hasil pertumbuhan sel pada jasad bersel tunggal, pembelahan sel merupakan pertumbuhan jumlah individu. Misalnya pembelahan sel pada bakteri akan menghasilkan pertumbuhan jumlah sel itu sendiri. Pada jasad bersel banyak atau multiseluler, pembelahan sel tidak menghasilkan pertumbuhan jumlah individu tetapi hanya merupakan pembentukan j aringan atau bertambah besar jasadnya. Dalam

membahas

pertumbuhan

mikroba

harus

dibedakan

antara

pertumbuhan masing-masing individu sel dan pertumbuhan kelompok sel atau populasi. Pertumbuhan bakteri umumnya dipengaruhi oleh faktor lingkungan yang akan memberikan gambaran pada kurva pertumbuhan (Darkuni, 2011). Kebutuhan mikroorganisme untuk pertumbuhan dapat dibedakan menjadi dua katagori, yaitu kebutuhan fisik dan kebutuhan kimiawi. Aspek-aspek fisik dapat mencakup suhu, pH, dan tekanan osmotik. Sedangkan kebutuhan kimiawi meliputi air, sumber karbon, nitrogen, oksigen, mineral-mineral, dan faktor penumbuh. Kondisi lingkungan juga dapat memicu pertumbuhan dan reproduksi bakteri. Faktor-faktor yang berpengaruh terhadap pertumbuhan dan reproduksinya yaitu suhu, kelembaban, dan cahaya (Jeneng, 2010). Salah satu faktor yang penting dalam pertumbuhan bakteri adalah nilai pH. Bakteri memerlukan suhu optimum (6,5-7,5) untuk tumbuh optimal. Nilai pH minimum dan maksimum untuk pertumbuhan kebanyakan spesies bakteri adalah 4 dan 9. Pengaruh pH terhadap pertumbuhan bakteri ini berkaitan dengan aktivitas enzim. Enzim ini dibutuhkan oleh beberapa bakteri untuk mengkatalis reaksireaksi yang berhubungan dengan pertumbuhan bakteri. Apabila pH dalam suatu medium atau lingkungan tidak optimal maka akan mengganggu kerja enzimenzim tersebut dan akhirnya mengganggu pertumbuhan bakteri itu sendiri (Suriani, 2013). Pertumbuhan bakteri juga dapat dipengaruhi oleh suhu atau temperatur. Mikroba memiliki batas toleransi masing-masing terhadap suhu. Efek dari suhu

121

yang ekstrim pada mikroba adalah enzim menjadi inaktif dan kemugkinan hal yang sama terjadi pada beberapa struktur sel lainnya. Pada kondisi optimumnya mikroba akan memiliki produktivitas yang optimal. Ada 3 jenis mikroba berdasarkan kisaran suhunya yaitu psikofilik dengan suhu minimum 0-5 °C dan maksimum 15 – 20 oC , mikroba mesofilik dengan suhu minimum 10 – 20 oC, optimum 20 – 40 oC, maksimum 40 – 45 oC dan mikroba termofilik dengan suhu minimum 25 – 45 oC, optimum 45 – 60 oC, dan maksimum 50 °C (Moat, 2010). Kehidupan bakteri tidak hanya dipengaruhi oleh faktor-faktor lingkungan akan tetapi juga mempengaruhi keadaan lingkungan. Bakteri dapat menyebabkan pH dari media tempat ia hidup, perubahan ini disebut perubahan secara kimia. Adapun faktor-faktor lingkungan dapat dibagi atas faktor-faktor abiotik dan biotik. Dimana faktor biotik terdiri atas makhluk-makhluk hidup, yang mencakup adanya asosiasi atau kehidupan bersama anatara mikroorganisme dapat dalam bentuk simbiosisme, sinergisme antibiose dan sitropisme. Sedangkan faktor-faktor abiotik terdiri atas faktor fisika seperti suhu, atmosfer gas, pH, tekanan osmotik, kelembaban, sinar gelombang dan pengeringan serta faktor kimia seperti adanya senyawa toksik atau senyawa kimia lain (Hadioetomo, 2007).

122

PELAKSANAAN PRAKITIKUM


Praktikum ini dilaksanakan pada hari Rabu, 27 November 2017 di Laboratorium Mikrobiologi Pangan Fakultas Teknologi Pangan dan Agroindustri Universitas Mataram.

Alat dan Bahan

a. Alat-alat Praktikum Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini antara lain vortex, jarum ose, tabung reaksi, lampu bunsen, refrigator dan inkubator. b. Bahan-bahan Praktikum Adapun bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum ini antara lain biakan Bacillus cereus dan Escherichia coli, medium Nutrient Agar, medium Nutrient broth, iodin, asam, basa, dan alkohol.

