Laporan Bioteknologi - Ekstraksi Protein Intraseluler

PEMBAHASAN

Ekstraksi Protein Intraseluler

Ekstraksi Ekstraksi protein diawali dengan membiakkan membiakkan bakteri, bakteri,  Escherichia coli, coli, deng dengan an meng mengin inku kuba basi si biak biakan an pada pada inku inkuba bato torr goya goyang ng selam selamaa 18 jam jam guna guna mend mendap apat atka kan n biak biakan an yang ang cuku cukup. p. Inku Inkuba bato torr goy goyang ang adal adalah ah alat alat untu untuk  k  menginkubasi atau memeram mikroba pada suhu yang terkontrol (umumnya di atas suhu ambient) serta dilengkapi dengan pengatur suhu dan pengatur waktu serta dilengkapi dengan dengan pengocok untuk aerasi biakan. Setelah dilakukan inkubasi, biakan disentriugasi untuk mendapatkan pelet sel. !elet sel bakteri diresuspensi dengan !"S. !"S merupakan larutan garam seimbang yang terdiri dari 1.# m$ %& '!.&', 8.1 m$ *a ' &!.+ & ', 1 m$ *a-l, '.+ m$ %-l. !"S merupakan sebuah larutan larutan penyangga penyangga yang biasa digunakan dalam penelitian biologi. "uer ini membantu untuk mempertahankan konstan p&. igunakannnya !"S karena protein memerlukan kisaran p& tertentu untuk untuk menjaga menjaga netralitas netralitas pada asam amino tertentu dan untuk mempertahan mempertahankan kan struktu strukturr protei protein. n. /ika /ika tidak tidak kondis kondisii ini tidak tidak terpen terpenuhi, uhi, struktu strukturr protein protein akan akan terdenaturasi. 0ntuk 0ntuk mendap mendapatk atkan an protei protein, n, sel harus harus dilisis dilisiskan kan.. !ada !ada percob percobaan aan ini dilakukan lisis sel dengan cara mekanik yaitu sonikasi. !roses sonikasi harus dilak dilakuk ukan an deng dengan an pros prosed edur ur yang yang sesua sesuaii yaitu aitu selam selamaa  deti detik k kemu kemudi dian an dihentikan selama  detik dan selanjutnya sonikasi dilakukan kembali dengan cara yang sama selama 1 kali dengan suhu dingin. !rosedur ini dimaksudkan agar protein yang keluar dari sel tidak rusak ataupun terdenaturasi. %emudian, untuk memisahkan protein dari komponen lain, suspensi disentriugasi kembali selama # menit. !ada tahap ini didapatkan didapatkan supernatan supernatan yang mengandung mengandung protein  bakteri Escherichia  bakteri Escherichia coli yang coli yang kemudian dikumpulkan untuk dielektrooresis.

!rotein rekombinan diekstraksi dengan metode sonikasi selanjutnya dianalisis dengan SS !23E. !roses ekstraksi protein dengan metode sonikasi harus dilakukan dalam kondisi on ice. !roses sonikasi yang tidak tepat dapat mengakibatkan protein rusak4terdegradasi sehingga tidak dapat dianalisis.Sonikasi merupakan metode pemecahan sel yang memanaatkan getaran dari gelombang suara dengan rekuensi tinggi untuk melisiskan sel. Sonikasi dilakukan dengan menggunakan alat yang disebut sonikator. i dalam sonikator tersebut, terdapat vibrating probe  yang dapat menghasilkan gelombang suara. 3elombang suara tersebut dikirimkan melalui vibrating probe yang dicelupkan ke dalam suspensi sel. Energi mekanik dari  probe tersebut kemudian menginisiasi pembentukan  partikel uap air dalam suspensi sel. !artikel uap air yang semakin banyak  menimbulkan  shockwave dan meradiasi sampel sehingga sel dalam suspensi sel lisis. Selama dikaukan proses sonikasi, suspensi sel diletakkan di dalam es agar   panas yang dihasilkan oleh sonikator tidak menyebabkan protein yang didapatkan tidak erdegradasi. Sonikasi biasa digunakan untuk sampel dengan5olume 61 m7 (hermo scientiic 9 ':).

hermo scientiic. ':. Cell Lysis Technical Handbook: version 2. 0nited States9 hermo ;isher Scientiic, Inc.