PRAKTIKUM II IDENTIFIKASI RHODAMIN PADA MAKANAN
A. TANGGAL PELAKSANAAN Sabtu, 10 Juni 2017
B. TUJUAN Mengidentifikasi adanya Rhodamin B pada sampel makanan dan minuman dengan metode kromatografi sederhana.
C. DASAR TEORI Di
dalam
Peraturan
Menteri
Kesehatan
Republik
Indonesia
No.239/MenKes/Per/V/85 disebutkan ada 30 jenis pewarna yang dinyatakan sebagai bahan berbahaya bagi kesehatan dan dilarang untuk digunakan sebagai bahan tambahan makanan. Salah satunya yaitu zat warna sintesis Rhodamin B yang merupakan pewarna yang dilarang digunakan untuk zat tambahan makanan. Rhodamin B adalah zat pewarna buatan yang digunakan dalam industri tekstil dan kertas. Rumus molekul dari Rhodamin B adalah C1NCl dengan berat molekul sebesar 479.000. Zat Rhodamin B berbentuk kristal hijau atau serbuk ungu kemerah-merahan, sangat larut dalam air dan akan menghasilkan warna merah kebiru-biruan dan berflouresensi kuat. Rhodamin B dapat larut dalam alcohol, HCl, dan NaOH selain mudah larut dalam air (Wisnu, 2008). Rhodamin B adalah zat pewarna sintesis yang digunakan pada industri tekstil dan kertas, zat pewarna sintesis ini sangat berbahaya apabila terhirup, mengenai mata dan kulit serta tertelan. Pengaruh buruk bagi kesehatan antara lain menimbulkan iritasi pada saluran pencernaan dan air seni menjadi berwarna merah atau merah muda. Pada kondisi yang lebih akut dapat mengganggu fungsi hati dan menimbulkan kanker hati (Wijaya, 2011). Identifikasi adanya zat tambahan Rhodamin B dalam makanan dapat dilakukan dengan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Tahap identifikasi dengan KLT dimulai dengan sampel ditotolkan pada plat KLT dan totolkan larutan baku Rhodamin B. Plat KLT yang mengandung cuplikan dimasukkan kedalam chamber yang lebih dahulu telah
dijenuhi fase gerak berupa n-butanol : etil asetat : ammonia (10 : 4 : 5). Biarkan hingga lempeng terelusi sempurna kemudian plat KLT diangkat dan dikeringkan. Ketika pelarut naik akibat dari aksi kapiler pada adsorben, komponen sampel terbawa dengan kecepatan yang berbeda dan dapat dilihat sebagai deretan titik-titik setelah platnya dikeringkan dan diwarnai atau dilihat dibawah cahaya ultraviolet. Mengamati warna secara visual dan dibawah sinar UV 254 nm. Jika secara visual noda berwarna merah jambu dan dibawah sinar UV 254 nm warna kuning dan 366 nm merah muda hal tersebut menunjukkan adanya Rhodamin B (Kumalasari, 2015). Pemakaian bahan pewarna sintesis dalam pangan walaupun mempunyai dampak positif bagi produsen dan bagi konsumen, diantaranya dapat membuat suatu pangan lebih menarik, meratakan warna pangan, dan mengembalikan warna dari bahan dasar yang hilang atau berubah selama pengolahan, ternyata dapat pula menimbulkan hal-hal yang tidak diinginkan dan bahkan mungkin memberi dampak negative terhadap kesehatan manusia. Penggunaan pewarna sintesis oleh para pedagang makanan tradisional di pasarpasar atau dikantin atau kios pada makanan disebabkan kurangnya pengetahuan terhadap bahaya pewarna sintesis yang dilarang. Selain itu pertimbangan harga relatif murah sehingga para pedagang menggunakan pewarna yang tidak diizinkan tersebut (Abdurrahmansyah, 2017).