Prosedur Kerja

a. Pengaruh suhu terhadap pertumbuhan mikroba Biakan

Divortex

Diambil 0,1 ml E.coli 0,1 ml Bacillus cereus

Diinokulasi dalam tabung reaksi berbeda berisi media

Divortex

123

Ditunggu hingga padat

Diinkubasi t=48 jam b. Pengaruh penambahan zat-zat kimia terhadap pertumbuhan mikroba Biakan

Divortex

Diambil 0,1 ml E.coli 0,1 ml Bacillus cereus

Dimasukkan ke dalam tabung reaksi berbeda yang berisi media NB

Dimasukkan zat kimia 1 ml ke dalam tabung reaksi yang sudah berisi biakan

Divortex

Diinkubasi pada suhu 37 oC selama 48 am

124

HASIL PENGAMATAN

Tabel 9.1 Hasil Pengamatan Pertumbuhan Bakteri Terhadap Suhu Pada Medium NA Biakan Kel. Perlakuan Bacillus cereus Escherichia coli o 1 0 C o 2 10 C + + o 3 27 C + ++ o 4 37 C ++ + o 5 55 C Tabel 9.2 Hasil Pengamatan Pertumbuhan Bakteri Terhadap penambahan zat kimia Pada Medium NB Biakan Kel. Perlakuan Bacillus cereus Escherichia coli 1 Tanpa perlakuan + ++ 2 Asam 3 Iodin +++ ++ 4 Basa 5 Alkohol + + Keterangan: +

= sedikit

++

= banyak

+++

= sangat banyak

-

= tidak ada

125

PEMBAHASAN

Mikrobiologi merupakan cabang ilmu dari biologi yang membahas dan mempelajari jasad-jasad renik. Mikrobiologi berasal dari bahasa yunani. Mikros yang berarti kecil dan bios yang berarti hidup serta logos yang berarti ilmu. Sehingga secara singkat mikrobiologi merupakan cabang ilmu biologi yang khusus mempelajari tentang makhluk hidup yang berukuran sangat kecil dan tidak kasat mata. Makhluk hidup yang kecil disebut dengan mikroorganisme, mikrobia, mikroba atau jasad renik. Contoh mikroorganisme yaitu seperti jamur, algae, protozoa, bakteri dan virus. Tujuan dilakukannya praktikum kali ini yaitu untuk mengetahui pengaruh faktor lingkungan terhadap pertumbuhan bakteri pada beberapa jenis medium yang berbeda. Adapun jenis mikroba yang digunakan yaitu e. Coli dan b.cereus. media yang dugunakan ada dua yaitu Nutrient Agar dan Nutrient Broth. Perlakuan yang diberikan terdiri dari penempatan bakteri pada berbagai macam suhu yaitu pada suhu 0 C, 10 C, 27 C, 37 C dan 5 C. Selain perlakuan pada suhu yang berbeda, bakteri juga diperlakukan dengan penambahan beberapa jenis zat kimia diantaranya seperti alkohol, asam, basa, iodin. Praktikum kali ini menggunakan jenis bakteri Bacillus cereus dan Escherichia coli yang digunakan sebanyak kali yaitu dua kali percobaan dengan Escherichia coli dan tiga kali percobaan dengan menggunakan bakteri Bacillus cereus untuk uji yaitu apakah pengaruh suhu yang digunakan selama inkubasi berpengaruh terhadap pertumbuhan bakteri tersebut. Menurut Moat (2010), ada 3 jenis mikroba berdasarkan kisaran suhunya yaitu psikofilik, mesofilik dan termofilik. Golongan psikofilik adalah bakteri yang dapat tumbuh pada suhu antara 0-30 °C dan suhu optimum 15 °C. Untuk golongan mesofilik akan tumbuh pada suhu antara 10-45°C dan suhu optimum 20-40 °C. Sedangkan golongan termofilik adalah bakteri yang dapat tumbuh pada suhu 60 °C tetapi tidak tumbuh pada suhu 30 °C. Menurut Hadioetomo (1993), bakteri Bacillus cereus termasuk bakteri yang bersifat mesofilik karena pertumbuhan optimumnya pada suhu 30 °C sampai 37 °C dan tumbuh baik pada NaCl 1-3% serta mempunyai morfologi yaitu warna koloni putih susu dan bentuk koloni bulat.

