Informe 6 Determinación de Glucosa en Suero

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

“CATEDRA DE BIOQUÍMICA”

DOCENTE TEMA

: Dra. Gisela Oliveira Bardales Dr. Percy Ureta Sierra : “Determinación de Glucosa en suero”

ALUMNA

: Becerra Cueva , Yessica Yvon

CICLO

: IV

SECCIÓN

: E

AÑO

: 2017

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RESUMEN

El presente informe abarca de Determinación de la Glucosa en suero cuya práctica fue realizada en el laboratorio de Inmunología el día 07 de Junio del 2017. En el Marco teórico se brindara algunas generalidades de la glucosa, sus características y el fundamento de la práctica. Se desarrollara la determinación de glucosa en sangre mediante el uso del reactivo para determinación de glucosa, previo preparado de tubos los cuales están especificados en la parte de procedimientos. Así mismo explicaremos los procedimientos desarrollados en la práctica los cuales estarán seguidos de imágenes de los mismos. Al final de los procedimientos se ha elaborado una tabla con los resultados obtenidos, a los cuales hemos aplicado las fórmulas para obtener finalmente el resultado de la glucosa encontrada en el paciente. Se adjunta cuestionario de la guía desarrollada como anexo.

BIOQUIMICA / DETERMINACIÓN DE GLUCOSA EN SUERO

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INTRODUCCIÓN La glucosa es la principal fuente de energía para el metabolismo celular. Se obtiene fundamentalmente a través de la alimentación, y se almacena principalmente en el hígado, el cual tiene un papel primordial en el mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre (glucemia). Para que esos niveles se mantengan y el almacenamiento en el hígado sea adecuado, se precisa la ayuda de la insulina, sustancia producida por el páncreas. La glucosa es un azúcar que es utilizado por los tejidos como forma de energía al combinarlo con el oxígeno de la respiración. Cuando comemos el azúcar en la sangre se eleva, lo que se consume desaparece de la sangre, para ello hay una hormona reguladora que es la insulina producida por el páncreas (islotes pancreáticos). Esta hormona hace que la glucosa de la sangre entre en los tejidos y sea utilizada en forma de glucógeno, aminoácidos, y ácidos grasos. Cuando la glucosa en sangre está muy baja, en condiciones normales por el ayuno, se secreta otra hormona llamada glucagón que hace lo contrario y mantiene los niveles de glucosa en sangre. Cuando la insulina es insuficiente, la glucosa se acumula en sangre, y si esta situación se mantiene, da lugarar una serie de complicaciones en distintos órganos. Esta es la razón principal por la que se produce aumento de glucosa en sangre, pero hay otras enfermedades y alteraciones que también la provocan. El tejido más sensible a los cambios de la glucemia es el cerebro, en concentraciones muy bajas o muy altas aparecen síntomas de confusión mental e inconsciencia. El mantenimiento de la glucemia, o concentración plasmática de glucosa, en los organismos superiores el fundamental para el funcionamiento de todos los órganos, al ser la glucosa un metabolito energético principal. La coordinación de los procesos metabólicos implicados en este cometido se lleva a cabo por la relación de dos hormonas insulina/glucagón. La ingestión de glucosa o sustancias que la produzcan (almidón, fructosa, galactosa, proteínas, pero no grasas) va seguida, en las personas sanas, por un aumento de la glucosa en sangre. Este aumento origina la puesta en marcha del mecanismo regulador: aumento de la utilización de glucosa (por glucólisis, entre otras), aceleración de la glucogenogénesis y disminución de la glucogenólisis; todo ello ocurre principalmente mediante la secreción de insulina, una hormona pancreática de tipo polipeptídico. En el caso de que la producción de insulina esté disminuida, la glucosa no puede ser utilizada por las células, lo cual ocasiona niveles elevados de glucosa en sangre (hiperglucemia); así ocurre en


