Laporan PKL 80%

MEKANISME PRODUKSI EMBRIO SECARA I N V I V O DAN APLIKASI TRANSFER EMBRIO DI BALAI EMBRIO TERNAK CIPELANG BOGOR

Laporan Pelaksanaan Praktek Kerja Lapang

Oleh: Pranaya Arya Satya Nur Ma’idah

Mifrotul Komariyah Febrina Eka Rahayu Ivan Geovani

NIM. 155050101111186 NIM. 155050100111005 NIM. 155050100111034 NIM. 155050100111071 NIM. 155050101111190

PROGRAM STUDI PETERNAKAN FAKULTAS PETERNAKAN UNIVERSITAS BRAWIJAYA MALANG 2018 1

MEKANISME PRODUKSI EMBRIO SECARA I N V I V O DAN APLIKASI TRANSFER EMBRIO DI BALAI EMBRIO TERNAK CIPELANG BOGOR

Laporan Pelaksanaan Praktek Kerja Lapang

Oleh: Pranaya Arya Satya Nur Ma’idah 

Mifrotul Komariyah Febrina Eka Rahayu Ivan Geovani

155050101111186 155050100111005 155050100111034 155050100111071 155050101111190

Praktek Kerja Lapang ini merupakan salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Peternakan pada Fakultas Peternakan Universitas Brawijaya

PROGRAM STUDI PETERNAKAN FAKULTAS PETERNAKAN UNIVERSITAS BRAWIJAYA MALANG 2018

2

MEKANISME PRODUKSI EMBRIO SECARA IN VIVO DAN APLIKASI TRANSFER EMBRIO DI BALAI EMBRIO TERNAK CIPELANG BOGOR

Laporan Pelaksanaan Praktek Kerja Lapang Oleh: Pranaya Arya Satya Nur Ma’idah 

Mifrotul Komariyah Febrina Eka Rahayu Ivan Geovani

155050101111186 155050100111005 155050100111034 155050100111071 155050101111190

Menyetujui: Dosen Pembimbing

Dosen Penguji,

(Dr.Ir.Sri Wahjuningsih, M.Si)  NIP. 196401101988022001 Tanggal ...................... ................................. ...........

(____________________)  NIP.....................  NIP................................ ................ ..... Tanggal ...................... ............................. .......

Mengetahui: Universitas Brawijaya Fakultas Peternakan Program Studi Peternakan Ketua, (Dr. Agus Susilo, S.Pt., MP)  NIP. 19730820 199802 1 001 Tanggal ...................... ................................. ...........

Balai Embrio Ternak Ci pelang  pelang

(Yanyan S., S.Pt.,MP.)  NIP. ................... .............................. ................ ..... Tanggal 26 Agustus 2018

Mengetahui, Universitas Brawijaya Dekan

(Prof.Dr.Sc.Agr.Ir. Suyadi, MS.)  NIP. 19620403 198701 1 001 Tanggal ..................... ............................. ........

3

THE MECHANISM OF EMBRYO PRODUCTION ON IN VIVO AND APPLICATION OF EMBRYO TRANSFER IN BALAI EMBRIO TERNAK CIPELANG BOGOR

Pranaya Arya Satya1, Nur Ma’idah2, Mifrotul Komariyah 3, Febrina Eka Rahayu 4, Ivan Geovani5, Sri Wahjuningsih 6 1,2,3,4,5)

Student of Animal Science Faculty Brawijaya University

6)

Lecturer of Animal Science Faculty Brawijaya University Email: [email protected] Email:  [email protected] ABSTRACT

The general objective of the activities of the field work practice is acquires knowledge and skills in the field about embryo production mechanism and application of embryo transfer in Balai Embrio Ternak (BET) Cipelang Bogor. Primary data collection was conducted based on data recording the observations and discussions while the secondary data collection was conducted based on data that already exists and processed by certain parties who are published in the form of a journal or a book. The production of embryos in BET done for in vivo use in cattle donors who have already been selected before. Embryo production program consists of several stages, namely synchronization of lust, superovulasi, artificial insemination and flushing. Subsequently be evaluated prior to embryo transfer embryo. Keywords: Cattle Resipien, Cattle Donor, Embryo Evaluation, Embryo Production, Embryo Transfer.

4

MEKANISME PRODUKSI EMBRIO SECARA IN VIVO DAN APLIKASI TRANSFER EMBRIO DI BALAI EMBRIO TERNAK CIPELANG BOGOR

Pranaya Arya Satya1, Nur Ma’idah2, Mifrotul Komariyah 3, Febrina Eka Rahayu 4, Ivan Geovani5, Sri Wahjuningsih 6 1,2,3,4,5)

Student of Animal Science Faculty Brawijaya University

6)

Lecturer of Animal Science Faculty Brawijaya University Email: [email protected] Email:  [email protected] RINGKASAN

Balai Embrio Ternak (BET) Cipelang merupakan salah satu unit pelaksana teknis dibawah Direktorat Jendral Peternakan dan Kesehatan Hewan, Departemen Pertanian Republik Indonesia yang bergerak dalam produksi dan penerapan  bioteknologi Transfer Embrio (TE). Praktik Kerja Lapang (PKL) telah dilaksanakan selama satu bulan dari 2 Juli hingga 30 Juli 2018 di Bogor, J awa Barat. Tujuan umum dari dilakukan kegiatan Praktik Kerja Lapang (PKL) yakni untuk memperoleh pengetahuan dan keterampilan dibidang mekanisme produksi embrio dan penerapan transfer embrio (TE) di BET Cipelang Bogor. Produksi embrio di BET dilakukan secrara in vivo dengan menggunakan ternak donor yang telah diseleksi sebelumnya. Progam ini terdiri dari beberapa tahapan yakni singkronisasi estrus, superovulasi, inseminasi buatan (IB) dan  flushing , serta evaluasi embrio sebelum dilakukan transfer embrio (TE).

5

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kepada Allah Yang Maha Kuasa, sehingga dapat menyelesaikan penulisan laporan PKL ini dengan baik. Oleh karena itu, dalam kesempatan penulis juga sangat berterima kasih kepada yang terhormat: 1. Kedua orang tua yang telah memberikan semangat dan motivasi selama  proses pembelajaran. 2. Dr. Ir. Sri Wahjuningsih, M.Si. selaku Pembimbing Utama atas saran dan  bimbingannya. 3. Prof. Dr. Sc.Agr. Ir. Suyadi, MS., selaku Dekan Fakultas Peternakan Universitas Brawijaya. 4. Dr. Agus Susilo, S.Pt., MP., selaku Ketua Program Studi Ilmu Peternakan yang telah banyak membina kelancaran proses studi. 5. Penulis juga menyampaikan terima kasih kepada Bapak Yanyan Setiawan, S.Pt., MP., Ibu Yuni Siswanti S.Pt., M.Si. dan seluruh  stakeholder   yang telah memberikan kesempatan praktek kerja lapang di Balai Embrio Ternak. Malang, 27 Agustus 2018 Penulis

6

DAFTAR ISI Isi Halaman HALAMAN SAMPUL ................................................................................ i HALAMAN JUDUL  .................................................................................... ii HALAMAN PENGESAHAN  ...................................................................... iii ABSTRACT  .................................................................................................. iv RINGKASAN  ............................................................................................... v KATA PENGANTAR   .................................................................................. vi DAFTAR ISI  ................................................................................................. vii DAFTAR TABEL  ........................................................................................ viii DAFTAR GAMBAR   .................................................................................... ix BAB I PENDAHULUAN 1.1 Analisa Situasi ................................................................................ 1 1.2 Rumusan Masalah...........................................................................2 1.3 Tujuan ............................................................................................. 2 1.4 Keguanaan ...................................................................................... 2 BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Teknologi Reproduksi Ternak ........................................................ 3 2.1.1 Inseminasi Buatan........................................................................ 2.1.2 Transfer Embrio........................................................................... 2.1.2.1 Seleksi Donor dan Resipien...................................................... 2.1.2.2 Sinkronisasi dan Superovulasi .................................................. 2.1.2.3 Panen Embrio dan Evaluasi ...................................................... BAB III METODE KEGIATAN 3.1 Lokasi dan Waktu Kegiatan............................................................ 9 3.2 Khalayak Sasaran............................................................................ 9 3.3 Metode Kegiatan ............................................................................. 9 3.4 Analisis Hasil Kegiatan .................................................................. 9 3.5 Batasan Istilah.................................................................................9 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Produksi Embrio (In Vivo) melalui Ternak Donor......................... 11 4.1.1 Pemeliharaan Sapi Donor ............................................................ 4.1.2 Seleksi Donor............................................................................... 4.1.3 Sinkronisasi Estrus Donor ........................................................... 4.1.4 Superovulasi Donor ..................................................................... 4.1.5 Inseminasi Buatan........................................................................ 4.1.6 Flushing ....................................................................................... 4.2 Persiapan Ternak Resipien ............................................................. 15 4.2.1 Pemeliharaan Sapi Resipien ........................................................ 4.2.2 Seleksi Resipien...........................................................................

7

4.2.3 Sinkronisasi Estrus Resipien ....................................................... 4.3 Evaluasi Embrio.............................................................................. 18 4.3.1 Teknik Evaluasi Embrio .............................................................. 4.3.2 Klasifikasi Embrio ....................................................................... 4.4 Pengemasan Embrio ( Loading ) ...................................................... 21 4.5 Pembekuan dan Penyimpanan Embrio ........................................... 23 4.5.1 Pembekuan Embrio...................................................................... 4.5.2 Penyimpanan Embrio .................................................................. 4.6 Transfer Embrio .............................................................................. 24 4.6.1 Persiapan Transfer Embrio .......................................................... 4.6.2 Pelaksanaan Transfer Embrio ...................................................... BAB V PENUTUP 5.1 Kesimpulan ..................................................................................... 26 5.2 Saran ............................................................................................... 26 DAFTAR PUSTAKA ................................................................................... 27 LAMPIRAN   .................................................................................................. 28

8

DAFTAR TABEL Isi Halaman Tabel 1. Protokol Berdasarkan Birahi ........................................................... Tabel 2. Protokol berdasarkan sinkronisasi birahi menggunakan  progesterone device ............................................................................................... Tabel 3. Protokol berdasarkan pengembangan teknis superovulasi menggunakan suntik epidural.................................................................................. Tabel 4. Protokol berdasarkan pengembangan teknis sup erovulasi dengan interval waktu produksi 25-30 hari ............................................................... Tabel 5. Rangkaian proses transfer embrio di BET Cipelang ....................... Tabel 6. Protokol berdasarkan sinkronisasi birahi menggunakan progesteron devise Tabel 7. Protokol berdasarkan adanya corpus luteum menggunakan single dosis Tabel 8. Protokol berdasarkan tidak adanya corpus luteum menggunakan double dosis Tabel 9.  Fase Embrio ..................................................................................... Tabel 10. Kriteria Kualitas Embrio .............................................................. Tabel 11.  Data Produksi Embrio di Balai Embrio Ternak Cipelang Bogor pada Bulan Juli 2018 ................................................................................ Tabel 12. Data TE di BET pada Bulan Mei-Juli ...........................................

9

DAFTAR GAMBAR

Isi Halaman Gambar 1. Flushing Embrio …….  ...................................................... Gambar 2. Evaluasi Embrio.......................................................................... Gambar 3. Pemberian Pakan Hijauan dan Pemberian Air Minum............... Gambar 4. Konsetrat Ternak Donor ............................................................. Gambar 5. Skema Sinkronisasi Birahi .......................................................... Gambar 6. Progesteron Device .................................................................... Gambar 7. Pemeriksaan Estrus dan Persiapan IB......................................... Gambar 8. Proses Flushing........................................................................... Gambar 9.  Ternak Resipien .......................................................................... Gambar 10. Pemberian Pakan Hijauan dan Pemotongan Kuku ................... Gambar 11. Konformasi Tubuh Sapi Resipien............................................. Gambar 12.  Filtrasi Embrio .......................................................................... Gambar 13. Fase –   Fase Embrio ................................................................... Gambar 14.  Loading Embrio ........................................................................ Gambar 15. Proses Seeding .......................................................................... Gambar 16. Proses Thawing Embrio ............................................................