D. ALAT DAN BAHAN 1. Alat a. Gelas arloji b. Beaker glass 100 ml c. Labu ukur 10 ml d. Gelas ukur 100 ml e. Pipet ukur 10 ml f. Batang pengaduk g. Chamber h. Pipet tetes i. Tabung reaksi j. Sendok plastic
k. Botol semprot l. Filter 2. Bahan a. Standar Rhodamin B b. Methanol c. Asam asetat glacial 10 % d. Propanol e. Ammonia f. Aquadest g. Sampel ( Terasi dan minuman Ale-ale)
E. PROSEDUR KERJA a. Pembuatan larutan Rhodamin B (sebagai standar ) 1 gram Rhodamin B
Dimasukkan dalam beaker 50 ml
Dilarutkan dengan aquadest
Dimasukkan ke dalam labu takar
Diencerkan sampai tanda batas dengan aquadest
Larutan standar
b. Persiapan sampel uji Sampel
Dimasukkan ke dalam gelas beaker 250 ml
Ditambahkan asam asetat glacial encer kedalamnya
Larutan uji c. Pembuatan eluen untuk elusidasi sampel
Diambil propanol : ammonia (9:1)
Dimasukkan dalam chamber
Dijenuhkan 30 menit
Eluen
d. Pengujian Rhodamin B pada sampel Plat KLT
Ditotolkan masing-masing larutan Rhodamin B, sampel uji pada plat KLT
Dimasukkan plat KLT ke dalam chamber
Dielusikan sampai pelarut merambat sampai garis tanda batas
Dikeringkan plat dan mengamati bercak noda yang terbentuk
Hasil
F. HASIL PENGAMATAN No. 1.
Perlakuan
Hasil pengamatan
Menghaluskan terasi dengan mortir, Warna terasi : merah kecoklatan kemudian menambahkan asam asetat Warna asam asetat glacial : bening glacial encer.
2.
Sampel
Warna campuran : merah kecoklatan
minuman
Ale-ale Warna ale-ale : merah
ditambahkan asam asetat glacial Warna campuran : merah encer.
3.
Pembuatan eluen Propana : ammonia Warna propanol dan ammonia : bening (9:1) kemudian dijenuhkan.
4.
Penotolan
sampel,
standard
dan
elusidasi.
5.
Pengamatan dengan sinar UV dan Standar : berflouresensi kuning pengukuran Rf.
Ale-ale : tidak berflouresensi Terasi : tidak berflouresensi Jarak migrasi eluen : 8 cm Jarak migrasi standar Rhodamin B : 5,9 cm Jarak migrasi sampel Ale-ale : 5,6 cm
Jarak migrasi sampel Terasi : 5,5 cm
G. ANALISIS DATA Menghitung nilai Rf
Standar Jarak migrasi standar
: 5,9 cm
Jarak migrasi eluen
: 8 cm
Rf
= =
𝑗𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑚𝑖𝑔𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟 𝑗𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑚𝑖𝑔𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑒𝑙𝑢𝑒𝑛 5,9 𝑐𝑚 8 𝑐𝑚
= 0,737
Sampel minuman Ale-ale Jarak migrasi ale-ale
: 5,6 cm
Jarak migrasi eluen
: 8 cm
Rf
= =
𝑗𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑚𝑖𝑔𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑎𝑙𝑒−𝑎𝑙𝑒 𝑗𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑚𝑖𝑔𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑒𝑙𝑢𝑒𝑛 5,6 𝑐𝑚 8 𝑐𝑚
= 0,7
Sampel terasi Jarak migrasi terasi
: 5,5 cm
Jarak migrasi eluen
: 8 cm
Rf
=
𝑗𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑚𝑖𝑔𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑡𝑒𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑗𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑚𝑖𝑔𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑒𝑙𝑢𝑒𝑛
=
5,5 𝑐𝑚 8 𝑐𝑚
= 0,687
H. PEMBAHASAN Praktikum kali ini membahas tentang identifikasi Rhodamin B dalam sampel makanan dengan tujuan dapat mengidentifikasi adanya kandungan Rhodamin B dalam sampel makanan dengan menggunakan metode kromatografi sederhana, yaitu Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Rhodamin B merupakan pewarna sintesis berbentuk serbuk kristal, berwarna hijau atau ungu kemerahan, tidak berbau dan dalam larutan akan berwarna merah terang berpendar/berfluoresensi. Rhodamin B merupakan zat warna golongan xanthenes dyes yang digunakan pada industri tekstil dan kertas, sebagai pewarna kain, kosmetika, produk pembersih mulut dan sabun. Nama lain Rhodamin B adalah D dan C Red no 19. Food Red 15, ADC Rhodamin B, Aizen Rhodamin dan Brilliant Pink (Maryadele, 2006). Pada praktikum ini dilakukan identifikasi Rhodamin B pada sampel Terasi dan minuman Ale-ale dengan menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Percobaan pertama yaitu membuat larutan standar Rhodamin B sebagai pembanding sampel, tetapi standar Rhodamin B sudah tersedia di