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las personas que sufren diabetes del tipo denominado "dependiente de insulina" o "tipo 1". El diagnóstico de la diabetes dependiente de insulina es sencillo y se basa en antecedentes, síntomas clínicos y comprobación de una hiperglucemia significativa. Las determinaciones de glucemia basal permiten el diagnóstico de la diabetes, pero constituyen valores puntuales y aislados en el tiempo que no reflejan los niveles medios de glucemia ni la duración de la misma. Por lo tanto, es necesario disponer de pruebas que indiquen el grado del control metabólico de la enfermedad a corto y medio plazo. Estas pruebas están basadas en el fenómeno de unión de la glucosa a diversas proteínas. Esta glucosilación tiene lugar por una reacción no enzimática y afecta tanto a proteínas de vida media corta (albúmina, hemoglobina, etc.) como de vida media larga (colágeno, mielina, etc.). La intensidad de la glucosilación depende de varios factores, siendo los más importantes los niveles medios de glucemia, la duración de la hiperglucemia, la vida media de las proteínas y la concentración de éstas. Como consecuencia, la medida de la glucosilación proteica constituye un buen marcador bioquímico del grado de compensación del enfermo diabético. Los niveles de glucosa en sangre se mantienen en la sangre entre unos límites muy estrechos y constantes gracias a la acción de dos hormonas: insulina y glucagón. En general, dichos valores nunca deben sobrepasar los 110 mg/dl, por grande que sea la ingestión de hidratos de carbono, ni descender por debajo de 70 mg/dl en condiciones fisiológicas. Interpretación de los datos de laboratorio  Hiperglucemia: Son elevaciones de la glucosa en sangre que cursan con valores de glucosa mayores a 120 mg/dl.  Diabetes mellitus: síndrome caracterizado por un aumento en los niveles fisiológicos de la glucosa y que cursa de manera característica con polifagia, poliuria y polidipsia. Durante las clases teóricas se explicará detalladamente las pruebas de laboratorio que llevan a su diagnóstico.  Disminución de la tolerancia a la glucosa: glucemia basal inferior a 140 mg/dl y, a las dos horas de sobrecarga oral de glucosa, valores intermedios entre los fisiológicos y los típicos de la diabetes.  Hipoglucemia: hablamos de hipoglucemia cuando los niveles de glucosa en sangre se sitúan entre 40 y 45 mg/dl. La hipoglucemia puede presentarse en ayunas, o bien ser reactiva a la ingestión de alimentos o a la toma de medicamentos. .


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OBJETIVOS  Reconocer la importancia que tiene la glucosa en el organismo y las diferentes patologías que se presenta por una alteración en el metabolismo del analito.  Que capaz de identificar mediante prueba de laboratorio la presencia del analito (Glucosa).  Identificar la presencia del analito y su aplicación en la clínica. Reconocer que pruebas auxiliares ayudan al diagnóstico del paciente.


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Dedicatoria: A nuestros docentes del curso de Bioquímica por transmitirnos sus conocimientos y sus experiencias en cada clase, y a mis padres por el esfuerzo que hacen y ser el motor para que sea posible continuar mis estudios.


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MARCO TEORICO DETERMINACION DE GLUCOSA EN SANGRE 1. La glucosa Es un glúcido o carbohidrato, más precisamente un monosacárido, la estructura más sencilla dentro de los azúcares simples, presente en forma libre en las frutas y la miel. Entre los carbohidratos de absorción rápida, la glucosa es la que se absorbe más rápidamente. La glucosa es una fuente importante de energía para la mayoría de las células del cuerpo, incluidas las del cerebro. Los carbohidratos que se encuentran en las frutas, los cereales, el pan, la pasta y el arroz se transforman rápidamente en glucosa en el cuerpo, lo que eleva el nivel de dicho azúcar en la sangre. Las hormonas producidas en el cuerpo llamadas insulina y glucagón ayudan a controlar los niveles de azúcar en la sangre. Es un examen que mide la cantidad de un azúcar llamado glucosa en una muestra de sangre. 2. Características

La glucosa, libre o combinada, es el compuesto orgánico más abundante de la naturaleza. Es la fuente primaria de síntesis de energía de las células, mediante su oxidación catabólica, y es el componente principal de polímeros de importancia estructural como la celulosa y de polímeros de almacenamiento energético como el almidón y el glucógeno. A partir de su estructura lineal, la D-glucosa sufre una ciclación hacia su forma hemiacetálica para dar sus formas furano y pirano (D-glucofuranosa y Fglucopiranosa) que a su vez presentan anómeros alfa y beta. Estos anómeros no presentan diferencias de composición estructural, pero si diferentes características físicas y químicas.