10

BAB I PENDAHULUAN 1.1 Analisis Situasi Peternakan merupakan salah satu sektor yang saat ini sedang berkembang di Indonesia. Salah satu sektor peternakan yang menjadi fokus pemerintah saat ini adalah peternakan sapi potong. Untuk mencukupi kebutuhan daging setiap tahunnya, selain pasokan daging sapi dalam negeri, pemerintah juga melakukan impor daging sapi dari negara-negara tertentu. Upaya yang dilakukan oleh  pemerintah untuk meminimalisir jumlah impor daging sap i adalah mengharuskan industri peternakan skala besar selain melakukan impor sapi bakalan juga diwajibkan untuk melakukan kegiatan breeding   atau budidaya pembibitan sapi  potong untuk mengurangi jumlah impor sapi bakalan setiap tahunnya. Kegiatan breeding   memerlukan bibit unggul untuk menghasilkan produk yang berkualitas. Cara lain yang dapat dilakukan adalah dengan meningkatkan mutu genetik sapisapi yang ada di Indonesia. Menurut Sutarno (2016) peningkatan mutu genetik dilakukan dengan memanfaatkan bioteknologi yang dapat meningkatkan produksi  peternakan. Penerapan bioteknologi dalam peternakan antara lain: kloning, inseminasi buatan, transfer embrio, dan rekayasa genetik pada ternak. Seiring dengan perkembangan Ilmu Pengetahuan dan Teknoogi (IPTEK) maka berbagai upaya telah dilakukan untuk menghasilkan bibit sapi unggul. Salah satu teknologi yang saat ini sedang diterapkan adalah teknologi transfer embrio. Menurut Adifa, Astuti dan Widiyati (2010) bahwa Transfer Embrio (TE) merupakan teknik untuk mempercepat proses reproduksi dengan mutu genetik yang unggul. Dalam prosesnya, embrio akan dipindahkan dari seekor ternak betina yang  bertindak sebagai donor pada waktu embrio tersebut belum mengalami implantasi, kepada seekor ternak betina yang bertindak sebagai penerima sehingga resipien tersebut menjadi bunting. Pedet hasil TE memiliki mutu genetik yang sama dengan induknya (100% murni). Di Indonesia terdapat satu unit instansi pemerintah yang  bergerak dibidang produksi embrio. Balai Embrio Ternak (BET) Cipelang Bogor merupakan salah satu Unit Pelaksanaan Teknis yang berada dibawah Direktorat Jendral Peternakan dan Kesehatan Hewan, Kementerian Pertaian Republik Indonesia yang bergerak di  bidang bioteknologi produksi dan aplikasi transfer embrio. Terdapat 3 bidang kegiatan yang dilakukan di BET antara lain bidang kegiatan pemeliharaan ternak,  produksi dan aplikasi, informasi dan penyebaran hasil. Pemeliharaan ternak meliputi pemeliharaan sapi donor dan resipien dari berbagai bangsa, kebersihan dan sanitasi kandang, recording , manajemen pemberian pakan dan minum, manajemen kesehatan dan perawatan ternak, uji performan serta perkandangan. Kegiatan  produksi dan aplikasi dimulai dari seleksi donor, superovulasi, inseminasi buatan (IB), pemanenan embrio ( flushing ), evaluasi kualitas embrio, pengemasan dan  penyimpanan embrio serta TE. Bidang informasi dan penyebaran hasil bertugas

11

untuk mendistribusikan embrio yang telah diproduksi serta penyebaran hasil melalui media informasi dan komunikasi. Tenak yang dihasilkan melalui teknologi transfer embrio (TE) diharapakan dapat menjadi ternak bibit yang unggul sehingga mampu meningkatkan kualitas dan mutu genetik sapi-sapi yang ada di Indonesia. Adanya Balai Embrio Ternak diharapkan menjadi salah satu balai yang menghasilkan benih dan bibit sapi unggul di Indonesia. Pemeliharaan sapi donor dan resipien dilakukan untuk meningkatkan populasi ternak unggul dan meningkatkan ternak hasil TE sebagai penyediaan benih dan bibit sapi unggul. Embrio yang dihasilkan akan didistribusikan ke seluruh Indonesia sehingga dapat meningkatkan populasi ternak unggul sebagai upaya pemerintah untuk mencapai swasembada daging. Pejantan dari hasil TE akan digunakan sebagian oleh BBIB/BIB untuk produksi semen beku. 1.2 Rumusan Masalah Rumusan masalah dari Kegiatan Praktik Kerja Lapang (PKL) ini adalah sebagai berikut : 1. Bagaimana mekanisme produksi embrio di Balai Embrio Ternak (BET) Cipelang Bogor? 2. Bagaimana aplikasi teknologi transfer embrio (TE) di Balai Embrio Ternak (BET) Cipelang Bogor? 1.3 Tujuan Tujuan umum dari kegiatan Praktik Kerja Lapang (PKL) ini adalah sebagai  berikut : 1. Memperoleh ilmu dan pengetahuan tentang mekanisme produksi dan aplikasi transfer embrio di Balai Embrio Ternak (BET) Cipelang Bogor. 2. Mendapatkan pengalaman manajerial dan melatih  softskill   serta hardskill  dalam bidang embrio transfer selama di Balai Embrio Ternak (BET) Cipelang Bogor. 1.4 Kegunaan Kegiatan Praktik Kerja Lapang (PKL) ini bermanfaat bagi berbagai pihak, diantaranya : a. Bagi Mahasiswa  



Meningkatkan ilmu pengetahuan dan keterampilan dalam dunia kerja Mengasah dan melatih kemampuan dalam aspek manajerial yang siap untuk menghadapi permasalahan dalam suatu perusah aan Melatih mahasiswa untuk menjadi seorang problem solver 

Memberikan bekal bagi mahasiswa sebelum memasuki dunia kerja.  b. Bagi Perguruan Tinggi 



Meningkatkan dan mempererat kerjasama antara Perguruan Tinggi sebagai pusat ilmu dan teknologi dengan Instansi Pemerintah dan swasta

12

Mencetak mahasiswa implementasi lapang. c. Bagi Instansi 

yang

unggul

dibidang

pengetahuan



Menjalin hubungan kerjasama dengan Per guruan Tinggi



Menciptakan tenaga kerja yanga b erkompeten dibidangnya



dan

Sebagai salah satu fasilitator dalam menunjang kegiatan pendidikan melalui Praktik Kerja Lapang

13

BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Teknologi Reproduksi Ternak 2.1.1 Inseminasi Buatan Inseminasi buatan (IB) atau kawin suntik adalah upa ya memasukkan semen segar, cair maupun beku ke dalam saluran reproduksi hewan betina yang sedang  birahi dengan bantuan inseminator agar hewan bunting. Keahlian dan keterampilan inseminator dalam akurasi pengenalan birahi, sanitasi alat, penanganan (handling) semen beku, pencairan kembali (thawing) yang benar, serta kemampuan melakukan IB akan menentukan keberhasilan.Indikator yang paling mudah untuk menilai keterampilan inseminator adalah dengan melihat persentase atau angka tingkat kebuntingan (conception rate, CR) ketika melakukan IB dalam kurun waktu dan  pada jumlah ternak tertentu (Herawati, Anggraeni, Praharani, Utami, dan Argiris., 2017). Keberhasilan IB dipengaruhi oleh kualitas straw, ketepatan IB, keterampilan inseminator serta kondisi induk dan pakan yang baik. Kualitas semen segar yang dapat dipakai untuk IB adalah minimum mengandung 500 juta sel/ml ejakulat dan 50% spermatozoa hidup dan aktif. Semakin baik kualitas sperma, maka semakin besar keberhasilan IB (Suteky, Sutriyono, Dwatmadji, dan Sholihin., 2017). IB dilakukan tiga kali ( pagi, sore, dan pagi esoknya) untuk mengoptimalkan fertilisasi (Setiawan, Dihansih, dan Zamanti., 2017). Untuk betina yang akan di I B harus diperiksa terlebih dahulu. Pemeriksaan yang dilakukan meliputi palpasi rektal, ultrasound dan vaginoscopy yang dapat dilengkapi dengan laparoskopi dan  biopsi. Pada palpasi rektal dan ultrasonografi diperiksa ukuran, konsistensi dan kontraksi dari rahim, tanduk uterus dan simetri. Dalam ovarium diamati bentuk dan ukuran folikel yang konsisten, kista dan korpus luteum persisten (Mohammed, 2018). 2.1.2 Transfer Embrio Teknik TE umumnya merupakan suatu manipulasi fungsi alat reproduksi dengan perlakuan berbagai hormon gonadotropin pada betina donor yang akan menyebabkan pertumbuhan, pematangan, dan ovulasi sel telur dalam jumlah lebih  besar. Sel telur hasil superovulasi, setelah dibuahi oleh spermatozoa pejantan unggul dikoleksi dari donor, dievaluasi, kemudian ditransfer ke induk resipien yang selanjutnya akan terjadi kebuntingan dan kelahiran (Waluyo, 2014). Transfer embrio segar maupun beku ke resipien dilakukan pada hari siklus  birahi yang sama dengan umur embrio (karena embrio d ipanen pada umur 7 hari) maka siklus birahi resipien yang dapat dipakai adalah 7 ± 1 hari setelah birahi atau  birahi hewan donor dan resipien minimal dalam 24 jam. Transfer dilakukan langsusng ke kornua u teri kurang lebih 5-10 cm dari bifurkasio u teri. Resipien yang tidak menunjukkan gejala birahi setelah 3 siklus birahi yang diharapkan dapat

14

dilakukan pemeriksaan kebuntingan per rectal un tuk menentukan berhasil tidaknya  program transfer. Pemeliharaan resipien yang telah bunting sama seperti  pemeliharaan-pemeliharaan pada hewan bunting pada umumnya. (Campbell, Fishel, Bowman, Duffy, Sedler, and Thorton., 2013). 2.1.2.1 Seleksi Resipien dan Donor Kriteria seleksi donor pada program TE, yaitu melihat nilai genetik baik dan mampu memproduksi embrio layak transfer, nilai jual anak yang tinggi dan kondisi kesehatan yang baik. Kondisi kesehatan donor harus dipelihara dengan tepat melalui karantina, tes darah dan vaksinasi. Resipien yang ideal adalah sapi betina muda dan bebas penyakit, memperlihatkan fertilitas yang tinggi serta mampu melahirkan dan memelihara anak. Sapi resipien harus diuji kesehatan dan keadaan reproduksinya meliputi keabnormalan pada sistem reproduksi, kebuntingan awal dan adanya penyakit. Selain itu harus dikarantina sehingga mudah mengamati kesehatannya, temperatur tubuh tubuh, dan beberapa infeksi yang berpengaruh  besar terhadap infertilitas dan abortus (Sophian dan fifi., 2016). Sapi donor yang digunakan untuk program superovulasi diseleksi terlebih dahulu yaitu dengan cara memeriksa keadaan alat reproduksi (servik, uterus dan ovarium). Cara penyeleksian dilakukan dengan palpasi rektal pada organ reproduksi calon ternak donor, memastikan bahwa ternak tidak dalam keadaan  bunting dan mengecek keadaan ovarium kanan dan kiri dengan mengetahui kondisi folikel dan corpus luteum (Setiawan, dkk., 2017). 2.1.2.2 Sinkronisasi dan Superovulasi Sapi merupakan ternak uniparous atau ternak yang hanya menghasilkan satu keturunan dalam satu masa kebuntingan, sehingga hanya satu sel telur yang terovulasi pada setiap siklus birahi (Sophian dan Fifi, 2016). Sehingga perlu adanya superovulasi untuk menghasilkan banyak se l telur. Untuk pelaksanaan superovulasi secara konvensional dilakukan dengan penyuntikan Follicle Stimulating Hormone (FSH) sebanyak dua kali sehari. Perlakuan superovulasi bertujuan menginduksi  banyak folikel berovulasi untuk menghasilkan banyak oosit sehingga setelah difertilisasi akan dihasilkan banyak embrio layak transfer dan memberikan tingkat kebuntingan yang diharapkan. Pelaksanaan superovulasi secara tradisional dilakukan dengan penyuntikan hormon FSH pada pagi dan sore selama 3 – 4 hari dengan dosis menurun untuk menstimulasi perkembangan folikel (Imron, Supriatna, Amrozi, dan Agus., 2016). Selain hormon FSH ada alternatif hormon

lain yang dapat dijadikan superovulasi, yaitu PMSG. PMSG atau Pregnant mare’s serum gonadotropin merupakan glikoprotein komplek yang mempunyai aktivitas  biologi seperti FSH dan LH, dimana aktivitas FSHnya lebih besar (Campbell, et.al., 2013).

15

2.1.2.3 Panen Embrio dan Evaluasi

Koleksi embrio merupakan kegiatan pemanenan embrio pada ternak yang dapat dilakukan dengan cara operasi (surgical) maupun tanpa operasi (non surgical). Koleksi embrio dengan cara pembedahan (surgical) biasanya dilakukan untuk ternak yang sudah mati (ovari dari RPH) sedangkan koleksi embrio tanpa  pembedahan (non surgical) dilakukan pada ternak hidup biasanya dengan menggunakan metode  flushing .  Flushing   embrio merupakan proses pemanenan embrio hasil program superovulasi. Flushing  dilakukan dengan memasukkan folley kateter ke dalam uterus kanan dan kiri (Waluyo, 2014).  Flushing dilakukan pada hari ke-7 setelah birahi atau IB pertama. Medium yang digunakan untuk  flushing adalah NaCl fisiologis yang ditempatkan dalam botol dan telah terhubung dengan  pipa penyalur. NaCl fisiologis akan dialirkan menuju uteri dengan menggunakan saluran folley kateter. Hasil dari flushing yang berisi medium dan embrio akan ditampung dalam botol untuk dilakukan evaluasi embrio.