126

Berdasarkan

praktikum

yang

telah

dilakukan,

didapatkan

hasil

pengamatan bahwa pada pemberian suhu sebesar 0 °C, mikroba jenis b.cereus dan e.coli ditandai dengan tanda minus yang berarti bahwa tidak ada bakteri yang tumbuh. Kemudian pada suhu sebesar 10 C, kedua bakteri menunjukkan tanda positif yang hanya berjumlah satu yang diartikan bahwa pada kondisi suhu tersebut kuantitas bakteri yang tumbuh adalah sedikit. Kemudian pada kondisi ketiga yaitu dengan suhu sebesar 27 C, pertumbuhan b.cereus sedikit namun e.coli banyak. Pada suhu 37 C, pertumbuhan b.cereus banyak begitupun dengan peretumbuhan e.coli. kemudian pada suhu 55 C pertumbuhan bakteri pada suhu tersebut bakteri ditandai dengan tanda minus yang berarti tidak ada bakteri yang tumbuh. Berdasarkan hasil pengamatan bakteri tumbuh baik pada suu 37 oC hal ini sesuai dengan (Nazaruddin, 2016) suhu optimum sadalah suhu yang paling baik untuk pertumbuhan mikroba dimana suhu optimum dari mikrobia mesofilik adalah 25-37 oC.Kemudian perlakuan kedua yaitu dengan penambahan beberapa jenis senyawa kimia berupa alkohol, asam, basa dan iodin. Berdasarkan hasil pengamatan didapatkan bahwa pertumbuhan bakteri yang awalnya tanpa perlakuan pada bakteri b.cereus terdapat hanya sedikit bakteri yang tumbuh sedangkan pada e.coli terdapat banyak yang tumbuh. Namun pada kondisi asam, kedua bakteri tidak menunjukan adanya aktivitas pertumbuhan, hal ini dikarenakan kedua bakteri tidak menyukai kondisi lingkungan dengan tingkat keasaman yang tinggi. Kemudian pada media yang ditambahkan iodium pertumbuhan bakteri b.cereus sangat banyak dan bakteri e.coli tergolong banyak. Perlakuan yang terakhir yaitu dengan penambahan zat kimia berupa alkohol, kedua bakteri menunjukkan aktivitas pertumbuhan ang tergolong banyak. Berdasarkan literatur (Neti, 2008), lingkungan sel yang asam berakibat proton-proton akan masuk kedalam sitoplasma dan menurunkan pH internal sel ehingga dapat mendenaturasi komponen-komponen sel berprotein termasuk enzim-enzim dan selanjutnya pertumbuhan mikroba terhambat. Sebagian mikroba dapat mengeluarkan sejumlah proton-proton yang masuk ke dalam sitoplasma dengan menggunakan energi, tetapi lama-kelamaan energi yang tersedia sangat

127

berkurang dan tidak cukup untuk aktivitas dan sintesis komponen-komponen sel sehingga pertumbuhan sel mikrob dapat terhambat bahkan berhenti. Adapun faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri yaitu ph yang optimu, kondisi lingkungan, ketersediaan nutrisi pada medium serta kandungan kimia yang terdapat pada medium pertumbuhannya. Nilai suhu kardinal menurut angka (minimum, optimum dan maksimum) dan kisaran suhu yang memungkinkan pertumbuhan sangat beragam pada bakteri. Beberapa bakteri yang diisolasi dari air sumber air panas dapat tumbuh pada suhu setinggi 95°C yang diisolasi dari lingkungan dingin dapat tumbuh pada suhu rendah -10°C, jika konsentrasi solut yang tinggi mencegah mediumnya jadi beku. Berdasarkan kisaran suhu tumbuh bakteri sering kali dibagi atas tigagolongasn besar diantaranya Termofilyang tumbuh pada suhu tinggi (diatas 55°C), Mesofilyang tumbuh baik antara 20°C sampai 45°C dan Psikrofilyang tumbuh baik pada suhu 0°C.

128

KESIMPULAN

Berdasarkan

hasil

pengamatan

dan

pembahasan,

maka

dapat

disimpulkan sebagai berikut : 1. Faktor lingkungan yang mempengaruhi mikroorganisme ada dua, yaitu faktor biotik dan abiotik. 2. Berdasarkan suhu pertumbuhannya bakteri dapat diklasifikasikan menjadi 3 golongan yaitu psikofilik, mesofilik dan termofilik. 3. Bacillus cereus dan Escherichia coli termasuk dalam golongan mesofilik pada hasil pengamatan karena rata-rata dapat tumbuh pada suhu 37°C. 4. Pada

penyimpanan

suhu

beku,

rata-rata

bakteri

tidak

mengalami

pertumbuhan dikarenakan faktor suhu yang terlalu rendah. 5. Faktor abiotik yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri adaah suhu, kelembaban,

pH,

tekanan

osmosa,

sinar

gelombang,

serta

daya

oligodinamik.