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La glucosa es uno de los tres monosacáridos dietéticos, junto con fructosa y galactosa, que se absorben directamente al torrente sanguíneo durante la digestión. Las células lo utilizan como fuente primaria de energía y es un intermediario metabólico. La glucosa es uno de los principales productos de la fotosíntesis y combustible para la respiración celular. Todas las frutas naturales tienen cierta cantidad de glucosa (a menudo con fructosa), que puede extraerse y concentrarse para preparar un azúcar alternativo. Sin embargo, a escala industrial tanto el jarabe de glucosa (disolución de glucosa) como la dextrosa (glucosa en polvo) se obtienen a partir de la hidrólisis enzimática de almidón de cereales (generalmente trigo o maíz). 3. Biosíntesis Los organismos fotoautótrofos, como las plantas, sintetizan la glucosa en la fotosíntesis a partir de compuestos inorgánicos como agua y dióxido de carbono, según la reacción:

Los seres heterótrofos, como los animales, son incapaces de realizar este proceso y toman la glucosa de otros seres vivos o la sintetizan a partir de otros compuestos orgánicos. Puede obtenerse glucosa a partir de otros azúcares, como fructosa o galactosa. Otra posibilidad es la síntesis de glucosa a partir de moléculas no glucídicas, proceso conocido como gluconeogénesis. Hay diversas moléculas precursoras, como el lactato, el oxalacetato y el glicerol. También existen ciertas bacterias anaerobias que utilizan la glucosa para generar dióxido de carbono y metano según esta reacción:

4. Fundamento : La glucosa por acción de la glucosa oxidasa se transforma en ácido Glucónico y peróxido de hidrogeno. El peróxido de hidrogeno en presencia de la 4aminofenazona y la Peroxidasa se transforma en una quinonimina coloreada cuyo color es directamente proporcional a la concentración del analito.


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5. Forma en que se realiza el examen: Se necesita una muestra de sangre. Esto se realizará antes del procedimiento de la glucosa a través de la venopunción o flebotomía. Preparación para el examen: Después de no haber comida nada (en ayunas) durante 7-8 horas. Lo que se siente durante el examen: Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor moderado, mientras que otras sólo sienten un pinchazo o sensación de picadura. Posteriormente, puede haber algo de sensación pulsátil. Razones por las que se realiza el examen: El médico puede solicitar este examen si uno tiene signos de diabetes. Sin embargo, otros exámenes (prueba de tolerancia a la glucosa y examen de glucemia en ayunas) son mejores para diagnosticar la diabetes. El examen de glucemia también se utiliza para monitorear a pacientes que padezcan diabetes. También se puede hacer si usted presenta: Un cambio en el comportamiento Episodios de desmayo Convulsiones por primera vez ¿Por qué se hace esta prueba? Por lo general, la prueba de glucosa en la sangre se hace para detectar la diabetes mellitus. ¿Recomendaciones para el análisis de glucosa? La forma más fácil de detectar la diabetes es medir la cantidad de azúcar en la sangre (glucosa) antes de que el paciente coma o beba algo por la mañana. En la mayoría de los casos, el paciente deberá ayunar durante la noche anterior, no comer ni beber nada más que agua después de la cena y por la mañana antes de la extracción de sangre.


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UNIVERSIDAD PRIVADA TELESUP FACULTAD DE SALUD Y NUTRICIÓN CARRERA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

LABORATORIO CENTRAL HOJA DE REQUERIMIENTO DE MATERIALES ESCUELA: MEDICINA

ASIGNATURA: INMUNOLOGÍA

DOCENTE: DR. GISELA OLIVEIRA BARDALES - PERCY URETA SIERRA NO LABORATORIO: Sección E FECHA DE PRÁCTICA: 07 DE JUNIO HORARIO: 8:50 – 12.10 PM N° Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA: N° 5 “Determinación de la Glucosa en suero ”

……………………………………………………………………………………………………………….


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CANT.

MATERIALES /EQUIPOS

CANT.

REACTIVOS U OTROS

04

Tubos de ensayo de 13 x 100

Frasco

Reactivo de glucosa enzimática

Frasco

Pisceta más agua destilada

01

Pipeta automática de 10 – 200 ul

01

Pipeta automática de 1000 ul

01

Lápiz marcador

01

Punteras de color amarillo

01

Punteras de color azul

01

Cronometro

01

Ligadura

01

Mascarilla, gorro, etc

Par

Guantes

02 01

Tubos vacutainer con gel separador Agujas de doble bisel 1x ½ para vacutainer Algodón Alcohol de 70° Gradilla …………………………………….