Gambar 1. Flushing Embrio

Panen embrio dilakukan dengan cara metode pembilasan pada uterus,  pembilasan uterus dilakukan dengan membuka klem pemasukan dan menutup klem  pengeluaran. Media pembilas dibiarkan mengalir sebanyak 20-50 ml. Untuk  pembilasan pertama hanya 20-30 ml, dalam keadaan klem pemasukan tertutup dilakukan pemijatan dan manipulasi uterus dimana kornua uteri diluruskan  beberapa menit untuk menghindari adanya embrio yang tersekap dalam apeks uteri yang melengkung, kemudian klem pengeluaran d ibuka untuk mengeluarkan media  pembilas. Cara pembilasan ini diulang lagi 8  –  10 kali, sehingga untuk satu kornua uteri dibutuhkan 400 - 500 ml media pembilas. Setelah pembilasan pada satu kornua selesaikemudian dilanjutkan dengan kornua yang lainnya. Pemindahan kateter dilakukan dengan pengempesan balon terlebih dahulu. Setelah pembilasan selesai uterus dibersihkan dengan cairan iodine povidone 2% sebanyak 50 ml yang dimasukan secara intra vagina untuk mencegah infeksi. Setelah itu sapi disuntik

dengan PGF2α, untuk mencegah terjadinya kebuntingan dan mempercepat masa  pemulihan reproduksi (Jodiansyah, Imron, dan Sumantri., 2013). Evaluasi embrio dilakukan didalam labortorium. Evaluasi embrio dilakukan dibawah mikroskop stereo. Tujuan dari evaluasi embrio adalah untuk menentukan 16

kualitas dari embrio. Menurut Pranatasari, Kustono dan Widayati (2016) klasifikasi kualitas embrio berdasarkan morfologi dibedakan menjadi 5 meliputi kualitas embrio A (excelent ), kualitas embrio B ( good ), kualitas embrio C ( fair ), kualitas embrio D ( poor ) dan kualitas embrio E (very  poor ). Embrio yang layak untuk diproses lebih lanjut (dibekukan) adalah embrio yang memiliki kualitas baik.

Gambar 2. Evaluasi Embrio

Kriopreservasi merupakan salah satu teknik yang digunakan untuk menyimpan sel dalam bentuk beku dengan cara mempertahankan kelangsungan hidup sel sehingga dapat digunakan dalam jangka waktu yang lama. Metode kriopreservasi terdiri dari metode konvensional ( slow freezing ) dan metode vitrifikasi (rapid freezing ). Selama proses kriopreservasi memerlukan suatu zat yang bertindak sebagai krioprotektan. Krioprotektan terdiri dari krioprotektan ekstra seluler dan krioprotektan intra seluler. Krioprotektan ekstraseluler akan melindundungi sel dari luar sedangkan krioprotektan intraseluler akan melindungi sel dari dalam. Krioprotektan diperlukan dalam proses pembekuan untuk mencegah terjadinya kerusakan sel selama proses pembekuan. Embrio yang telah dikemas dalam mini straw selanjutnya dimasukkan dalam kontainer yang b erisi nitrogen cair untuk dilakukan penyimpanan (Wahjuningsih, Hardjopranjoto dan Sumitro, 2010). Embrio layak transfer adalah embrio yang sudah berkembang minimal mencapai fase 4 (morula) dengan kualitas 1 (excellent) dan 2 (fair). Embrio degenerasi/jelek adalah embrio yang mengalami kerusakan lebih dari 75% pada selsel blastomerenya dan memiliki bentuk yang tidak beraturan (kualitas 3 dan 4). Oosit terfertilisasi adalah embrio yang minimal memiliki dua sel blastomer. Oosit dianggap tidak mengalami fertilisasi jika tidak teramati tanda-tanda pembelahan sel  blastomer (Imron, dkk., 2016).

17

18

BAB III METODE KEGIATAN 3.1 Lokasi dan Waktu Kegiatan Praktek Kerja Lapang (PKL) ini dilaksanakan selama satu bulan, yaitu pada tanggal 02 Juli –  31 Juli 2018, d i Balai Embrio Ternak Cipelang Bogor, Jawa Barat. Lokasi Balai Embrio Ternak Cipelang Bogor terletak di lereng Gunung Salak di desa Cipelang Kecamatan Cijeruk Kabupaten Bogor Provinsi Jawa Barat (17 km dari Gerbang Tol Bogor). Secara administratif Desa Cipelang berbatasan dengan Desa Tanjungsari (Utara), Desa Cibalung (Timur), Desa Cijeruk (Selatan), Kabupaten Sukabumi (Barat). 3.2 Khalayak Sasaran Sasaran dari kegiatan Praktek Kerja Lapang ini adalah semua pihak yang terlibat aktif dalam kegiatan di Balai Embrio Ternak (BET) Cipelang-Bogor, Jawa Barat. BET berperan sebagai salah satu Unit Pelaksana Teknis (UPT) p enyedia bibit ternak sapi unggul nasional. BET Cipelang mempunyai 3 divisi/seksi, yaitu Seksi Pelaksanaan Teknis Produksi dan Aplikasi Transfer Embrio, Seksi Informasi dan Penyebaran Hasil, dan Seksi Pelayanan Teknis Pemeliharaan Ternak. 3.3 Metode Kegiatan Metode yang digunakan dalam kegiatan Praktek Kerja Lapang ini adalah: a. Magang kerja melalui kegiatan observasi dan partisipasi aktif dalam seluruh kegiatan yang berkaitan dengan produksi dan transfer embrio di BET CipelangBogor.  b. Analisa data melalui pengumpulan data yang selanjutnya akan dipelajari untuk mendapatkan sebuah kesimpulan yang berhubungan dengan produksi embrio, evaluasi embrio, dan transfer embrio pada waktu pelaksanaan PKL. 3.4 Analisis Hasil Kegiatan Hasil yang diperoleh akan dianalisis secara deskriptif yaitu dengan menggambarkan atau menjelaskan situasi obyek pengamatan dari data-data yang diperoleh dalam kegiatan Praktek Kerja Lapang, kemudian dibandingkan dengan landasan teori menggunakan metode studi literatur, sehingga didapatkan  perbandingan antara kajian teori dan kenyataan di lapangan hingga akhirnya akan diperoleh pemecahan terhadap permasalahan yang ada. 3.5 Batasan Istilah Beberapa istilah yang kerap muncul dalam topik pembahasan mengenai  produksi dan aplikasi transfer embrio antara lain : Embrio : Eukariota diploid multisel hasil fertilisasi oosit dengan spermatozoa (Gunawan,Fahrudin dan Boediono 2014)

19

Transfer embrio

:

Produksi embrio secara : in vivo

Ternak donor

:

Ternak resipien

:

Evaluasi embrio

:

Teknik untuk mempercepat proses reproduksi dengan mutu genetik yang unggul melalui pemindahan embrio dari ternak donor ke resipien (Adifa,dkk, 2010) Teknologi Multiple Ovulation Embrio Transfer  (MOET). Tujuan dari teknologi ini adalah untuk menghasilkan embrio yang banyak dalam satu kali siklus (Situmorang dan Triwulaningsih, 2004). Ternak yang mendapat perlakuan superovulasi hingga  flushing sebagai penghasil embrio (Jodiansyah, Imron, dan Sumantri 2017) Ternak yang dipelihara dengan tujuan sebagai tempat  penerimaan embrio (Situmorang dan Triwulaningsih, 2004). Kegiatan yang dilakukan untuk mengklasifikasi embrio  berdasarkan morfologinya yaitu normal dan abnormal (Jodiansyah, dkk. 2017).

20

Commented [A1]: Situmorang, P. dan Triwulaningsih, E. 2004. Aplikasi dan Inovasi Teknologi Transfer Embrio (TE) untuk Pengembangan Sapi Potong. Lokakarya Nasional Sapi Potong.

Commented [A2]: Situmorang, P. dan Triwulaningsih, E. 2004. Aplikasi dan Inovasi Teknologi Transfer Embrio (TE) untuk Pengembangan Sapi Potong. Lokakarya Nasional Sapi Potong.

BAB IV HASIL DAN EVALUASI KEGIATAN 4.1 Produksi Embrio (In Vivo) melalui Ternak Donor 4.1.1 Pemeliharaan Sapi Donor Sapi donor merupakan sapi yang digunakan sebagai sumber embrio sehingga diperlukan manajemen khusus dalam pemeliharaannya. Standar Operasional Prosedur (SOP) pemeliharaan sapi donor meliputi sanitasi kandang, sanitasi ternak, pemberian hijauan pakan ternak dan konsentrat, pemberian air minum, dan pemeriksaan kesehatan. Berdasarkan hasil pengamatan di lapangan, sapi donor ditempatkan pada kandang utama (kandang A, B, C, D, I, dan H) dan kandang rearing 2 (R2). Kegiatan-kegiatan yang dilakukan dalam pemeliharaan sapi donor meliputi  pemeliharaan ternak, sanitasi kandang dan peralatannya, serta pe mberian pakan. Setiap hari kandang dibersihkan menggunakan air mengalir bersamaan dengan memandikan ternak. Pembersihan kandang dan ternak dilakukan sekitar pukul 07.00 –  08.00 WIB. Kebersihan kandang d an tubuh ternak perlu d iperhatikan agar ternak tetap sehat dan bersih sehingga parasit luar tidak mudah menginfeksi. Pemberian pakan dilakukan setelah kandang dibersihkan. Jenis pakan yang diberikan kepada ternak donor yaitu pakan hijauan dan  pakan konsentrat. Air minum diberikan secara ad-libitum. Pemberian pakan hijauan dilakukan 2 kali dalam sehari. Pemberian pagi pukul 08.00  –  08.30 WIB dan siang hari pukul 13.30  –   14.00 WIB. Pemberian pakan hijauan untuk sapi donor dan resepien sebanyak 10 % dari bobot badan atau di sesuaikan dengan kondisi fisiologinya, sehingga masing-masing sapi donor diberi pakan hijauan sebanyak 25-35 kg yang terdiri dari rumput gajah, rumput odot, dan  stargrass. Rumput gajah dichopping  terlebih dahulu sebelum diberikan ke ternak, sedangkan rumput odot dan stargrass tidak perlu dichopping   sebelum diberikan ke ternak . Pada saat terjadi kekurangan HPT maka pakan hijauan akan ditambahkan silase tidak lebih dari 20% hijauan.

Commented [a3]: Setauku waktu aku tanya bet gak pernah pakek silase. Kalian ada yg tanya gak pernah ngasih pakan silase? Trus cara buat silase di bet gimana? Dan knpa gak boleh >20%

(a) (b) Gambar 3. (a) pemberian pakan hijauan, (b) pemberian air minum Pemberian pakan konsentrat diberikan satu kali dalam sehari yaitu setelah  pemberian hijauan (pukul 09.00-09.30 WIB). Pemberian konsentrat untuk sapi

21

donor dan resepien yaitu sebanyak 1 % dari bobot badan atau disesuaikan dengan kondisi fisiologisnya. Pakan konsentrat yang diberikan untuk sapi donor mempunyai kandungan protein kasar minimal 16% atau berkisar antara 15-20%. Pencampuran konsentrat dilakukan setiap hari dengan bahan pakan CGF, pollard, onggok, dedak, kopra, bungkil kelapa sawit, bungkil kedelai, molasses dan mineral.

Commented [a4]: Iki 16 atau minim 16? Kalau setahuku itu donor 18% resipien 16%. Kalau diberi berkisar antara berarti 19% boleh dong? Padahal 19% itu proteinnya laktasi. Padahal dibawah gambar 3 ada ketrangan yang menyebutkan protein berpengaruh thdp kadar protein dlm darah. Walaupun hanya 1%

Gambar 4. Konsentrat ternak donor

Perbedaan proporsi kandungan protein pada pemberian konsentrat untuk ternak donor di BET Cipelang didasarkan pada faktor epigenetik ternak. Protein dalam pakan akan memberikan pengaruh langsung terhadap kadar protein dalam darah, karena protein dalam pakan akan dicerna dan diubah menjadi protein yang  beredar di dalam darah. Hardiyanto, Sumantri, dan Zamanti (2016) menjelaskan  bahwa faktor epigenetik memberikan peranan yang penting dalam perkembangan awal embrio, seperti ion, substrat energi, asam amino, vitamin, faktor  pertumbuhan, sitokin, dan hormon. Selain itu, syarat sapi donor yang baik antara lain memiliki saluran reproduksi yang normal, sejarah  post   partum yang baik, memiliki siklus estrus normal, tidak memiliki cacat genetik maupun cacat tubuh serta selalu mendapat kecukupan nutrisi pakan. Manajemen pemberian pakan  berperan penting untuk produksi embrio karena, sapi dengan asupan energi  berkurang memiliki folikel dominan berukuran lebih kecil dan siklus lebih dari 3 gelombang, dibandingkan dengan sapi dengan asupan pakan berkadar protein lebih tinggi, sehingga pengaruh nutrisi terhadap efisiensi reproduksi adalah pada tingkat produksi embrio.

Commented [a5]: Iki seng bener energi apa protein yg tinggi dan kurang?