.

129

DAFTAR PUSTAKA

Andriani, R., 2016. Pengenalan Alat-alat Laboratorium Mikrobiologi Untuk Mengatasi Keselamatan Kerja dan Keberhasilan Praktikum. Jurnal

Mikrobiologi. 1(1):1-9.

Anindya, 2012. Pengenalan Alat Mikrobiologi. Erlangga. Jakarta. Bambang, 2006. Dasar-dasar Mikrobiologi. UI Press. Jakarta. Copernicus. 2014. Petunjuk Penggunaan dan Pembuatan Potato Dextrose Agar (PDA). www.alatalatlaboratorium.com/LaboratoriumMikrobiologi/petunjuk penggunaan-dan-pembuatan-potato-dextrose-agar-pd. (5 Oktober 2017). Djaman,A.,Asia,R.Wahyuni,2014.Isolasi Mikroba Endofit Dari Kulit Batang, Daun, dan Kulit Buah Manggis Pengkulturan Serta Uji Aktivitas

Antimikrobionya. Jurnal Farmasi Higea. 6(1) 90- 97.

Dwijoseupto,1984. Dasar-dasar Mikrobiologi. Djambatan. Jakarta. Dwinanti, Sefti dan Tanbiyaskur. 2014. Rekayasa Media Padat Nonselektif Untuk Bakteri Akuatik. Jurnal Akuakultur Indonesia. 13(2): 163-166. Ferdiaz, S., 1993. Analisis Mikrobiologi Pangan Edisi Pertama. Raja Grafindo.

Jakarta.

Fitri.L.,2011. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. Gramedia. Jakarta. Frobisher. 1974. Fundamentals Of Microbiology. Saunders Company. London. Gembong, 2008. Taksonomi tumbuhan. Universittas Gajah Mada. Yogyakarta. Hafsari, A. Dan Isma A. , 2013. isolasi dan identifikasi kapang endofit dari tanaman obat surian(TOONA SINENSIS). Jurnal Biologi. 7(2) : 175-177. Ibrahim, A., A. Fridayanti, F. Dalvia, 2015. Isolasi dan Identifikasi bakteri asam laktat dari buah mangga. Jurnal Ilmiah Manuntung. 1(2)159-160.

Indra , 2010. Mikrobiologi. Rineka Cipta. Bandung. Irianto, M., 2006. Konsep Dasar Kimia Analitik. UI Press. Jakarta. Kadri, A. N., K. T. P. Gelgel.,dan I. G. K. Suarjana., 2015. Perbedaan Cara Penyebaran suspenso Terhadap Jumlah Bakteri Pada Media Eosin Methylene Blue Agar. Jurnal Veteriner. 4(3): 205-212. Kusnadi, 2003. Mikrobiologi. FMIPA UPI JICA. Bandung. Makamto,Syawzani, Ulfah, W. Mahalina, A. Syauqi, L. Istiqfaroh, G. Trimulyono,2014. Isolasi dan Karakterisasi Bacillus Sp. Pelarut Fosfor Dari Rhizopus Tanaman Leguminanose. Jurnal Sains dan Matematika. 1(2) 1-5. Mirzana, D. K., Netty, S. Dan Arni, A.,2016. Identifikasi pertumbuhan jamur aspergillus sp. Pada roti tawar yang dijual di kota padang berdasarkan suhu dan lama penyimpanan. Jurnal Kesehatan Andalas. 5(2): 355-356. Nazzaruddin, 2014. Analisis Mikroba Di laboratorium. Rajawali. Jakarta. Pelczar, 2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Universitas Indonesia. Jakarta. Puspitasari, 2012. Mikrobiologi Dasar I. Gramedia. Jakarta. Rukmi, 2008. Mikrobiologi Umum. UMM Press. Malang. Soehajono, 2006. Mikrobiologi. Universitas Brawijaya. Malang Soetarto. 2012. Alat-Alat Mikrobiologi. http:/itartrie.com/mikrobiologi-alat.html (Diakses pada tanggal 30 September 2017). Suardana,I.W., I.H. Utama, M.H.W, 2014. Identifikasi Escerichia Coli U157:H7 Dari Feses Ayam dan Uji Profit Hemolisinya Pada Media Agar Darah. Jurnal Kedokteran Hewan. 8(1) 1-2. Subandi, 2009. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Gunung Djahpress. Bandung.

Laporan Tetap 4 Itp Genap 2016 - Revisi 1

Recommend Documents