……………………………………….

FIRMA Y NOMBRE DEL ESTUDIANTE

JEFE DE LABORATORIO

PROCEDIMIENTOS

AUTORIZACIÓN

Tendremos en cuenta que todos los procedimientos se realizaran debidamente con el uso de las medidas de bioseguridad como guardapolvo, gorro, guantes, mascarillas, etc.

PROCEDIMIENTO 1 - BENEDICT 1. Teniendo ya nuestra de sangre que ha sido sometida a centrifugada . procedemos a ponerlo al tubo correspondiente según las indicaciones .


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2. En tres tubos marcados B (Blanco) S (Standard) y D.

En este caso utilizamos un tuvo blanco donde estuvo solo el reactivo , en el otro la muestra standard , dos muestras 1 (que pertenecían al mismo alumno) y una muestra 2 3. Los cuales contienen lo siguiente:

Con la ayuda de la pipeta automatizada procedemos a llenar los respectivos tubos ya sea con el reactivo de determinación de glucosa y/o con la muestra .


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Cualitativamente ya podríamos decir si ha habido variación en el color lo que indicaría presencia de glucosa y observamos la diferencia de los mismos

4. Luego procedemos a hacer la lectura en el equipo Espectrofotómetro . -

Primero calibramos el equipo con la base.

Standard

Muestra 2

Muestra 1

Muestra 3


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RESULTADOS OBTENIDOS .

TUBOS Blanco Standard Muestra 1 Muestra 2 (se tomó del mismo tubo del paciente de la muestra 1) Muestra 3 ( Otro paciente )

DENSIDAD OPTICA 0.061 0.290

ABSORBANCIA

FC

0.290 – 0.061 = 0.229

0.330 0.392

0.330 – 0.061 = 0.269 0.392 – 0.061 = 0.331

100 = 436 0.229 Abs1=436x0.269=117 Abs2=436x0.331=144

0.429

0.429 - – 0.061 = 0.368

Abs3=436x0.368=160

𝐹𝐶 =


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RECOMENDACIONES

 Se recomienda seguir los procedimientos de la guía para obtener mejores resultados.  Trabajar siempre bajo la supervisión y ayuda del docente a cargo.  Estar en todo momento con el equipo de bioseguridad necesaria como guantes y mandil.  Calibrar bien el equipo, para una mejor lectura ya que estos al final serán dato importante para la obtención de datos, las cuales se encuentran en la sección de Resultados de este informe.  Desechar cuidadosamente todos los materiales contaminados y lavar adecuadamente los materiales de laboratorio.


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CONCLUSIONES

 Aprendimos a realizar la prueba de medición de glucosa en suero con el reactivo de determinación de glucosa.  Así mismo pudimos observar que al dejar reaccionar el reactivo con la muestra ya se podía observar una diferencia de colores (cualitativo).  Utilizamos nuevamente el equipo espectrofotómetro para medir la absorbancia , y con los datos obtenidos pudimos aplicar las fórmulas de para determinar el Fc, y la Abs total de la muestra .  Debemos tomar en cuenta de la D.O obtenida se le debe restar la D.O de la base.  De los dos alumnos a quienes se le tomo la muestra, uno en el resultado cuantitavo final luego de aplicar las formulas Fc, y al hallar la Abs. Total de c/muestra obtuvimos que el primer paciente se encuentra normal mientras que el segundo se encuentra un poco más elevado de los valores normales.  Se cumplió el objetivo de la práctica de laboratorio .

ANEXO: CUESTIONARIO


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1. ¿Cuál es la finalidad del blanco? ¿Cómo se ajusta el espectrofotómetro con el blanco? ¿Ha realizado un blanco de reactivos o de suero? por qué? - El blanco el es tubo el cual esta solo con la solución del reactivo es decir con 2ml de Reactivo de determinación de glucosa, la finalidad de este es que al determinar la absorbancia del mismo nos sirve para que una vez obtenida la observancia de las otras muestras, le restaremos la d.o de este reactivo para obtener unos mejores resultados; así como también nos sirve para calibrar el espectrofotómetro con este, y es en base a este que se mide la absorbancia de las muestras restantes. -

Se debe colocar la muestra blanco en la celda respectiva del espectrofotómetro , luego cerrar el equipo y presionar el botón de 0%ADJ y luego 100%ADJ , los cuales se muestran en la siguiente figura

2. Calcule la concentración de glucosa en el suero indicando los cálculos realizados. El calculo de glucosa total en el suero se encuentran en la parte de Resultados del informe , los cuales vuelvo a presentar .