4.1.2 Seleksi Donor Standar Operasional Prosedur (SOP) seleksi sapi donor dilakukan dengan melakukan pemeriksaan kesehatan dan kondisi organ reproduksi terhadap sapi donor yang akan diprogram superovulasi melalui palpasi rektal, serta pemeriksaan kondisi ovarium untuk menentukan status reproduksi (fase folikuler atau fase luteal) sapi donor. Sapi donor yaitu sapi betina yang memenuhi kriteria/syaratsyarat sebagai berikut :

22

a. Memiliki keunggulan secara genetik ( genetic superiority).  b. Mempunyai catatan data individu/silsilah keturunan donor yaitu dua generasi ke atas c. Mempunyai catatan reproduksi (siklus b erahi) normal. d. Ternak bebas penyakit. Ternak yang diseleksi sebagai donor harus bebas dari penyakit terutama penyakit reproduksi seperti endometritis, prolapsus uteri, retensio secundinarum, pyometra, brucellosis, maupun kelainan siklus reproduksi seperti corpus luteum persisten, cystic ovary, silent heat , dan hipofungsi ovarium. e. Memiliki sejarah reproduksi yang baik yaitu beranak teratur dan tidak  pernah mengalami kesulitan melahirkan. f. Umur tidak terlalu tua. Pemrograman sapi donor dilakukan setiap 2-4 bulan sekali, sehingga dalam 1 (satu) tahun dapat dilakukan 3-5 kali  flushing / panen embrio atau tergantung dari protocol produksi embrio yang diadopsi. Sapi donor akan diistirahatkan setelah 3-4 kali flushing atau 1 (satu) tahun diproduksi. Mekanisme  pengistirahatan sapi donor dilakukan dengan membuntingkan sapi donor tersebut atau dengan tidak dilakukan produksi embrio selama minimal 1 tahun . Seidel dan Elsden (1985) dalam Prasetyo (2012) mendefinisikan donor sebagai hewan sumber embrio dipanen. Berdasarkan pengamatan saat PKL, diketahui bahwa sapi donor sebelumnya telah disiapkan oleh Seksi Pemeliharaan Ternak sesuai dengan menajemen pemeliharaan sapi donor. Pelaksanaan seleksi donor dapat dilakukan untuk kontrol kondisi reproduksi ternak . Grimes (2008) menyatakan bahwa sapi yang digunakan sebagai ternak donor haru s mempunyai kriteria : memiliki genetik unggul ( genetic superiority) , memiliki kemampuan reproduksi (reproductive ability) dan memiliki keturunan yang marketable atau memiliki nilai ekonomi yang tinggi. 4.1.3 Sinkronisasi Estrus Penyerentakan birahi (sinkronisasi estrus) merupakan upaya yang dilakukan untuk merangsang estrus ternak donor secara bersamaan. Terdapat 4 (empat) protokol sinkronisasi estrus di BET Cipelang. Tabel 1. Protokol berdasarkan birahi alam Hari ke- Perlakuan donor

Keterangan

0

Birahi alam

7

Seleksi donor cek CL

Ada CL diprogram

9

Suntik FSH IM @4 ml pagi dan sore

400 mg dilarutkan dalam 20 ml

10 11

Suntik FSH IM @3ml pagi dan sore Suntik FSH IM @2ml pagi dan sore

lanjut

Suntik PGF2α @1 dosis pagi dan sore

23

Commented [a6]: Cari jurnal aslinya jangan dalam dalam

12

Suntik FSH IM @1 ml pagi dan sore

Tabel 2. Protokol berdasarkan sinkronisasi birahi menggunakan  progesterone device Hari ke- Perlakuan donor Keterangan

0

Pasang progesterone device

9

Suntik FSH IM @4 ml pagi dan sore

10

Suntik FSH IM @3ml pagi dan sore

11

Suntik FSH IM @2ml pagi dan sore

400 mg dilarutkan dalam 20 ml

Suntik PGF2α @1 dosis pagi dan sore Cabut progesterone device sore 12

Suntik FSH IM @1 ml pagi dan sore

Tabel 3. Protokol berdasarkan pengembangan teknis superovulasi menggunakan suntik epidural Hari ke- Perlakuan donor Keterangan

0

Pasang progesterone device

7

Suntik FSH 200 mg epidural

400 mg dilarutkan dalam 20 ml

Suntik FSH 200 mg IM 9

Suntik PGF2α IM @1 dosis pagi dan sore Cabut progesterone device pagi

Tabel 4. Protokol berdasarkan pengembangan teknis superovulasi dengan interval waktu produksi 25-30 hari Hari ke- Perlakuan donor Keterangan 0 Pasang  progesterone device + suntik 5 mg estrogen + 100 mg progesteron

4

Suntik FSH IM @4 ml pagi dan sore

5 6

Suntik FSH IM @3ml pagi dan sore Suntik FSH IM @2ml pagi dan sore

400 mg dilarutkan dalam 20 ml

Suntik PGF2α @1 dosis pagi dan sore Cabut progesterone device sore 7

Suntik FSH IM @1 ml pagi dan sore

Berdasarkan pengamatan di lapang selama bulan Juli 2018, diperoleh hasil  pengamatan sinkronisasi estrus menggunakan protokol dengan pemasangan 24

 progesterone device yang berlangsung selama 9 (Sembilan) hari pada sapi donor yang telah diseleksi. Superovulasi dengan protokol ini, disamping dilakukan  pemasangan progesterone device juga dilakukan penyuntikan hormone FSH dua kali sehari dengan dosis menurun pada hari ke 9, 10, 11, dan 12.  Progesterone device dicabut pada hari ke 11. Pagi

Hari ke

Sore

Pasang Cue-mate

FSH

FSH

3 ml

0

FSH 1 ml

IB

3 ml

FSH 2 ml + PGF2α

9

10

11

12

13

FSH

FSH 3 ml

FSH 2 ml + PGF2α + cabut

FSH 1 ml

IB

4 ml

IB

Flushing  dan

evaluasi embrio

14

20

Cue-mate

Gambar 5. Skema sinkronisasi birahi menggunakan progesterone device dan penyuntikan FSH dosis menurun

Gambar 6. Progesteron device (Cue-mate)

Estrus atau birahi merupakan fase dimana ternak betina bersedia menerima  pejantan untuk kopulasi. Fase estrus terbagi dalam 4 (empat) fase yaitu estrus, metestrus, diestrus, dan proestrus. Sinkronisasi estrus merupakan usaha yang  bertujuan untuk menyerentakkan kondisi reproduksi ternak sapi donor dan

resipien menggunakan hormon prostaglandin (PGF2α) atau kombinasi hormon  progestron dan PGF2α. Preparat Prostaglandin F2α (PGF2α) dikenal sebagai agen luteolitik yang dapat menyamakan siklus estrus dalam waktu yang bersamaan, sedangkan hCG dapat menginduksi ovulasi, sehingga pemberian hCG pada  pertengahan estrus dapat merangsang pelepasan ovum dalam waktu yang lebih seragam, maka perkembangan folikel dapat diamati sehingga dapat ditentukan waktu inseminasi yang lebih tepat (Arifiantini, dkk., 2010).

25

4.1.4 Superovulasi pada Sapi Donor Superstimulasi/superovulasi dilakukan dengan cara menyuntikan hormonhormon Gonadotropin, hormon yang digunakan yaitu FSH, PMSG, GnRH, PGF2α, Progesteron, hCG. Penggunaan hormon-hormon tersebut disesuaikan dengan prosedur protokol yang digunakan ataupun sesuai dengan anjuran produk  untuk program superstimulasi atau superovulasi. Pelaksanaan superstimulasi/ superovulasi dilakukan  pada hari 4-9 setelah birahi alam atau pemasangan  preparat progesteron (sesuai protokol yang digunakan). Upaya untuk merangsang ovulasi ganda (multiple ovulation) dalam  program TE, maka diberikan hormon supero vulasi sehingga diperoleh 12-15 sel telur dalam satu kali ovulasi (Prasetyo, 2012). Superovulasi dapat d iinduksi secara  buatan melalui pemberian hormon gonadotropin eksogen (berasal dari luar tubuh), misalnya FSH dan PMSG. Pemberian hormon tersebut dengan dosis tertentu akan menstimulasi proses pertumbuhan, perkembangan, pematangan dan ovulasi dari sejumlah besar folikel pada ternak sapi. Penyuntikan FSH pada sapi donor dilakukan secara berulang pagi dan sore selama 3-4 hari dengan dosis menurun. Hal ini dilakukan karena FSH mempunyai paruh waktu dalam darah yang cukup singkat. Keberhasilan superovulasi dapat dilihat menggunakan alat ultrasonography (USG) ataupun juga dapat dilakukan dengan palpasi rektal yaitu dengan melihat atau meraba corpus luteum (CL) yang terdapat di ovarium. Subchan, Handarini, dan Siswanti (2016), menyatakan bahwa keberhasilan dari  perlakuan superovulasi dapat dilihat dari respon ovarium yang diukur dari  banyaknya CL yang terbentuk akibat proses ovulasi dari folikel yang matang (de Graaf ). Semakin banyak CL yang terbentuk dapat dikatakan semakin tinggi pula respon dari program superovulasi. 4.1.5 Inseminasi Buatan (IB) Inseminasi Buatan (IB) dilaksanakan pada saat sapi donor menunjukkan tanda-tanda estrus (berahi) atau mengikuti prosedur program superstimulasi/ superovulasi yang digunakan. Pada program superstimulasi/superovulasi dilakukan lebih dari satu kali sesuai p rosedur yang digunakan. Adapun tatalaksana inseminasi buatan di BET Cipelang ad alah sebagai berikut : 1. Persiapan alat dan bahan. Peralatan penunjang yang digunakan yaitu gun IB,  plastik sheath, gloves, gunting straw, pinset, thermometer, straw semen sapi, kapas alkohol, tisu, dan air hangat. 2. Siapkan straw/semen bangsa donor. 3. Thawing semen yaitu straw dikeluarkan dari nitrogen cari (kurang dari 3 detik) dan dimasukkan ke d alam air hangat 37°C selama 10-15 d etik. Tiriskan dengan tissue. 4. Masukkan straw ke dalam gun IB dan dipasang plastik  sheath. Sapi donor siap diinseminasi. 5. Lakukan palpasi rektal pada sapi donor. Feses dibersihkan. Posisi tangan memegang serviks, dan vulva dibersihkan dari kotoran. 6. Gun IB dimasukkan ke dalam serviks sampai posisi 4 (pangkal korpus uteri).

26

7. Suntikkan semen dan catat kode straw yang digunakan.

Gambar 7. Pemeriksaan estrus dan persiapan IB

Setelah berhasil memilih hewan donor berkualitas tinggi, kunci keberhasilan dari transfer embrio selanjutnya terletak pada inseminasi dengan semen yang berasal dari sapi jantan bibit unggul. Setelah perlakuan superovulasi,  perlu dilakukan pengamatan terhadap tanda-tanda estrus pada sapi donor sehingga dapat dijadikan acuan untuk menentukan waktu inseminasi yang tepat dan IB dilakukan 6 - 24 jam setelah estrus. Inseminasi harus segera dilakukan pada saat sel telur diovulasikan karena daya hidup sperma yang singkat (20-30 jam) (Prasetyo, 2012). Kualitas semen yang baik dan petugas mempunyai banyak  pengalaman dengan program TE, maka cukup dilakukan sekali inseminasi saja. Jika hanya satu inseminasi yang dilakukan, penting untuk memeriksa berahi dan inseminasi 10 sampai 20 jam setelah awal berahi (inseminasi dilakukan ketika sejumlah besar telur dilepaskan dari ovarium, ovulasi dapat terjadi selama 24 jam atau lebih). Pada saat telur terakhir dilepaskan dari ovarium mungkin tidak ada cukup sperma untuk membuahi. Tabel 5. Rangkaian proses transfer embrio di BET Cipelang Hari ke: Waktu Perlakuan Keterangan 0 Pagi Pasang Cue-Mate

9

Pagi Sore

Inject 4 ml FSH Inject 4 ml FSH

10

Pagi

Inject 3 ml FSH

Sore

Inject 3 ml FSH

Pagi Sore

Inject 2 ml FSH dan PGF 2 α Inject 2 ml FSH, Inject PGF 2 α dan Cabut Cue-Mate

11

27

12

Pagi Sore

Inject 1 ml FSH Inject 1 ml FSH

13

Pagi Sore

IB IB

14

Pagi

IB

20

Pagi

 Flushing dan inject PGF 2 α

4.1.6 F lushing (Panen Embrio)  Flushing   dilakukan pada hari ke-enam sampai ke-delapan setelah IB  pertama. Standar Operasional Prosedur (SOP) flushing  yaitu : 1. Cek kondisi ovarium sapi donor. 2. Petugas melakukan palpasi rectal. 3. Lakukan anastesi epidural dan pasang peralatan flushing. 4.  Flushing /panen embrio. 5. Treatment  pasca flushing (spool, injeksi PGF2α, dan injeksi multivitamin). 6. Lakukan pencatatan. Peralatan penunjang yang digunakan untuk flushing  yaitu media flushing  (ringer laktat/ PBS + FBS 1 % + antibiotic pem-strep 0,4%), folley catheter , inner  stylet, infuse set, Y-connector, sillicontube, cervix expander , botol steril, syringer , needle 18G, gloves, lidocaine HCl 2%, iodine poridone, PGF2α, gun spool , dan gunting.