Laboratorium sehingga tidak dibuat lagi. Selanjutnya masing-masing sampel dilarutkan dengan asam asetat glacial encer dengan tujuan untuk mendestruksi senyawa-senyawa yang ada di dalam sampel dan menstabilkan Rhodamin B agar tidak berubah dari bentuk terionisasi menjadi bentuk netral. Kemudian dilakukan penyiapan eluen sebagai pelarut atau fase gerak. Digunakan propanol dan ammonia dengan perbandingan 9:1 . Penggunaan eluen ini disesuaikan dengan sifat polar Rhodamin B karena memiliki gugus karboksil dengan pasangan electron bebas dan gugus amina pada struktur molekulnya. Gugus karboksil dan amina ini akan membentuk ikatan hydrogen intermolecular dengan pelarut polar sehingga mudah larut dalam pelarut polar seperti alcohol. Sehingga digunakan campuran eluen polar agar dapat mengelusikan Rhodamin B dengan baik. Berikut struktur dari Rhodamin B :
(Wisnu, 2008). Setelah dibuat eluen, maka larutan eluen tersebut dijenuhkan terlebih dahulu. Tujuan penjenuhan adalah untuk memastikan partikel fase gerak terdistribusi merata pada seluruh bagian chamber sehingga proses pergerakan spot diatas fase diam oleh fase gerak berlangsung optimal, dengan kata lain penjenuhan digunakan untuk mengoptimalkan naiknya eluen. Kemudian dilakukan penotolan larutan baku dan sampel menggunakan pipa kapiler. Tujuannya yaitu supaya diperoleh hasil penotolan yang kecil, karena dalam kromatografi kertas penotolan yang baik diusahakan sekecil mungkin untuk menghindari pelebaran spot dan jika sampel yang digunakan terlalu banyak akan menurunkan resolusi. Lalu plat dimasukkan dengan hati-hati ke dalam chamber tertutup yang berisi fase gerak dengan posisi fase gerak berada dibawah garis. Fase gerak perlahan-lahan bergerak naik, setelah mencapai jarak tempuh, kertas diangkat dan dibiarkan kering diudara, untuk menguapkan sisa pelarut. Dari hasil pengamatan diperoleh sampel terasi terlihat adanya spot dengan jarak 5,5 cm sedangkan pada sampel minuman ale-ale spotnya 5,6 cm dan spot untuk standar Rhodamin B yaitu 5,9 cm. Dengan jarak migrasi eluen 8 cm, sehingga diperoleh nilai Rf untuk sampel terasi sebesar 0,687 , untuk sampel minuman ale-ale sebesar 0,7 dan untuk standar Rhodamin B sebesar 0,737. Berdasarkan perolehan nilai Rf maka sampel minuman ale-ale memiliki nilai Rf yang sama dengan nilai Rf standar Rhodamin B. Namun setelah diamati dibawah sinar UV 254 nm terlihat yang berpendar/berflouresensi hanya standar Rhodamin B sedangkan untuk kedua sampel tidak berfluoresensi. Sehingga hal tersebut belum bisa membuktikan bahwa sampel yang diuji positif mengandung Rhodamin B walaupun memiliki nilai Rf yang sama. Kemiripan nilai Rf mungkin disebabkan karena adanya senyawa lain, bukan karena adanya zat Rhodamin B tersebut. Suatu sampel dikatakan sama dengan standar harus memiliki nilai Rf yang sama dan jika dilihat dibawah sinar UV 254 nm akan berfluoresensi dengan warna yang sama.
I. KESIMPULAN Berdasarkan praktikum yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa, untuk mengidentifikasi adanya Rhodamin B dalam sampel makanan dapat dilakukan dengan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Sampel yang digunakan yaitu Terasi dan minuman Ale-ale. Berdasarkan hasil pengamatan, diperoleh nilai Rf untuk sampel terasi sebesar 0,687 , untuk sampel minuman ale-ale sebesar 0,7 dan untuk standar Rhodamin B sebesar 0,737. Sampel minuman ale-ale memiliki nilai Rf yang sama dengan standar Rhodamin B tetapi tidak berfluoresensi di bawah sinar UV 254 nm. Sehingga dari kedua sampel tidak ada yang positif mengandung Rhodamin B.
DAFTAR PUSTAKA
Abdurrahmansyah, dkk. 2017. Analisis Zat Pewarnan Rhodamin B Pada Saus Cabai Yang Beredar di Kampus Universitas Islam Negeri Raden Fatah Palembang. Jurnal Biota Vol.3 No.1. Kumalasari, Eka. 2015. Identifikasi dan Penetapan Kadar Rhodamin B dalam Kerupuk Berwarna Merah yang Beredar di Pasar Antasari Kota Banjarmasin. Jurnal Ilmiah Manuntung, 1 (1), 85-89. Wijaya, D. 2011. Waspadai Zat Aditif Dalam Makananmu. Yogyakarta : Buku Biru. Wisnu, C. 2008. Analisis dan Aspek Kesehatan Bahan Tambahan Pangan. Jakarta : Bina Aksara.