TUBOS Blanco Standard Muestra 1 Muestra 2 (se tomó del mismo tubo del paciente de la muestra 1) Muestra 3 ( Otro paciente )

DENSIDAD OPTICA 0.061 0.290

ABSORBANCIA

0.290 – 0.061 = 0.229

0.330 0.392

0.330 – 0.061 = 0.269 0.392 – 0.061 = 0.331

0.429

0.429 - – 0.061 = 0.368

FC

100 = 436 0.229 Abs1=436x0.269=117 Abs2=436x0.331=144 𝐹𝐶 =

Abs3=436x0.368=160


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3. Si la concentración de glucosa hubiera sido superior a 800 mg/dL. ¿Cómo actuaria? Primero debemos saber que En un paciente sano: en ningún momento se superan los 200mg/dL En un paciente diabético: la glucemia a las 2 horas es superior a 200 mg/dL y al menos otro valor intermedio es también superior a 200 mg/dL. Puede que el paciente este en un coma hiperglucémico hiperosmolar nocetonémico (CHHNC) se caracteriza por una severa hiperglicemia (niveles de glucosa por encima de 600 a 800 mg/dL) . El índice de mortalidad del CHHNC es bastante alto (50% o más), primariamente debido a la edad de la población que lo padece a las causas agudas que lo precipitan. El tratamiento está primariamente dirigido hacia la sustitución de fluídos y electrolitos mientras se administran cuidados de soprte. La terapia con insuina está diseñada para hacer retornar lentamente en 24-48 horas los niveles de glucosa a niveles normales. Cuando el tratamiento es exitoso, el enfermo puede ser significativamente sensible a una insulina de más. En último término, el enfermo alcanzará en control metabólico mediante la dieta y/o agentes orales. 4. Para la determinación ha utilizado un método enzimático. ¿Se trata de un método cinético? Fundamente su respuesta. Sí, ya que la cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones químicas que son catalizadas por las enzimas. El estudio de la cinética y de la dinámica química de una enzima permite explicar los detalles de su mecanismo catalítico, su papel en el metabolismo, cómo es controlada su actividad en la célula y cómo puede ser inhibida su actividad por fármacos o venenos o potenciada por otro tipo de moléculas. En general, no se determina la concentración de enzimas en tejidos y/o fluidos orgánicos, sino su actividad. El motivo es que la concentración de enzimas en suero es baja; sin embargo, dada su elevada capacidad catalítica es posible determinar su actividad con fiabilidad y se presupone que, por lo general, la actividad es proporcional a la concentración. Por tanto, es sumamente importante el procesado adecuado de las muestras, para que se garantice la conservación de la estructura proteica, fácilmente alterable por variaciones de: temperatura, pH muy ácidos o alcalinos, detergentes, metales pesados o la presencia de microorganismos en el recipiente, lo cual degradaría la proteína. La conservación de los sueros a Tª ambiente genera la inactivación de las enzimas.


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BIBLIOGRAFIA

 Graff, Laurine (1987). «2». Análisis de orina - Atlas Color (1ª edición). Ed. Médica Panamericana. p. 59. ISBN 950-06-0841-3. Consultado el 14 de marzo de 2012.   3,4,5 - Murray, Robert; Granner, Daryl; Rodwell, Victor; Mayes, Peter; 1997; BIOQUÍMICA DE HARPER; México; Editorial El Manual Moderno; p.77-110.  2,4 - Mier, Geraldine; Rhodes, V.J.; Maharg, Leta; Webb, Nancy, S; et al.: BEEF TENDERIZATION WITH PROTELYITIC ENZYMES; E.E.U.U.; Food Tech; p.16,111; Dairy Sci. Abstracts; p.23,197.

 1 - PRODUCTION AND APPLICATION OF ENZYME PREPARATIONS IN FOOD MANUFACTURE; (Symposium, London,1959); Monograph No.11; Industrial Chemical Society; London.

 Páginas de Internet consultadas: 5 - http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimicabiolmol/pdfs/08III%20ESPECTROFOTOMETRÍA.pdf


Informe 6 Determinación de Glucosa en Suero

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