Gambar 8. Proses flushing

Panen atau koleksi embrio pada sapi donor dilakukan pada hari ke-6 sampai hari ke-8 setelah berahi (biasanya hari ke-7) saat sebagian besar embrio sudah memasuki ujung cornua uteri  pada masa itu. Embrio akan berkembang sekitar satu minggu, kemudian embrio dipanen pada tahap morula sampai

28

blastocyst (Subchan, dkk 2016). Pemanenan embrio tidak dilakukan lebih awal karena dapat menurunkan efisiensi koleksi embrio dengan metode non bedah. Sebelum hari ke-4, hampir semua embrio terletak di dalam oviduk yang dipisahkan dari uterus oleh utero-tubal junction. Struktur ini berfungsi sebagai katup (valve) yang dapat mengatur masuknya sperma dari uterus menuju oviduk sehingga fertilisasi terjadi tepat waktu dan mengatur transpor embrio ke arah sebaliknya. Embrio akan ditranspor menuju uterus p ada hari ke-4 sampai hari ke5 setelah estrus, melalui kontraksi ritmik pada dinding oviduk dan relaksasi dari otot pada dinding utero-tubal junction sehingga tingkat keberhasilan koleksi embrio akan lebih tinggi pada hari ke-6 dan seterusnya daripada hari ke-4. Kadang-kadang beberapa embrio masih ditemukan dalam oviduk pada sapi yang disuperovulasi sampai hari ke-10 (Prasetyo, 2012). 4.2 Persiapan Ternak Resipien 4.2.1 Pemeliharaan Sapi Resipien Berdasarkan hasil pengamatan yang dilakukan pada saat Praktik Kerja Lapang di BET Cipelang Bogor diperoleh sapi resipien dipelihara pada kandang sukhoi (sukhoi 1, 2 dan 3). Kegiatan-kegiatan yang dilakukan dalam pemeliharaan sapi resipien sama dengan sapi donor yang meliputi pemeliharaan badan sapi, sanitasi kandang dan peralatannya, dan pemberian pakan.

Gambar 9. Ternak sapi resipien dikandang Sukhoi

Secara umum kegiatan harian perawatan sapi resipien menurut SOP, meliputi: pembersihan kandang dan lingkungannya, pembersihan tempat pakan dan minum, memandikan sapi, perawatan/pemotongan kuku dan bulu, serta melakukan pelepasan sapi untuk kegiatan exercise. Pembersihan atau sanitasi kandang dan peralatannya dilakukan sekitar pukul 07.00  –  08.00 WIB. Kegiatan  pembersihan kandang meliputi pembersihan kotoran ternak (feses) yang langsung dialirkan melalui saluran pembuangan menuju kebun rumput, pembersihan area kandang, dan tempat minum. Sanitasi ternak juga dilaksanakan bersamaan dengan proses sanitasi kandang dan peralatannya. Kegiatan yang dilakukan meliputi pembersihan sisa feces yang menempel pada tubuh ternak dengan cara menyemprot dan menyikat 29

tubuh ternak mulai dari badan hingga kaki/kuku ternak. Tujuannya yaitu agar  performance dan kondisi ternak selalu dalam keadaan bersih dan terawat. Sedangkan untuk pemotongan kuku dilakukan rutin 6 bulan sekali. Pemberian pakan hijauan dilakukan setelah pekerjaan sanitasi kandang dan ternak telah selesai dilakukan. Pemberian pakan hijauan dilakukan 2 kali dalam sehari. Pemberian pagi hari dilakukan jam 08.00 - 08.30 WIB dan  pemberian sore hari dilakukan jam 13.30 - 14.00 WIB. Pemberian pakan hijauan untuk sapi resipien sebanyak 10% dari bobot badan atau disesuaikan dengan kondisi fisiologisnya, yaitu sekitar 25-30 kg/ekor. Jenis pakan hijauan yang tersedia adalah rumput gajah, rumput odot dan Star Grass. Rumput dichopping  terlebih dahulu sebelum diberikan ke ternak untuk jenis rumput gajah, sedangkan rumput odot dan  star grass tidak perlu dichopping. Pada saat kekurangan HPT maka pakan sapi resipien ditambahkan silasi tidak melebihi dari 20% hijauan.

(a) (b) Gambar 10. (a) Pemberian pakan hijauan, (b) Pemotongan kuku Pemberian pakan konsentrat diberikan satu kali dalam sehari setelah  pemberian pakan hijauan yaitu pada sekitar jam 09.00  –   09.30 WIB. Pemberian konsentrat untuk resipien yaitu sebanyak 1% dari bobot badan atau disesuaikan dengan kondisi fisiologisnya. Pakan konsentrat yang diberikan untuk sapi resipien memiliki kandungan PK 16%. Konsentrat diperoleh dari pengolahan konsentrat milik BET Cipelang Bogor bagian Hijauan Pakan Ternak (HPT). Bahan-bahan yang digunakan sebagai penyusun konsentrat adalah CGF, pollard, onggok, dedak, kopra, bungkil kelapa sawit, bungkil kedelai, dan molasses. 4.2.2 Seleksi Resipien Sapi resipien adalah sapi yang memenuhi kriteria organ reproduksi yang  baik, bebas dari p enyakit yang menular, fertilitas baik, mothering abillity tinggi,  performa tubuh baik dan mempunyai rekording yang baik. Adapun kriteria ternak yang dapat dijadikan resipien:

30

a. Ternak resipien adalah dara atau induk dalam kondisi tidak bunting, memiliki organ reproduksi baik dan memiliki catatan reproduksi / siklus berahi normal;  b. Performa tubuh baik dan sehat dengan Body Condition Score (BCS) score sekitar 3 –  3,5; c. Sehat, tidak menunjukkan gejala klinis pen yakit hewan menular strategis; d. Terseleksi setelah palpasi rektal, pada salah satu ovarium memiliki corpus luteum (CL) fungsional. e. Tidak pernah mengalami gagal bunting lebih dari 2 kali.

Gambar 11. Konformasi tubuh dari sapi resipien

Seleksi induk sapi yang dijadikan sebagai ternak resipien dilakukan dengan memeriksa keadaan reproduksinya. Sapi dengan kondisi organ reproduksi yang memenuhi syarat digunakan sebagai ternak resipien yang meliputi tingkat fertilitas yang tinggi, sehat dan terbebas dari penyakit menular (Kain, Said, dan Tappa, 2008). 4.2.3 Sinkronisasi Estrus Ternak Resipien Sinkronisasi birahi (sinkronisasi estrus) merupakan suatu teknik menyeragamkan program perkawinan dalam kurun waktu tertentu dan dapat diramalkan pada sekelompok hewan (Ratnawati, Adinata, dan Lutfi., 2015). Penggunaan teknik sinkronisasi birahi mampu meningkatkan efisiensi produksi dan reproduksi kelompok ternak, serta mengoptimalkan pelaksanaan inseminasi  buatan dan transfer embrio. Manfaat sinkronisasi birahi diantaranya adalah optimalisasi dan efisiensi pelaksanaan IB, mempercepat birahi kembali, mengatasi permasalahan silent heat, memperpendek days open (DO), dan sebagai manajemen reproduksi resipien pada kegiatan transfer embrio (Fauzi, Suyadi, dan Susilawati., 2017). Teknik penyerentakan estrus (sinkronisasi birahi) pada ternak sapi dapat dilakukan dengan menggunakan preparat hormon yang mengandung  prostaglandin (PGF 2α). Hormon ini akan bekerja dengan melisiskan korpus luteum sebagai tempat produksi hormon progesteron yang menghalangi munculnya estrus pada ternak sapi (Saili, Baa, Sani, Rahadi, Sura, dan Lopulalan.,

31

2016). Secara normal estrus akan muncul pada jam ke 64 atau hari ke 3 setelah  penyuntikan hormon prostaglandin (Saili, Bain, Aku, Rusdin, dan Aka, 2011). Pada hari yang bersamaan munculnya estrus, kegiatan transfer embrio pada sapi resipien dapat dilakukan untuk mendapatkan kebuntingan pada ternak sapi. Jenis  protokol sinkronisasi estrus pada sapi resipien di BET Cipelang Bogor dapat dilihat pada Tabel 6, 7, 8. Tabel 6. Protokol berdasarkan sinkronisasi b irahi menggunakan progesteron devise Hari kePerlakuan resipien 0

Pasang progesteron device dan suntik estradiol sebanyak 2mg

7

Cabut progesteron device dan suntik PGF2α sebanyak 25mg

8

Suntik estradiol sebanyak 1mg

9 – 11

Pengamatan estrus

Tabel 7. Protokol berdasarkan adanya corpus luteum menggunakan single dosis Hari ke- Perlakuan resipien 0

Suntik PGF2α

13 - 14

Pengamatan estrus

Tabel 8. Protokol berdasarkan tidak adanya corpus luteum menggunakan double dosis Hari ke-

Perlakuan resipien

0 11

Suntik PGF2α Suntik PGF2α

13 – 14

Pengamatan estrus

Berdasarkan pengamatan yang dilakukan selama Praktik Kerja Lapang, diperoleh hasil pengamatan sinkronisasi birahi (sinkronisasi estrus) menggunakan  protokol pemasangan  progesteron device. Pada protokol ini dilakukan  pemasangan progesteron device agar mampu merangsang hormon progesteron dan penyuntikan estradiol yang berfungsi untuk menimbulkan estrus atau birahi  pada hewan betina. Setelah hari ke 7 dilakukan pencabutan  progesteron device dan penyuntikan PGF2α untuk melisiskan progesteron. Fauzi, dkk (2017)

mendukung bahwa hormon PGF2α berperan dalam meregresi korpus luteum untuk memperpendek siklus birahi dan mengembalikan siklus birahi pada fase folikuler. Regresinya corpus luteum yang disertai dengan turunnya jumlah hormon progesteron akan memberikan respon terhadap hipotalamus yang nantinya akan merangsang terjadinya proses pensekresian hormon-hormon birahi yaitu Gn-RH, FSH, estrogen dan LH. Kemudian disuntik kembali dengan estradiol pada hari ke 8 dan dilakukan pengamatan pada hari ke 9 sampai 11.

32

Ada beberapa upaya yang dilakukan untuk percepatan estrus antara lain  pemberian penambahan CIDR (Controlled Internal Drug Release) pada perlakuan sinkronisasi birahi dengan menggunakan hormon pro gesteron. Penggunaan CIDR ini adalah sebagai sumber progesteron yang akan diserap secara perlahan (Mardiansah, Yuliani, dan Prasetyo., 2016). Hormon progesteron merupakan hormon steroid yang disekresikan oleh sel korpus luteum, placenta dan kelenjar andrenal. Sekresi hormon progesteron sangat tergantung dari siklus estrus, kadar tertinggi hormon progesteron berada  pada fase luteal karena korpus luteum merupakan sumber utama dari hormon  progesteron dan kadar terendah adalah fase folikel (Pemayun, 2010). 4.3 Evaluasi Embrio 4.3.1 Teknik Evaluasi Embrio Evaluasi embrio merupakan penilaian kualitas terhadap kualitas embrio yang diperoleh disesuaikan dengan standar yang berlaku. Berdasarkan Standar Operasional Prosedur (SOP), perlakuan selanjutnya adalah : 1. Hasil flushing  disaring dengan filter embrio dan dipindahkan kedalam cawan  petri bergaris untuk memudahkan pencarian embrio dibawah mikroskop stereo. 2. Setelah embrio diperoleh, selanjutnya dikoleksi dalam cawan petri yang  berukuran lebih kecil (cawan petri ukuran 30x10 mm) yang berisi media handling embrio dengan menggunakan per angkat pipet pasteur. 3. Klasifikasi embrio; Embrio yang dikoleksi diamati di bawah mikroskop stereo dengan perbesaran 50-60 kali untuk dievaluasi fase dan kualitasnya yang ditentukan berdasarkan standar yang berlaku. Teknik evaluasi embrio yang diterapkan di BET Cipelang pada saat dilakukan PKL adalah sebagai berikut : 1. Hasil flushing  yang telah diperoleh dari proses pemanenan embrio di lapang, apabila terdapat lendir maka lendir diambil dengan menggunakan kanula, 2. Penyaringan embrio dilakukan dengan menggunakan filter, 3. Sisa dari penyaringan tersebut, dituangkan kedalam petridisk 100x100 4. Apabila terdapat gelembung udara, dilakukan fiksasi dengan menggunakan korek api agar tidak mengganggu penglihatan saat dilakukan pengamatan embrio, 5. Pengamatan embrio dilakukan dengan menggunakan mikroskop stereo  perbesaran 50-60 kali, 6. Kualitas embrio dinilai berdasarkan standar yang telah ditetapkan oleh IETS.

33

Gambar 12. Filtrasi Embrio (Sumber: Dokumentasi Pribadi).

Embrio yang telah diperoleh dari proses flushing  sesegera mungkin harus dibawa ke laboratorium untuk dilakukan evaluasi dan  grading   embrio. Evaluasi sangat penting dilakukan untuk menentukan kualitas dari embrio yang layak untuk diproses lebih lanjut maupun untuk dilakukan transfer segar. Hasil dari evaluasi embrio yang dilakukan juga digunakan untuk melakukan penilaian terhadap  produktivitas embrio dari ternak tersebut. Banyak sedikitnya embrio yang dihasilkan tergantung pada bangsa dan individu ternak. Menurut Jodiansyah, (2013) bahwa faktor yang mempengaruhi tinggi dan rendahnya embrio layak transfer meliputi faktor fisiologis saat pemanenan embrio, faktor genetik, pakan dan kesehatan organ reproduksi. Ternak donor yang mengalami penurunan  produksi embrio yang cukup drastis akan dilakukan evaluasi dan pemeriksaan. Penurunan produksi embrio dapat dikarenakan berbagai faktor diantaranya fisiologis ternak, umur, pakan, dan adanya gangguan organ reproduksi. 4.3.2 Klasifikasi Embrio SOP dar penilaian kualitas embrio di Balai Embrio Ternak (BET) Cipelang  berdasarkan kriteria  zona pellucida  yang rata warnanya, kekompakan sel,  persentase sel yang mengalami degenerasi, permukaan trophoblast yang rata, warna khas, kekompakan sel, dan ukuran banyaknya vesicles. Kualitas embrio dinilai berdasarkan fase perkembangan ( stage) dan kualitas (quality) embrio. Dengan mengacu pada standar penilaian yang ditetapkan oleh  International  Embryo Transfer Society  (IETS). Adapun daftar kode fase untuk penilaian  perkembangan embrio dapat dilihat pada Tabel 9. Sedangkan untuk kriteria kualitas embrio diuraikan pada Tabel 10. Tabel 9. Fase embrio Fase Keterangan

Fase 1

Unfertilized

34

Fase 2 Fase 3

Embrio dengan 2 s/d 12 sel  Early Morulla

Fase 4 Fase 5 Fase 6 Fase 7 Fase 8 Fase 9

 Morulla  Early Blastocysts  Blastocysts  Expanded Blastocysts  Hatched Blastocysts  Expanded Hatched Blastocysts

Tabel 10. Kriteria kualitas embrio

Fase Kualitas 1 :  Excellent or Good

Keterangan 







Kualitas 2 : Fair 





Kualitas 3 : Poor





Kualitas 4 :  Dead or Degenerating 

Bentuk embrio simetris dan bulat ( spherical ) dengan  blastomere yang seragam baik pada ukuran, warna maupun kepadatannya Embrio harus memiliki bentuk yang konsisten dengan perkiraan fase perkembangan embrio itu sendiri. Bentuk irregular relative minor  Memiliki minimal 85% material selular dalam keadaan intact dan massa embrio hidup Zona pelusida harus bulat, mulus, tidak menempel  pada cawan petri atau pipet Secara umum memiliki bentuk yang tidak teratur (irregular) dalam kategori sedang dalam hal massa embrio, ukuran, warna dan kepadatan sel-sel individual. Memiliki sel intact  dan massa embrio hidup minimal sebanyak 50% Embrio didominasi bentuk yang tidak teratur pada  bentuk massa embrio, ukuran, warna, dan kepadatan individu sel Memiliki sel intact dan massa embrio hidup minimal sebanyak 25%



Embrio degenerasi



Oosit



Embrio 1 sel : tidak hidup/mati

Embrio yang layak transfer dan dapat dibekukan lebih lanjut adalah embrio yang mencapai perkembangan fase 4 (morulla) sampai dengan fase 8 (hatched blastocyst ) dan memiliki kualitas 1 dan 2. Embrio dengan fase 9 ( expand hatched blastocyst ) dapat digunakan sebagai embrio yang akan dilakukan proses transfer segar. Embrio dengan kualitas 3 dapat ditransfer segar atau dilakukan

35

kultur. Embrio dengan fase 3 (early morulla) dilakukan kultur untuk  perkembangan lebih lanjut.

A

 b

c

D

e

f

Gambar 13. Fase-Fase Embrio a) unfertil ; b) morula; c) blastocyst ; d) expanded blastocyst ; e) expanded hatched blastocyst ; f) degeneratif (Sumber: Laboratorium Balai Embrio Ternak).

Klasifikasi embrio di BET dikategorikan berdasarkan kualitas yang dikelompokkan menjadi 4 kategori yaitu kualitas 1)  Excellent or Good , kualitas 2) Fair , kualitas 3)  Poor , kualitas 4)  Dead or degenerating. Penentuan kualitas embrio berdasarkan atas pemeriksaan secara morfologi. Menurut Waluyo (2014) menyatakan bahwa kriteria yang digunakan untuk evaluasi dan klasifikasi embrio yakni : 1. Kekompakan antara sel, 2. Kesimetrisan bentuk embrio, 3. Variasi dalam ukuran, 4. Warna dan susunan sitoplasma, 5. Ada tidaknya vesikel, 6. Adanya sel-sel yang keluar dari ikatan sel, 7. Diameter, 8. Keteraturan zona pelusida, 9. Adanya debrisel seperti reruntuhan sel dan granulasi, umur dan stadia  perkembangan embrio. Berdasarkan hasil evaluasi yang dilakukan di Laboratorium BET Cipelang, embrio yang memiliki kualitas 1 dan kualitas 2 merupakan kriteria embrio yang layak untuk diproses lebih lanjut. Secara komersial, embrio yang dipilih untuk kriopservasi adalah embrio yang berkualitas baik mulai dari stage 4 (morula) hingga  stage 7 (expanded blastocyst ) (Hasler, 2014). Embrio yang

36

memiliki kualitas 1 dan kualitas 2 merupakan jenis embrio yang baik karena embrio berkembang secara normal serta memiliki massa hidup antara 50-85%. Embrio dengan kualitas 3 tidak akan dilakukan proses lebih lanjut, akan tetapi embrio tersebut akan langsung dilakukan transfer secara segar jika ada ternak resipien yang siap untuk TE (transfer embrio segar). Hal tersebut dikarenakan embrio dengan kualitas 3 memiliki sel intact dan massa embrio yang rendah. Menurut Wydooghe, Heras, Dewuli, Piepers, Abbeel, Sutter, Vandaele and Soom (2013) bahwa pada sapi donor sering terdapat sedikit oosit yang tidak dibuahi. Metode yang dapat digunakan untuk mengatasi embrio tersebut adalah dengan kultur embrio secara in vitro. Evaluasi embrio hasil  flushing  yang dilakukan akan menghasilkan embrio dengan jumlah dan kualitas yang berbeda-beda. Tabel 11. Data Produksi Embrio di Balai Embrio Ternak Cipelang Bogor pada Bulan Juli 2018 (Sumber: PPID BET Cipelang). NO

TANGGAL FLUSHING

1

2-Jul-18

2

DONOR

KUALITAS EMBRIO LT

DG

UF

TOTAL

SIMMENTAL

0

0

0

0

5-Jul-18

LIMOUSIN

4

0

1

5

3

5-Jul-18

SIMMENTAL

1

0

0

1

4

9-Jul-18

SIMMENTAL

1

5

4

10

5

11-Jul-18

BRAHMAN

0

0

0

0

6

25-Jul-18

LIMOUSIN

9

2

4

15

7

25-Jul-18

LIMOUSIN

2

0

2

4

Keterangan: LT (layak transfer); DG (Degeneratif); UF (Unfertil).

Keterampilan petugas dalam melakukan penilaian dan  grading   terhadap embrio menjadi salah satu faktor yang paling penting pada tahapan ini. Perbedaan kualitas embrio tersebut dikarenakan tingkat kematangan oosit pada saat sapi donor disuperovulasikan berbeda-beda. Berbagai faktor yang dapat mempengaruhi kualitas dari embrio yang dihasilkan diantaranya adalah faktor genetik, umur, kesehatan organ reproduksi, karakteristik fisiologis dan pakan. Manajemen pemberian pakan berperan penting untuk produksi embrio, sapi dengan protein pakan yang kurang memiliki folikel dominan berukuran lebih kecil dan siklus lebih dari 3 gelombang dibandingkan sapi dengan asupan pakan dengan protein lebih tinggi (Hardiyanto, dkk 2016) 4.4 Pengemasan Embrio (Loading) Standar Operasional Prosedur (SOP) yang digunakan oleh Balai Embrio Ternak (BET) adalah sebagai berikut : A. Kemasan Embrio

37



Straw transparan dengan ukuran 0.25 ml,



Kondisi kemasan harus tertutup,



Setiap straw berisi satu embrio,

Kemasan harus dilengkapi dengan identitas. B. Pengemasan 



 

Media yang digunakan untuk pembekuan embrio disesuaikan dengan metode  pembekuan yang digunakan, Straw yang digunakan untuk kemasan embrio berwarna transparan, Saat memasukkan embrio ke dalam straw (loading), posisikan media, rongga udara serta embrio dalam posisi bergantian sesuai den gan metode pembekuan yang digunakan,

Embrio yang layak transfer dan dibekukan dimasukkan dalam straw dengan  jumlah masing-masing straw 1 (satu) embrio. C. Identitas Embrio, tercantum dalam kode embrio, susunan identitas embrio memuat: 





Baris pertama memuat informasi kode produsen, nomor betina dan nomor urut embrio, Baris kedua memuat informasi kode semen/pejantan dan tanggal pembekuan

Baris 1. Kode Produsen

Nomor Betina

 Nomor Pejantan

Tanggal Produksi

Nomor Urut Embrio

Baris 2.

Contoh Pengkodean Embrio : BET Kode Produsen Embrio

80744 Nomor Betina

200LM0309  Nomor Pejantan

130114 Tanggal Produksi

1.6.1 Nomor Urut

BET 80744 1.6.1 200LM0309 130114

Pengemasan embrio (loading ) perlu dilakukan untuk mempermudahkan dalam penyimpanan maupun transfer embrio. Praktik pengemasan embrio selama PKL dilakukan dengan langkah-langkah sebagai ber ikut : 1. Apabila telah menemukan embrio dengan kualitas yang telah ditentukan, maka akan dilakukan pencucian dengan menggunakan NaCl fisiologis. Pengambilan

38

embrio dilakukan dengan menggunakan pipet pasteur dan diletakkan dalam petri disk berukuran 30x10 mm, 2. Embrio dipindahkan kedalam petri disk kedua yang berisi media, 3. Straw diisi embrio, media dan udara secara berseling dengan menggunakan disposable syiringe dengan susunan sebagai berikut :

Keterangan :

: Sumbat laboratorium/PVA : Media : Udara : Embrio

: Sumbat pabrik 4. Straw ditutup dengan menggunakan straw po wder (PVA), 5. Label straw ditempelkan pada bagian cutton plug ,

Gambar 14. Loading Embrio (Sumber: Dokumentasi Pribadi).

Pengemasan embrio di BET Cipelang dilakukan dengan menggunakan mini straw dengan ukuran 0,25 ml. Satu straw berisi satu embrio. Straw yang digunakan hanya terdiri dari satu warna, biasanya menggunakan straw dengan warna trasparan. Media yang digunakan sebagai media kriopreservasi embrio terdiri dari PBS dan etilen glikol. Embrio yang telah dikoleksi, selanjutnya akan diletakkan dalam medium Phosphate Buffered Salline (PBS) (Febretrisiana, Setiadi dan Karja, 2015). Pengemasan embrio ke dalam straw memerlukan udara untuk menjaga agar embrio tetap berada pada bagian tengah straw. Pelabelan straw dilakukan secara manual. Pembuatan label sesuai dengan ketentuan yang telah ditetapkan oleh BET. Pemasangan label dilakukan setelah proses pengemasan embrio pada straw

39

( Loading ). Label straw yang telah d ibuat selanjutnya akan ditempelkan straw pada  bagian cutton plug  dengan menggunakan perekat. 4.5 Pembekuan dan Penyimpanan Embrio Embrio yang telah dilakukan seleksi dan  grading   selanjutnya dilakukan  penyimpanan dan pembekuan. Berikut merupakan tahapan d alam pembekuan dan  penyimpanan embrio yang dilakukan di BET Cipelang : 4.5.1 Pembekuan Embrio SOP dari pembekuan embrio disesuaikan dengan prosedur pembekuan embrio yang digunakan. Pembekuan dilakukan dengan cara sebagai berikut : 1.  Nitrogen cair dari dalam container diambil dan dituangkan kedalam cryobath, 2. Cryochamber   dimasukkan kedalam cryobath  yang telah berisi nitrogen cair dan ditunggu hingga suhu menurun, 3. Straw yang telah berisi embrio dimasukkan dalam cryobath, ditunggu hingga suhu -60C, 4. Lakukan seeding  dengan cara : a. Letakkan pinset pada nitrogen cair selama ± 1 menit,  b. Angkat straw dari cryobath, c. Jepit bagian media dibawah label, pastikan terbentuk kristal es di dalam straw, d. Masukkan straw dan tutup cryochamber  dan tunggu hingga suhu -30 0C, 5. Pindahkan straw yang telah dilakukan seeding kedalam container.

Gambar 15. Proses Seeding (Sumber: Dokumentasi Pribadi).

Terdapat 2 jenis metode pembekuan yakni metode pembekuan secara cepat (vitrifikasi) dan metode pembekuan secara lambat (konvensional). Pembekuan embrio di BET Cipelang dilakukan dengan menggunakan metode  slow freezing   atau biasanya dikenal dengan metode konvensional. Prinsip dari metode ini yakni melakukan pembekuan secara bertahap ( step by step freezing )  pada suhu yang berbeda. Pada metode ini dilakukan  seeding   pada suhu -60C selama ± 1-2 menit untuk membentuk kristal-kristal es. Ditunggu hingga suhu turun menjadi -30 0C. Tujuan dari dilakukan  seeding yakni untuk meminimalisir kerusakan yang ditimbulkan akibat cold shock   sebelum dilakukan penyimpanan

40

 pada suhu -1960C. Pembekuan yang dilakukan pada suhu yang tinggi dapat menyebabkan embrio rentan mengalami kerusakan, sehingga diperlukan kriprotektan untuk melindungi embrio dari kerusakan. Oosit dengan masa yang  besar dan bentuk sel yang bulat memerlukan penggunaan krioprotektan yang  permeabel dengan toksisitas rendah diantaranya etilen glikol (Pamungkas, 2010). Etilen glikol digunakan sebagai krioprotektan intraseluler yang akan melindungi embrio dari dalam karena mampu menembus membran sel. 4.5.2 Penyimpanan Embrio Penyimpanan embrio di Balai Embrio Ternak (BET) dilakukan dengan cara sebagai berikut : a. Straw embrio disimpan dengan menggunakan goblet dalam canister, embrio harus selalu terendam penuh dalam Nitrogen Cair (LN2) dengan suhu -196 0C  pada container kriogenik (cryogenic) dengan tujuan untuk menjaga kualitas embrio.  b. Setiap kontainer kriogenik dilengkapi dengan kartu petunjuk yang menerangkan isi kontainer. Penyimpanan embrio hanya dilakukan untuk embrio yang telah lolos  grading   sesuai dengan standar kualitas yang telah ditetapkan oleh BET. Embrio yang akan di transfer segar ke ternak resipien tidak memerlukan proses  penyimpanan dan pembekuan sebelumnya. Sebelum dilakukan penyimpanan embrio, pastikan terdapat nitrogen cair (LN2) didalam container. Embrio yang telah melalui proses  seeding , diambil straw dari cryochamber   kemudian diletakkan pada goblet dan ditutup container. Suhu yang digunakan dalam  penyimpanan embrio adalah -1960C. Pengecekan ketersediaan nitrogen cair dalam container perlu dilakukan secara kontinyu untuk memastikan ketersediaan nitrogen dalam container. Embrio yang telah disimpan dalam kontainer (embrio  beku) dapat digunakan untuk TE dalam jangka waktu yang lama. 4.6 Transfer Embrio Transfer embrio (TE) dilakukan untuk mendapatkan keturunan murni yang memiliki genetik mirip seperti induknya. Adapaun langkah-langkah yang harus dipersiapkan adalah persiapan transfer embrio dan pelaksanaan transfer embrio. 4.6.1 Persiapan Transfer Embrio Berdasarkan pengamatan saat kegiatan TE di Balai Embrio Ternak dilakukan apabila ternak, khususnya ternak resipien, telah memenuhi beberapa  persyaratan. Salah satunya yaitu d itemukannnya korpus luteum d engan kondisi  baik (diameter CL minimal 2,5 cm). Keberadaannya dapat diketahui setelah dilakukan kegiatan palpasi rektal dan dengan bantuan alat ultrasonography (USG). Selain itu performa tubuh resipien tidak terlalu gemuk maupun kurus dengan perkiraan BCS ( Body Condition Score) antara 2,5-3.0 dan tidak memiliki kelainan reproduksi. Hal ini sesuai dengan Lestari, Ismudiono, Sardjito, Srianto

41

(2016) bahwa respon keberhasilan sinkronisasi dipengaruhi oleh pemberian pakan  pada ternak dengan nutrisi yang cukup, BCS berkisar 2,8-3,5, tidak terdapat cacat reproduksi, ovarium dan corpus luteum normal. Selanjutnya tersedianya embrio yang siap untuk ditransfer. Adapun  peralatan untuk kegiatan transfer embrio terdiri dari Gun TE, spuit 5 ml, jarum suntik 18 G,  sheat   TE dan outer sheat , sarung tangan plastik, gunting  straw,  pinset, termometer, form seleksi resipien, fo rm aplikasi transfer embrio. Bahan bahan yang diperlukan antara lain embrio, preparat anastesi, kapas alkohol, tisu. Beberapa hal di atas telah sesuai dengan Standar Operasional (SOP) yang diterapkan di BET. 4.6.2 Pelaksanaan Transfer Embrio Berdasarkan pengamatan yang telah dilakukan pada tanggal 27 Juli 2018 kegiatan TE yang dilakukan dengan menggunakan metode TE beku. Transfer embrio dilakukan pada hari ketujuh setelah ternak resipien mengalami birahi. Pada saat pengamatan telah ditemukan corpus luteum sehingga dapat dilakukan TE saat hari itu juga. Tahapan pelaksanaan TE pada saat pengamatan telah disesuaikan dengan Standar Operasional (SOP) yang diterapkan di Balai Embrio Ternak Cipelang: 1. Persiapan ternak resipien yang telah diseleksi terlebih dahulu. 2. Persiapan alat dan bahan untuk TE. 3. Anastesi dilakukan pada bagian pangkal ekor ternak yang bertujuan untuk merilekskan tubuh bagian belakang termasuk organ reproduksi dan menghilangkan rasa sakit saat dimasuki ben da asing. 4. Thawing   dengan mengambil straw yang berisi embrio pada kontainer menggunakan penjepit, diangin-anginkan selama ±10-15 detik, dimasukkan ke dalam air hangat suhu sekitar 38,5 0C selama 10-15 detik. Namun terdapat rentang suhu thawing  yang diperkirakan berkisar 36-38oC. 5. Straw dikeringkan dengan tisu, dimasukkan dalam gun TE, dipotong ujung straw, ditutup dengan sheat  TE dan dibungkus dengan outer sheat  TE. 6. Dilakukan TE ke ternak resipien. 7. Dilakukan pencatatan pada form TE oleh petugas meliputi tanggal  pelaksanaan, kode resipien, kode embrio. Berdasarkan pengamatan dan penjelasan petugas TE bahwa embrio ditempatkan di bagian cornua uteri. Selanjutnya dilakukan pengecekan untuk mengetahui keberhasilan sekitar 2-3 bulan s etelah pelaksanaan TE. Hal ini sesuai dengan Campbell et al . (2013) transfer dilakukan langsung ke kornua uteri kurang lebih 5-10 cm dari bifurkasio uteri. Resipien yang tidak menunjukkan gejala birahi setelah 3 siklus birahi yang diharapkan dapat dilakukan pemeriksaan kebuntingan  per rektal untuk menentukan berhasil tidaknya program transfer. Pemeliharaan resipien yang telah bunting sama seperti p emeliharaan-pemeliharaan pada hewan  bunting pada umumnya.

42

Commented [a7]: Ditulis lengkap nama-namanya

Gambar 16. Proses thawing embrio

Berdasarkan informasi yang didapatkan bahwa keberhasilan program TE dipengaruhi oleh beberapa faktor salah satunya keterampilan petugas, kualitas embrio, dan kondisi ternak resipien. Lestari, et al. (2016) mengungkapkan bahwa faktor-faktor keberhasilan TE antara lain: 1. Kualitas embrio yang ditransfer; seperti umur f ase, jenis embrio (beku/segar), metode pembekuan dan adanya kontaminasi atau infeksi pada embrio tersebut. 2. Keahlian operator dalam melakukan TE meliputi kapabilitas dalam menempatkan embrio ke apex cornua uteri, melakukan transfer dengan cepat dalam waktu yang tepat, tidak terjadi luka pada u terus sehingga ternak merasa tenang dan tidak stres. 3. Kondisi ternak resipien yang memenuhi persayaratan ( BCS, pemberian pakan  bernutrisi cukup dan organ reproduksi normal). Adapun data pelaksanaan TE di BET periode Mei-Juli dapat dilihat pada Tabel 12. Tabel 12. Data TE di BET pada Bulan Mei-Juli. No

1 2 3 4

Tgl TE

02May-18 07May-18 11May-18 11May-18

Jenis Embrio Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue

Asal Embrio

Jumlah Embrio

Resipien

Belgia

1

FH

Belgia

1

Limousin

Belgia

1

FH

Belgia

1

FH

Lokasi

BET Cipelang BET Cipelang BET Cipelang BET Cipelang

Posisi Ka Ki

Metode

-

√ 

Direct

√

-

Direct

-

√ 

Direct

-

√ 

Direct

43

5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27

13May-18 13May-18 13May-18 13May-18 16May-18 16May-18 16May-18 18May-18 18May-18 18May-18 18May-18 18May-18 18May-18 18May-18 18May-18 18May-18 22May-18 22May-18 22May-18 22May-18 23May-18 24May-18 26-Jun18

Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue Belgian Blue BET

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

Belgia

1

BET Cipelang

1

BET Cipelang BET FH Cipelang BET FH Cipelang BET FH Cipelang BET FH Cipelang BET FH Cipelang BET FH Cipelang BET Limousin Cipelang BET FH Cipelang BET FH Cipelang BET FH Cipelang BET FH Cipelang BET FH Cipelang BET FH Cipelang BET FH Cipelang BET FH Cipelang BET Simmental Cipelang BET Limousin Cipelang BET Limousin Cipelang BET Limousin Cipelang BET Limousin Cipelang BET Limousin Cipelang

√

-

Direct

√

-

Direct

√

-

Direct

-

√ 

Direct

-

√ 

Direct

-

√ 

Direct

√

-

Direct

√

-

Direct

√

-

Direct

-

√ 

Direct

√

-

Direct

√

-

Direct

√

-

Direct

√

-

Direct

√

-

Direct

√

-

Direct

-

√ 

Direct

√

-

Direct

√

-

Direct

√

-

Direct

-

√ 

Direct

-

√ 

Direct

BET Cipelang

√ 

-

Segar

FH

Limousin

44

05-Jul- Belgian Belgia 18 Blue 10-Jul- Belgian 29 Belgia 18 Blue Sumber: PPID BET Cipelang. 28

1

FH

1

FH

BET Cipelang BET Cipelang

√

-

Direct

√

-

Direct

Kegiatan TE terbanyak dilaksanakan pada Bulan Mei 2018 sebanyak 26 kali dengan 18 diantaranya menggunakan resipien sapi FH. Alasan digunakannya sapi FH sebagai resipien yaitu memiliki serviks yang lebih besar dibanding jenis sapi lain sehingga dapat menjadi tempat berkembang yang ideal bagi embrio sapi  berbobot b adan besar dan produksi susu tergolong tinggi. Adapun embrio yang digunakan sebagian besar dari jenis Belgian Blue dan berasal dari Belgia. Hal ini dikarenakan sapi jenis tersebut memiliki keunggulan genetik, pertumbuhan bobot  badan cepat, dan menjadi target pengembangan oleh pemerintah untuk mencapai swasembada protein.

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan Berdasarkan kegiatan yang dilakukan selama masa praktek kerja lapang (PKL) di Balai Embrio Ternak bahwa produksi embrio dilakukan secara in vivo menggunakan ternak donor yang telah diseleksi sebelumnya. Program produksi embrio terdiri dari beberapa tahap yaitu sinkronisasi birahi, superovulasi, inseminasi buatan dan flushing. Selanjutnya dilakukan evaluasi embrio untuk menilai kualitas embrio yang telah dipanen berdasarkan kriteria yang telah ditetapkan oleh IETS. Embrio yang telah dievaluasi kemudian dimasukkan ke dalam straw dan disimpan pada suhu beku (-196 oC). Proses transfer embrio (TE) dilakukan apabila ditemukan corpus luteum pada salah satu ovary ternak resipien sehingga kegiatan transfer embrio dapat dilakukan pada hari tersebut. Ternak resipien yang digunakan memiliki performa tubuh yang ideal dan tidak mengalami gangguan reproduksi. Pelaksanaan TE terdiri dari anastesi, thawing, memasukkan straw ke dalam gun TE, transfer embrio, dan diperiksa kembali pasca dua sampai tiga bulan untuk menilai keberhasilan program TE.

5.2 Saran Adapun saran yang dapat menjadi pertimbangan untuk lebih diperbaiki  pembagian jadwal kegiatan praktek di laboratorium maupun kandang yang menyesuaikan dengan program produksi dan transfer embrio terutama untuk mengantisipasi banyaknya peserta magang.

45

46

DAFTAR PUSTAKA

Adifa, N. S., Astuti, P., dan Widayati, D. T. 2010. Pengaruh Penambahan Chrionic Gonadotrophin pada Medium Maturasi Terhadap Kemampuan Maturasi, Fertilisasi, dan Perkembangan Embrio secara In Vitro Kambing Peranakan Ettawa. Buletin Peternakan. 34 (1): 8  –  15. Arifiantini, R. I., Purwatara, B., Yusuf, T. L., Sajuthi, D., dan Amrozi. 2010. Angka Konsepsi Hasil Inseminasi Semen Cair Versus Semen Beku pada Kuda yang Disinkronisasi Estrus dan Ovulasi. Media Peternakan. 33 (1) : 1  –  5. Campbell, A., Fishel S., Bowman N., Duffy S., Sedler M., and Thorton S. 2013. Retrospective Analysis Of Outcomes After IVF Using An Aneuploidy Risk Model Derived From Time-Lapse Imaging Without PGS.  Reprod Biomed Online. 27 (2) : 140-146. Fauzi, M. R., Suyadi, dan Susilawati, T. 2017. Pengaruh Pemberian Prostaglandin F2 Alpha Terhadap Waktu Kemunculan Birahi dan Keberhasilan I nseminasi Buatan Sapi Brahman Cross (Bx) Heifers. Jurnal Ilmu-Ilmu Peternakan. 27 (3): 39 –  43. Febretrisiana, A., Setiadi, M. A., dan Karja, N. W. K. 2015. Tingkat Fertilisasi Oosit Domba dari Ovarium yang Disimpan pada Suhu dan Waktu yang Berbeda Secara In Vitro. Jurnal Kedokteran Hewan. 9 (2): 109 - 113. Gunawan, M., Fahrudin, M. dan Boediono, A. 2014. Perkembangan Embrio Sapi Setelah Fertilisasi Menggunakan Metode Intracytoplasmic Sperm Injection (ICSI) dan Aktivasi dengan Strontium. Jurnal Kedokteran Hewan. 8 (2): 154 - 157. Hardiyanto, D., Sumantri, C., dan Zamantri, D. 2016. Kualitas Embrio pada Sapi Simmental dan Limousin dengan Kadar Protein Pakan Berbeda. Jurnal Ilmu  Produksi dan Teknologi Hasil Peternakan. 4 (2): 319 - 324. Hasler, J. F. 2014. Forty Years of Embryo Transfer in Cattle. Theriogenology. 81: 152 - 169. Herawati, T., Anggraeni, A., Praharani, L., Utami, D., dan Argiris, A. 2017. Peran Inseminator dalam Keberhasilan Inseminasi Buatan pada Sapi Perah. Informatika Pertanian. 21 (2): 81  –  88. Imron, M., Supriatna,I., Amrozi., dan Agus, M. S. 2016. Respons Superovulasi Sapi Peranakan Ongole terhadap Penyuntikan Tunggal Follicle Stimulating Hormone ke dalam Ruang Ep idural. Jurnal Veteriner Maret . 17(1): 78-87. Jodiansyah, S., Imron, M., dan Sumantri, C.2013.Tingkat Respon Superovulasi dan Produksi Embrio In Vivo dengan Sinkronisasi CIDR ( Controlled Internal  Drug Releasing ) pada Sapi Donor Simmental.  Jurnal Ilmu Produksi dan Teknologi Hasil Peternakan. 1(3): 184 - 190. Kain, E. M., Said, S., dan Tappa, B. 2008. Kelahiran Anak Sapi Hasil Fertilisasi secara in Vitro dengan Sperma Hasil Pemisahan. Media Peternakan. 3 (1): 22  –  28.

47

Commented [a8]: Ini apakah sudah sesuai? Kurang tau, bukan  jurnalku. Tp kelihatannya sesuai hehe

Commented [u9R8]:

Lestari, T.D., Ismudiono, Sardjito, T. and Srianto, P. 2016. The Success of Embryo Transfer in Dairy Cattle Recipient Using Beef Cattle Embryos. Scientific  Papers - Animal Science Series. 65: 203 - 208. Mardiansyah, Yuliani, E., dan Prasetyo, S. 2016. Respon Tingkah Laku Birahi, Service Per Conception, Non Return Rate, Conception Rate pada Sapi Bali Dara dan Induk yang Disinkronisasi Birahi dengan Hormon Progesteron. Mohammed, Ahmed. 2018. Artificial Insemination and its Economical Significancy in Dairy Cattle: Review.  International Journal of Research Studies in Microbiology and Biotechnology. 4 (1): 30 - 43. Pamungkas, F. A. 2010. Pemanfaatan Metode Vitrifikasi untuk Kriopreservasi Oosit Mamalia. Wartazoa. 20(3): 112 - 118. Pemayun, T. G. O. 2010. Kadar Progesteron Akibat Pemberian PMSG d an GN-RH  pada Sapi Perah yang Mengalami Anestrus Postpartus.  Buletin Veteriner Udayana. 2 (2): 85 - 91. Pranatasari, D., Kustono, Widayati, D. T. 2016. Suplementasi Hormon Gonadotropin pada Medium Maturasi In Vitro untuk Meningkatkan Perkembangan Embrio Stadium 4 Sel Kambing Bligon.  Buletin Peternakan. 40(2): 83 - 91. Prasetyo, D. 2012. Tingkat Superovulasi pada Beberapa Bangsa Sapi dengan Sumber Follicle Stimulating Hormone (FSH) yang Berbeda . Departemen  Ilmu Produksi dan Teknologi Peternakan Institut Pertanian Bogor . 1 –  49. Ratnawati, D., Adinata, Y., dan Lutfi, M. 2015. Respon Sinkronisasi Berahi pada Induk Sapi Potong dengan Skor Kondisi Tubuh Berbeda pada Peternakan Rakyat. Prosiding Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner . 74 –  80. Saili, T., Baa, L. O., Sani, L. O. A., Rahadi, S., Sura, I. W, dan Lopulalan, F. 2016. Sinkronisasi Estrus dan In seminasi Buatan Menggunakan Semen Cair Hasil Sexing pada Sapi Bali Induk yang Dipelihara dengan Sistem yang Berbeda.  Jurnal Ilmu Ternak . 16 (2): 49 –  55. Saili, T., Bain, A., Aku, A. S., Rusdin, M., dan Aka, R. 2011. Sinkronisasi Estrus Melalui Manipulasi Hormon Agen Luteolitik untuk Meningkatkan Efisiensi Reproduksi Sapi Bali dan Peranakan Ongole di Sulawesi Tenggara.  Agripilus. 21 (1): 50 –  54. Setiawan, A., Dihansih, E., dan Zamanti D. 2017. Penggunaan Preparat  Progesteron dan Hormon Gnrh dalam Penentuan Estrus pada Program Superovulasi Sapi Limosin. Jurnal Pertanian Vol 8(1): 7 - 16. Sophian, E., dan Fifi, A. 2016. Peranan Bioteknologi Reproduksi dalam Peningkatan Kualitras Ternak . Bio Trends. 7(1): 42 - 47. Subchan, F.A., Handarini, R., dan Siswanti, S.W. 2016. Perbedaan Waktu Penyuntikan Hormon FSH Terhadap Respon Superovulasi Sapi Angus.  Jurnal Peternakan Nusantara. 2(2) : 159 –  166.

48

Sutarno. 2016. Rekayasa Genetik dan Perkembangan Bioteknologi di Bidang Peternakan. Proceeding Biology Education Conference. 13 (1): 23 - 27. Suteky, T., Sutriyono, Dwatmadji, dan Sholihin, M. I. 2017. Kualitas Semen Produksi UPTD Bengkulu dan Tingkat Keberhasilan Inseminasi pada Sapi Bali dan Peranakan Simental di Bengkulu. Jurnal Sain Peternakan Indonesia. 12(2) : 221 –  229. Wahjuningsih, S., Hardjopranjoto, S., dan Sumitro, S. B. 2010. Pengaruh Konsentrasi Etilen Glikol dalam Lama Paparan terhadap Tingkat Fertilitas In Vitro Oosit Sapi. Jurnal Kedokteran Hewan. 4(2): 61 - 64. Waluyo, S. T. 2014. Reproduksi Aplikasi pada Sapi. Bandung: PT. SEWU. Wydooghe, E., Heras, S., Dewuli, J., Piepers, S., Abbeel, E. V. D., Sutter, P. D., Vandaele, L., and Soom, A. V. 2013. Replacing Serum in Culture Medium with Albumin and Insulin, Transferrin and Selenium is the Key to Successful Bovine Embryo Development in Individual Culture. Jurnal Compilation.

Adriani., Depison., Rosadi, B., Supriondo, Y., dan Isroli. 2007. Pengaruh Superovulasi Terhadap Jumlah Corpus Luteum Pada Sapi Simbrah. Journal  Indonesia Tropical Animal Agriculture. 32 (3): 207-212. Adriani, Rosadi, B. dan Depison. 2008 . Jumlah dan Kualitas Embrio Sapi Br ahman Cross Setelah Pemberian Hormon FSH dan PMSG (The Quantity and Quality of Brahman Cross Cattle Embryo After Injected FSH and PMSG).  Animal Production. 11 (2) 96‐102. Anonymous. 2015. Teknologi Reproduksi. Artikel Ilmiah. pp. 1-20. Badan Pusat Statistik. 2016.  Jumlah Produksi Daging Sapi di Indonesia. Diakses  pada 27 Desember 2017 pukul 19.48 WIB.

Davis, R. L. 2004.  Embryo transfer in beef cattle. http://www.davisrairdan.com/embryo-transfer.htm. Diwyanto, K. 2008. Pemanfaatan Sumber Daya Lokal Dan Inovasi Teknologi Dalam Mendukung Pengembangan Sapi Potong di Indonesia.  Pemanfaatan Sumber Daya Lokal dan Inovasi Teknologi. 1 (3) : 173-188. Gordon, I. 1994.  Laboratory Production of Cattle Embryos. Cab International, University Press, Cambridge

Grimes, J. F. 2008. Utilization of embryo transfer http://ohioline.osu.edu/anr-fact/pdf/ANR_17_08.pdf.

in

beef

cattle .

49

Hartantyo, Sri. 1987. Embrio Transfer Pada Kambing.  Disertasi. Perpustakaan Fakultas Kedokteran Hewan UGM Yogyakarta. Herren, R. 2000. The Science of Animal Agriculture. 2nd ed. Delmar Thomson Learning, Albany. Kaiin, E, M Dan Tappa, B. 2006 . Induksi Superovulasi Dengan Kombinasi Cidr, Hormon Fsh Dan Hcg Pada Induk Sapi Potong. Media Peternakan. Vol 29(3): 141-146. Kain, E. M., S. Said, dan B. Tappa. 2008. Kelahiran Anak Sapi Hasil Fertilisasi secara in Vitro dengan Sperma Hasil Pemisahan. Media Peternakan. 3 (1): 22-28. Lewis, I. 1996. Conventional Embryo Transfer. In: I. Lewis, J. Owens, S. McClintoch dan M. Trevean (Eds.). Cattle Breeding Technology. Genetics Australia, Australia. Oguri N. and Y. Tsunami. 1974. Non surgical egg transfer mares.  J. Repro. Fert . 41: 313-320. Putro, P.P. 1993.  Petunjuk Laboratorium Fertilisasi In Vitro. Pusat Antar Universitas Bioteknologi UGM. Yogyakarta. pp.10-19. Rusono, Nono. 2015.  Peningkatan Produksi Daging Sapi untuk Mewujudkan  Kedaulatan Pangan Hewani. Prosiding Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner. Hal.12-21. Seidel, G. E. & R. P. Elsden. 1985.  Procedures for Recovery, Bisection, Freezing and Transfer of Bovine Embryos. Colorado State Univ, Colorado. Seidel, G. E. & R. P. Elsden. 1989.  Embryo Transfer in Dairy Cattle. WD Hoard & Sons, Colorado. Situmorang, P., A. Lubis dan E. Triwulaningsih. 1993. Pengaruh jenis hormon terhadap tingkat ovulasi sapi perah yang sedang laktasi.  Ilmu Peternakan 7:13. Situmorang, P., E. Triwulaningsih, A. Lubis., T. Sugiarti., W. Caroline dan K. Diwyanto. 1999. Pengaruh hormon hCG terhadap persentase kebuntingan resipien yang mendapatkan transfer embrio hasil pembuahan secara in vitro.  Laporan penelitian 1999. Susilawati, T., dan Lukman A. 2004. Tantangan dan Peluang Peningkatan  Produktivitas Sapi Potong Melalui Teknologi Reproduksi. Lokakarya  Nasional Sapi Potong. Hal.88-93. Toelihere, M.R. 1981. Fisiologi Reproduksi Pada Ternak. Bandung : CV Angkasa. Utama, Suzanita,. Imam, M., Tjuk, I. R., Sri, M., Tita, D. L.. 2017.  Metode dan Teknik Transfer Embrio. Universitas Airlangga: Surabaya. Vicente, J.S. and Garcia-Ximenez. 1994. Osmotic and cryopreservative effects of a mixture of DMSO and ethylene glycol on rabbit morula. Theriogenology 42: 1205-1215. Wahjuningsih, S., D. Sasmito, E. T Riwulaningasih dan P.Situmorang. 2003. Produksi embrio sapi potong secara murah dengan teknologi IVF dan aplikasinya dalam transfer embrio untuk penyediaan bakalan.  Laporan  PAATP Departemen Pertanian 2003.

50